專利名稱：田基黃總黃酮用于制備治療肝纖維化的藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及田基黃總黃酮的新用途，尤其是涉及田基黃總黃酮用于制備治療肝纖維化的藥物的新用途。
背景技術(shù)：
肝纖維化是包括肝炎、脂肪肝、酒精肝等在內(nèi)的大部分肝病發(fā)展到肝硬化、肝癌的必經(jīng)環(huán)節(jié)。研究表明，肝纖維化患者中的20% 40%最終發(fā)展為肝硬化乃至肝癌。國際肝病學(xué)術(shù)權(quán)威Hans Popper教授提出“誰能阻止肝纖維化，誰就能治愈大多數(shù)肝病”，因此有效阻斷肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，對防治肝硬化和肝癌具有重要意義。然而，由于肝纖維化病理機制的復(fù)雜性，目前臨床仍缺乏療效顯著、毒副作用小的肝纖維化治療藥物。我國現(xiàn)有各類型肝病患者已超過2億之眾，其中乙肝病毒攜帶者約9300萬，現(xiàn)癥感染者約3000萬，丙肝病毒攜帶者約4000萬，脂肪肝患者約1. 2億，每年新增病例超過100 萬人，治療費用達1000億人民幣以上，給社會造成無比沉重的經(jīng)濟負擔，也給無數(shù)患者和家庭帶來了巨大的痛苦。因此，尋找具有顯著抗肝纖維化作用的安全藥物是當前研究的熱點，也是切合當前醫(yī)療水平實際的緊要課題。中藥因其多靶點作用及毒副作用小的特點，近年已成為國內(nèi)外防治肝纖維化研究的熱點。中藥田基黃為藤黃科金絲桃屬植物地耳草japonicum Thunb.的全草。始載于《生草藥性備要》、《植物名實圖考》，為兩廣(廣東、廣西)道地藥材。性平，味甘淡、微苦辛，入肝、脾經(jīng)。具清熱利濕、解毒、散瘀消腫之功，主治濕熱黃疸、泄瀉、痢疾、腸癰、 癰癤腫毒、乳蛾、口瘡、目赤腫痛、毒蛇咬傷、跌打損傷等，民間和臨床上多用于治療急性黃疸性肝炎，療效顯著。上海長征制藥廠自1972年起以田基黃為原料制成田基黃注射液，用于治療急性黃疸型肝炎，該制劑收載于1977版中國藥典，并沿用至今。我們在前期的實驗研究中發(fā)現(xiàn)田基黃總黃酮口服給藥，對膽管結(jié)扎所致的大鼠肝纖維化、四氯化碳所致的大鼠肝纖維化、豬血清腹腔注射所致的大鼠肝纖維化具有顯著的治療作用，且未見毒副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供田基黃總黃酮的一種新用途，即將田基黃總黃酮用于制備治療肝纖維化的藥物的用途。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量的研究工作，表明田基黃總黃酮能起到治療肝纖維化的作用，可用于制備治療肝纖維化的藥物。上述田基黃總黃酮含有黃酮類化合物的總量高于50%。根據(jù)本發(fā)明所述的田基黃總黃酮的用途的進一步特征，所述的田基黃總黃酮是從中藥田基黃O^eric腫japonicum Thunb.)中提取的。本發(fā)明對田基黃總黃酮進行抗肝纖維化作用的動物實驗。結(jié)果表明田基黃總黃酮口服給藥，對膽管結(jié)扎所致的大鼠肝纖維化、四氯化碳所致的大鼠肝纖維化、豬血清腹腔注射所致的大鼠肝纖維化具有顯著的治療作用；既能通過阻抑膠原等胞外基質(zhì)合成、分泌和促進已沉積的膠原纖維重吸收等直接干預(yù)肝內(nèi)胞外基質(zhì)代謝來發(fā)揮其抗肝纖維化作用， 又通過抗炎等作用以減少肝纖維化誘發(fā)因素而間接發(fā)揮其抗肝纖維化作用，從而從肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展各個方面產(chǎn)生顯著作用。提示田基黃總黃酮具有很好的抗肝纖維化作用。本發(fā)明的實驗證明，田基黃總黃酮不僅具有很好的抗肝纖維化作用，而且在大鼠急性毒性實驗中沒有表現(xiàn)出毒性反應(yīng)。動物實驗表明當田基黃總黃酮以4. 44g/kg經(jīng)口灌胃給予SD大鼠14天觀察期內(nèi)，大鼠未見死亡，精神及行為活動狀況良好、皮膚被毛清潔、大小便正常，體重增長正常，攝食量亦未見異常，大體解剖亦未見臟器異常。表明田基黃總黃酮安全性高。綜上所述，田基黃總黃酮具有很好的抗肝纖維化作用，未見毒副作用，可用于制備治療肝纖維化的藥物，用于臨床中肝纖維化的治療。


圖1是肝組織切片HE染色圖(X 200)，由上至下分別為正常對照組、模型對照組和田基黃總黃酮組，顯示田基黃總黃酮對膽總管結(jié)扎所致大鼠肝纖維化的作用。圖2是肝組織切片α -SMA蛋白表達免疫組化染色圖(Χ400)，由上至下分別為正常對照組、模型對照組和田基黃總黃酮組，顯示田基黃總黃酮對膽總管結(jié)扎所致大鼠肝纖維化的作用。圖3是肝組織切片HE染色圖(X 200)，由上至下分別為正常對照組、模型對照組和田基黃總黃酮組，顯示田基黃總黃酮對豬血清致大鼠免疫性肝纖維化的作用。圖4是肝組織切片α -SMA蛋白表達免疫組化染色圖(Χ400)，由上至下分別為正常對照組、模型對照組和田基黃總黃酮組，顯示田基黃總黃酮對豬血清致大鼠免疫性肝纖維化的作用。圖5是肝組織切片HE染色圖(X 200)，由上至下分別為正常對照組、模型對照組和田基黃總黃酮組，顯示田基黃總黃酮對CCl4復(fù)合因素所致大鼠肝纖維化的影響。圖6是肝組織切片α -SMA蛋白表達免疫組化染色圖(Χ400)，由上至下分別為正常對照組、模型對照組和田基黃總黃酮組，顯示田基黃總黃酮對CCl4復(fù)合因素所致大鼠肝纖維化的影響。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。各實施例中所涉及的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以Wt/Wt、V0l/V0l、Wt/V0l計算，除非另有說明。實施例1 :田基黃總黃酮的制備
取田基黃藥材適量，切段，分別以12倍、10倍、8倍量水煎煮三次，每次1小時，濾過，濾液合并，減壓濃縮至含田基黃藥材0. 5g/ml ；加入到預(yù)先準備好的聚酰胺柱上，首先以蒸餾水洗脫至洗脫液顏色色淡，再加60%乙醇洗脫至鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陰性為止，收集醇洗液， 濃縮至相對密度為1. 08 1. 10 (60°C)的濃縮液，在進風(fēng)溫度為100 200°C，出風(fēng)溫度為 50 150°C的條件下，噴霧干燥即得田基黃總黃酮。按上述方法，共選用五批田基黃藥材進
4行提取，得到五批田基黃總黃酮提取物。 精密稱取槲皮苷對照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得(每Iml中含槲皮苷200 μ g)。精密量取槲皮苷對照品溶液0. 5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、 2. 5ml，分別置IOml量瓶中，各加甲醇至2. 5ml，加5%亞硝酸鈉溶液0. 4ml，混勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液0. 4ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液，再加水至刻度，搖勻， 放置15分鐘，以相應(yīng)試劑作空白，照紫外一可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2005 年版一部V A)，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。取前述田基黃總黃酮每批約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理 (功率360W，頻率35kHz) 10分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液anl，置IOml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取anl，置IOml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加甲醇至2. 5ml”起，依法測定吸光度，根據(jù)標準曲線計算，即得。按干燥品計算，五批田基黃總黃酮中黃酮類化合物含量以槲皮苷(C21H2tlOltl)計，測定結(jié)果如表1
表1 五批田基黃總黃酮中黃酮類化合物含量
權(quán)利要求
1.田基黃總黃酮用于制備治療肝纖維化的藥物的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的田基黃總黃酮中，黃酮類化合物的總含量高于50%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述的田基黃總黃酮是從中藥田基黃 {Hypericum japonicum Thunb.)中提取的。
全文摘要
本發(fā)明涉及田基黃總黃酮用于制備治療肝纖維化的藥物的用途。田基黃總黃酮是從田基黃(Hypericum japonicum Thunb.)中提取的有效成分。本發(fā)明進一步提供了一種用于治療肝纖維化的藥物組合物，該藥物組合物包括有效治療劑量的作為活性成分的田基黃總黃酮，以及藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明通過動物實驗表明，田基黃總黃酮具有很好的抗肝纖維化作用，未見毒副作用，可用于制備治療肝纖維化的藥物，用于臨床中肝纖維化的治療。
文檔編號A61P1/16GK102210725SQ20111015062
公開日2011年10月12日 申請日期2011年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月7日
發(fā)明者吳忠, 彭維, 李沛波, 楊翠平, 王永剛, 蘇薇薇 申請人:中山大學(xué)