專利名稱：低咖啡堿茶葉提取物的制備方法
低咖啡堿茶葉提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種山茶科植物提取物的制備方法。背景技術(shù)：
茶屬于山茶科，為常綠灌木或小喬木植物?，F(xiàn)代科學(xué)研究證實，茶葉含有許多與人體健康密切相關(guān)的活性成份如茶多酚、咖啡堿、脂多糖、茶氨酸等。具有抗衰老、抑制心血管疾病、抗癌、防輻射、抵抗病毒菌、美容護(hù)膚、醒腦提神、利尿解乏、降脂助消化、護(hù)齒明目等作用?？Х葔A是一種中樞神經(jīng)的興奮劑，在綠茶葉含量一般為干茶重的4%左右，并且咖啡堿能使胃酸增多，引起胃腸紊亂，導(dǎo)致消化道不適。目前對茶葉的提取主要是使用有機(jī)溶劑萃取，但是這樣容易造成有機(jī)溶劑殘留， 降低提取物的純度，影響提取物中活性成分的功效，并對人體安全造成隱患。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種制備茶葉提取物的方法，該方法獲得的茶葉提取物能清除體內(nèi)自由基，預(yù)防細(xì)胞癌變，并且其中所含的咖啡堿的量能明顯降低。本發(fā)明所述的一種低咖啡堿茶葉提取物的制備方法，由以下步驟組成將茶葉粉碎為茶粉并對其進(jìn)行加濕預(yù)處理；將處理過的茶粉進(jìn)行C02超臨界萃?。粚⒔?jīng)過超臨界萃取的茶粉進(jìn)行水浴提?。粚⑻崛∫撼闉V后濃縮冷凍干燥。其中，優(yōu)選地步驟(1)所述的粉碎是使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟悉的方法和要求進(jìn)行的，如可以粉碎至20目。而所述的加濕預(yù)處理是使其含水量為20% -80% (% w/w)。步驟O)中所述的萃取條件為溫度25°C -70°C;處理時間3-10小時；夾帶劑為水， 其含量為 15% -65% (% w/w)。步驟(3)中所述的水浴提取的提取溫度為40°C -100°C;料液比為1 5至1 30 ； 提取1-4次；每次30-60分鐘。本發(fā)明有效地提取了茶葉中的活性物質(zhì)，降低活性物質(zhì)中的咖啡堿含量，將活性物質(zhì)中的咖啡堿含量控制在5% (質(zhì)量百分含量)以內(nèi)，并使其具有較高的抑制腫瘤細(xì)胞生長功效。通過實驗驗證發(fā)現(xiàn)此活性物質(zhì)的副作用低，對腫瘤細(xì)胞生長具有良好的抑制效果， 且無耐藥性的產(chǎn)生。下面通過相關(guān)實驗來驗證本發(fā)明從茶葉中提取獲得的活性物質(zhì)(下面簡稱為本發(fā)明)的功效。咖啡因及茶多酚得率檢測實驗使用本發(fā)明進(jìn)行咖啡因含量及茶多酚得率檢測實驗。實驗結(jié)果顯示使用本發(fā)明中的條件對茶粉進(jìn)行處理和提取比普通提取方法的咖
3啡因含量降低約80 %，茶多酚含量提高到大約40 %。
實驗條件咖啡因含量(％ w/w)茶多酚得率(％ w/w)普通條件1230本發(fā)明< 542二、抑制腫瘤細(xì)胞生長實驗使用本發(fā)明進(jìn)行抑制腫瘤細(xì)胞生長實驗。實驗步驟1.稱取一定量的本發(fā)明，用DMEM培養(yǎng)基稀釋成10mg/ml后，用0. 22um的無菌濾器除去細(xì)菌等污染物。然后用DMEM培養(yǎng)基稀釋終濃度為lmg/ml。2.細(xì)胞計數(shù)用含青霉素、鏈霉素和10%胎牛血清(FBQ的DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。將含有 10% FBS的DMEM細(xì)胞懸液接種于96孔組織培養(yǎng)板上，細(xì)胞密度為1 X 105cells/孔。培養(yǎng)物置于37°C、5% C02的組織培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，收集細(xì)胞，用細(xì)胞計數(shù)器測定細(xì)胞數(shù)。3. MTT法檢測抑制效果(1)收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入lOOul，鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度至1 X 105cells/孔(邊緣孔用無菌PBS填充)。(2)5% C02，37°C孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)，加入濃度梯度的藥物，孵育4個小時后加藥.每孔lOOul，設(shè)5個復(fù)孔。(3)5% C02，37°C孵育48小時，倒置顯微鏡下觀察。(4)每孔加入 20ul MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5% MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。(5)終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150ul 二甲基亞砜，置脫色搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀0D490nm處測量各孔的吸光值。(6)同時設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)。4.計算抑制率相對抑制率=1-(給藥孔平均OD值/對照孔平均OD值)X 100 %5.實驗結(jié)果實驗結(jié)果如圖1顯示，隨著樣品濃度的增加，樣品抑制腫瘤細(xì)胞生長的效果也增加，即抑制效果呈濃度依賴性。

圖1所示的是樣品抑制腫瘤細(xì)胞生長效果圖。
具體實施方式實施例一1.將茶葉進(jìn)行加濕預(yù)處理，使其含水量達(dá)到25% (% w/w)。
2.將處理過的茶葉進(jìn)行C02超臨界萃取脫除咖啡堿。萃取條件溫度30°C ；處理時間10小時；夾帶劑為水，其含量為25% (% w/w)。3.將經(jīng)過超臨界萃取的茶葉進(jìn)行水浴提取。提取溫度為60°C ；料液比為1 8; 提取2次；每次40分鐘。4.將提取液抽濾后濃縮冷凍干燥。5.提取物咖啡因含量為2. 7% w/w，茶多酚得率為38% w/w。實施例二1.將茶葉進(jìn)行加濕預(yù)處理，使其含水量達(dá)到30% (% w/w)。2.將處理過的茶葉進(jìn)行C02超臨界萃取脫除咖啡堿。萃取條件溫度45°C ；處理時間8小時；夾帶劑為水，其含量為35% (% w/w)。3.將經(jīng)過超臨界萃取的茶葉進(jìn)行水浴提取。提取溫度為55°C ；料液比為1:9; 提取2次；每次50分鐘。4.將提取液抽濾后濃縮冷凍干燥。5.提取物咖啡因含量為2. 5% w/w，茶多酚得率為40% w/w。實施例三1.將茶葉進(jìn)行加濕預(yù)處理，使其含水量達(dá)到60% (% w/w)。2.將處理過的茶葉進(jìn)行C02超臨界萃取脫除咖啡堿。萃取條件溫度70°C ；處理時間5小時；夾帶劑為水，其含量為55% (% w/w)。3.將經(jīng)過超臨界萃取的茶葉進(jìn)行水浴提取。提取溫度為90°C;料液比為1 27; 提取4次；每次50分鐘。4.將提取液抽濾后濃縮冷凍干燥。5.提取物咖啡因含量為2. 9% w/w，茶多酚得率為36% w/w。
權(quán)利要求
1.低咖啡堿茶葉提取物的制備方法，其特征在于由以下步驟組成(1)將茶葉粉碎為茶粉并對其進(jìn)行加濕預(yù)處理；(2)將處理過的茶粉進(jìn)行C02超臨界萃?。?3)將經(jīng)過超臨界萃取的茶粉進(jìn)行水浴提?。?4)將提取液抽濾后濃縮冷凍干燥。
2.如權(quán)利要求1所述的低咖啡堿茶葉提取物的制備方法，其特征在于步驟⑴所述的加濕預(yù)處理是使其含水量為20% -80%。
3.如權(quán)利要求1所述的低咖啡堿茶葉提取物的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的萃取的條件為溫度25°C -70°C ；處理時間3-10小時；夾帶劑為水，其含量為15% -65%。
4.如權(quán)利要求1所述的低咖啡堿茶葉提取物的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的水浴提取的提取溫度為40°C -90°C ；料液比為1 5至1 30 ；提取1_4次；每次30-60 分鐘。
全文摘要
本發(fā)明所述的一種低咖啡堿茶葉提取物的制備方法涉及一種山茶科植物提取物的制備方法。該方法由以下步驟組成(1)將茶葉粉碎為茶粉并對其進(jìn)行加濕預(yù)處理；(2)將處理過的茶粉進(jìn)行CO2超臨界萃取；(3)將經(jīng)過超臨界萃取的茶粉進(jìn)行水浴提??；(4)將提取液抽濾后濃縮冷凍干燥。本發(fā)明有效地提取了茶葉中的活性物質(zhì)，降低活性物質(zhì)中的咖啡堿含量，將活性物質(zhì)中的咖啡堿含量控制在3％(質(zhì)量百分含量)以內(nèi)，并使其具有較高的抑制腫瘤細(xì)胞生長功效。通過實驗驗證發(fā)現(xiàn)此活性物質(zhì)的副作用低，對腫瘤細(xì)胞生長具有良好的抑制效果，且無耐藥性的產(chǎn)生。
文檔編號A61P39/06GK102198189SQ20111008306
公開日2011年9月28日 申請日期2011年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月2日
發(fā)明者余雄濤, 張智, 李向敏, 李崇, 李森柱, 潘鴻輝, 焦春偉, 蔡勉華, 謝意珍, 陳冠州 申請人:廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司