專利名稱：白頭翁總皂苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種白頭翁總皂苷的制備方法。
背景技術(shù)：
白頭翁又名老翁花，白頭草，為多年生草本植物白頭翁Pulsatilla Chinensis (Bge.)Regel.的干燥根，具有清熱解毒、涼血止痢的功效，臨床用于阿米巴痢疾、 細菌性痢疾和陰道滴蟲等疾病。分布于東北、華北、西北、華東以及朝鮮和俄羅斯西伯利亞等地。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。白頭翁的活性成分主要是皂苷類，包括白頭翁皂苷A、B、C、D， 皂苷1，皂苷2，白樺酯酸，白樺酯酸-3-0-α-L阿拉伯吡喃糖苷，3-氧代白樺酯酸，胡蘿卜苷，原白頭翁素，白頭翁素，白頭翁靈，白頭翁英等。許多研究發(fā)現(xiàn)，白頭翁在醫(yī)療方面具有抗腫瘤活性及抗肝損傷，抗生育，抗炎抑菌，治療慢性結(jié)腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎等作用；在獸醫(yī)臨床上可用于治療多種牛、羊疾?。辉谵r(nóng)業(yè)上，白頭翁對小麥赤霉病菌和水稻白葉枯病菌等均表現(xiàn)出很好的抑制活性，并具有殺蟲活性，石寶俊等采用不同色譜技術(shù)對白頭翁地上部分乙醇提取物的正丁醇部位進行分離純化，得到7個三萜皂苷類化合物。鐘邱等的研究表明，白頭翁的皂苷組分有明顯的體外抑瘤活性，且不同分子量的皂苷組分的活性不盡相同。潘曉茹應(yīng)用微量量熱法研究大腸埃希菌在白頭翁總皂苷液中的代謝作用，發(fā)現(xiàn)白頭翁皂苷具有明顯的抑菌作用。時維靜等的研究發(fā)現(xiàn)白頭翁及白頭翁皂苷對雞免疫有一定的促進作用。據(jù)最新研究表明，將白頭翁五個糖基的皂苷改變成低糖基皂苷，有利于人體吸收， 并且白頭翁皂苷的酶解產(chǎn)物明顯促進皮膚纖維芽細胞的膠原蛋白合成，該物質(zhì)和化妝品中常用物質(zhì)混合制備皮膚抗老化化妝品，使皮膚中膠原蛋白量明顯增多，有效改善皮膚彈性， 抗皺紋抗老化?，F(xiàn)有白頭翁皂苷提取技術(shù)主要采用醇提、大孔樹脂柱層析等方法，如劉琳等發(fā)表的文獻“白頭翁皂苷的分離提純”，采用酒精溶劑浸提得到較粗的白頭翁總皂苷，脫脂后，經(jīng)大孔樹脂層析得到白頭翁總皂苷，該方法所得白頭翁總皂苷雜質(zhì)較多。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供所述白頭翁總皂苷的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種白頭翁總皂苷，以白頭翁根為原料提取得到，皂苷含量為60-80%。本發(fā)明提供了所述白頭翁總皂苷的制備方法，包括以下步驟(1)將白頭翁根粉碎成粗粉，用水或甲醇微波提取，得到提取液；(2)加入硅藻土攪拌，過濾，濾液回收甲醇，得到白頭翁提取濃縮液；(3)上述濃縮液用水飽和正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)將正丁醇浸膏通過聚酰胺樹脂柱，用去離子水和含水醇作為洗脫劑，收集洗脫液；(5)將上述洗脫液通過中性氧化鋁柱，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到白頭翁總皂苷。所述步驟(1)中甲醇體積百分比為60-95%，提取溶劑用量為藥材重量的5-15倍， 提取2-3次。所述步驟O)中硅藻土加入量與提取液質(zhì)量體積比為2 8 100。所述步驟(3)中水飽和正丁醇萃取，加入與濃縮液等體積的水飽和正丁醇。所述步驟(4)中含水醇為體積百分比為50-80%的乙醇水溶液。本發(fā)明的有益效果是(1)采用正丁醇從提取濃縮液中抽提白頭翁總皂苷，避免了提取物中糖類的干擾；(2)通過聚酰胺柱層析方法除去提取物中的水溶性色素及鞣質(zhì)等雜質(zhì)；(3)本發(fā)明提供的制備方法，操作簡單、成本低，雜質(zhì)含量少，生產(chǎn)過程對環(huán)境無污
^fe ο下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，下述各實施例僅用于說明本發(fā)明而并非對本發(fā)明的限制。
具體實施例方式下述實施例中白頭翁總皂苷的成分鑒定采用薄層色譜法(參照劉琳等發(fā)表的文獻“白頭翁皂苷的分離提純”)，具體方法如下薄層層析板硅膠-0. 3% CMC-Na(l 2. 5)鋪板，室溫晾干，110°C活化30min ；展開劑氯仿-甲醇-水=7 3 0. 5 ；顯色劑10%硫酸水溶液。下述實施例中含量測定采用HPLC法測定白頭翁總皂苷的含量。以白頭翁皂苷B4 為對照品(色譜條件參照現(xiàn)行2010年《中華人民共和國藥典》白頭翁含量測定項下)，具體方法如下以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(64 36)為流動相；檢測波長為 201nm。理論塔板數(shù)按白頭翁皂苷氏峰計算應(yīng)不低于3000。實施例一將Ikg白頭翁根粉碎成粗粉末，采用10L70% (ν/ν)的甲醇微波提取3次，合并提取液，加入總液量5%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液于55°C減壓濃縮至總體積的1/4，得到提取濃縮液；加入等體積的水飽和正丁醇萃取，分離出正丁醇層，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取4次，得正丁醇浸膏350g ；將正丁醇浸膏用水溶解后通過裝有500g聚酰胺樹脂柱，先以水洗至糖反應(yīng)為陰性，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液再通過中性氧化鋁柱，收集下注液，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到IOlg白頭翁總皂苷，總皂苷含量為 73%。實施例二 將^g白頭翁根粉碎成粗粉末，采用30L80% (ν/ν)的甲醇微波提取2次，合并提取液，加入總液量4%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液于55°C減壓濃縮至總體積的1/4，得到提取濃縮液；加入等體積的水飽和正丁醇萃取，分離出正丁醇層，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取4次，得正丁醇浸膏720g ；將正丁醇浸膏用水溶解后通過裝有800g聚酰胺樹脂柱，先以水洗至糖反應(yīng)為陰性，再以50%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液再通過中性氧化鋁柱，收集下注液，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到198g白頭翁總皂苷，總皂苷含量為 64%。實施例三將^g白頭翁根粉碎成粗粉末，采用25L75% (ν/ν)的甲醇微波提取3次，合并提取液，加入總液量8%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液于55°C減壓濃縮至總體積的1/4，得到提取濃縮液；加入等體積的水飽和正丁醇萃取，分離出正丁醇層，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取4次，得正丁醇浸膏1. 7kg ；將正丁醇浸膏用水溶解后通過裝有2500g聚酰胺樹脂柱，先以水洗至糖反應(yīng)為陰性，再以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液再通過中性氧化鋁柱，收集下注液，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到454g白頭翁總皂苷，總皂苷含量為 68%。實施例四將^g白頭翁根粉碎成粗粉末，采用35L60% (ν/ν)的甲醇微波提取3次，合并提取液，加入總液量6%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液于55°C減壓濃縮至總體積的1/4，得到提取濃縮液；加入等體積的水飽和正丁醇萃取，分離出正丁醇層，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取3次，得正丁醇浸膏1. 7kg ；將正丁醇浸膏用水溶解后通過裝有2500g聚酰胺樹脂柱，先以水洗至糖反應(yīng)為陰性，再以75%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液再通過中性氧化鋁柱，收集下注液，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到462g白頭翁總皂苷，總皂苷含量為 71%。實施例五將IOkg白頭翁根粉碎成粗粉末，采用120L95% (ν/ν)的甲醇微波提取2次，合并提取液，加入總液量2 %的硅藻土，攪拌，過濾，濾液于55°C減壓濃縮至總體積的1/4，得到提取濃縮液；加入等體積的水飽和正丁醇萃取，分離出正丁醇層，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取3次，得正丁醇浸膏3kg ；將正丁醇浸膏用水溶解后通過裝有5kg聚酰胺樹脂柱，先以水洗至糖反應(yīng)為陰性，再以65%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液再通過中性氧化鋁柱，收集下注液，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到1. Ikg白頭翁總皂苷，總皂苷含量為 69%。實施例六將20kg白頭翁根粉碎成粗粉末，采用160L水微波提取3次，合并提取液，加入總液量7%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液于55°C減壓濃縮至總體積的1/4，得到提取濃縮液；加入等體積的水飽和正丁醇萃取，分離出正丁醇層，回收正丁醇(可再次用于萃取)，萃取5 次，得正丁醇浸膏7kg ；將正丁醇浸膏用水溶解后通過裝有IOkg聚酰胺樹脂柱，先以水洗至糖反應(yīng)為陰性，再以80%乙醇洗脫，收集洗脫液，洗脫液再通過中性氧化鋁柱，收集下注液， 減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到2. 3kg白頭翁總皂苷，總皂苷含量為75%。
權(quán)利要求
1.白頭翁總皂苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將白頭翁根粉碎成粗粉，用水或甲醇微波提取，得到提取液；(2)加入硅藻土攪拌，過濾，濾液減壓濃縮，得到白頭翁提取濃縮液；(3)上述濃縮液用水飽和正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)將正丁醇浸膏通過聚酰胺樹脂柱，用去離子水和含水醇作為洗脫劑，收集洗脫液；(5)將上述洗脫液通過中性氧化鋁柱，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到白頭翁總皂苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中甲醇體積百分比為 60-95%，提取溶劑用量為藥材重量的5-15倍，提取2-3次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟O)中硅藻土加入量與提取液質(zhì)量體積比為2 8 100。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中水飽和正丁醇萃取， 加入與濃縮液等體積的水飽和正丁醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟中含水醇為體積百分比為50-80%的乙醇水溶液。
全文摘要
白頭翁總皂苷的制備方法，屬于天然藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，方法步驟為(1)將白頭翁根粉碎成粗粉，用水或甲醇微波提取，得到提取液；(2)加入硅藻土攪拌，過濾，濾液減壓濃縮，得到白頭翁提取濃縮液；(3)上述濃縮液用水飽和正丁醇萃取，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)將正丁醇浸膏通過聚酰胺樹脂柱，用去離子水和含水醇作為洗脫劑，收集洗脫液；(5)將上述洗脫液通過中性氧化鋁柱，減壓回收乙醇，得浸膏，真空干燥得到白頭翁總皂苷。本發(fā)明實現(xiàn)后與現(xiàn)有技術(shù)相比具有成本低，雜質(zhì)含量少，生產(chǎn)過程對環(huán)境污染少等優(yōu)點。
文檔編號A61P35/00GK102233013SQ20111011757
公開日2011年11月9日 申請日期2011年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月6日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司