專利名稱：蒔蘿子揮發(fā)油防治陰道念珠菌病的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蒔蘿子揮發(fā)油的用途，尤其涉及蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病的防治 作用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
念珠菌病是由念珠菌屬，尤其是白色念珠菌弓I起的真菌病。陰道念珠菌病是婦科 常見病，75%的女性一生中至少患過一次陰道念珠菌病，5%_10%的婦女患陰道念珠菌病后 經(jīng)過治療，又復(fù)發(fā)陰道念珠菌病。念珠菌屬條件致病菌，在人體免疫功能低下時(shí)可引起口腔 念珠菌病、泌尿生殖系統(tǒng)念珠菌病以及播散性念珠菌病等。念珠菌病的治療面臨著嚴(yán)峻的 挑戰(zhàn)。雖然新型抗真菌藥物的相繼問世給真菌病治療帶來了新的轉(zhuǎn)機(jī)，但同時(shí)耐藥菌株的 出現(xiàn)也呈增多趨勢。念珠菌病治療難度大、念珠菌的耐藥性增多及現(xiàn)有抗念珠菌藥物毒副 作用多等促使人們不斷尋找高效低毒的抗真菌藥物。植物源抗菌藥物倍受關(guān)注，且需求量 逐漸增加。揮發(fā)油(essential oil)是一類由揮發(fā)性天然化合物組成并帶有強(qiáng)烈氣味的油狀 液體總稱，它是一種植物體內(nèi)的次生代謝物。揮發(fā)油在植物界分布廣泛，主要集中在菊科、 傘形科、唇形科、蕓香科、樟科、姜科、木蘭科等植物中。揮發(fā)油具有豐富的生物活性，具體表 現(xiàn)為抗菌驅(qū)蟲、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、解熱鎮(zhèn)痛、祛痰止咳等。目前已知的植物揮發(fā) 油有大約3000種，其中約300種已被廣泛應(yīng)用于制藥、食品、農(nóng)業(yè)、化妝品等工業(yè)中。研究 發(fā)現(xiàn)很多藥用植物的揮發(fā)油如茶樹揮發(fā)油、丁香揮發(fā)油、薄荷揮發(fā)油、肉桂揮發(fā)油、百里香 揮發(fā)油、羅勒揮發(fā)油、蕓香草揮發(fā)油都有較強(qiáng)抗真菌作用。蒔蘿為傘形科(iM^Bi/erae)蒔蘿屬(^？對力 )—年生草本植物。原產(chǎn)于歐洲 南部，以亞熱帶和溫帶種植較多，現(xiàn)我國新疆、甘肅等地盛產(chǎn)。在食品工業(yè)中，蒔蘿被廣泛的 用作調(diào)味劑。我國應(yīng)用其作為藥用植物歷史悠久，可追溯到2000多年前，歷代本草，多有著 錄。其干燥成熟果實(shí)稱為蒔蘿子，亦為常用的維吾爾族藥。蒔蘿在臨床上主要用于治療消 化系統(tǒng)疾病，如胃痛、消化不良、口臭及腸胃氣脹，并有安神、鎮(zhèn)靜的療效，亦可用于治療小 兒打嗝，對哺乳期婦女有催乳的作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明蒔蘿子揮發(fā)油具有抗菌、驅(qū)蟲、 抗氧化、催乳、調(diào)節(jié)女性生育周期及降血脂等藥理活性。國外學(xué)者報(bào)道蒔蘿子揮發(fā)油對革蘭 氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、霉菌、白色念珠菌具有抑制作用。國內(nèi)阿布力米提·伊力報(bào)道產(chǎn) 于新疆的蒔蘿子揮發(fā)油對金黃色葡萄菌、白假絲酵母菌有抑制作用，但國內(nèi)外未見有對蒔 蘿子揮發(fā)油防治陰道念珠菌病的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
沒有任何文獻(xiàn)報(bào)道過用蒔蘿子揮發(fā)油防治陰道念珠菌病。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題 在于提供蒔蘿子揮發(fā)油在防治陰道念珠菌病中的用途。在本發(fā)明中，通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了 蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病具有很好防治作用。測定了不同濃度蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念 珠菌病的防治作用。蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病預(yù)防作用。在預(yù)防實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)揮發(fā)油濃度分別為2% v/vU% ν/ν和0.0625% ν/ν時(shí)，連續(xù)給藥15天后，陰道載菌量分別為Iogl. 81 士 1.4、 log 3. 1 士 1. 23cfu/mL、log 4. 01 士2. 73 cfu/mL,而造模非給藥組，陰道載菌量為 log5. 16士 1.如fu/mL，給藥后陰道載菌量明顯較低。氟康唑(lOOPg/mL)陽性對照組，陰道 載菌量為log 3士0.47 cfu/mL。揮發(fā)油濃度為洲ν/ν時(shí)，清除陰道念珠菌能力強(qiáng)于氟康唑 陽性對照組，揮發(fā)油濃度為1% ν/ν時(shí)，清除陰道念珠菌能力與氟康唑陽性對照組相當(dāng)。表 明蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病有很好預(yù)防作用。蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病治療作用。在治療實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)揮發(fā)油濃度分別為 2% v/vU% ν/ν和0. 0625% ν/ν時(shí)，連續(xù)給藥15天后，陰道載菌量分別為log2. 24士 1. 93、 log 3. 43士 1. 25cfu/mL、log 4. 19士3 cfu/mL,而造模非給藥組，陰道載菌量為 log5. 16士 l.kfu/mL，給藥后陰道載菌量明顯較低。氟康唑(lOOPg/mL)陽性對照組陰道載 菌量為log3.6士 1.77 cfu/mL，揮發(fā)油高濃度為洲ν/ν時(shí)，清除陰道念珠菌能力強(qiáng)于氟康唑 陽性對照組，揮發(fā)油濃度為1% ν/ν時(shí)，清除陰道念珠菌能力與氟康唑陽性對照組相當(dāng)。表 明蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病有很好治療作用?？傊?，本發(fā)明蒔蘿子揮發(fā)油在體內(nèi)體外對念珠菌都具有抑制作用，可用于陰道念 珠菌病防治。本發(fā)明還公開了防治陰道念珠菌病的藥物，其中含有蒔蘿子揮發(fā)油。本發(fā)明為篩選防治陰道念珠菌病的藥物提供了一種方向上的指導(dǎo)，具有有益的效果。


圖1為本發(fā)明預(yù)防念珠菌病真菌檢驗(yàn)
空白對照組(CK):不感染白色念珠菌，不給藥；非造模組(Group 1):不進(jìn)行免疫抑制造 模，而進(jìn)行白色念珠菌感染；造模非給藥組(Group 2)免疫抑制造模，接種白色念珠菌，給 20μ 賦形劑；預(yù)防組(Group Pl)造模感染給100 μ g/mL氟康唑；預(yù)防組(Group P2)造 模感染給饑ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；預(yù)防組(Group P3)造模感染給1%ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；預(yù) 防組(Group P4)造模感染給0.0625%v/v蒔蘿子揮發(fā)油(n = 6)。與造模組比較，** ρ < 0. 01 ； < 0. 05。圖2為本發(fā)明預(yù)防念珠菌病組織病理檢查
空白對照組(CK):不感染白色念珠菌，不給藥；非造模組(Group 1):不進(jìn)行免疫抑制造 模，而進(jìn)行白色念珠菌感染；造模非給藥組(Group 2)免疫抑制造模，接種白色念珠菌，給 20μ 賦形劑；預(yù)防組(Group Pl)造模感染給100 μ g/mL氟康唑；預(yù)防組⑴roup P2)造 模感染給洲v/v蒔蘿子揮發(fā)油；預(yù)防組(Group P3):造模感染給1%ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；預(yù) 防組(Group P4)造模感染給0.0625%v/v蒔蘿子揮發(fā)油。圖3為本發(fā)明治療念珠菌病真菌檢驗(yàn)
空白對照組(CK):不感染白色念珠菌，不給藥；非造模組(Group 1):不進(jìn)行免疫抑制造 模，而進(jìn)行白色念珠菌感染；造模非給藥組(Group 2)免疫抑制造模，接種白色念珠菌，給 20μ 賦形劑；治療組(Group Tl)造模感染給100 μ g/mL氟康唑；治療組(Group T2)造 模感染給饑ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；治療組(Group T3)造模感染給1%ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；治 療組(Group T4)造模感染給0.0625%v/v蒔蘿子揮發(fā)油(n = 6)。與造模組比較，** ρ< 0. 01 ； */7 < 0. 05。圖4為本發(fā)明治療念珠菌病組織病理檢查
空白對照組(CK):不感染白色念珠菌，不給藥；非造模組(Group 1):不進(jìn)行免疫抑制造 模，而進(jìn)行白色念珠菌感染；造模非給藥組(Group 2)免疫抑制造模，接種白色念珠菌，給 20μ 賦形劑；治療組(Group Tl)造模感染給100 μ g/mL氟康唑；治療組(Group T2)造 模感染給饑ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；治療組(Group T3)造模感染給1%ν/ν蒔蘿子揮發(fā)油；治 療組(Group T4)造模感染給0. 0625%v/v蒔蘿子揮發(fā)油。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 蒔蘿子揮發(fā)油的制備
將干燥的蒔蘿子粉碎后過40目篩，稱取400-500g，加入適量蒸餾水，蒸餾，餾出物除 掉水相后，每90-100ml揮發(fā)油用35-45g無水硫酸鈉進(jìn)行干燥，得到蒔蘿子揮發(fā)油，于4°C冰 箱內(nèi)密封避光保存。以此法獲得的蒔蘿子揮發(fā)油得率可達(dá)3. 5% (v/w干重)以上。采用日本SHIMADZU GCMS-QP2010型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對制得的蒔蘿子揮發(fā) 油進(jìn)行了分析。GC條件Rtx -5MS毛細(xì)管柱(30mX0. 25mmX0. 25 mm)；進(jìn)樣口溫度； 分流進(jìn)樣，分流比20:1;揮發(fā)油進(jìn)樣量1 μ 1;載氣(99. 999%的高純氦)恒線速度40 cm/ sec ；吹掃氣流量3 ml/min。升溫程序初始溫度70 °C，保持2 min ；再以10 V /min程序 升溫至250°C，保持lOmin。MS條件電子轟擊源(Electron Impact, EI)，電子能量為70 eV,離子源溫度200°C，接口溫度220°C。選取SCAN模式時(shí)，質(zhì)量掃描范圍為3(T500(m/z)， 溶劑延遲2. 5 min。根據(jù)保留時(shí)間，同時(shí)對各化合物質(zhì)譜在OTST數(shù)據(jù)庫進(jìn)行相似檢索，對 各組分進(jìn)行定性分析，其相對含量采用面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算。GC-MS分析結(jié)果見表1。從 蒔蘿子揮發(fā)油中共鑒定出了 23個(gè)化合物(見表1)，占總含量的99. 4%。主要物質(zhì)有香芹酮 (41.5 %)，檸檬烯(32. 6 %)及芹菜腦(16. 8 %)等。
表1蒔蘿子揮發(fā)油主要化學(xué)成分(質(zhì)量相對百分比)
權(quán)利要求
1.蒔蘿子揮發(fā)油用于防治陰道念珠菌病。
2.防治陰道念珠菌病的藥物，其中含有蒔蘿子揮發(fā)油。
全文摘要
本發(fā)明涉及蒔蘿子揮發(fā)油防治陰道念珠菌病的用途，蒔蘿子先采用常規(guī)的揮發(fā)油提取分離方法提取后，可得蒔蘿子揮發(fā)油。根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)制定的M27-A3微量稀釋法測定蒔蘿子揮發(fā)油對念珠菌的最低抑菌濃度(MIC)。結(jié)果證明蒔蘿子揮發(fā)油具有較強(qiáng)抑制念珠菌的作用。采用小鼠免疫抑制模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，評價(jià)蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病的防治作用。真菌檢驗(yàn)和組織病理檢查證明了蒔蘿子揮發(fā)油對陰道念珠菌病有較強(qiáng)的防治作用，可用于制備抗陰道念珠菌的藥物。
文檔編號A61P31/10GK102145031SQ201110086418
公開日2011年8月10日 申請日期2011年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月7日
發(fā)明者何敬勝, 曾紅, 王有為, 班小泉, 田俊, 陳玉欣, 黃博 申請人:武漢大學(xué)