專利名稱：豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于農業(yè)獸用生物技術領域，涉及生物制品的冷凍干燥技術，特別涉及豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法。
背景技術：
目前，弱毒活疫苗是預防畜禽傳染病的主要疫苗之一，在我國動物用疫苗中，活疫苗占相當大的比例。國內疫苗企業(yè)常用的保護劑主要是蔗糖、牛奶、明膠等，組方簡單，保護性能差。如果在2 8°C條件下，保存期只有3 6個月，多需要在-15°C以下保存。而國內傳統(tǒng)的動物用疫苗保護劑的研制相對滯后，使疫苗的長期保存和長途運輸受到很大限制， 加上基層防疫部門缺乏必要的冷凍和冷藏設施，容易造成因冷鏈系統(tǒng)不完善而導致疫苗的效價降低。發(fā)達國家在二十世紀八十年代就已開始進行耐熱保護劑的研究，目前已經(jīng)基本采用耐熱保護劑生產(chǎn)活疫苗，但研制方法未見詳細報道。我國在耐熱保護劑方面的研究雖然起步較晚，但近年來研究非常活躍，已經(jīng)取得了一定的成果。但是，產(chǎn)品配套還不齊全，且與國外同類產(chǎn)品相比較仍有一定差距，目前針對豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法未見報導。因此，本研究針對豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的特性，研制出豬繁殖與呼吸綜合征耐熱型活疫苗。該疫苗在2 8°C保存M個月，病毒含量不發(fā)生改變。依據(jù)本研究的工藝進行凍干試驗，疫苗產(chǎn)品凍干前后病毒損失率僅為0.2個滴度，凍干的產(chǎn)品在37°C條件下分別保存IOd和30d，病毒損失率分別僅為0. 4和1. 2個滴度之內。本研究解決了豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗僅能在_15°C條件下保存和運輸?shù)募夹g瓶頸，使該疫苗的儲存和運輸更方便。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是通過對多種凍干保護劑基質與豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原進行相溶性研究，找出合適的基質，并由此設計一種凍干保護劑配方，并用與此相適應的凍干曲線對病毒抗原進行凍干。用該保護劑與豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原混合，按一定的凍干曲線凍干后所成的活疫苗可在2 8°C條件下長期保存，有望解決我國目前豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗需在_15°C條件下保存的問題。本發(fā)明的技術方案為一種豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑，其特征是由下述重量百分比的物質混配而成明膠1 2%、海藻糖4 6%、胰蛋白胨1 2%、酶解酪蛋白1 2%、聚乙二烯吡咯烷酮1 2%、磷酸氫二鉀0. 164%、磷酸二氫鉀0. 052%,山梨醇1 %、谷氨酸鈉 1%、精氨酸鹽1%，余量為蒸餾水。豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，各組分按重量百分比計，其特征在于按以下幾個步驟進行(1)將ι 2%明膠、4 6%海藻糖、1 2%胰蛋白胨、1 2%酶解酪蛋白、1 2%聚乙烯吡咯烷酮、0. 164%磷酸氫二鉀、0. 052%磷酸二氫鉀溶于部分蒸餾水中，在110 116 °C滅菌30分鐘；( 將！^山梨醇^^谷氨酸鈉^^精氨酸鹽溶于剩余的蒸餾水中，并用孔徑0. 22 μ m濾膜過濾除菌；C3)將上述第(1)步、第(2)步制得的兩種溶液混合，制得耐熱凍干保護劑；使用時，按耐熱凍干保護劑與病毒抗原液比為 1 1充分混勻，定量分裝后立即進行冷凍干燥。凍干曲線設計首先將凍干機預冷至_5°C，將分裝好的疫苗裝入凍干機箱體內， 再以rC/min的速度降溫至-45°C，在此溫度下維持3 4個小時后，抽真空至1 后，再開始緩慢升溫，14 18小時內升至0°C，之后以每小時5 8°C的速度升溫至25°C，維持4 6小時加塞出箱；凍干全程為25 32小時。本發(fā)明制備的凍干保護劑，凍干前后病毒損失率低，損失率僅為0.2個滴度，凍干產(chǎn)品耐老化程度高，凍干的產(chǎn)品在37°C條件下分別保存IOd和30d，病毒損失率分別僅為 0. 4和1. 2個滴度之內，產(chǎn)品在2 8°C保存M個月，病毒含量不發(fā)生改變。本發(fā)明解決了豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗僅能在_15°C條件下保存和運輸?shù)募夹g瓶頸，使該疫苗的儲存和運輸更方便。
具體實施例方式下面結合實施例子對本發(fā)明進行詳細的說明1、疫苗抗原的制備生產(chǎn)用毒種為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒JXAl-R株，由中國動物疫病控制中心鑒定、保管和提供。選取所需數(shù)量的細胞(已長成單層的細胞轉瓶)，棄去生長液，按 1% (V/V)接種生產(chǎn)用毒種病毒，加入含2%胎牛血清的DMEM細胞培養(yǎng)液，37°C旋轉(9 12轉/小時)培養(yǎng)。在顯微鏡下觀察由病毒引起的CPE，當CPE達到70%以上時收獲細胞培養(yǎng)物，凍融1次，經(jīng)離心或過濾除去細胞碎片，凍存-40°C以下。按《中國獸藥典》附錄對疫苗抗原進行無菌支原體及外源病毒檢驗，應符合規(guī)定。2、凍干保護劑的配制附表1.是本發(fā)明實施例1 4所用原料及配比。表1各實施例所用原料及配比重量百分比％
權利要求
1.一種豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑，其特征是由下述重量百分比的物質混配而成明膠1 2%、海藻糖4 6%、胰蛋白胨1 2%、酶解酪蛋白1 2%、聚乙烯吡咯烷酮1 2%、磷酸氫二鉀0. 164%、磷酸二氫鉀0. 052%,山梨醇1 %、谷氨酸鈉1 %、 精氨酸鹽1%，余量為蒸餾水。
2.根據(jù)權利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征疫苗耐熱凍干保護劑的制備方法，各組分按重量百分比計，其特征是按以下幾個步驟進行(1)將1 2%明膠、4 6%海藻糖、1 2%胰蛋白胨、1 2%酶解酪蛋白、1 2%聚乙烯吡咯烷酮、0. 164%磷酸氫二鉀、 0. 052%磷酸二氫鉀溶于部分蒸餾水中，在110 116 °C滅菌30分鐘；( 將1 %山梨醇、1 % 谷氨酸鈉、精氨酸鹽溶于剩余的蒸餾水中，并用孔徑0. 22 μ m濾膜過濾除菌；(3)將上述第(1)步、第( 步制得的兩種溶液混合，制得耐熱凍干保護劑；使用時按耐熱凍干保護劑與病毒抗原液比為1 1混合，分裝后再進行冷凍干燥。
3.根據(jù)權利要求2的制備方法，其特征是配制好疫苗后，根據(jù)以下要求進行凍干首先將凍干機預冷至-5°C，將分裝好的疫苗裝入凍干機箱體內，再以1°C /min的速度降溫至_45°C，在此溫度下維持3 4個小時后，開始抽真空至1 后，再開始緩慢升溫，14 18 小時內升至0°C，之后以每小時5 8°C的速度升溫至25°C，維持4 6小時加塞出箱；凍干全程為25 32小時。
全文摘要
本發(fā)明涉及豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法，耐熱凍干保護劑由下述重量百分比的物質混配而成明膠1～2％、海藻糖4～6％、胰蛋白胨1～2％、酶解酪蛋白1～2％、聚乙烯吡咯烷酮1～2％、磷酸氫二鉀0.164％、磷酸二氫鉀0.052％、山梨醇1％、谷氨酸鈉1％、精氨酸鹽1％，余量為蒸餾水。制備方法將上述物質配制成二種混合溶液，分別通過除菌再行混配，制得耐熱凍干保護劑，使用時按保護劑與病毒抗原液比為1∶1混合，分裝后再進行冷凍干燥。凍干前后病毒損失率低，凍干產(chǎn)品耐老化程度高，產(chǎn)品在2～8℃保存24個月，病毒含量不發(fā)生改變。本發(fā)明解決豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗僅能在-15℃條件下保存和運輸?shù)募夹g瓶頸。
文檔編號A61K47/42GK102166362SQ20111009198
公開日2011年8月31日 申請日期2011年4月13日 優(yōu)先權日2011年4月13日
發(fā)明者劉漢平, 李偉, 楊雷, 溫文生, 漆世華, 祝春花, 秦洪剛, 肖敏, 舒銀輝 申請人:武漢中博生物股份有限公司