專利名稱：一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于橄欖苦苷提取的技術領域，涉及一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法。
背景技術：
橄欖葉的藥用歷史已有數(shù)千年，古希臘人用它來清洗傷口。有跡象顯示飲用橄欖葉泡的茶是中東地區(qū)傳統(tǒng)上已沿用數(shù)百年的治療例如咳嗽，喉嚨痛，膀胱炎和發(fā)熱等不適的方法。另外，橄欖葉軟膏被用于治療癤子，皮疹，疣子和其它皮膚疾病。長期以來，人們一直從橄欖油中提取抗氧化活性成分。生物學家研究發(fā)現(xiàn)，油橄欖葉含有的抗氧化活性成分較之橄欖油更為突出，尤其是橄欖苦苷在葉中的含量明顯高于果實和樹。科學家發(fā)現(xiàn)，地中海沿岸冠心病和癌癥的發(fā)生率都比較低，他們認為橄欖苦苷與冠心病和癌癥發(fā)生率低有著密切的聯(lián)系。橄欖苦苷具有以下的功效1、可以阻止細胞和病毒的生長，并刺激免疫系統(tǒng)中重要細胞的活性，以抵抗感染。2、對皰疹、膀胱和微菌感染也極為有效。3、它有抗氧化能力， 能減輕低密度脂蛋白的氧化程度，預防冠心病，動脈粥樣硬化的發(fā)生。4、保持健康的血壓和膽固醇水平，有舒緩血管平滑肌，降低血壓的能力。橄欖苦苷的使用具有廣闊的前景，具體包括1、制藥，用于制造治療病毒、細菌、寄生蟲和吸血蟲等所引起的疾病的新藥，和治療感冒的新藥。2、護膚品，用于護膚品中可以促進肌膚原蛋白再生，自然抵御由氧化而導致肌膚的破壞。目前市場上橄欖葉提取物橄欖苦苷含量大多為10 40%，但高含量的橄欖苦苷產品不多。比如，黨建章、張幸生、黃曉裕等，在《D-101大孔樹脂富集橄欖葉中橄欖苦苷的研究》中采用DlOl靜態(tài)吸附，水洗脫糖類等物質，以70%乙醇洗脫，可制備出5 20%的產
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發(fā)明內容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，該方法便于規(guī)?；a高含量橄欖苦苷，橄欖苦苷含量能夠大于40%。本發(fā)明是通過以下技術方案來實現(xiàn)一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，包括以下步驟1)將清洗干凈的油橄欖葉用其質量6 200倍的水在0 40°C浸提1 4h或在40 100°C加熱提取1 池，過濾，收集濾液；共提取2 3次，合并濾液濃縮至1/6 1/12，得到濃縮提取液；或者將清洗干凈的油橄欖葉用其質量6 200倍的體積分數(shù)10 90%的醇溶液加熱回流提取1 池，過濾，收集濾液；共提取2 3次，合并濾液濃縮至無醇，得到濃縮提取液；2)將濃縮提取液放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂，使得橄欖苦苷被吸附在大孔吸附樹脂上，用體積分數(shù)10 90%的醇溶液進行洗脫，收集洗脫液；3)將收集的洗脫液濃縮，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂，收集流出液；4)用流出液體積0. 8 2. 0倍量的有機溶劑進行萃取，收集有機相，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到包含橄欖苦苷的提取物。所述的體積分數(shù)10 90%的醇溶液為甲醇或乙醇的水溶液。所述的用醇溶液提取得到的濃縮提取液在上樣于大孔吸附樹脂之前，還添加其體積1/5 1/2的水。所述的大孔吸附樹脂為DM130樹脂、DlOl樹脂或AB-8樹脂。所述的脫色樹脂為XDA-7樹脂、LX-68樹脂、LX-10G樹脂或LSA-700樹脂。所述的萃取所用的有機溶劑為正丁醇、乙酸乙酯、氯仿或正乙烷。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下有益的技術效果本發(fā)明提供的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，在用水或醇水混合溶劑提取之后，將提取液濃縮之后依次經(jīng)過三步分離大孔樹脂吸附并用醇水溶劑洗脫、脫色樹脂吸附 (對橄欖提取液中的色素有良好吸附作用的脫色樹脂(對橄欖苦苷有良好吸附作用的大孔吸附樹脂，洗脫除去其他雜質)，吸附除去色素)和有機溶劑萃取，逐步對提取液當中的橄欖苦苷進行分離純化，最后獲得高含量的橄欖苦苷提取物，橄欖苦苷的含量大于40%，甚至達到80 90%。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖；圖2為本發(fā)明制備的產品的橄欖苦苷含量檢測的色譜圖之一；圖3為本發(fā)明制備的產品的橄欖苦苷含量檢測的色譜圖之二。
具體實施例方式本發(fā)明提供的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，利用水或醇水混合溶液作為溶劑進行提取，對提取液濃縮之后依次經(jīng)過三步分離大孔樹脂吸附并用醇水溶劑洗脫、脫色樹脂吸附和有機溶劑萃取，逐步對提取液當中的橄欖苦苷進行分離純化，最后獲得高含量的橄欖苦苷提取物。下面結合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。實施例1將清洗干凈的油橄欖葉IOOg粉碎后，加入IOOOml的水，60°C加熱提取lh，過濾，收集濾液；油橄欖葉再加入IOOOml的水再次加熱提取，相同條件下共提取三次，合并濾液后濃縮至600ml ；放涼至室溫后，將濃縮的提取液上樣于大孔吸附樹脂DM130，用50%的甲醇(體積比)進行洗脫，收集洗脫液；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除甲醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂XDA-7，收集所有流出液(B液)；用流出液(B液)體積1倍量的正丁醇進行萃取，收集有機相，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物1.52g。利用HPLC法檢測提取物所含有的橄欖苦苷的含量，色譜柱(0DS-3C18)，流動相 乙腈水磷酸=21 79 0. 1 (V/V)，波長:254nm,柱溫室溫，流速0. 8 μ 1/min,進樣量50 μ 1。提取物當中橄欖苦苷含量檢測結果的色譜圖如圖2所示，經(jīng)計算提取物當中橄欖苦苷的含量為82. 18%。實施例2將干燥的油橄欖葉IOOg粉碎后，加入2000ml的80%乙醇，加熱回流提取lh，過濾，收集濾液；共提取三次，合并濾液濃縮至無醇加水至800ml，放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂DM130，用70%的乙醇進行洗脫，收集洗脫液(A液)；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除乙醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂LX-68，收集流出液(B液)；用流出液(B液)體積0.8倍量的乙酸乙酯進行萃取，收集有機相(乙酸乙酯相)，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物1.21g，檢測提取物當中橄欖苦苷的含量為 75. 46%o實施例3將清洗干凈的油橄欖葉IOOg粉碎后，加入5000ml的20%甲醇，加熱回流提取lh， 過濾，收集濾液；共提取三次，合并濾液濃縮至1000ml，放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂 D101，用20%的甲醇進行洗脫，收集洗脫液(A液)；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除甲醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂LX-10G，收集流出液(B液)；用流出液(B液)體積1.0倍量的乙酸乙酯進行萃取，收集有機相(乙酸乙酯相)，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物0. Mg，檢測提取物當中橄欖苦苷的含量為 93. 22%。實施例4將干燥的油橄欖葉IOOg粉碎后，加入800ml的70%甲醇，加熱回流提取lh，過濾， 收集濾液；共提取三次，合并濾液濃縮至無醇加水至750ml，放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂AB-8，用50%的甲醇進行洗脫，收集洗脫液(A液)；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除甲醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂LSA-700，收集流出液(B液)；用流出液(B液)體積1. 0倍量的氯仿進行萃取，收集有機相(氯仿相)，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物1. 06g，檢測提取物當中橄欖苦苷的含量為70. 53%。實施例5將清洗干凈的油橄欖葉IOOg粉碎后，加入IOOOml水，在0 15°C浸提池，過濾， 收集濾液；共提取兩次，合并濾液濃縮至600ml，放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂DM130， 用70%的甲醇進行洗脫，收集洗脫液(A液)；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除甲醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂LSA-700，收集流出液(B液)；用流出液(B液)體積0. 8倍量的正丁醇進行萃取，收集有機相(正丁醇)，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物0. 9g，檢測提取物當中橄欖苦苷的含量為61. 09%，其橄欖苦苷含量檢測結果的色譜圖如圖3所示。實施例6將干燥的油橄欖葉IOkg粉碎后，加入80L的70%甲醇，加熱回流提取lh，過濾， 收集濾液；共提取三次，合并濾液濃縮至90L，放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂DM130，用 60%的甲醇進行洗脫，收集洗脫液(A液)；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除甲醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂LX-10G，收集流出液(B液)；用流出液(B液)體積1. 0倍量的氯仿進行萃取，收集有機相(氯仿相)，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物182g，檢測提取物當中橄欖苦苷的含量為72. 19%。實施例7將干燥的油橄欖葉1 OOkg粉碎后，加入2000L的80 %甲醇，加熱回流提取Ih， 過濾，收集濾液；共提取三次，合并濾液濃縮至1000L，放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂 DM130，用70%的甲醇進行洗脫，收集洗脫液(A液)；將集洗脫液(A液)減壓濃縮去除甲醇，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂XDA-7，收集流出液(B液)；用流出液(B液)體積1.0倍量的乙酸乙酯進行萃取，收集有機相，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到提取物0. 55kg，檢測提取物當中橄欖苦苷的含量為96. 31%。
權利要求
1.一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，其特征在于，包括以下步驟1)將清洗干凈的油橄欖葉用其質量6 200倍的水在0 40°C浸提1 4h或在40 100°C加熱提取1 池，過濾，收集濾液；共提取2 3次，合并濾液濃縮至1/6 1/12，得到濃縮提取液；或者將清洗干凈的油橄欖葉用其質量6 200倍的體積分數(shù)10 90%的醇溶液加熱回流提取1 2h，過濾，收集濾液；共提取2 3次，合并濾液濃縮至無醇，得到濃縮提取液；2)將濃縮提取液放涼至室溫后上樣于大孔吸附樹脂，使得橄欖苦苷被吸附在大孔吸附樹脂上，用體積分數(shù)10 90%的醇溶液進行洗脫，收集洗脫液；3)將收集的洗脫液濃縮，濃縮至無醇后靜置放涼至室溫，將濃縮液上樣于脫色樹脂，收集流出液；4)用流出液體積0.8 2. 0倍量的有機溶劑進行萃取，收集有機相，濃縮干燥去除有機溶劑后，得到包含橄欖苦苷的提取物。
2.如權利要求1所述的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，其特征在于，所述的體積分數(shù)10 90%的醇溶液為甲醇或乙醇的水溶液。
3.如權利要求1所述的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，其特征在于，所述的用醇溶液提取得到的濃縮提取液在上樣于大孔吸附樹脂之前，還添加其體積1/5 1/2的水。
4.如權利要求1所述的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，其特征在于，所述的大孔吸附樹脂為DM130樹脂、DlOl樹脂或AB-8樹脂。
5.如權利要求1所述的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，其特征在于，所述的脫色樹脂為XDA-7樹脂、LX-68樹脂、LX-10G樹脂或LSA-700樹脂。
6.如權利要求1所述的從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，其特征在于，所述的萃取所用的有機溶劑為正丁醇、乙酸乙酯、氯仿或正乙烷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從油橄欖葉中提取橄欖苦苷的方法，在用水或醇水混合溶劑提取之后，將提取液濃縮之后依次經(jīng)過三步分離大孔樹脂吸附并用醇水溶劑洗脫、脫色樹脂吸附(對橄欖提取液中的色素有良好吸附作用的脫色樹脂(對橄欖苦苷有良好吸附作用的大孔吸附樹脂，洗脫除去其他雜質)，吸附除去色素)和有機溶劑萃取，逐步對提取液當中的橄欖苦苷進行分離純化，最后獲得高含量的橄欖苦苷提取物，橄欖苦苷的含量大于40％，甚至達到80～90％。
文檔編號A61P31/04GK102228514SQ201110115400
公開日2011年11月2日 申請日期2011年5月5日 優(yōu)先權日2011年5月5日
發(fā)明者侯睿, 劉濤, 張愛萍, 雷玉萍 申請人:陜西禾博天然產物有限公司