專利名稱：一種具有抗菌藥理活性的三七提取物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā) 明屬于中藥材有效成分提取、制劑和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從中藥三七中提取具有抗菌藥理活性的三七提取物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
三七為五力口科(A raliaceae)植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F. H. Chen 的干燥根及根莖，其藥用價值日益被世人所認(rèn)同，應(yīng)用越來越廣泛。隨著現(xiàn)代生物提取技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用，三七的利用方式悄然發(fā)生著變化。由傳統(tǒng)方式為全藥應(yīng)用、到磨粉應(yīng)用、再到有效成分提取濃縮應(yīng)用，可以說發(fā)生了本質(zhì)上的變化。現(xiàn)有技術(shù)中三七有效成分的提取，多采用水提或醇提方式，然后進(jìn)行大孔樹脂吸附，再用稍高濃度(一般為80%左右)的乙醇將醇溶性成分從大孔樹脂中洗脫出來，濃縮后即得到通常的三七總皂苷。2010版《中國藥典》頒布了“三七總皂苷”的標(biāo)準(zhǔn)，公開了三七總皂苷的制備方法。但是，現(xiàn)有技術(shù)沒有把80%乙醇洗脫后殘留在大孔樹脂柱上的部分提取物加以收集和利用，造成了三七資源的浪費(fèi)。因此，開發(fā)三七及其有效成分的綜合利用技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)潛力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，第一目的在于提供一種具有抗菌藥理活性的三七提取物，第二目的在于提供一種制備該三七提取物的方法，第三目的在于提供該三七提取物在藥物制備上的應(yīng)用，第四目的在于提供該三七提取物的藥用制劑。本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的具有抗菌藥理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，包含(重量比)22，23_ 二氫豆甾醇3 6%、豆甾醇2 4%、大香葉烯DO. 5 1.0%、 匙葉桉油烯醇3 5%、喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯1. 0 2. 5%。所述的三七提取物還含有(重量比)揮發(fā)性藍(lán)桉醇1 3%、δ-杜松醇0.2 1. 0%、喇叭茶醇0. 2 1. 0%、綠花醇1 3%、異匙葉桉油烯醇0. 5 1. 5%、Tau_杜松醇 0. 5 1. 5%、α -古蕓烯2% 4%。所述的三七提取物還含有(重量比)十六烷酸甲酯0.05 0.2%、十六烷酸 0. 1 0.5%、十六烷酸甘油酯1.0 2.5%、十六烷酸乙酯0.5 1.0%、十八碳二烯酸甲酯0. 1 0. 3%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1. 0 2. 5%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯0. 1 0.5%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基-2， 6，10-十二碳三烯基)苯酚1.5 3.5%、4_甲氧基-6-戊基-5，6-二氫-2-吡喃酮0. 1 0. 5%。本發(fā)明第二個目的是這樣實現(xiàn)的所述三七提取物的制備方法包括下列步驟，Α、將三七干燥根洗凈干燥，然后粉碎成830-380 μ m的粗粉；B、將粗粉加5 10倍重量的70%乙醇回流提取3次，每次1. 5小時，合并醇提液后回收乙醇，所得濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂柱吸附靜置1 3小時后，用水對大孔吸附樹脂柱洗脫，至流出水不出現(xiàn)紫環(huán)反應(yīng)，然后用80 %乙醇繼續(xù)洗脫，得到三七總皂苷醇提液，濃縮后得到常規(guī)三七提取物。C、用85% 9 5%高濃度乙醇再次對B步驟洗脫過的大孔吸附樹脂洗脫2小時，收集洗脫液并回收乙醇后得到土黃色粘稠狀液體，即為本發(fā)明所述的三七提取物。上述制備方法中，所述的高濃度乙醇濃度為90% ；所述的大孔吸附樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂、AB-8型大孔吸附樹脂、LX68型大孔吸附樹脂或DM130型大孔吸附樹脂。本發(fā)明第三個目的是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明所述的具有抗菌藥理活性三七提取物在制備抗乙型鏈球菌和/或綠膿桿菌和/或金黃色葡萄球菌藥物上的應(yīng)用。本發(fā)明的第四目的是這樣實現(xiàn)的以含有所述的具有抗菌藥理活性三七提取物的藥用制劑，含有治療有效量的所述三七提取物和醫(yī)藥上可接受的輔料，制成任意適用的劑型。以本發(fā)明所述制備方法制取的具有抗菌藥理活性三七提取物的藥用制劑，含有治療有效量的所述三七提取物和醫(yī)藥上可接受的輔料，制成任意適用的劑型。本發(fā)明三七提取物中含有植物留醇類的豆留醇和22，23_ 二氫豆留醇，植物萜類的大香葉烯和雙環(huán)大香葉烯，揮發(fā)性醇類的匙葉桉油烯醇、藍(lán)桉醇、綠花醇、S -杜松醇、異匙葉桉油烯醇和Tau-杜松醇，在組合作用下，使得該三七提取物具有更強(qiáng)的抗菌藥理活性。尤其對乙型鏈球菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌的繁殖抑制效果良好。本發(fā)明三七提取物可用于制備對抗上述病菌的各種劑型的藥物。本發(fā)明三七提取物是從常規(guī)三七提取過程中丟棄的“廢物”中經(jīng)過優(yōu)化方法，深度提純后獲得的，突破了傳統(tǒng)的三七有效成分提取和利用的思維模式，變廢為寶，大大提高了三七資源的利用率，同時為人類的健康提供一種安全的藥物資源。


圖1為本發(fā)明三七提取物的制備工藝流程框圖；圖2為用于抗菌的三七提取物成份分析氣相色譜圖；圖3為所含22，23-二氫豆甾醇質(zhì)譜圖；圖4為所含豆甾醇質(zhì)譜圖；圖5為所含匙葉桉油烯醇質(zhì)譜圖；圖6為所含藍(lán)桉醇質(zhì)譜圖；圖7為所含綠花醇質(zhì)譜圖；圖8為所含大香葉烯D的質(zhì)譜圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。實施例1本發(fā)明所述的具有抗菌藥理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23-二氫豆甾醇3.5%、豆甾醇2.2%、大香葉烯DO. 56 %、匙葉桉油烯醇3. 21 %、 喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯1. 21%、藍(lán)桉醇1. 3%, δ -杜松醇0. 25%、喇叭茶醇0. 23%、綠花醇1.25%、異匙葉桉油烯醇0.59%、Tau-杜松醇0.66%、α -古蕓烯2. 65%、十六烷酸甲酯0. 07%、十六烷酸0. 15%、十六烷酸甘油酯1. 3%、十六烷酸乙酯0. 53%、十八碳二烯酸甲酯0. 12%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1.2%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 18%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基_2，6，10-十二碳三烯基)苯酚1.8%,4-甲氧基-6-戊基-5，6-二氫-2-吡喃酮0. 17%。實施例2本發(fā)明所述的具有抗菌藥理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23- 二氫豆甾醇5. 47%、豆甾醇3. 58%、大香葉烯DO. 91%、匙葉桉油烯醇3. 94%, 喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯2. 35 %、藍(lán)桉醇2. 65%、δ -杜松醇0. 83%、喇叭茶醇0. 48%、綠花醇2. 83%、異匙葉桉油烯醇1.35%、Tau-杜松醇1.21%、α -古蕓烯2. 75%、十六烷酸甲酯0. 15%、十六烷酸0. 41%、十六烷酸甘油酯2. 12%、十六烷酸乙酯0. 76%、十八碳二烯酸甲酯0. 25%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸2. 32%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 42%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯基)苯酚3. 15%,4-甲氧基-6-戊基-5，6-二氫-2-吡喃酮0.44%。實施例3本發(fā)明所述的具有抗菌藥理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23- 二氫豆甾醇4. 75%、豆甾醇2. 50%、大香葉烯DO. 82%、匙葉桉油烯醇3. 67%, 喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯2. 08%、藍(lán)桉醇1. 58%, δ -杜松醇0. 64%、喇叭茶醇0. 43%、綠花醇1.89%、異匙葉桉油烯醇0.80%、Tau-杜松醇0.79%、α -古蕓烯2. 15%、十六烷酸甲酯0. 13%、十六烷酸0. 27%、十六烷酸甘油酯1. 24%、十六烷酸乙酯0. 72%、十八碳二烯酸甲酯0. 19%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1. 34%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 30%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基_2，6，10-十二碳三烯基)苯酚2.51%、4_甲氧基-6-戊基-5，6-二氫-2-吡喃酮0. 22%。實施例4本發(fā)明所述的具有抗菌藥理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其包含(重量比)22，23- 二氫豆甾醇4. 15%、豆甾醇3. 17%、大香葉烯DO. 65%、匙葉桉油烯醇4. 65%, 喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯2. 3%、藍(lán)桉醇2. 22%, δ -杜松醇0. 45%、喇叭茶醇0. 91%、綠花醇2. 25%、異匙葉桉油烯醇1.05%、Tau-杜松醇1.36%、α -古蕓烯2. 45%、十六烷酸甲酯0. 11%、十六烷酸0. 48%、十六烷酸甘油酯2. 35%、十六烷酸乙酯0. 85%、十八碳二烯酸甲酯0. 21%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸2. 36%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯 0. 45%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2-(3，7，11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯基)苯酚3. 31%,4-甲氧基-6-戊基-5，6-二氫-2-吡喃酮0. 38%。實施例5稱取干燥IOKg三七粉碎成830 μ m的粗粉，將粗粉加5倍重量的70 %乙醇回流提取3次，每次1. 5小時，合并醇提液后回收乙醇，所得濃縮液經(jīng)、LX68型大孔吸附樹脂柱吸附靜置1小時后，用水對大孔吸附樹脂柱洗脫，至流出水不出現(xiàn)紫環(huán)反應(yīng)，然后用80%乙醇繼續(xù)洗脫，得到三七總皂苷醇提液，濃縮后得到常規(guī)三七提取物。用85%高濃度乙醇再次洗脫大孔吸附樹脂2小時，收集洗脫液并回收乙醇后得到土黃色粘稠狀液體，為本發(fā)明所述的三七提取物0. 28Kg。實施例6
稱取干燥IOKg三七粉碎成380 μ m的粗粉，將粗粉加10倍重量的70%乙醇回流提取2次，每次1. 5小時，合并醇提液后回收乙醇，所得濃縮液經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂柱吸附靜置2小時后，用水對AB-8型大孔吸附樹脂柱洗脫，至流出水不出現(xiàn)紫環(huán)反應(yīng)，然后用80% 乙醇繼續(xù)洗脫，得到三七總皂苷醇提液，濃縮后得到常規(guī)三七提取物。用95%高 濃度乙醇再次洗脫大孔吸附樹脂2小時，收集洗脫液并回收乙醇后得到土黃色粘稠狀液體，為本發(fā)明所述的三七提取物0. 298Kg。實施例7稱取干燥IOKg三七粉碎成500 μ m的粗粉，將粗粉加6倍重量的70 %乙醇回流提取3次，每次1. 5小時，合并醇提液后回收乙醇，所得濃縮液經(jīng)DM130型大孔吸附樹脂柱吸附靜置3小時后，用水對大孔吸附樹脂柱洗脫，至流出水不出現(xiàn)紫環(huán)反應(yīng)，然后用80%乙醇繼續(xù)洗脫，得到三七總皂苷醇提液，濃縮后得到常規(guī)三七提取物。用90%高濃度乙醇再次洗脫大孔吸附樹脂2小時，收集洗脫液并回收乙醇后得到土黃色粘稠狀液體，為本發(fā)明所述的三七提取物0. 305Kg。實施例8 稱取干燥IOKg三七粉碎成600 μ m的粗粉，將粗粉加8倍重量的70 %乙醇回流提取3次，每次1. 5小時，合并醇提液后回收乙醇，所得濃縮液經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂柱吸附靜置3小時后，用水對大孔吸附樹脂柱洗脫，至流出水不出現(xiàn)紫環(huán)反應(yīng)，然后用80%乙醇繼續(xù)洗脫，得到三七總皂苷醇提液，濃縮后得到常規(guī)三七提取物。用90%高濃度乙醇再次洗脫大孔吸附樹脂2小時，收集洗脫液并回收乙醇后得到土黃色粘稠狀液體為本發(fā)明所述的三七提取物0. 31Kg。試驗1 對具有抗菌活性的三七提取物成份的分析鑒定藥物材料采用85%乙醇提取的具有抗菌活性的三七提取物(由云南省云科藥業(yè)有限公司提供)。氣相色譜條件儀器為美國Agilent Technologies公司HP5890，HP-5石英毛細(xì)管柱(30mmX0. 32mmX0. 25 μ m)；柱溫 80 280°C，程序升溫 5°C/min ；柱流量為 1. 5ml/min ； 進(jìn)樣口溫度250°C ；氫火焰檢測器溫度250°C ；進(jìn)樣量Ι.ΟμΙ ；分流比50 1 ；載氣為高純氮氣。氣相色譜-質(zhì)譜條件HP6890GC/5973MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent Technologies 公司生產(chǎn))。GC 條件HP-5MS 石英毛細(xì)管柱(30mmX0. 25mmX0. 25 μ m)；柱溫 100 260°C，程序升溫5°C /min ；柱流量為1. 0ml/min ；進(jìn)樣口溫度250°C ；柱前壓IOOkPa ；進(jìn)樣量0. 30 μ 1 ； 分流比10 1;載氣為高純氮氣。MS條件電離方式EI ；電子能量70 ；傳輸線溫度250°C ；離子源溫度230°C ；四級桿溫度150°C ；質(zhì)量范圍35 500 ；采用Wiley7n. 1標(biāo)準(zhǔn)譜庫計算機(jī)檢索定性。試驗結(jié)果用氣相色譜法對用于抗菌的三七提取物進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果顯示該提取物包含25 種以上脂溶性成份(見表1)，總含量約占全三七脂溶部分的28. 38% (重量比)，其主要成分為22，23-豆留醇4. 65% (重量比，下同)、豆留醇2. 49%、匙葉桉油烯醇3. 26%、藍(lán)桉醇1. 50%、綠花醇1. 75%, α -古蕓烯2. 67%、大香葉烯DO. 78%。表1具有抗菌活性的三七提取物(85%乙醇提取)成份鑒定結(jié)果及含量表
權(quán)利要求
1.一種具有抗菌藥理活性的三七提取物，富含脂溶性成份，其特征是包含(重量比)22，23- 二氫豆甾醇3 6%、豆甾醇2 4%、大香葉烯DO. 5 1. O%、匙葉桉油烯醇 3 5%、喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯1. O 2. 5%。
2.按照權(quán)利要求1所述的三七提取物，其特征是還含有(重量比)揮發(fā)性藍(lán)桉醇1 3%, δ-杜松醇0.2 1.0%、喇叭茶醇0.2 1.0%、綠花醇1 3%、異匙葉桉油烯醇 0.5 1. 5%、Tau-杜松醇0. 5 1.5%、α -古蕓烯2% 4%。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的三七提取物，其特征是還含有(重量比)十六烷酸甲酯 0. 05 0. 2%、十六烷酸0. 1 0. 5%、十六烷酸甘油酯1. 0 2. 5%、十六烷酸乙酯0. 5 1.0%、十八碳二烯酸甲酯0. 1 0.3%、十八碳二烯酸和十八碳烯酸1.0 2.5%、十八碳二烯酸乙酯和十八碳烯酸乙酯0. 1 0. 5%、十八碳二烯酸甘油酯和3-甲氧基-5-甲基-2- (3，7，11-三甲基-2，6，10-十二碳三烯基)苯酚1. 5 3. 5%、4_甲氧基-6-戊基-5， 6- 二氫-2-吡喃酮0. 1 0. 5 %。
4.一種制備權(quán)利要求1、2或3所述的具有抗菌藥理活性的三七提取物的方法，其特征是所述三七提取物的制備方法包括下列步驟，Α、將三七干燥根洗凈干燥，然后粉碎成830-380 μ m的粗粉；B、將粗粉加5 10倍重量的70%乙醇回流提取3次，每次1. 5小時，合并醇提液后回收乙醇，所得濃縮液經(jīng)大孔吸附樹脂柱吸附靜置1 3小時后，用水對大孔吸附樹脂柱洗脫， 至流出水不出現(xiàn)紫環(huán)反應(yīng)，然后用80%乙醇繼續(xù)洗脫，得到三七總皂苷醇提液，濃縮后得到常規(guī)三七提取物。C、用85% 95%高濃度乙醇再次對B步驟洗脫過的大孔吸附樹脂洗脫2小時，收集洗脫液并回收乙醇后得到土黃色粘稠狀液體，即為本發(fā)明所述的三七提取物。
5.如權(quán)利要求4所述的具有抗菌藥理活性三七提取物的制備方法，其特征是所述的高濃度乙醇濃度為90%。
6.如權(quán)利要求4所述的具有抗菌藥理活性三七提取物的制備方法，其特征是所述的大孔吸附樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂、AB-8型大孔吸附樹脂、LX68型大孔吸附樹脂或 DMl30型大孔吸附樹脂。
7.—種權(quán)利要求1、2或3所述的具有抗菌藥理活性三七提取物的應(yīng)用，其特征是在制備抗乙型鏈球菌和/或綠膿桿菌和/或金黃色葡萄球菌藥物上的應(yīng)用。
8.一種含有權(quán)利要求1、2或3所述的具有抗菌藥理活性三七提取物的藥用制劑，其特征是含有治療有效量的所述三七提取物和醫(yī)藥上可接受的輔料，制成任意適用的劑型。
9.一種以權(quán)利要求4、5或6所述方法制取的具有抗菌藥理活性三七提取物的藥用制齊U，其特征是含有治療有效量的所述三七提取物和醫(yī)藥上可接受的輔料，制成任意適用的劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗菌藥理活性的三七提取物及其制備方法與應(yīng)用。該三七提取物富含脂溶性成份，并包含(重量比)22，23-二氫豆甾醇3～6％、豆甾醇2～4％、大香葉烯D0.5～1.0％、匙葉桉油烯醇3～5％、喇叭烯和雙環(huán)大香葉烯1.0～2.5％等有效成分。所述的制備方法是在進(jìn)行常規(guī)三七總皂苷提取后，將其采用的大孔吸附樹脂柱用85～95％的高濃度乙醇再次洗脫，收集洗脫液、濃縮后得到的土黃色粘稠狀的三七提取物。所述三七提取物對乙型鏈球菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌的繁殖有明顯的抑制作用，可用于制備抗乙型鏈球菌和/或綠膿桿菌和/或金黃色葡萄球菌的藥物。所述的含有治療有效量的所述三七提取物和醫(yī)藥上可接受的輔料，制成任意適用的劑型。本發(fā)明擴(kuò)大了三七有效成分的提取率和利用效果，也為人類提供一種安全的藥物資源。
文檔編號A61P31/04GK102178713SQ20111009202
公開日2011年9月14日 申請日期2011年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月13日
發(fā)明者張要武, 楊如萍, 楊金華, 甘獻(xiàn)文, 陳彤 申請人:云南云科藥業(yè)有限公司