專利名稱：黃花草木犀總皂苷及其制備方法和藥物用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥領域，涉及一種從黃花草木犀中提取獲得的總皂苷，及該總皂苷制備方法和其藥物用途。
背景技術：
黃花草木犀(Melilotus. officinalis. L.)是豆科草木犀屬的一年生或二年生草本植物，又名黃香草木犀。目前，對黃花草木犀中香豆素類化合物研究較多，并就富含香豆素類化合物的草木犀提取物及富含黃酮、多酚和香豆素類物質(zhì)的草木犀提取物在鎮(zhèn)痛、止血及消炎等方面申報了專利。皂苷(saponins)是一類以三萜或留體為苷元具有較高分子量的糖苷類化合物，皂苷類化合物廣泛分布于植物之中，是許多中藥的重要生物活性成分， 已成國內(nèi)外研究的熱門課題。而目前國內(nèi)外對黃花草木犀總皂苷類化學成分分離純化技術及藥理活性研究的還是空白。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種黃花草木犀總皂苷及其制備方法和藥物用途。本發(fā)明黃花草木犀總皂苷是由下列制法得到的(1)取黃花草木犀干燥全草，加入40 90%有機溶劑提取2 4次，每次0. 5 3小時，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂柱，先用水洗至中性，再以10% 20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50% 80%乙醇洗脫，收集50% 80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，得含量20% 90%黃花草木犀總皂苷。有機溶劑采用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮；提取方法包括加熱回流法、超聲提取法、超臨界提取法、浸漬法、微波法；大孔樹脂采用SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100, DlOU DM301、 DM130。本發(fā)明在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明所指的腫瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、腸癌及骨肉瘤。本發(fā)明還提供用本發(fā)明的草木犀總皂苷以及藥學上可接受的載體或賦形劑制備的藥物制劑。這些藥物制劑選自以下劑型片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、泡騰片劑、舌下片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、微球劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、散劑、 膏劑、口服液、混懸齊 、溶液齊 、氣霧齊 、注射劑，注射乳齊 、凍干粉針，還可以根據(jù)需要制備成緩釋或控釋制劑。本發(fā)明的含有草木犀總皂苷的藥物制劑，在制備藥物制劑時可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體來自抗氧劑、鏊合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、濕潤劑、 溶劑、緩釋材料、腸溶材料、PH調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用載體如甘露糖醇、右旋糖苷、 乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化鈉、硅衍生物、纖維素、纖維素衍生物、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、聚乙二醇、環(huán)糊精、磷脂類材料、 滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣等。本發(fā)明通過對黃花草木犀各有效部位的研究，發(fā)現(xiàn)富含總皂苷的草木犀提取物 總皂苷含量為20% 90%，具有較好的抗炎、消腫、止血、抑制腫瘤乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、腸癌及骨肉瘤活性。本發(fā)明的有益效果填補了制備草木犀總皂苷的空白并擴展了其在醫(yī)藥領域的應用范圍，從而提高了該類制劑在國際市場的況競爭力?？诜淮?00mg 600mg，每日兩次。


圖1是樣品最大吸收圖2是標準曲線圖3是CMX-M對MCF-7細胞增殖的抑制作用圖4是CMX-M對PC3M細胞增殖的抑制作用圖5是CMX-M對ACC細胞增殖的抑制作用圖6A是乳腺癌MCF-7對照組細胞形態(tài)圖6B是乳腺癌MCF-7經(jīng)CMX組作用后細胞形態(tài)圖7A是腮腺癌ACC對照組細胞形態(tài)圖7B是腮腺癌ACC經(jīng)CMX組作用后細胞形態(tài)圖8A是前列腺癌PC3M對照組細胞形態(tài)圖8B是前列腺癌PC3M經(jīng)CMX組作用后細胞形態(tài)圖
圖9A是腸癌SW620對照組細胞形態(tài)圖9B是腸癌SW620經(jīng)CMX組作用后細胞形態(tài)圖IOA是肺癌A549對照組細胞形態(tài)圖IOB是肺癌A549經(jīng)CMX組作用后細胞形態(tài)圖。
具體實施例方式實施例1(1)取黃花草木犀干燥全草，加入40%乙醇加熱回流提取2次，每次3小時，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂DlOl，先用水洗至中性，再以10%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50 %乙醇洗脫，最后收集50 %乙醇洗脫液濃縮干燥，得到含量 20% 90%的黃花草木犀總皂苷。實施例2(1)取黃花草木犀干燥全草，加入65%乙醇加熱回流提取3次，每次2小時，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂D201，先用水洗至中性，再以15%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用65 %乙醇洗脫，最后收集65 %乙醇洗脫液濃縮干燥，得到含量 20% 90%的黃花草木犀總皂苷。
實施例3(1)取黃花草木犀干燥全草，加入90%乙醇加熱回流提取4次，每次0. 5小時，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物，(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂AB8，先用水洗至中性，再以20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用80 %乙醇洗脫，最后收集80 %乙醇洗脫液濃縮干燥，得到含量 20% 90%的黃花草木犀總皂苷。在實施例中，有機溶劑還可選取甲醇、乙酸乙酯、丙酮，提取方法采取超聲提取法、 超臨界提取法、浸漬法、微波法，大孔樹脂選取SP825、DS401、DS100、HPD600、HPD100、DM301、 DM130。下面通過實驗例對本發(fā)明作進一步說明。實驗例一、黃花草木犀總皂苷的提取方法的研究實驗儀器與材料超聲提取器(KQ-250B型)、超臨界萃取器(HA420-40-96-EX型)、滲漉器、電子天平(DT100型)、UV-1700(日本島津)、HWC3L-1型微波萃取器(天水華圓制藥設備廣州分公司)、圓底燒瓶、冷凝管、其余試劑均為分析級。實驗方法1、總皂苷提取方法的研究(1)加熱回流提取法取黃花草木犀干燥全草(粉碎2 如m) 4份，每份各50g，分別加入40 90%有機溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，加熱回流提取2 4次，每次0. 5 3小時。合并提取液，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計算收率，結果見表1。(2)超聲法提取法取黃花草木犀干燥全草(粗粉)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機溶劑 (乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，超聲(30 60KHZ)提取2 4次，每次0. 5 1小時。合并提取液，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計算收率，結果見表2。(3)超臨界提取法取黃花草木犀干燥全草(粗粉)50g，投入萃取釜中，設置分離釜I溫度40°C、分離釜I壓力7. OMPa、分離釜II壓力6MPa，溫度!35°C，在萃取壓力20 50Mpa，萃取溫度30 50°C，萃取時間1 3小時，C02流量20 30L · h，萃取級數(shù)1 2，乙醇夾帶劑濃度25 70%條件提取總皂苷。萃取達到預定時間后，收集提取物，除去水分稱其質(zhì)量，計算得率，結果見表3。(4)浸漬提取法取黃花草木犀干燥全草(20 60目)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，浸泡提取2 4次，每次12 48小時。合并提取液，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計算收率，結果見表4。(5)滲漉提取法
取黃花草木犀干燥全草(40 100目)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)50 IOOml (溶劑量為藥材量的1 2倍)浸泡2 4小時，裝入滲漉器中，緩緩從滲漉器頂部加40 90%有機溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250 350ml (溶劑量為藥材量的5 7倍)，放置M 48小時后打開下口開關，使?jié)B漉液緩緩流出。60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計算收率，結果見表5。(6)微波提取法取黃花草木犀干燥全草(40 100目)4份，每份各50g，分別加入40 90%有機溶劑(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)4000 5000ml使用微波提取器提取，微波功率 (190 250W)提取2 4次，每次5 25min。合并提取液，過濾，60 80°C回收溶劑，60 80°C減壓干燥得干品，計算收率，結果見表6。2、測定方法(1)最大吸收波長的確定①標準品溶液的制備精密稱取黃花草木犀苷A對照品(自制)4. 40mg于25ml量瓶中，加甲醇超聲使其完全溶解，并定容至刻度，使?jié)舛葹?. 176mg/ml。②樣品溶液的制備取加熱回流提取法所得干膏1. 0g，精密稱定，用50ml水使其充分溶解，過濾，濾液置分液漏斗中，用等量的水飽和正丁醇萃取三次，合并萃取液，水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至IOOml容量瓶中，定容至刻度，為樣品溶液。③最大吸收波長的測定分別取上述標準品溶液及樣品溶液各0. 5ml，分別置于IOml具塞試管中，沸水浴中揮干，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.細1，高氯酸1. 6ml，密塞，于65°C水浴中加熱20min，取出，冰水浴中冷卻后加入冰醋酸8ml，混勻，分別為對照品與樣品液。以相應試劑為空白，在400 900nm波長范圍內(nèi)測定其吸收波長。結果顯示，標準品與樣品溶液在Mlnm處均有最大吸收，所以將測定波長設為541nm，結果見圖1。(2)標準曲線的繪制精密量取上述標準品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于IOml具塞試管中，沸水浴中揮干，照2. 2. 3項下自“加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 4ml, ”起，在Mlnm下測定其吸光度。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。得蘆丁標準曲線為Y = 15. 602x+0. 0877, r = 0. 9995 (n =幻。表明黃花草木犀苷 A 在 0. 0088 0. 044mg/ml 范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線形關系。結果見圖2。(3)總皂苷含量測定取上述樣品溶液各0. :3ml，置于IOml具塞試管中，沸水浴中揮干，依次加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.細1，高氯酸1. 6ml，密塞，于65°C水浴中加熱20min，取出，冰水浴中冷卻后加入冰醋酸8ml，混勻，以相應的試劑為空白對照，在Mlnm處測定吸光度，計
笪弁。計算公式
6黃花草木犀總皂苷含量
權利要求
1.一種黃花草木犀總皂苷，其特征在于是由下列制法得到的(1)取黃花草木犀干燥全草，加入40 90%有機溶劑提取2 4次，每次0.5 3小時，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；(2)將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂柱，先用水洗至中性，再以10% 20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50% 80%乙醇洗脫，收集50% 80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，得含量20% 90%黃花草木犀總皂苷。
2.根據(jù)權利要求1所述的黃花草木犀總皂苷，其特征在于有機溶劑采用乙醇、甲醇、 乙酸乙酯、丙酮。
3.根據(jù)權利要求1所述的黃花草木犀總皂苷，其特征在于提取方法包括加熱回流法、超聲提取法、超臨界提取法、浸漬法或微波法。
4.根據(jù)權利要求1所述的黃花草木犀總皂苷，其特征在于大孔樹脂采用SP825、D201、 DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301 或 DM130。
5.如權利要求1所述的黃花草木犀總皂苷的制備方法。
6.如權利要求1所述的黃花草木犀總皂苷在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應用。
7.如權利要求6所述的黃花草木犀總皂苷在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應用，其特征在于腫瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、腸癌及骨肉瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及黃花草木犀總皂苷及其制備方法和藥物用途，屬于中藥領域。取黃花草木犀干燥全草，加入40～90%有機溶劑提取2～4次，每次0.5～3小時，合并提取液，提取液濃縮，干燥，得提取物；將此提取物以水溶解，通過大孔樹脂柱，先用水洗至中性，再以10%～20%乙醇洗脫，至洗脫液無色，再用50%～80%乙醇洗脫，收集50%～80%乙醇洗脫液，濃縮干燥，得含量20%～90%黃花草木犀總皂苷。本發(fā)明在制備抗炎、消腫、止血、抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明填補了制備草木犀總皂苷的空白并擴展了其在醫(yī)藥領域的應用范圍。
文檔編號A61P7/04GK102178725SQ20111011917
公開日2011年9月14日 申請日期2011年5月10日 優(yōu)先權日2011年5月10日
發(fā)明者嚴銘銘, 于紅威, 吳巖, 周媛, 張銀玲, 楊智, 王醫(yī)術, 趙大慶 申請人:長春中醫(yī)藥大學