專利名稱：一種用于痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑的成分檢測方法，特別是一種用于各種類型痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法。
背景技術(shù)：
以大黃、浙貝母、炒側(cè)柏葉、厚樸、白及、冰片和紫草為原料藥制備的中藥復(fù)方栓劑，具有消腫化瘀、生肌止血、清熱止痛及行氣提肛的功效，用于各種類型、各種程度的痔瘡，顯示了顯著的治療效果。所述中藥復(fù)方制劑的制備工藝中，既有既經(jīng)過溶劑提取的，如大黃、浙貝母、炒側(cè)柏葉、厚樸、白及和紫草，也有以原料直接入藥的，如冰片，因此其成分檢測應(yīng)當(dāng)對這兩部分原料藥都有所反映。但是現(xiàn)有技術(shù)中還沒有有關(guān)該復(fù)方栓劑的成分檢測方法的報(bào)道。在實(shí)際中，還有可能處方組成與上述復(fù)方栓劑相同的其它復(fù)方栓劑上市，因此，有必要建立所述處方組成的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，從而保證用藥安全。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于各種類型痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是
本發(fā)明所述用于各種類型痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的原料藥組成如下 大黃50-150重量份，浙貝母50-150重量份，炒側(cè)柏葉200-600重量份，厚樸200-600 重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份。取上述原料藥，按常規(guī)工藝，加入水溶性基質(zhì)制備成臨床上可以接受的任一種栓劑。所述水溶性基質(zhì)可以是聚乙二醇類的一種或幾種。本發(fā)明優(yōu)選一種的所述中藥復(fù)方栓劑，其原料藥組成為
大黃117重量份，浙貝母117重量份，炒側(cè)柏葉333重量份，厚樸333重量份，白及167 重量份，冰片10重量份，紫草333重量份；
優(yōu)選的水溶性基質(zhì)的組成為1450重量份的聚乙二醇6000和900重量份的聚乙二醇 4000。所述優(yōu)選的中藥復(fù)方栓劑通過如下方法制備
取除冰片外的所述重量份的原料藥，以70%乙醇加熱回流提取3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次1. 5小時，合并提取液，回收乙醇，得到濃縮藥液，備用；取所述重量份的聚乙二醇6000和聚乙二醇4000，加熱融化，充分混勻，加入所述濃縮藥液中，攪勻，冷卻至 50-55°C，加入所述重量份的冰片，制栓1000粒，即得。每Ig所述中藥復(fù)方栓劑折算成原料藥量，相當(dāng)于1.41g。對含量測定所用的高效液相法而言，在一定含量范圍內(nèi)，所檢測成分含量與峰面積才能保持良好的線性關(guān)系。而本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑的原料藥組成在一定范圍內(nèi)變化，加之制劑工藝的不同，因此每一種處方制備的所述中藥復(fù)方栓劑，其每一粒中所含檢測成分，如大黃素、大黃酚、厚樸酚、和厚樸酚的量也有一個變動范圍。所以不適宜用制劑單位為單位來量取所述中藥復(fù)方栓劑。但是對于每一種栓劑而言，每克栓劑折算成的原料藥的量是確定，故在含量測定時，以折算成原料藥的量來稱取檢測所述栓劑。本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑的檢測方法包括如下I和II的高效液相色譜法含量測定中的一種或兩種
I.大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為9 1的甲醇-0. 1%磷酸為流動相，檢測波長為440nm，理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500 ； 對照品溶液的制備精密稱取大黃素對照品和大黃酚對照品適量，置同一容量瓶中，加流動相制成每Iml含60 μ g大黃素和80 μ g大黃酚的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液的制備取相當(dāng)于原料藥7. 05g的所述中藥復(fù)方栓劑，精密稱定，置雞心瓶中，加無水乙醇100ml，加熱回流提取60分鐘，放冷。置冰浴中，使基質(zhì)完全沉淀出，用布氏漏斗抽濾，用無水乙醇洗滌2次，合并濾液、洗滌液置蒸發(fā)皿中，揮去乙醇，用無水乙醇溶解殘?jiān)迫?0ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，精密吸取該溶液IOml置蒸發(fā)皿中，揮干乙醇，用2. 5mol/L硫酸溶液20ml分次洗滌殘?jiān)喜⒁迫腚u心瓶中，加熱回流水解2小時，放冷至室溫后，加入氯仿20ml繼續(xù)回流兩次，每次1小時，回流結(jié)束，分出氯仿液，揮去氯仿，殘?jiān)蒙倭柯确氯芙獠⒁浦?ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0. 45 μ m 的微孔濾膜濾過，取濾液，即得；
測定法精密吸取對照品溶液5 μ 1，供試品溶液15 μ 1，分別注入液相色譜儀，測定，即得。II.厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7 3的甲醇-水為流動相，檢測波長為294nm，理論塔板數(shù)按厚樸酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3800 ；
對照品溶液的制備精密稱取厚樸酚對照品、和厚樸酚對照品適量，置同一容量瓶中， 加流動相制成每Iml含20 μ g厚樸酚和20 μ g和厚樸酚的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液的制備取相當(dāng)于原料藥7. 05g的所述中藥復(fù)方栓劑，精密稱定，置雞心瓶中，加無水乙醇100ml，加熱回流提取60分鐘，放冷。置冰浴中，使基質(zhì)完全沉淀出，用布氏漏斗抽濾，用無水乙醇洗滌2次，合并濾液、洗滌液置蒸發(fā)皿中，揮去乙醇，用無水乙醇溶解殘?jiān)迫?0ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，精密吸取該溶液2ml置IOml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，用孔徑0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，取濾液，即得；
測定法精密吸取對照品溶液5 μ 1，供試品溶液10 μ 1，分別注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法還可以包括如下A和B的薄層鑒別方法
Α.取所述中藥復(fù)方栓劑1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小時，濾過，取濾液10ml，蒸干， 殘?jiān)铀甀Oml使溶解，滴加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，放冷，加乙醚提取2次，每次 15ml，合并乙醚提取液，蒸干，殘?jiān)勇确翴ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材粉末0. lg，加氯仿20ml冷浸1小時，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，滴加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干， 殘?jiān)勇确翴ml使溶解，作為對照藥材溶液；另取大黃酚對照品ang，加氯仿制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取所述供試品溶液10 μ 1，所述對照藥材溶液10μ 1，所述對照品溶液2μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以體積比為15 5 1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干； 置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個橙黃色斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點(diǎn)；在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個黃色斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點(diǎn)；
B.取所述中藥復(fù)方栓劑2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分鐘，濾過， 合并濾液，濃縮至5ml，作為供試品溶液，取厚樸對照藥材粉末1. Og,同法制成對照藥材溶液；另取厚樸酚、和厚樸酚對照品各ang，分別加甲醇制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液； 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取所述四種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為12 :2 :1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光萃滅斑點(diǎn)。本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法還可以包括如下的鑒別方法 取所述中藥復(fù)方制劑1粒，研碎，進(jìn)行微量升華，所得的白色升華物，加新制備的1%香
草醛硫酸溶液1-2滴，漸顯紫紅色。因此，本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑的質(zhì)量檢測方法可以有如下幾種方案
1)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定；
2)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，以及薄層鑒別方法A和B；
3)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，以及冰片的鑒別方法；
4)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，薄層鑒別方法A和B，以及冰片的鑒別方法；
5)厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定；
6)厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定，以及薄層鑒別方法A和B；
7)厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定，以及冰片的鑒別方法；
8)厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定，薄層鑒別方法A和B，以及冰片的鑒別方法；
9)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，以及厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定；
10)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定，以及薄層鑒別方法A和B ；
11)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定，以及冰片的鑒別方法；
12)大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定，厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定，薄層鑒別方法A和B，以及冰片的鑒別方法。上述各種成分檢測方法都可以一定程度上反應(yīng)所述中藥復(fù)方制劑的原料藥組成， 當(dāng)然以所述方案12為優(yōu)選。對于本發(fā)明所述優(yōu)選的中藥復(fù)方栓劑，上述檢測方法中的取樣量和檢測結(jié)果為 大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定取5粒所述栓劑，照說明書記載的方法進(jìn)行測定，每粒栓劑含大黃以大黃素計(jì)不少于20 μ g，按大黃酚計(jì)不少于30 μ g。厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定取5粒所述栓劑，照說明書記載的方法進(jìn)行測定，每粒栓劑含厚樸按厚樸酚計(jì)不少于0. 60mg，按和厚樸酚計(jì)不少于0. 20mg。下面以本發(fā)明優(yōu)選的中藥復(fù)方栓劑為例，通過實(shí)驗(yàn)說明本發(fā)明所述成分檢測方法的建立。實(shí)驗(yàn)例1大黃所含成分大黃素、大黃酚的含量測定
大黃為君藥，其主要成分為大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等蒽醌類化合物。大黃具有多種藥理作用，如瀉下、抗炎、止血等，其中大黃素為抗炎的主要成分，大黃酚則止血作用較強(qiáng)且含量較高，故測定大黃所含大黃素和大黃酚的含量以從一定程度上反映本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑的質(zhì)量。1. 1儀器與試藥
高效液相色譜儀=HPllOO ；數(shù)據(jù)處理機(jī)HP-3500積分儀。試藥色譜純甲醇，重蒸水，分析純磷酸。對照品大黃素(批號0756-9707)，大黃酚(批號0766_9707)，中國藥品生物制品檢定所提供。1. 2色譜條件
色譜柱=YWG-C18 IOym(4. 6mmX250mm)；流動相為體積比為9 :1的甲醇-0. 1%磷酸；流速:lml/min ；柱溫20°C。1. 3系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為9 :1的甲醇-0. 1%磷酸為流動相，檢測波長為440nm，理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。1. 4波長選擇
一般大黃蒽醌類化合物在254nm和440nm處有最大吸收?？紤]到本制劑為復(fù)方制劑， 成分較復(fù)雜，為了避免其它物質(zhì)的干擾，選擇蒽醌另一吸收波長440nm為測定波長。1. 5供試品溶液的制備
本發(fā)明所述中藥復(fù)方栓劑含有水溶性基質(zhì)——聚乙二醇，對含量測定有影響，必須除去。利用聚乙二醇在熱無水乙醇中溶解，冷卻后則沉淀析出的性質(zhì)，可以有效去除聚乙二醇。為了大黃素和大黃酚提取完全，考察了不同提取方法，如索氏提取器提取、石油醚脫脂后索氏提取器提取和超聲提取等方法。大黃素和大黃酚的含量測定顯示，加熱回提取的效果好于超聲提取，索氏提取器提取和石油醚脫脂后索氏提取器提取的效果相當(dāng)，且操作簡便，故選擇索氏提取器提取。針對索氏提取器提取的加熱回流時間，考察了不同的加熱回流提取時間，如10、30、60、90和120min ；其中加熱回流60min，大黃素、大黃酚的含量最高。故供試品的制備方法為無水乙醇加熱回流60min，冷卻除去基質(zhì)。1.6空白試驗(yàn)
取處方中不含大黃的其它藥材按照說明書記載的制備方法制成陰性樣品，再按照說明書中記載的供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液，依說明書記載的含量測定方法試驗(yàn)， 結(jié)果陰性無干擾。1. 7線性關(guān)系考察
精密稱取大黃素、大黃酚對照品適量，置同一容量瓶中，加流動相制成每Iml含大黃素，80yg大黃酚的溶液，精密吸取上述溶液1μ 1、2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1、 ομ 1，注入高效液相色譜儀中，按照說明書記載的色譜分析條件，測定峰面積，結(jié)果見表1 和2。 表1 大黃素線性關(guān)系考察結(jié)果
權(quán)利要求
1. 一種用于各種類型痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其原料藥組成如下大黃 50-150重量份，浙貝母50-150重量份，炒側(cè)柏葉200-600重量份，厚樸200-600重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份；所述中藥復(fù)方栓劑是指按常規(guī)工藝，加入水溶性基質(zhì)制備成臨床上可以接受的任一種栓劑；其特征在于所述成分檢測方法包括如下I和II的高效液相色譜法含量測定中的一種或兩種方式1.大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為9 1的甲醇-0. 1%磷酸為流動相，檢測波長為440nm，理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500 ； 對照品溶液的制備精密稱取大黃素對照品和大黃酚對照品適量，置同一容量瓶中，加流動相制成每Iml含60 μ g大黃素和80 μ g大黃酚的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取相當(dāng)于原料藥7. 05g的所述中藥復(fù)方栓劑，精密稱定，置雞心瓶中，加無水乙醇100ml，加熱回流提取60分鐘，放冷；置冰浴中，使基質(zhì)完全沉淀出，用布氏漏斗抽濾，用無水乙醇洗滌2次，合并濾液、洗滌液置蒸發(fā)皿中，揮去乙醇，用無水乙醇溶解殘?jiān)?，移?0ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，精密吸取該溶液IOml置蒸發(fā)皿中，揮干乙醇，用2. 5mol/L硫酸溶液20ml分次洗滌殘?jiān)?，合并移入雞心瓶中，加熱回流水解2小時，放冷至室溫后，加入氯仿20ml繼續(xù)回流兩次，每次1小時，回流結(jié)束，分出氯仿液，揮去氯仿，殘?jiān)蒙倭柯确氯芙獠⒁浦?ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0. 45 μ m 的微孔濾膜濾過，取濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5μ 1，供試品溶液15μ 1，分別注入液相色譜儀，測定，即得；II.厚樸酚、和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7 3的甲醇-水為流動相，檢測波長為^Mnm，理論塔板數(shù)按厚樸酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3800 ；對照品溶液的制備精密稱取厚樸酚對照品、和厚樸酚對照品適量，置同一容量瓶中， 加流動相制成每Iml含20 μ g厚樸酚和20 μ g和厚樸酚的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取相當(dāng)于原料藥7. 05g的所述中藥復(fù)方栓劑，精密稱定，置雞心瓶中，加無水乙醇100ml，加熱回流提取60分鐘，放冷；置冰浴中，使基質(zhì)完全沉淀出，用布氏漏斗抽濾，用無水乙醇洗滌2次，合并濾液、洗滌液置蒸發(fā)皿中，揮去乙醇，用無水乙醇溶解殘?jiān)?，移?0ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，精密吸取該溶液2ml置IOml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，用孔徑0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，取濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5 μ 1，供試品溶液10 μ 1，分別注入液相色譜儀，測定，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其特征在于所述的成分檢測方法還包括如下A和B的薄層鑒別方法Α.取所述中藥復(fù)方栓劑1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小時，濾過，取濾液10ml，蒸干， 殘?jiān)铀甀Oml使溶解，滴加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，放冷，加乙醚提取2次，每次 15ml，合并乙醚提取液，蒸干，殘?jiān)勇确翴ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材粉末0. lg，加氯仿20ml冷浸1小時，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，滴加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干， 殘?jiān)勇确翴ml使溶解，作為對照藥材溶液；另取大黃酚對照品ang，加氯仿制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取所述供試品溶液10 μ 1，所述對照藥材溶液10μ 1，所述對照品溶液2μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以體積比為15 :5 :1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干； 置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個橙黃色斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點(diǎn)；在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個黃色斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點(diǎn)；B.取所述中藥復(fù)方栓劑2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分鐘，濾過， 合并濾液，濃縮至5ml，作為供試品溶液，取厚樸對照藥材粉末1. Og,同法制成對照藥材溶液；另取厚樸酚、和厚樸酚對照品各ang，分別加甲醇制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液； 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取所述四種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為12 :2 :1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光萃滅斑點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其特征在于所述的成分檢測方法還包括如下的鑒別方法取所述中藥復(fù)方栓劑1粒，研碎，進(jìn)行微量升華，所得的白色升華物，加新制備的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，漸顯紫紅色。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其特征在于所述的中藥復(fù)方栓劑的原料藥優(yōu)選組成如下大黃117重量份，浙貝母117重量份，炒側(cè)柏葉333重量份，厚樸333重量份，白及167 重量份，冰片10重量份，紫草333重量份；所述中藥復(fù)方栓劑的水溶性基質(zhì)的組成為1450重量份的聚乙二醇6000和900重量份的聚乙二醇4000 所述中藥復(fù)方栓劑通過如下方法制備取除冰片外的所述重量份的原料藥，以70%乙醇加熱回流提取3次，第一次3小時，第二次2小時，第三次1. 5小時，合并提取液，回收乙醇，得到濃縮藥液，備用；取所述重量份的聚乙二醇6000和聚乙二醇4000，加熱融化，充分混勻，加入所述濃縮藥液中，攪勻，冷卻至 50-55°C，加入所述重量份的冰片，制栓1000粒，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其特征在于所述中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法包括如下I和II的高效液相色譜法含量測定的一種或兩種方式I.大黃素和大黃酚的高效液相色譜法含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為9 1的甲醇-0. 1%磷酸為流動相，檢測波長為440nm，理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500 ；對照品溶液的制備精密稱取大黃素對照品和大黃酚對照品適量，置同一容量瓶中，加流動相制成每Iml含60 μ g大黃素和80 μ g大黃酚的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取所述中藥復(fù)方栓劑5粒，精密稱定，置雞心瓶中，加無水乙醇 100ml，加熱回流提取60分鐘，放冷；置冰浴中，使基質(zhì)完全沉淀出，用布氏漏斗抽濾，用無水乙醇洗滌2次，合并濾液、洗滌液置蒸發(fā)皿中，揮去乙醇，用無水乙醇溶解殘?jiān)?，移?50ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，精密吸取該溶液IOml置蒸發(fā)皿中，揮干乙醇，用 2. 5mol/L硫酸溶液20ml分次洗滌殘?jiān)?，合并移入雞心瓶中，加熱回流水解2小時，放冷至室溫后，加入氯仿20ml繼續(xù)回流兩次，每次1小時，回流結(jié)束，分出氯仿液，揮去氯仿，殘?jiān)蒙倭柯确氯芙獠⒁浦?ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用孔徑0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，取濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5μ 1，供試品溶液15μ 1，分別注入液相色譜儀，測定，即得； 所述中藥復(fù)方栓劑含大黃按大黃素計(jì)不少于20 μ g，按大黃酚計(jì)不少于30 μ g ； II.厚樸酚和厚樸酚的高效液相色譜法含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比為7 3的甲醇-水為流動相，檢測波長為294nm，理論塔板數(shù)按厚樸酚峰計(jì)算應(yīng)不低于3800 ；對照品溶液的制備精密稱取厚樸酚對照品、和厚樸酚對照品適量，置同一容量瓶中， 加流動相制成每Iml含20 μ g厚樸酚和20 μ g和厚樸酚的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的制備取所述中藥復(fù)方栓劑5粒，精密稱定，置雞心瓶中，加無水乙醇 100ml，加熱回流提取60分鐘，放冷；置冰浴中，使基質(zhì)完全沉淀出，用布氏漏斗抽濾，用無水乙醇洗滌2次，合并濾液、洗滌液置蒸發(fā)皿中，揮去乙醇，用無水乙醇溶解殘?jiān)?，移?0ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度， 搖勻，精密吸取該溶液2ml置IOml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，用孔徑0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，取濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液5 μ 1，供試品溶液10 μ 1，分別注入液相色譜儀，測定，即得；所述中藥復(fù)方栓劑含厚樸按厚樸酚計(jì)不少于0. 60mg，按和厚樸酚計(jì)不少于0. 20mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其特征在于所述中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法還包括如下A和B的薄層鑒別方法A.取所述中藥復(fù)方栓劑1粒，研碎，加甲醇20ml冷浸1小時，濾過，取濾液10ml，蒸干， 殘?jiān)铀甀Oml使溶解，滴加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，放冷，加乙醚提取2次，每次 15ml，合并乙醚提取液，蒸干，殘?jiān)勇确翴ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材粉末0. lg，加氯仿20ml冷浸1小時，濾過，取濾液10ml，蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，滴加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，放冷，加乙醚提取2次，每次15ml，合并乙醚提取液，蒸干， 殘?jiān)勇确翴ml使溶解，作為對照藥材溶液；另取大黃酚對照品2mg，加氯仿制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取所述供試品溶液10 μ 1，所述對照藥材溶液10μ 1，所述對照品溶液2μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以體積比為15 5 1的石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干； 置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個橙黃色斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點(diǎn)；在日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的5個黃色斑點(diǎn)，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點(diǎn)；B.取所述中藥復(fù)方栓劑2粒，加甲醇冷浸3次，每次加甲醇20ml冷浸30分鐘，濾過，合并濾液，濃縮至5ml，作為供試品溶液，取厚樸對照藥材粉末1. Og,同法制成對照藥材溶液； 另取厚樸酚、和厚樸酚對照品各ang，分別加甲醇制成lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取所述四種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比為12 2 :1的環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外燈下檢視， 供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光萃滅斑點(diǎn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法，其特征在于所述的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法還包括如下的鑒別方法取所述中藥復(fù)方栓劑1粒，研碎，進(jìn)行微量升華，所得的白色升華物，加新制備的1%香草醛硫酸溶液1-2滴，漸顯紫紅色。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑的成分檢測方法，特別是一種用于各種類型痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的成分檢測方法。本發(fā)明所述用于各種類型痔瘡的中藥復(fù)方栓劑的原料藥組成如下大黃50-150重量份，浙貝母50-150重量份，炒側(cè)柏葉200-600重量份，厚樸200-600重量份，白及100-300重量份，冰片5-15重量份，紫草200-600重量份。取上述原料藥，按常規(guī)工藝，加入水溶性基質(zhì)制備成臨床上可以接受的任一種栓劑。所述水溶性基質(zhì)可以是聚乙二醇類的一種或幾種。本發(fā)明的檢測方法可提高用藥安全。
文檔編號A61K36/8966GK102178829SQ201110116510
公開日2011年9月14日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者許寶星 申請人:江西九華藥業(yè)有限公司