專利名稱：一種青黛炮制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種青黛炮制方法，屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
青黛為爵床科植物馬藍、蓼科植物蓼藍或十字花科植物菘藍的葉或莖葉經(jīng)加工制得的干燥粉末或團塊。其炮制過程，是馬藍莖葉中的前體物質(zhì)向靛藍、靛玉紅轉(zhuǎn)化的過程， 主要包括浸泡、制粗靛、水飛精制等環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的炮制方法為在秋季收割莖葉，將其置于浸泡池內(nèi)，引入河水，將其完全淹沒，浸泡發(fā)酵數(shù)日，待池液呈污綠色時，撈去殘渣，投入石灰， 充分攪拌，靜置1至2日，棄去上清液，收集底部的沉淀物移至小池中，靜置、再棄去上清液， 得到半成品一一粗靛。粗靛再經(jīng)過水飛、泡沫浮選等除雜精制過程，干燥后即得青黛。[賈思勰.齊民要術(shù).卷五[M].繆啟愉校釋，繆桂龍參校.北京農(nóng)業(yè)出版社，1982 :53.][宋應星·天工開物[M],北京商務(wù)印書館，1954 12.]專利申請?zhí)?00310110926. 8，發(fā)明名稱“青黛炮制的現(xiàn)代化生產(chǎn)方法”的專利申請公開了一種以天然植物馬藍的葉或莖葉炮制粗靛的現(xiàn)代化生產(chǎn)方法浸泡環(huán)節(jié)將切制后的馬藍莖葉，按照1 10 1 30的比例加入經(jīng)預處理過的浸泡用水，浸泡發(fā)酵至浸泡液變成污綠色為止，浸泡用水的溫度為20 50°C，浸泡時間為M 7 后過濾除莖葉碎片；制粗靛環(huán)節(jié)按生石灰用量與馬藍量的比值為10 1的比例加入生石灰，調(diào)成石灰乳， 將其引入上述已除雜的浸泡發(fā)酵液中，并用攪拌器充分攪拌，同時在攪拌過程中通過對溶液酸堿度的測試進而增減生石灰的用量，至1小時后觀察溶液有藍靛成線狀沉淀為止；或者使用鼓風機或空氣壓縮機將空氣直接通入浸泡發(fā)酵池中，直至有藍靛成線狀沉淀生成為止。其中，所述的酸堿度的測試，是指一方面在攪拌過程中注意觀察池內(nèi)溶液的顏色變化， 若由綠色變?yōu)榈包S色說明石灰用量已適度；另一方面，為穩(wěn)重起見，還須經(jīng)口嘗味道加以驗證，感到先苦后帶甜是堿性適度，即PH值為12 13。青黛中的有效成分是靛藍(Indigo)和靛玉紅(Indirubin)。近年來，青黛及其制劑的治療范圍不斷擴展，除傳統(tǒng)應用外，靛玉紅治療白血病的藥用價值引起了高度關(guān)注。但是目前青黛炮制方法的研究僅以靛藍為控制產(chǎn)品質(zhì)量的指標，如何提高青黛中靛玉紅或靛藍的含量值得研究。另外，制靛過程中調(diào)節(jié)的PH為影響靛藍、靛玉紅產(chǎn)生的關(guān)鍵因素，而實際中石灰乳的用量完全依據(jù)經(jīng)驗，使得炮制工藝難以規(guī)范，導致青黛成品質(zhì)量參差不齊，影響了臨床療效的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種青黛炮制方法，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了此法制備的粗靛。本發(fā)明提供了一種青黛炮制方法，它包括如下步驟a、取爵床科植物馬藍、蓼科植物蓼藍或十字花科植物菘藍的葉或莖葉，置于pH值為3. 5-7，溫度為25-60°C的水中，水與鮮葉質(zhì)量比值為8_15，浸泡Mh_48h，過濾除去葉渣，得濾液；b、濾液通空氣0-30min后，加堿調(diào)節(jié)pH值至9-10. 5，通空氣30_240min，加入石灰乳，攪拌均勻后靜置，過濾取沉淀，干燥得粗靛，粗靛精制后即得青黛。其中，所述的石灰乳的制備方法為取生石灰，緩慢加入沸水中配制而得，其中，生石灰的用量為葉或莖葉量的5-12倍；所述的堿為氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀。其中，步驟a所述的PH值為3.5，溫度為25_601，水與鮮葉的質(zhì)量比值為 11. 5-15，浸泡時間為Mh ；步驟b所述的加堿調(diào)節(jié)PH值至9，通空氣30-50min。進一步優(yōu)選地，步驟a所述的溫度為25 V，水與鮮葉的質(zhì)量比值為11. 5-13 ；步驟b所述的加堿調(diào)節(jié) PH值后通空氣30min。所述的步驟a的浸泡過程采用避光浸泡操作。該炮制方法制備的粗靛中靛藍轉(zhuǎn)移率大于1. 8mg/g，其中所述的轉(zhuǎn)移率為粗靛中靛藍的質(zhì)量mg/鮮葉的質(zhì)量g。其中，所述的步驟a中pH值為7，溫度為42. 5-60°C，水與鮮葉的質(zhì)量比值為8_15， 浸泡時間為48h ；所述的步驟b中濾液通空氣30min后，加氨水調(diào)節(jié)pH值至10. 5，通空氣 30-240min。進一步優(yōu)選地，步驟b所述的通空氣135-180min。該方法制備得到的粗靛中靛玉紅轉(zhuǎn)移率大于0. 35mg/g，其中所述的轉(zhuǎn)移率為粗靛中靛玉紅的質(zhì)量mg/鮮葉的質(zhì)量g。本發(fā)明分別以靛藍、靛玉紅為評價指標系統(tǒng)的確定了粗靛炮制工藝，量化了各個工藝參數(shù)，改變了依據(jù)經(jīng)驗進行炮制的傳統(tǒng)，通過制靛前通氧氣和制靛過程中調(diào)節(jié)PH值提高了靛玉紅的含量，擴大了青黛臨床應用范圍；本發(fā)明將粗靛制備分為兩步，采用氨水調(diào)節(jié) PH值以提供氧化環(huán)境，再采用石灰乳作為靛沉淀的載體，減少了石灰用量，減少了粗靛的后期精制次數(shù)，節(jié)約了工序；通過在本發(fā)明炮制方法下不同參數(shù)的選擇，可分別定向制備成靛藍或靛玉紅的含量較高的粗靛，產(chǎn)品品質(zhì)好。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明粗靛的制備將鮮葉置于pH約為3. 5的25°C自來水中，其中水體積鮮葉質(zhì)量(ml g)為13， 避光浸泡24h后，過濾除去葉渣，加氨水調(diào)節(jié)濾液pH至9，再通空氣30min后，加入10 %新制的石灰乳(取鮮葉質(zhì)量10%的CaO，加入10倍量的沸水中，不斷攪拌，形成混懸液，即可)， 攪拌均勻后靜置Mh，過濾取沉淀，干燥即得粗靛。實施例2本發(fā)明粗靛的制備將鮮葉置于pH約為7的60°C自來水中，其中水體積鮮葉質(zhì)量(ml g)為15，浸泡4 后，過濾除去葉渣，濾液通空氣30min，加氨水調(diào)節(jié)濾液pH至10. 5，再通空氣180min 后，加入10%新制的石灰乳(取鮮葉質(zhì)量10%的CaO，加入10倍量的沸水中，不斷攪拌，形成混懸液，即可)，攪拌均勻后靜置Mh，過濾取沉淀，干燥即得粗靛。實施例3粗靛炮制過程中靛藍定向生成的工藝參數(shù)選擇1、儀器與試藥島津LC-10ATvp高效液相色譜儀(浙江智達N2000色譜工作站)；BP211D型電子分析天平(Max = 210g，d = 0. Olmg，德國Sartorius) ；KQ-400DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；SZ-93型自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；UB-FB 型轉(zhuǎn)子流量計(蘇州化工儀表有限公司)；ACO系列電磁式空氣壓縮機(浙江森森實業(yè)有限公司)；SHB-III S循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)
馬蘭莖葉(四川江油恒源藥業(yè)提供)；靛藍(中國藥品生物制品檢定所，批號 110716-200509)；靛玉紅(中國藥品生物制品檢定所，批號:110717-200204)；甲醇(色譜純，購買于Fisher公司)；水(重蒸水，自制)；微孔濾頭(0.2 μ m，購買于Millipore公司)； 其它試劑均為分析純。2、方法與結(jié)果2. 1 Plackett-Burman i式驗方^去選用Plackett-Burman設(shè)計對影響浸泡、打靛環(huán)節(jié)的8個因素的重要性進行考察。 共8個因素做12個試驗，每個因素取高、低兩種水平。用design expert7. 1軟件設(shè)計試驗并進行數(shù)據(jù)處理。比較各因素P值，P值< 0. 05的因素作為顯著影響因素。2. 1. 1試驗因素范圍及水平的規(guī)定以葉子前處理是否除蠟、浸泡液pH、浸泡是否避光、溶劑體積、浸泡時間、溫度、加堿種類、通空氣時間等8個因素作為考察對象。每個因素測試高(+1)、低(-1)兩水平，試驗次數(shù)為12。具體試驗因素以及水平值見表1。表1 Plackett-Burman設(shè)計因子的水平范圍
ABCD (ml g)E(h)F(0C)GH(min)閃素除蠟否浸泡液pH避光否溶劑體積鮮葉質(zhì)量時間、>曰 ρ τ πη/又加堿種類通氣時間水平d 1除蠟3.5避光81230石灰乳30不除蠟7不避光153660氨水2402. 1. 2 Plackett-Burman 試驗結(jié)果及分析8個因素12個試驗，按Plackett-Burman設(shè)計表進行試驗，每個試驗號重復做三次，粗靛含量測定結(jié)果取三次的均值，再轉(zhuǎn)化為鮮葉中的產(chǎn)靛量(mg/g)。Plackett-Burman 試驗設(shè)計及響應值(靛藍的產(chǎn)量)見表2。表2 Plackett-Burman試驗設(shè)計及響應值
試驗號浸泡除賠否、 t 避光否溶劑體積液pH浸泡時間 (min)浸泡她/又 (。C)加堿種類？·罵閩 B 3虛靛藍產(chǎn)量 (mg/g)111-1 111-11.182111-10.273-11111.2141-1111.5151110.326-111-]0.1271-1110.818-1110.259-1-11-10.7510-1-111.52111-1-11.3512-1 -1 -1 -1-1-1-10.00
由表2可以看出，各個因素對產(chǎn)靛有比較顯著的影響。運用design expert7. 1軟件對表2進行回歸分析，得到各因素的顯著性列入表3。表3各因素顯著性分析
權(quán)利要求
1.一種青黛炮制方法，它包括如下步驟a、取爵床科植物馬藍、蓼科植物蓼藍或十字花科植物菘藍的葉或莖葉，置于pH值為 3. 5-7，溫度為25-60°C的水中，水與鮮葉質(zhì)量比值為8_15，浸泡Mh_48h，過濾除去葉渣， 得濾液；b、濾液通空氣0-30min后，加堿調(diào)節(jié)pH值至9-10.5，通空氣30_240min，加入石灰乳， 攪拌均勻后靜置，過濾取沉淀，干燥得粗靛，粗靛精制后即得青黛。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青黛炮制方法，其特征在于所述的石灰乳的制備方法為取生石灰，緩慢加入沸水中配制而得，其中，生石灰的用量為葉或莖葉量的5-12倍；所述的堿為氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的青黛炮制方法，其特征在于步驟a所述的pH值為3.5， 溫度為25-60°C，水與鮮葉的質(zhì)量比值為11. 5-15，浸泡時間為Mh ；步驟b所述的加堿調(diào)節(jié) pH值至9，通空氣30-50min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的青黛炮制方法，其特征在于步驟a所述的溫度為25°C，水與鮮葉的質(zhì)量比值為11. 5-13 ；步驟b所述的加堿調(diào)節(jié)pH 值后通空氣30min。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的青黛炮制方法，其特征在于所述的步驟a的浸泡過程采用避光浸泡操作。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的青黛炮制方法，其特征在于所述的步驟a中pH值為7， 溫度為42. 5-60°C，水與鮮葉的質(zhì)量比值為8-15，浸泡時間為48h ；所述的步驟b中濾液通空氣30min后，加堿調(diào)節(jié)pH值至10. 5，通空氣30_240min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的青黛炮制方法，其特征在于步驟a所述的溫度為60°C，水與鮮葉的質(zhì)量比值為15 ；步驟b所述的通空氣 i;35-180min。
8.權(quán)利要求3或4所述的炮制方法制備的粗靛。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的粗靛，其特征在于靛藍轉(zhuǎn)移率大于1.8mg/g。
10.權(quán)利要求6或7所述的炮制方法制備的粗靛。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的粗靛，其特征在于靛玉紅轉(zhuǎn)移率大于0.35mg/g。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種青黛炮制方法，它包括如下步驟a、取爵床科植物馬藍、蓼科植物蓼藍或十字花科植物菘藍的葉或莖葉，置于pH值為3.5-7，溫度為25-60℃的水中，水與鮮葉質(zhì)量比值為8-15，浸泡24h-48h，過濾除去葉渣，得濾液；b、濾液通空氣0-30min后，加堿調(diào)節(jié)pH值至9-10.5，通空氣30-240min，加入石灰乳，攪拌均勻后靜置，過濾取沉淀，干燥得粗靛，粗靛精制后即得青黛。本發(fā)明炮制方法制備的粗靛中靛藍、靛玉紅的含量較高，產(chǎn)品品質(zhì)好。
文檔編號A61K36/315GK102247415SQ20111015224
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
發(fā)明者傅超美, 劉澤玉, 楊明, 蘇柘僮, 許潤春 申請人:成都中醫(yī)藥大學