專利名稱：預(yù)防和/或治療肝硬化的干細(xì)胞復(fù)合藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種干細(xì)胞復(fù)合藥物、其制備方法及其在治療肝硬化上的應(yīng)用，特別是采用從人臍帶組織提取的間充質(zhì)干細(xì)胞，復(fù)合低抗凝肝素制備的干細(xì)胞的復(fù)合藥物，其制備方法及其在轉(zhuǎn)化成新生肝細(xì)胞發(fā)揮正常肝細(xì)胞功能和干預(yù)肝纖維化形成方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝硬化是由于各種病因長(zhǎng)期損害肝臟，引起肝臟慢性、進(jìn)行性、彌漫性纖維性病變，是常見的慢性肝病之一。近年來，由于人們生活飲食習(xí)慣以及環(huán)境因素的改變，肝硬化的發(fā)病呈上升趨勢(shì)。從肝臟組織學(xué)上來看，僅有大量的纖維化組織增生和沉積，而肝小葉結(jié)構(gòu)尚未被破壞稱為肝纖維化。如果病情進(jìn)一步發(fā)展，在纖維化的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)再生結(jié)節(jié)，正常的肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞而形成假小葉，即稱肝硬化。作為末期慢性肝病，肝硬化導(dǎo)致持久性和復(fù)發(fā)性擴(kuò)散肝損傷，在肝細(xì)胞中引起纖維癥和形成結(jié)節(jié)。肝纖維化、肝硬化是各種慢性肝病演變至肝壞死、肝衰竭的必經(jīng)階段，其病理學(xué)特征一是肝細(xì)胞變性造成功能性肝細(xì)胞大量減少，出現(xiàn)嚴(yán)重的肝功能障礙。二是，肝組織纖維化，質(zhì)地變硬，出現(xiàn)結(jié)節(jié)，導(dǎo)致肝組織結(jié)構(gòu)進(jìn)一步的破壞，肝竇狀隙變窄，使得進(jìn)出肝臟的血液循環(huán)受阻而產(chǎn)生肝門脈高壓、腹水、肝昏迷等一系列嚴(yán)重后果。肝纖維化是由于肝細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)過度增生和/或ECM降解減少造成沉積形成的，是造成肝硬化不可逆轉(zhuǎn)的重要病因。目前肝移植被認(rèn)為是一種有效的替代無功能肝細(xì)胞的臨床治療方法，但因供體缺乏、手術(shù)損傷、排斥反應(yīng)及價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)而應(yīng)用受限。肝內(nèi)干細(xì)胞移植具有來源廣泛、創(chuàng)傷性小及可重復(fù)進(jìn)行等優(yōu)點(diǎn)，新生的肝細(xì)胞還能有效地代償肝功能。然而具有大量增生的纖維和結(jié)節(jié)的硬化肝臟，造成肝臟缺乏血液供應(yīng)，使得移植入肝臟的新生細(xì)胞缺乏合適的生存環(huán)境而逐漸凋亡。人臍帶沃頓膠質(zhì)(Wharton ‘ s Jelly)組織中含有大量的具有極強(qiáng)的分化禾口轉(zhuǎn)化人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical mesenchymal stem cells, HUMSCs)。許多研究證明HUMSCs在體外培養(yǎng)中能分化成多種干細(xì)胞(Fu, Y. S. et al.， Conversion οfHumanUmbi1ica1 Cord Mesenchymal Stem Cells in Wharton ' s Jelly to Dopaminergic Neurons inVitro-Potential Therapeutic Application for Parkinsonism. Stem Cells 2004 ；24 :115-124 ；Wang, H. S. , Hung, S. C. , and Pong, S. Τ., Mesenchymal Stem Cells in Wharton Jelly oftheHuman Umbilical Cord.Stem Cells 2004 ；22 :1330-1337)。肝素屬于ECM中蛋白質(zhì)聚糖成分，除了有抗凝活性外，對(duì)ECM產(chǎn)生細(xì)胞(腎小球系膜細(xì)胞，3T3成纖維母細(xì)胞)和潛在ECM產(chǎn)生細(xì)胞(血管平滑肌細(xì)胞)和肝星狀細(xì)胞均有明顯的抑制增生和調(diào)節(jié)ECM合成的生物學(xué)效應(yīng)。然而肝素的強(qiáng)抗凝活性能導(dǎo)致血凝時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)本來已有出血傾向的肝病更易發(fā)生大出血而不宜使用。但是低抗凝肝素與肝素具有相同的抑制肝星狀細(xì)胞合成前膠原蛋白的功效，能有效地干預(yù)肝纖維化生成過程，并能降解已形成的肝纖維，給新生的肝細(xì)胞提供生存的空間(CastellotJJ Jr, et al. Heparinand glomerular epithelial cell-secreted heparin-like species inhibitmesangial cell proliferation. Am J Pathol, 1985,120 ；427 ；Hoover RL, et al. Inhibition of ratarterial smooth muscle cell proliferation by heparin, II， in vitro studies. Circ Res, 1980,47 :578)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的產(chǎn)品及其制備方法。本發(fā)明所提供的預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的產(chǎn)品，它的活性成分為下述a)或b)a)由離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素組成的組合物；所述低抗凝肝素的抗凝效價(jià)為(27-3 X 103U/g ；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素的配比為IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素；b)由離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素可溶性鹽組成的組合物；所述低抗凝肝素可溶性鹽的抗凝效價(jià)為(27-3 X 103U/g ；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽的配比為IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素可溶性鹽。所述低抗凝肝素可溶性鹽具體可為低抗凝肝素鈉。上述低抗凝肝素的抗凝效價(jià)具體可為30. 33X 103U/g，如來自Sigma-Aldrich Inc, N/2/3DS的低抗凝肝素。所述a)中，所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素可獨(dú)立包裝，也可混合在一起；所述b)中，所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素可溶性鹽可獨(dú)立包裝， 也可混合在一起。上述產(chǎn)品的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。上述產(chǎn)品的制備方法具體可包括下述1)或幻或幻或4)的步驟1)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素按照所述配比混合，得到所述產(chǎn)品；2)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽按照所述配比混合，得到所述產(chǎn)品；3)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素按照所述配比分別獨(dú)立包裝，得到所述產(chǎn)品；4)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽按照所述配比分別獨(dú)立包裝，得到所述產(chǎn)品。需要的時(shí)候，在上述預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化產(chǎn)品中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合齊 、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等，必要時(shí)還可以加入香味劑、甜味劑等。本發(fā)明還提供了一種預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液。
本發(fā)明所提供的預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液，由上述產(chǎn)品和注射用生理鹽水組成。所述注射液中，所述產(chǎn)品的含量以所述人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞計(jì)為IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞每0. 25ml注射用生理鹽水，具體可為IO7個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞每0. 25ml 注射用生理鹽水。本發(fā)明還提供了一種預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的成套產(chǎn)品。本發(fā)明所提供的預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的成套產(chǎn)品，活性成分為上述產(chǎn)品和治療肝纖維化和/或肝硬化的中藥，所述產(chǎn)品和治療肝纖維化和/或肝硬化的中藥分別獨(dú)立包裝；所述治療肝纖維化和/或肝硬化的中藥可為中成藥，如乙肝寧。乙肝寧的劑型可為沖劑或顆粒，如乙肝寧顆粒(九芝堂股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020152)。所述預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化具體體現(xiàn)為下述1)至幻中的至少一種1)降低肝纖維化和2)降低肝纖維化和3)降低肝纖維化和4)降低肝纖維化和5)降低肝纖維化和量。本發(fā)明的由人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素組成的產(chǎn)品可以顯著緩解慢性肝病患者的臨床癥狀，顯著降低患者血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、透明質(zhì)酸、IV型膠原、血清III型前膠原肽和層粘連蛋白的含量。


圖1為實(shí)施例1中兩組的血清透明質(zhì)酸(HA)的變化情況。*p < 0. 05，< 0. 01， One Way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析圖2為實(shí)施例1中兩組血清IV型膠原(IV-C)的變化情況。< 0. 01，One WayANOVA統(tǒng)計(jì)分析圖3為實(shí)施例1中兩組示血清層粘連蛋白(LN)的變化情況。< 0.01, One WayANOVA統(tǒng)計(jì)分析圖4為實(shí)施例1中兩組示血清III型前膠原肽(PIIIP)的變化情況。<0.01, One Way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析圖1-4中的2月、4月和6月分別表示第4次注射后的60天、120天和180天。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中所用的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來自Sciencell，7530。下述實(shí)施例中所用的抗凝效價(jià)為30. 33X 103U/g的低抗凝肝素來自 Sigma-AldrichInc, N/2/3DS。
/或肝硬化患者的血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量； /或肝硬化患者的血清中的透明質(zhì)酸含量； /或肝硬化患者的血清中的IV型膠原含量； /或肝硬化患者的血清中的層粘連蛋白含量； /或肝硬化患者的血清中的PIIIP(血清III型前膠原肽)含
本專利申請(qǐng)的發(fā)明人所在實(shí)驗(yàn)室先前的研究中證明HUMSCs可以分化為肝樣細(xì)胞，并利用肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、成纖維生長(zhǎng)因子和抑瘤素等細(xì)胞因子將HUMSCs向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化，分化的細(xì)胞表達(dá)出肝細(xì)胞表面標(biāo)志物ALB、AFP、CK18和CK19，糖原染色呈現(xiàn)陽性。將 HUMSCs移植入大鼠肝臟內(nèi)，HUMSCs能發(fā)育并呈現(xiàn)出肝細(xì)胞樣形態(tài)，儲(chǔ)藏肝糖原，產(chǎn)生尿素， 成為具有功能的肝細(xì)胞，達(dá)到恢復(fù)和提高肝功能的目的。本專利申請(qǐng)的發(fā)明人還發(fā)掘出低抗凝肝素(low anticoagulant activity heparin, LAAH)及其衍生物的新用途，尤其是阻止ECM的纖維化進(jìn)程，并能降解ECM形成的纖維。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，低抗凝肝素通過抑制肝星狀細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β 1 (transforming growth factor-betal, TGF-β 1)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(smooth muscle alpha-actin, α-SMA)及I、IV型前膠原蛋白的表達(dá)，大大降低透明質(zhì)酸和層粘連蛋白水平，能明顯減少肝組織內(nèi)的膠原沉積和羥脯氨酸含量，從而減輕肝纖維化程度。實(shí)施例1、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和抗凝效價(jià)為30.33Xl(fU/g的低抗凝肝素治療肝纖維化和肝硬化一、預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液的制備將IO7個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和2. 5mg抗凝效價(jià)為30. 33X 10sU/g的低抗凝肝素加入0. 25ml注射用生理鹽水(0. 9 %的氯化鈉水溶液)，得到一個(gè)注射劑量的預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液(干細(xì)胞藥物復(fù)合劑)。二、臨床實(shí)驗(yàn)將確診的慢性乙型肝炎肝纖維化(Si、S2、S3期)及早期肝硬化(S4期)病人42 例分為治療組28例，對(duì)照組14例。系統(tǒng)觀察了每例患者治療前后的臨床癥狀、體征、肝功、血清纖維化指標(biāo)檢測(cè)。治療組觀例在服用常規(guī)藥物乙肝寧顆粒(九芝堂股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020152) 基礎(chǔ)上，按計(jì)劃接受一個(gè)療程共四次的步驟1的預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液肝內(nèi)動(dòng)脈注射治療。一個(gè)療程共21天，第一次注射給藥后7天進(jìn)行第2次注射，第2 次注射給藥后7天進(jìn)行第3次注射，第3次注射給藥后7天進(jìn)行第4次注射給藥。每次注射給藥的方法均為右肝葉上注射6個(gè)點(diǎn)，左肝葉上注射4個(gè)點(diǎn)，各點(diǎn)一個(gè)注射量0. 25ml (含人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞IO7個(gè)細(xì)胞，低抗凝肝素為2. 5mg)。合計(jì)每次每人的肝臟共接受了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞IO8個(gè)，低抗凝肝素25mg。對(duì)照組14例病人在服用常規(guī)藥物乙肝寧基礎(chǔ)上，接受與治療組相同的注射量和次數(shù)，但注射液為注射用生理鹽水。常規(guī)藥物乙肝寧顆粒的服用方式為每天口服17g乙肝寧，一日三次。一個(gè)療程后2個(gè)月、4個(gè)月和6個(gè)月時(shí)以及治療前分別對(duì)患者進(jìn)行臨床癥狀和體征檢查、并檢測(cè)血清學(xué)肝功能指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和血清肝纖維化指標(biāo)，包括透明質(zhì)酸 (HA)、血清IV型膠原(IV-C)、血清PIIIP及血清層粘連蛋白(LN)等四項(xiàng)指標(biāo)。肝細(xì)胞外基質(zhì)成份(ECM)的增加是慢性肝病向肝纖維化、肝硬化進(jìn)展的中心問題。利用各種肝病時(shí)血清HA、LN、IV-C (均為ECM)水平的動(dòng)態(tài)變化來判斷慢性肝病纖維化形成及轉(zhuǎn)變的觀察指標(biāo)，對(duì)臨床診斷肝纖維化有著重要的意義。層粘連蛋白(LN)是細(xì)胞外間質(zhì)中非膠原糖蛋白的主要成份，廣泛分布于基底膜的透明層中，是細(xì)胞外骨架中的支持結(jié)構(gòu)，并對(duì)細(xì)胞外ECM的其它成份有粘附作用。在正常肝臟肝竇內(nèi)無基底膜存在，LN含量較少，當(dāng)肝內(nèi)發(fā)生慢性炎癥時(shí)，肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及上皮細(xì)胞均參與合成LN，并在肝竇內(nèi)大量沉積。透明質(zhì)酸(HA)是一種大分子氨基多糖，由間質(zhì)細(xì)胞合成，在體內(nèi)參與基質(zhì)的構(gòu)成，主要由肝竇內(nèi)皮細(xì)胞攝取和分解。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，肝內(nèi)皮細(xì)胞亦同時(shí)受損，數(shù)量、功能減退，導(dǎo)致HA分解減少，此外肝間質(zhì)細(xì)胞合成HA增加，門一腔分流，使HA逃逸肝臟的降解， 故血清HA水平升高。IV型膠原(IV-C)是一種膠原蛋白，是構(gòu)成基底膜的主要成份，膠原蛋白在肝臟內(nèi)約占蛋白總量的5% 10%。當(dāng)肝臟發(fā)生纖維化時(shí)，基底膜遭受破壞，膠原蛋白可增加50%左右，在膠原增生過程中，IV型膠原大量沉積。檢測(cè)患者下述五個(gè)臨床癥狀(1)易出血的癥狀，多是牙齦出血，鼻出血等，和肝臟的造血凝血能力下降有關(guān)系。(2)神經(jīng)反應(yīng)反酸、呃逆、上腹隱痛、肝區(qū)隱痛、噯氣等胃腸癥狀。(3)上消化道反應(yīng)惡心嘔吐、厭油膩、食欲不振。肝臟纖維化后肝臟代謝能力下降，同時(shí)也伴隨一定的胃腸不適。(4)消化能力減弱腹脹、腹瀉、納差等，與胃腸的消化分泌物和吸收功能紊亂有關(guān)系。(5)全身反應(yīng)四肢乏力，易疲勞。肝纖維化早日癥狀之一，對(duì)判斷慢性肝纖維化的判斷十分的靈敏。根據(jù)上述五個(gè)癥狀組的臨床癥狀對(duì)步驟1的預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液的療效予以評(píng)估，每個(gè)癥狀組設(shè)0-2分，0分為正常，沒有該組所述的癥狀；1分為輕度，即出現(xiàn)該組所述輕微的癥狀；2為重度，即出現(xiàn)該組所述明顯的癥狀，總分共10分。 上述五個(gè)癥狀組評(píng)分下降50%以上說明癥狀顯著緩解即視為好轉(zhuǎn)。接受注射半年后(一個(gè)療程結(jié)束后6個(gè)月時(shí))，治療組癥狀好轉(zhuǎn)率為81 %，而對(duì)照組僅為27%。接受注射半年后(一個(gè)療程結(jié)束后6個(gè)月時(shí))，檢測(cè)肝功能。結(jié)果表明兩組患者 ALT復(fù)常率比較有顯著性差異。治療組的肝功能ALT復(fù)常率為90. 3%，而對(duì)照組的肝功能 ALT復(fù)常率為9%。說明通過本發(fā)明的干細(xì)胞藥物復(fù)合劑治療可以顯著緩解慢性肝病患者的臨床癥狀，降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶。肝纖維化血清指標(biāo)變化分別測(cè)定血清透明質(zhì)酸、血清IV型膠原、血清PIIIP及血清層粘連蛋白等四項(xiàng)纖維化指標(biāo)。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One Way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析)。如圖1-圖4所示，治療組患者的血清透明質(zhì)酸、血清IV型膠原、血清層粘連蛋白及血清PIIIP等四項(xiàng)纖維化指標(biāo)均顯著下降，而對(duì)照組則無明顯改變，表明使用本發(fā)明的干細(xì)胞藥物復(fù)合劑治療有效抑制肝纖維化活動(dòng)性及纖維化程度明顯減輕。圖1-4中的數(shù)值為所有病例的平均值士標(biāo)準(zhǔn)差。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的產(chǎn)品，它的活性成分為下述a)或b)a)由離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素組成的組合物；所述低抗凝肝素的抗凝效價(jià)為(27-3 X 103U/g ；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素的配比為 IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素；b)由離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素可溶性鹽組成的組合物；所述低抗凝肝素可溶性鹽的抗凝效價(jià)為(27-3 X 103U/g ；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽的配比為IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素可溶性Τττ . ο
2.下述a)或b)的物質(zhì)在制備預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化產(chǎn)品中的應(yīng)用a)由離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素組成的組合物；所述低抗凝肝素的抗凝效價(jià)為(27-3 X 103U/g ；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素的配比為 IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素；b)由離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素可溶性鹽組成的組合物；所述低抗凝肝素可溶性鹽的抗凝效價(jià)為(27-3 X 103U/g ；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽的配比為IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素可溶性Τττ . ο
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品、權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述低抗凝肝素可溶性鹽為低抗凝肝素鈉；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素的配比為 IO7個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和76U低抗凝肝素；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽的配比為IO7個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和76U低抗凝肝素可溶性鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的產(chǎn)品，根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述a)中，所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素獨(dú)立包裝或混合在一起；所述b)中，所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽獨(dú)立包裝或混合在一起。
5.權(quán)利要求1或3所述的產(chǎn)品的制備方法，其特征在于所述制備方法包括下述1)-4) 中的任一步驟1)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素按照所述配比混合，得到所述女口廣 PFt ；2)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽按照所述配比混合， 得到所述產(chǎn)品；3)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素按照所述配比分別獨(dú)立包裝， 得到所述產(chǎn)品；4)將所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素可溶性鹽按照所述配比分別獨(dú)立包裝，得到所述產(chǎn)品。
6.一種預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的注射液，由權(quán)利要求1或3或4所述的產(chǎn)品和注射用生理鹽水組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射液，其特征在于所述注射液中權(quán)利要求1或3或4所述的產(chǎn)品的含量以所述人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞計(jì)為IO6-IO8個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞每0. 25ml 注射用生理鹽水；所述注射液中權(quán)利要求1或3或4所述的產(chǎn)品的含量以所述人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞計(jì)，具體為IO7個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞每0. 25ml注射用生理鹽水。
8.一種預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的成套產(chǎn)品，活性成分為權(quán)利要求1或 3或4所述的產(chǎn)品和治療肝纖維化和/或肝硬化的中藥，所述產(chǎn)品和治療肝纖維化和/或肝硬化的中藥分別獨(dú)立包裝。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的注射液，其特征在于所述治療肝纖維化和/或肝硬化的中藥為中成藥，如乙肝寧。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9所述的產(chǎn)品、應(yīng)用、制備方法、注射液或成套產(chǎn)品，其特征在于 所述預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化體現(xiàn)為下述1)至幻中的至少一種1)降低肝纖維化和/或肝硬化患者的血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量；2)降低肝纖維化和/或肝硬化患者的血清中的透明質(zhì)酸含量；3)降低肝纖維化和/或肝硬化患者的血清中的IV型膠原含量；4)降低肝纖維化和/或肝硬化患者的血清中的層粘連蛋白含量；5)降低肝纖維化和/或肝硬化患者的血清中的血清III型前膠原肽含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種預(yù)防和/或治療肝硬化的干細(xì)胞復(fù)合藥物及其制備方法。該預(yù)防和/或治療肝纖維化和/或肝硬化的干細(xì)胞復(fù)合物，它的活性成分為離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素組成的組合物；所述低抗凝肝素的抗凝效價(jià)為(27-33)×103U/g；所述離體的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和所述低抗凝肝素的配比為106-108個(gè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和(70-80)U低抗凝肝素。本發(fā)明的由人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和低抗凝肝素組成的干細(xì)胞復(fù)合物可以顯著緩解慢性肝病患者的臨床癥狀，顯著降低患者血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、透明質(zhì)酸、IV型膠原和層粘連蛋白的含量。
文檔編號(hào)A61K36/71GK102228475SQ201110153658
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月9日
發(fā)明者曹衛(wèi), 李戍, 焦守恕, 焦陽 申請(qǐng)人:無錫人寰生物醫(yī)藥科技有限公司