專利名稱：一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品、飲料等技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及一種藥品、保健品或食品的加工技術(shù)，更具體地說是涉及一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，再具體地說是涉及一種在確保重金屬低含量、黃酮類成分高含量的前提下，仍保持產(chǎn)品“原汁原味”的蜂膠加工方法。
背景技術(shù)：
(一 )蜂膠的研究概況1、概述蜂膠(Propolis)和蜂蜜及蜂王漿都是蜜蜂制造的天然物質(zhì)，它最初被發(fā)現(xiàn)于蜂巢的入口處，因而得名。蜂膠是蜜蜂從植物幼芽、新生枝芽及樹干樹皮上采集的樹脂樹膠，混以自身分泌物(上顎腺分泌物和蜂蠟等)加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物(芳香膠狀體)。 蜂膠是蜜蜂用于維持整個群體健康的有效物質(zhì)，4萬 5萬只蜜蜂1年僅能采到40g 60g 左右的蜂膠，被譽(yù)為“紫色黃金”。蜂膠和蜂蜜、蜂王漿、花粉，都是小小蜜蜂奉獻(xiàn)給人類的天然食品、保健品。蜂蜜、 蜂王漿、花粉的營養(yǎng)價值和保健作用大家已比較了解，蜂膠由于相對發(fā)現(xiàn)得較晚，開發(fā)利用更是因現(xiàn)代生物提純技術(shù)才得以實現(xiàn)，所以很多人對蜂膠可能還比較陌生。中外科學(xué)家在經(jīng)過潛心研究后贊美說，蜂膠是最完美的天然廣譜抗生物質(zhì)；是天然免疫增強(qiáng)劑；是血管的清道夫；是健康的保護(hù)神；是天然的抗氧化劑……由于蜂膠臨床上具有顯著抗病毒、抑菌、抗氧化、降血糖血脂、提高機(jī)體免疫力等醫(yī)療保健作用，因此對蜂膠的開發(fā)利用得到高度重視。2、理化性質(zhì)與來源蜂膠為不透明固體，表面光滑或粗糙，折斷面呈砂粒狀，切面與大理石外形相似。 呈黃褐色、棕褐色、灰褐色、灰綠色、暗綠色，極少數(shù)深似黑色。具有令人喜愛的特殊的芳香味。味微味，略帶辛辣味，嚼之粘牙，用手搓捏能軟化。溫度低于15°C時變硬、變脆、易粉碎； 36°C時質(zhì)軟、有粘性和可塑性；溫度達(dá)60 70°C時熔化成為粘稠流體，并分離出蜂蠟。比重隨不同植物種類而異，一般在1. 112 1. 136之間。不溶于水，微溶于松節(jié)油，部分溶于乙醇，極易溶于乙醚和氯仿。蜂膠溶于95%乙醇中呈透明的栗色，并有顆粒狀沉淀。純蜂膠不應(yīng)有其它雜質(zhì)。近代研究證明，蜂膠所含有的豐富而獨(dú)特的生物活性物質(zhì)，使其具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強(qiáng)免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種功能，對人體有著廣泛的醫(yī)療、保健作用，現(xiàn)已成為各國科學(xué)研究的熱點(diǎn)，并成為新興的保健品倍受推^k。蜂膠生產(chǎn)期多為夏、秋季，中國的膠源植物大至有樺木科、楊柳科、松科、柏科和漆樹科中的多數(shù)樹種，以及桃、李、杏、栗、橡膠、桉樹和向日葵等。蜂膠是植物遺傳物質(zhì)與蜜蜂內(nèi)分泌的復(fù)雜化合物，是蜜蜂從膠源植物的新生枝的嫩芽、腋芽、花蕾或創(chuàng)傷處采集的樹脂類物質(zhì)，經(jīng)蜜蜂注入其腺體分泌物，經(jīng)蜜蜂反復(fù)加工轉(zhuǎn)化而成的膠狀物質(zhì)。蜂膠具有防毒、殺菌、消炎、防腐、促進(jìn)細(xì)胞再生及新陳代謝等作用，成為蜜蜂生命群體生存與發(fā)展的不可或缺的物質(zhì)基礎(chǔ)。經(jīng)檢測，蜂膠中含有二十余類、三百多種天然成份，蜂膠的主要功效成份是黃酮類、萜烯類等天然化合物。蜜蜂在產(chǎn)卵前，就是將蜂膠涂在巢壁或間隙，增強(qiáng)殺菌力，以保護(hù)蜂巢內(nèi)部，使得蜂巢內(nèi)部維持無菌狀態(tài)。蜂膠是蜜蜂以人力不可及的方式，使多種有效成份與活性物質(zhì)有機(jī)融合而成的一種珍貴的蜜蜂產(chǎn)品，是天然營養(yǎng)保健食品。國家衛(wèi)生部2002年3月5日衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51 號文件公布蜂膠是可用于保健食品的物品。3、中國藥典2005版收載的蜂膠品種情況中西藥分類中藥(藥材及飲片)基原本品為蜜蜂科昆蟲意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物。多于夏季從蜂箱中收集，除去雜質(zhì)。性狀本品為團(tuán)塊狀或不規(guī)則碎塊，多數(shù)呈棕黃色、棕褐色或灰褐色，具光澤。20°C 以下性脆、30°C以上逐漸變軟，發(fā)黏性。氣芳香，味苦，有辛辣感。鑒別取本品粉末0. 5g，加甲醇20ml.超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取白楊素對照品、高良姜素對照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液.作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丁酮(9.4 0.3 0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。檢查干燥失重取本品粉末，減壓干燥至恒重，減失重量不得過2. 0 % (附錄IX G)?？偦曳植坏眠^8.0% (附錄IX K)。酸不溶性灰分不得過6.0% (附錄IX K)。氧化時間取本品粉末約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，密塞，振搖1小時，再精密加入水100ml，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液0. 5ml，置50ml的量瓶中，用水稀釋至刻度， 搖勻，精密量取IOml，置具塞錐形瓶中，精密加入20 %硫酸溶液2ml，振搖1分鐘，精密加入 0. 02mol/L。高錳酸鉀溶液0. 05ml,同時，開動秒表計時，當(dāng)溶液的紫紅色完全消退時，停止秒表，記錄的時間即為供試品的氧化時間。不得過22秒。浸出物照酸溶性浸出物測定法項下的冷浸法(附錄X A)測定，用乙醇作溶劑， 不得少于50. 0%。含量測定照高效液相色譜法(附錄VI D)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.15%磷酸溶液(64 36)為流動相；檢測波長為268nm。理論板數(shù)按白楊素峰計算應(yīng)不低于6000。對照品溶液的制備精密稱取白楊素對照品15mg，高良美素對照品10mg，分別置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻； 分別精密量取lml，各置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取本品粉末(過四號篩)約0. lg，精密稱定，置索氏提取器中，加丙酮100ml，加熱回流至提取液無色，提取液回收溶劑至于，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至IOOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻， 即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測
4定，即得。本品按干燥品計算，含白楊素(C15HltlO4)不得少于2.0%;含高良姜素(C15HltlO5)不得少于1.0%。炮制方法酒制蜂膠取蜂膠粉碎，用乙醇浸泡溶解，濾過，濾液回收乙醇，晾干。性味苦，辛，寒。功效抗菌消炎、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、加速組織愈合。主治用于高脂血癥和糖尿病的輔助治療。用法用量0.2 0.6g。外用適量。用藥禁忌過敏體質(zhì)者慎用。貯藏置陰涼干燥處。4、化學(xué)成分蜂膠的品質(zhì)與產(chǎn)地的植物種類有關(guān)。從蜂箱里收集的蜂膠含有大約55種樹脂和香30始蜂蠟、少量芳香揮發(fā)油和花粉等夾雜物。目前，已從中分離鑒定出的成分有黃酮類、萜烯類、醌類、酯類、醇類、酚類、醚類、 有機(jī)酸和大量的氨基酸、酶類、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素E和維生素A以及礦物質(zhì)等。含有大量的黃酮類、萜烯類化合物是蜂膠的重要特征，現(xiàn)已從蜂膠中分離鑒定的黃酮化合物有30余個。包括白楊素、柚柏素、芹菜素、金合歡素、槲皮素、高良姜素、蘆丁、山柰酚、山柰甲素、鼠李素、松屬素等，其中5，7-二羥基-3，4-二甲黃酮、5-羥基-4，7-二甲氧基雙氫黃酮是蜂膠的特有成分，蜂膠大部分的生理及藥理功能都與此類化合物有密切關(guān)系。有報道在巴西蜂膠中新發(fā)現(xiàn)的另一類酚類是異戊二烯-對-香豆酸和它的衍生物。在蜂膠中揮發(fā)物所占的比重較小，但芳香族化合物對蜂膠生物學(xué)活性起著重要作用。在蜂膠揮發(fā)物中，許多化學(xué)成分首次被鑒定出來，主要是單和倍半萜烯類物質(zhì)。4. 1氨基酸蜂膠中含有微量的氨基酸，包括纈氨酸、組氨酸、賴氨酸、精氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、谷氨酸、異氨酸、半胱氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、色氨酸 (缺)、天門冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸。4. 2維生素B族蜂膠中含有微量的維生素B族，包括維生素Bl (硫胺素)、維生素B2 (核黃素)、維生素B3 (泛酸)、維生素B6 (毗多醇)、維生素B7 (維生素H)、維生素B12 (鈷胺素)、肌醇(屬 B族)、維生素E(生育酚)等。4. 3礦物質(zhì)和微量元素蜂膠中含有豐富的礦物質(zhì)和微量元素。常量元素有鈣、鎂、磷、鉀、鈉、硫、硅、氯、碳、氫、氧、氮等12種；微量元素有鋅、硒、錳、鈷、鉬、氟、銅、鐵、鋁、錫、鈦、鍶、鉻、鎳、鋇、金等25種之多 (注硒、錳、鈷、鉬這四種現(xiàn)被稱為長壽元素的物質(zhì)都可在蜂膠中找到)。4. 4有機(jī)酸藥材中所含的有機(jī)酸，有的具有一定的醫(yī)療價值，例如，水楊酸有解熱止痛作用； 纈草酸有鎮(zhèn)靜作用；苯甲酸有防腐、祛痰的作用；咖啡酸具有止血、鎮(zhèn)咳、祛痰等效用；檸檬酸可用為搞凝劑等。近年來還發(fā)現(xiàn)一些有酸是某些中藥的有效成分，如丁二酸是止咳平喘藥地龍的有效成分之一；原兒茶酸是四季青中抑菌成分之一；異綠原酸是金銀花中搞菌有效成分之一。蜂膠含多種的有機(jī)酸，酸類化合物包括苯甲酸、丁苯甲酸、對羥苯甲酸、水楊酸、茵香酸、檸檬酸、酮戊二酸、桂皮酸、3，4_ 二甲氧桂皮酸、咖啡酸、阿Q酸、阿魏酸、異阿魏酸、芥子酸、對香豆酸等。其中主要下述有三種①苯甲酸有防腐、祛痰作用；②阿魏酸有消炎、止痛的作用。中藥用于治療偏頭痛；③咖啡酸有止血、鎮(zhèn)咳、祛痰的作用；注美國健康基金會的科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠中的咖啡酸能抑制培養(yǎng)器皿中結(jié)腸腫瘤細(xì)胞的增長和發(fā)生，因此認(rèn)為，蜂膠中抗腫瘤的活性成份也包括咖啡酸在內(nèi)。蜂膠中羥基桂皮酸的衍生物是一組生物活性強(qiáng)的芳香族有機(jī)酸，如蜂膠中的咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸、芥子酸、對香豆酸和3，4_ 二甲氧桂皮酸等。4. 5烯、烴、砧類化合物與揮發(fā)油包括半旅烯、菠烯、曹烯、坷巴烯、異長葉烯、石竹烯、卜愈刨木烯、聽雪松烯、鋒草烯、廠依蘭油烯、杜松烯、鱉烯等。蜂膠中有多種萜類化合物，主要有二種①雙萜具有抗菌和抑癌活性；②三萜 這就是人參有效成分的皂甙，具有多方面的生物活性。換句話說，蜂膠也有人參的一些主要作用。揮發(fā)油又稱精油，是蜂膠蒸餾所得到的與水不相混合的揮發(fā)性油狀成分的總稱。 揮發(fā)油具有芳香氣味，其中所含的化學(xué)成分比較復(fù)雜，因來源不同，所含的成分也不亡樣， 但其由往往以某種或數(shù)種成分占較大的份量。其基本組成為脂肪族、芳香族和惦類等三類化合物，以及它們的含氧衍生物如醇、醛、酮、酸、酚、醚、酯、內(nèi)酯等。4. 6黃酮類化合物黃酮化合物是廣泛存在于自然界的一大類化合物，大多具有顏色，具有多方面的生理和藥理活性，能幫助人體防治多種疾病，使機(jī)體各種功能正?；?、增強(qiáng)化。許多治療冠心病有效的許多中草藥中含有黃酮類成分，并注意到具有活血化淤作用的中藥，也多含有黃酮類成分。臨床治療冠心病常用的銀杏葉制劑"舒血寧片"，其主要有效成分為槲皮素、 山茶素、異鼠李素等，這三種黃酮類成分均能在蜂膠中分離到。蜂膠中的黃酮類化合物，其品種之多、含量之高超過了一般的植物藥。世界各地蜂膠樣品中分離出的黃酮化合物，已見文獻(xiàn)報道的有70種以上。蜂膠保健食品，作為飲食黃酮類、萜烯類等化合物的不足的有益補(bǔ)充，調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能；以蜂膠為主要原料加工生產(chǎn)的保健食品，具有免疫調(diào)節(jié)、改善睡眠、調(diào)節(jié)血脂、調(diào)節(jié)血糖、改善胃腸道功能、抑制腫瘤、抗疲勞、延緩衰老、抗氧化等多方面保健功效。世界上很多科學(xué)家在研究蜂膠、應(yīng)用蜂膠。根據(jù)世界各國幾十年的研究應(yīng)用結(jié)果， 科學(xué)家們給予蜂膠許多美稱——“最完美的天然廣譜抗生物質(zhì)”、“天然免疫增強(qiáng)劑”、“血管清道夫”、“天然抗氧化劑”、“二十世紀(jì)人類發(fā)現(xiàn)的最偉大的天然物質(zhì)”等等。雖然由于蜂膠中含有多種天然的物質(zhì)，具有抗病原微生物(細(xì)菌、真菌、病毒、病原蟲)作用，所以有的人就把蜂膠說成是抗生素；但是，這是不科學(xué)的。從科學(xué)角度講蜂膠不是抗生素，更不是什么“典型的天然抗生素”，而是天然營養(yǎng)保健食品。屬于黃酮類約有白楊素、楊芽黃素、刺槐素、芹菜素、木榨草素、柳穿魚素、蜜桶黃素、槲皮素、蘆丁、福擂黃素等；屬于黃酮醇類的有良姜素、高良姜素、鼠李素、鼠李秦素、異鼠李素、鼠李檸檬素、 山奈素、山奈甲黃素、岳撣素，桑木黃素、揪皮素及蘆丁等衍生物；屬無雙氫黃酮類的有喬松素、球松素、櫻花素、異櫻花素、袖皮素等；屬于雙氫黃酮醇的有短葉松素及其衍生物。下面專門介紹蜂膠中的兩種很有特色的黃酮類化合物(1)槲皮素槲皮素的化學(xué)名為3，5，7，3，4-五羥基黃酮，它廣泛分布在植物藥中。它的3_羥基與蕓香糖結(jié)合的甙，稱為蘆丁或蕓香甙，有維生素P樣的作用，多年來臨床用做毛細(xì)血管性止血藥和輔助降壓藥?，F(xiàn)已證實，槲皮素具有非常廣泛的生理和藥理活性槲皮素是許多中草藥，如羅布麻葉、銀杏、三七、金蕎麥、鹽膚木、款冬花、高良姜、 側(cè)柏葉等均含有的成分，柳果、小葉枇杷等作為藥用時都要檢測槲皮素含量。第一，有擴(kuò)張冠狀血管、降低血脂、降血壓、抗血小板聚集(注血小板聚集會妨礙血液的流通，以致容易引起心臟病、腦中風(fēng)等心腦血管疾病)等作用。顧振綸等(1993年)、 趙雪英等(1996年)進(jìn)一步實驗證實，它具有抑制花生四烯酸誘導(dǎo)血小板化學(xué)發(fā)光和聚集的作用，并與阿斯匹林有協(xié)同作用；可抑制不同狀態(tài)下的內(nèi)皮細(xì)胞釋放內(nèi)皮素，以降低血管的緊張性，為防治血栓栓塞性疾病提供了理論根據(jù)。第二，具有止咳、祛痰、抗炎、抗病毒、抗過敏和抗氧自由基作用。宋必衛(wèi)等(1994 年)、龔珊等(1996年)還發(fā)現(xiàn)槲皮素有鎮(zhèn)靜作用，采用多種藥理學(xué)測痛方法，觀察動物被注射不同濃度的槲皮素后，能明顯提高動物的痛閾，且具有劑量效應(yīng)關(guān)系，證實200mg/kg槲皮素與100mg/kg的阿斯匹林或2mg/kg嗎啡鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)。第三，近年來槲皮素對腫瘤的化學(xué)預(yù)防作用和治療作用日益受到人們的重視。槲皮素不僅對多種致癌物、促癌物和致癌劑有拮抗作用，而且體外研究發(fā)現(xiàn)槲皮素能顯著抑制人卵巢癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞、人骨髓瘤細(xì)胞、人白血病細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞、人淋巴瘤細(xì)胞的生長，IC50為7 20mg/L。1995年，日本林原生物化學(xué)研究所研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠原料中所含的抗腫瘤成分高達(dá)5%。有關(guān)槲皮素抗腫瘤作用機(jī)理已進(jìn)行較廣泛的研究，既有理論意義，又有臨床實用價值。(2)蘆丁(Rutin)蘆丁就是蕓香苷，有維生素P同樣的作用。那就是，軟化毛細(xì)血管、增強(qiáng)毛細(xì)血管的通透性，還能降低膽固醇，對防治心、腦血管硬化很有幫助。4. 7醇類化合物包括苯甲醇、3，5-二甲氧苯甲醇、2，5-二甲氧苯甲醇、桂皮醇、校葉醇、卜嘩木烯醇(乙酚氧)、椎木烯醇、甜沒藥惦醇、蔭品-4-醇、愈創(chuàng)木醇、布黎醇等。4. 8酚、醛、酮、醚類化合物包括丁香酚、香草醛、異香草醛、苯用醛、卜環(huán)檸檬醛、4，5-二甲-4-苯基AZ環(huán)己烯酮、苯乙烯醚、對甲氧苯乙烯謎，對香直酸酯、咖啡酸酯、咖啡酸苯乙酯、乓乙醚咖啡酸酯、卜甲咖啡酸苯乙酯、環(huán)己醇苯甲酸酯、環(huán)己二醇苯甲酸酯、松柏醇苯甲酸酯、對香豆醇香草酸酶、苯甲醇阿魏酸酯等。4. 9蜂膠中已分離的其它成分包括脂肪酸、淄類化合物、酶和多糖等。5、蜂膠提取工藝對比自二十世紀(jì)五十年代房柱教授開始對蜂膠治療皮膚病開始，中國真正對蜂膠投入精力去研發(fā)的是在國家九五期間，是由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所主持的國家九五重點(diǎn)科技攻關(guān)蜂膠項目，主持人是許正鼎和劉富海。并且此后再度主持了十五、948產(chǎn)業(yè)化等國家重點(diǎn)項目蜂膠的研發(fā)工作，取得了一系列的成果，其中低溫逆流分段冷提取技術(shù)，是目前國際先進(jìn)的提純分離技術(shù)，有效分離了蜂蠟與雜質(zhì)、重金屬等。948產(chǎn)業(yè)化期間，許正鼎等通過創(chuàng)建蜂珍科技公司、劉富海創(chuàng)建天寶康科技公司， 提供低溫逆流冷提取的技術(shù)支持等，形成了以蜂珍、知蜂堂、天寶康、中宏的一批最早期的蜂膠產(chǎn)業(yè)化企業(yè)，使得蜂膠真正開始進(jìn)入尋常百姓家。蜂膠原膠中含有大量重金屬成分(如鉛、汞等)，如提取不當(dāng)，會對人體造成嚴(yán)重傷害，甚至死亡。所以蜂膠的提純技術(shù)對于蜂膠的品質(zhì)至關(guān)重要。隨著科技的不斷發(fā)展，及科研人員的不懈努力，目前中國在蜂膠提純方面已經(jīng)達(dá)到國際先進(jìn)水平。天然蜂膠中雖然各種成分很復(fù)雜，但絕大部分有效成分均能良好地溶于乙醇和氫氧化鈉溶液，只有少數(shù)物質(zhì)溶于非極性溶液，如蜂蠟。石油醚與乙醇混合可提出蜂膠中大部分有效物質(zhì)，但工藝比較復(fù)雜，且因工藝限制只適于大規(guī)模生產(chǎn)。丙酮與乙醇的極性接近， 但是提取物不如乙醇提取法可直接制成酊劑，浸膏應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化裝品等方面。以下介紹幾種比較可行的蜂膠提純技術(shù)。5.1浸提法文獻(xiàn)報道粗蜂膠與乙醇1 4配比，85°C下回流，過濾，回收乙醇得到蜂膠浸膏。此方法所用試劑來源豐富，回收率高，制備蜂膠得率41. 59%。乙醇溶液浸漬法具體操作如下將粉碎的蜂膠粉加入5倍的乙醇水溶液，濃度分別為75%，85%，95%。在常溫下浸漬24h，提出浸液，在重復(fù)加入2次，合并浸液冷卻至5°C以下過濾，減壓回收溶劑。其濃縮物呈深棕色至黑色純蜂膠。工藝過程(1)原料經(jīng)預(yù)選分級，去除雜質(zhì)。(2)將預(yù)選后的原料放入冷藏柜，置于_18°C溫度下冷凍48h。(3)冷凍后的原料，迅速放入破碎機(jī)中破碎。由于蜂膠的物理性質(zhì)決定了它在常溫下呈半塑性狀態(tài)，很難破碎，但在_5°C以下的溫度破碎就容易。(4)破碎后的原料，立即進(jìn)入震動篩(14目)，大于14目的顆粒返回冷藏柜。(5)將破碎篩分后的原料放入浸漬釜，浸漬釜最好選用配回流冷凝器的反應(yīng)釜。再加上90%乙醇(蜂膠(重量)乙醇(容積=1 4))，在常溫下浸漬，并不斷攪動。6h 后，停止攪動，靜置2h，放出上清液，再加90%乙醇如上述工藝重復(fù)3次，合并溶液。浸漬過程中溫度應(yīng)保持在25°C左右，溫度過高會引起蜂蠟大量溶化，造成過濾困難；溫度過低溶解度降低導(dǎo)致時間延長，溶劑用量加大。(6)浸漬后的溶液進(jìn)入冷卻反應(yīng)釜，在反應(yīng)釜加套內(nèi)通入循環(huán)冷卻，機(jī)械攪動，降溫至5°C以下。
(7)降溫后的溶液趁冷通過泵進(jìn)入板框式過濾機(jī)進(jìn)行過濾。溶液溫度應(yīng)保持5°C 以下，這樣可以使溶入乙醇溶液中的蜂蠟析出而隨濾渣濾出。(8)濾液進(jìn)入減壓蒸發(fā)器，采用水浴加熱。在此階段溫度應(yīng)保持在50°C以下，這樣可以減少揮發(fā)油的蒸發(fā)和有效成分受熱變性。(9)蒸發(fā)出的乙醇蒸氣經(jīng)冷凝器回收注入溶劑貯罐，循環(huán)使用。(10)蒸發(fā)后的蜂膠注模成型后即成(純蜂膠)商品。5. 2索氏提取索氏提取法是利用索氏提取器加有機(jī)溶劑的方法進(jìn)行加速提取， 比傳統(tǒng)水溶提取效率高，但一般耗時數(shù)小時或十幾小時，并且高溫、低品質(zhì)，操作復(fù)雜。例如，乙醇、石油醚雙相溶劑萃取法具體操作如下將粉碎后的天然蜂膠粉置于萃取器內(nèi)，加入90%乙醇4倍，60-90°石油醚1倍 (重量容積)，在40°C恒溫下攪拌萃取，如上述重復(fù)3次，合并萃取液分層，冷卻后過濾，減壓濃縮。將脂溶性與醇溶性物質(zhì)合并即得較純的蜂膠。通過實驗證實石油醚與乙醇溶液與蜂膠的容量重量比在1 4 1范圍內(nèi)，40°C溫度下，提取率較高，成分較完整。但因設(shè)備、工藝較單溶劑提取法復(fù)雜，適合大規(guī)模生產(chǎn)。5. 3超聲提取通過超聲波的發(fā)射、振動使蜂膠有效成分溶解在溶劑中，從而達(dá)到分離，提純的目的。超聲波萃取法一般耗時十幾分鐘至1小時，具有提取速度快，節(jié)省溶劑， 能耗小，從而降低成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。5. 4氫氧化鈉溶劑提取法將粉碎后的天然蜂膠加入1 %，2%的氫氧化鈉溶液10 倍，充分?jǐn)嚢瑁怪芎罅⒓催^濾，再加入5% HCL水溶液酸化蜂膠析出，經(jīng)水洗后注模成型。這種方法工藝上比較難以掌握，在用堿液溶解及酸化過程中都會出現(xiàn)時間過長、 溫度過高等情況，使析出的蜂膠呈爐渣樣樣物質(zhì)。分析證明雖然氫氧化鈉溶液對蜂膠有效成分均有良好的溶解特性，但酸化后并不能使所有成分還原，而出現(xiàn)了部分異物化，部分皂化成酸性等不可逆反應(yīng)。所以，氫氧化鈉作為天然蜂膠全部有效成分的溶劑是不妥的。5. 5超臨界CO2流體(SFE-CO2)萃取超臨界流體是溫度和壓力均在本身的臨界點(diǎn)以上的高密度流體，具有液體同樣的凝聚力和溶解力，擴(kuò)散系數(shù)接近氣體的擴(kuò)散系數(shù)，通常是液體的近百倍，因此萃取速度快。利用超臨界流體的這種特殊性能，在超臨界狀態(tài)下，采用CO2作溶劑，乙醇作夾帶劑(因蜂膠在CO2溶解度不大)進(jìn)行萃取，從而獲取純蜂膠。其具有以下特點(diǎn)改善了以往蜂膠制品的口感，并且色澤淡黃、雜質(zhì)少、安全無毒、無溶劑殘留， 溫度低，重金屬含量低，純度高，工藝流程簡單等優(yōu)點(diǎn)，但由于此萃取過程是在高壓下進(jìn)行， 故萃取設(shè)備投資較高，能耗較大。5. 6超臨界萃取復(fù)合微波輔取萃取(SFE-MAE)微流萃取是一種新型食品分離技術(shù)。微波萃取實際是微波對萃取溶劑和物料的加熱過程。微波能直接穿透溶劑和物料內(nèi)部， 加速分子運(yùn)動，使物料充分并且快速溶解于溶劑從而達(dá)到萃取目的。微波萃取具有如下特點(diǎn)熱效率及能量利用率高，迅速省時，萃取均勻，產(chǎn)品質(zhì)量高，低溫短時，組份不易破壞，設(shè)備簡單，操作方便。超臨界萃取復(fù)合微波輔助萃取是把兩者結(jié)合起來，發(fā)揮各自的優(yōu)勢，通過不同萃取技術(shù)，分階段地將蜂膠中的活性物質(zhì)多糖、萜烯類、黃酮類物質(zhì)、多環(huán)脂類逐漸提取出來，使得萃取更徹底，萃取率更高，萃取產(chǎn)物多，可以制作功能不同的保健食品或天然藥物，從而實現(xiàn)蜂膠有效成分的充分利用。但由于這是兩種工藝的結(jié)合，工藝流程相對復(fù)雜，設(shè)備昂貴，能耗也大。6、蜂膠中總黃酮的提取及含量測定方法以乙醇為溶劑，采用超聲提取的方法對蜂膠中的總黃酮進(jìn)行提取，利用紫外-可見分光光度法對總黃酮的含量進(jìn)行測定。該檢測方法簡便、快速、適用性好，可用于質(zhì)量控制，具有較高的開發(fā)應(yīng)用價值。蜂膠是蜜蜂的分泌物，因其含有豐富的黃酮類化合物而名聲顯赫，是自然界中總黃酮含量最高的天然物質(zhì)之一?？傸S酮具有很強(qiáng)的抗氧化和清除自由基作用；同時具有抗炎癥，抗過敏，抗感染，抗腫瘤，抗化學(xué)毒物，抑制寄生蟲，抑制病毒，防治肝病，防治血管疾病，防治血管栓塞，防治心與腦血管疾病等醫(yī)療功效。為了有效的對總黃酮進(jìn)行提取及質(zhì)量控制，本實驗采用了紫外-可見分光光度法對總黃酮的含量進(jìn)行測定，為實際生產(chǎn)提供了質(zhì)量控制依據(jù)。1.實驗部分1.1實驗藥材蜂膠1.2試藥與試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、乙醇、甲醇、苯、聚酰胺；1. 3儀器分析天平、超聲清洗儀、紫外分光光度計；1.4供試品溶液的制備精密稱取蜂膠細(xì)粉約0.08g，加乙醇定容至25ml，搖勻后，超聲提取20min。放置， 吸取上清液1.0ml于蒸發(fā)皿中，加Ig聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。 先用20ml苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫總黃酮，收集甲醇液定容至25ml，即得。1.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定1.5. 1對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品5. 15mg，加甲醇溶解并定容至100ml，即得51. 5μ g/ml的溶液。1.5. 2波長的選擇對蘆丁對照品溶液和樣品溶液分別在波長200-400nm之間進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示對照品溶液在360nm和254nm處有最大吸收峰，而蜂膠中所含成分比較復(fù)雜，多數(shù)在254nm處都有吸收，對總黃酮的含量測定存在干擾，故本實驗選擇360nm作為檢測波長。1.5. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取1. 5. 1項下制備的對照品溶液1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0ml，分別置IOml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，于360nm波長處測定吸光度。數(shù)據(jù)經(jīng)處理得回歸方程為Abs =0. 02612*C-0. 02486，R = O. 99581，結(jié)果表明總黃酮在 5. 15 μ g/ml-25. 7 μ g/ml 間呈良好的線性關(guān)系。1.6蜂膠中總黃酮含量的測定精密稱取蜂膠細(xì)粉①0. OSOlg ’②0. 0807g加乙醇定容至25ml，搖勻后，超聲提取 20min。放置，吸取上清液1. Oml于蒸發(fā)皿中，加Ig聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20ml苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫總黃酮，收集甲醇液定容至25ml， 于波長360nm處測定吸收值，依回歸方程計算其含量。由上表可知，蜂膠中總黃酮的平均含量為9. 71g/100g。1.7精密度試驗
取濃度為51. 5 μ g/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液2. Oml至IOml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按此法平行做5個樣品，分別測定； 求得RSD = 0. 1 %，本實驗精密度較好。1.8穩(wěn)定性試驗取濃度為51. 5 μ g/ml蘆丁對照品2ml，置IOml量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法操作，在 360nm處測定結(jié)果見下表3。求得RSD = 0. 3 %，本實驗穩(wěn)定性較好。1.9重現(xiàn)性試驗分別精密稱取蜂膠細(xì)粉0. 0803g ；0. 0809g ；0. 0812g ；0. 0809g ；0. 0810g 加乙醇定容至25ml，搖勻后，超聲提取20min。放置，吸取上清液1. Oml于蒸發(fā)皿中，加Ig聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20ml苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫總黃酮，收集甲醇液定容至25ml，分別于波長360nm處測定吸收值，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法操作。求得RSD = 0. 5%，可見本實驗重現(xiàn)性較好。1.10準(zhǔn)確度試驗精密吸取1.6項下的供試品溶液①1ml，置IOml量瓶中，精密加入濃度為 51. 5 μ g/ml的蘆丁對照品溶液2ml，加甲醇定容至刻度，搖勻。按標(biāo)準(zhǔn)曲線法操作，在360nm 處測定吸光度。計算公式回收率=(測出量-樣品含量)/加入量*100%測得平均回收率為99. 25%，RSD為0. 1%02 討論2. 1分別選用乙醇超聲20min提取，回流0. 5h提取，浸泡Ih提取，經(jīng)測定，前兩種方法提取的總黃酮幾乎相同，后者提取的含量較低。相比較，超聲方法操作簡便，提取的總黃酮含量高，故采用超聲方法。2. 2本實驗分別用30%、95%、100%不同濃度的乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果經(jīng)定性檢測， 30%乙醇提取液幾無總黃酮，100%乙醇提取液中總黃酮含量最高，故選擇無水乙醇作為提取溶劑。3 結(jié)論本實驗通過對蜂膠中總黃酮提取方法及含量測定的研究，利用聚酰胺柱層析初步純化蜂膠中總黃酮，并提供了測量蜂膠中總黃酮含量的一種快速、準(zhǔn)確的方法_紫外分光光度法，無論是在制藥工業(yè)還是食品工業(yè)上，都具有廣泛的應(yīng)用前景，為進(jìn)一步分離其中的單體黃酮及研究其藥理活性打下了基礎(chǔ)。(二)蜂膠的應(yīng)用進(jìn)展1、蜂膠史話(1)遠(yuǎn)在1億5千萬年以前，蜜蜂就生活在我們這個星球上(比人類早1億多年)， 在這漫長的1億多年里，蜜蜂抵御病原微生物侵襲最重要的“秘密武器”就是蜂膠。(2)3000年以前，古埃及人發(fā)現(xiàn)蜂膠具有殺菌、防腐作用，將蜂膠用于制作木乃伊， 以防止尸體腐敗。(3)古希臘哲學(xué)家亞里士多德在《動物志》中記錄了蜂膠可治療各種皮膚病、刀傷、割傷和一些細(xì)菌感染癥。(4)公元11世紀(jì)，伊朗哲學(xué)家阿維森納在《醫(yī)典》中記載了蜂膠具有“自動消毒傷口及緩和腫瘤的療效”。(5)明朝李時珍所著《本草綱目》中記載了蜂膠在治療牙痛、殺菌等方面的功效。(6) 1899-1902年，在英國與南非的戰(zhàn)爭中，軍醫(yī)用蜂膠與凡士林混合，作為手術(shù)后的外涂藥，防止感染。(7) 1909年，亞歷山大羅夫發(fā)表《蜂膠是藥》的論文，引起了人們的極大關(guān)注，這是蜂膠藥用的里程碑。(8) 1972年，首屆國際蜂膠大會在捷克斯洛伐克召開。(9) 1978年9月，被海外譽(yù)為“蜂膠之父”的房柱的一篇題為“關(guān)于蜂膠醫(yī)療效用的研究”論文被譯成英、俄、德、法、西班牙、塞爾維亞多種文本發(fā)表，這是中國的蜂膠研究成果第一次得到國外同行的認(rèn)可。(10) 1995年，中國蜂產(chǎn)品協(xié)會蜂膠專業(yè)委員會成立。(11) 2001年，國家科技部、農(nóng)業(yè)部、國家林業(yè)總局、中國科學(xué)院將“蜂膠資源高效利用與產(chǎn)業(yè)化發(fā)展”列為“十五”國家重點(diǎn)科技攻關(guān)項目。(12)2005年蜂膠被正式列入《中華人民共和國藥典》，成為一味法定的中藥。(13)截至2005年，蜂膠研制產(chǎn)品獲國家衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的藥品、保健品已有160多種。(中國農(nóng)產(chǎn)品加工網(wǎng)綜合)2、藥理作用2.1抗細(xì)菌作用抗細(xì)菌蜂膠是一種天然抗生素對多種細(xì)菌有抗菌作用，能抑制金葡菌、鏈球菌、沙門氏菌、變形桿菌、炭疽桿菌、出血敗血性桿菌、產(chǎn)氣英膜桿菌、枯草桿菌、臘桿菌、單核細(xì)胞增多性李司忒氏菌、丹毒絲菌屬、馬棒狀桿菌、大腸桿菌等20余種細(xì)菌；其中對金葡菌、綠色鏈球菌、溶血性鏈球菌和變形桿菌的殺菌作用較青霉素、四環(huán)素等抗菌素強(qiáng)。蜂膠水溶液尚有抗結(jié)核桿菌的作用。另有報道，對白色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、大腸桿菌、大腸魏氏梭菌、大腸艾氏菌也均有抑菌作用。2. 2抗真菌蜂膠中所含黃酮類化合物是其抗真菌作用的重要成分。10%的蜂膠醇溶液對毛霉、根霉、細(xì)黃鏈霉菌均有抑制作用。尤其對放線菌、真菌中腐生根霉毛霉酵母菌抑制作用較好，而對平菇、金針菇等食用菌都抑制作用弱，為此可作為食用菌生產(chǎn)中的抑菌劑。2. 3抗原蟲蜂膠制劑在低濃度時能抑制陰道滴蟲的生長，濃度為150mg/I_NN能完全殺滅之， 與其所含黃酮類化合物的作用有關(guān)。此外對艾美爾球蟲等原生動物的感染也有治療作用。2. 4抗病毒體外試驗，蜂膠水提液能顯著減輕牛痘病毒的感染，但體內(nèi)試驗抗病毒作用較弱。 體外抗病毒試驗，證實蜂膠對單純疽疹病毒和疽疹性口腔炎病毒外殼均有殺滅作用；還證明其對脊髓灰質(zhì)炎病毒繁殖的抑制作用最強(qiáng)，而腺病毒敏感性較差。2. 5防突變、抗腫瘤抗腫瘤作用為蜂膠最引人注目的生理活性作用，蜂膠具有抑制和消滅癌作用，而不影響正常細(xì)胞，其關(guān)鍵是蜂膠的消除活性氧作用和增強(qiáng)免疫作用。2. 6抗炎、調(diào)節(jié)免疫作抗炎蜂膠通過有效抑制機(jī)體PGst和LTs的合成，產(chǎn)生較阿司匹林更強(qiáng)的抗炎效果，為臨床治療關(guān)節(jié)炎，哮喘、牛皮癬等提供理論基礎(chǔ)。其抗炎作用與其所含類黃酮化合物_咖啡酸和金合歡素有關(guān)。2. 7增強(qiáng)免疫功能蜂膠本身無明顯的抗原性。但它與一些抗原混合免疫動物時，能起免疫增強(qiáng)作用， 能增加免疫動物的血清總蛋白和球蛋白的含量，并能促進(jìn)免疫器官一脾臟及免疫細(xì)胞1淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞再生，提高兩種球蛋白活性，明顯增強(qiáng)血清IgG的合成；并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能。免疫調(diào)節(jié)是慢性肝病尤其是慢性病毒性肝炎治療的重要環(huán)節(jié)，可以利用蜂膠對慢性乙型肝炎和慢性丙型肝炎進(jìn)行肝癌的二級預(yù)防。2. 8抗氧化延緩衰老多數(shù)資料報道，蜂膠中起抗氧化作用的主要成分之一是黃酮類化合物，也有資料顯示蜂膠中眾多的其他類化合物亦有抗氧化作用，阿魏酸、咖啡酸等含有酚羥基的有機(jī)酸可消除自由基，抑制氧化反應(yīng)和自由基反應(yīng)，具有保肝和抗肝脂質(zhì)過氧化作用，糖類中的果糖也有明顯的抗氧化作用。蜂膠黃酮對小鼠腦氧化氮影響的研究，顯示可明顯提高腦組織抗氧化酶的活性，同時顯著降低腦組織NO的含量，提示蜂膠黃酮可以抑制N啪細(xì)胞毒作用， 達(dá)到延緩衰老的作用。2. 9對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用蜂膠對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的抑制作用。腹腔注射蜂膠醇提取物(100 200mg/ kg)，能減少小鼠的自主活動，其作用與劑量成正比。除之，還能顯著延長環(huán)己巴比妥對大鼠的麻痹作用，并增強(qiáng)二甲基亞砜提高小鼠痛閾和降溫作用。蜂膠水提液還能拮抗咖啡因引起的中樞興奮作用，并具有局部麻醉作用。還有止痛作用和戒煙功效。2. 10對心血管系統(tǒng)的作用王南舟等利用蜂膠乙醇提取液與中藥甘草、芍藥配伍的復(fù)合制劑為實驗材料，以牛蛙為實驗對象，通過在體蛙心運(yùn)動描記法和離體蛙心灌注，探討了蜂膠對蛙心活動的影響。兩者均能使心肌收縮力加大，而心律變化不大，從而增加心輸出量。蜂膠水提物對心臟有負(fù)性肌力作用，還能擴(kuò)張血管，這些作用可能與其擬毒章堿作用有關(guān)。蜂膠乙醇提取物具有短暫的降血壓作用。尚有報道蜂膠對高血壓、低血壓、白血病均有效，還可影響高粘滯血癥的血液流變學(xué)、全血比粘度，血漿粘度等項指標(biāo)。2. 11 其他蜂膠可促進(jìn)肝細(xì)胞能量代謝，蛋白質(zhì)核酸合成和生物膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能，有利生長發(fā)育。 另有報道蜂膠有促進(jìn)組織再生，加快創(chuàng)傷愈合，而用于創(chuàng)傷和深度燒傷治療，還可用來治療牛皮癬和皰疹等外科疾患和預(yù)防齲齒。3、蜂膠的應(yīng)用蜂膠味微甘；性平。治雞眼、胼胝、疣和尋常疣。治惡性腫瘤和創(chuàng)傷有效。潤膚生肌；消炎止痛。主胃潰瘍；口腔潰瘍；宮頸糜爛；帶狀皰疹；牛皮屑；銀屑??；皮膚裂痛；雞眼；燒燙傷。蜂膠還能夠明顯改善睡眠，特別適合白領(lǐng)和中老年人。
3. 1醫(yī)療和食品保健由于蜂膠中含有大量類黃酮、芳香酸及其酯、有機(jī)酸、萜烯類等物質(zhì)，具有抗細(xì)菌、 真菌、霉菌、局部麻醉作用；并且臨床證明類黃酮、萜烯類、酶類、醇類可抑制胸腺嘧啶、尿嘧啶和亮氨酸的結(jié)合，影響DNA合成，從而抑制癌細(xì)胞的新陳代謝；同時這些物質(zhì)可以增強(qiáng)心臟收縮力和血管韌性，軟化血管，降低血脂、血糖，清除血管內(nèi)壁堆積物，固有心血管的“清道夫”之稱。蜂膠的消炎、止痛、殺菌作用，廣泛用于呼吸、耳鼻喉、口腔、皮膚科等疾病的治療，蜂膠中的這些物質(zhì)再加上還有氨基酸、礦物質(zhì)、多糖，可增加機(jī)體免疫力，提高自愈力， 廣泛用于燒傷、燙傷的治療。既然蜂膠有這么好的功效，于是人們把蜂膠加入食品，進(jìn)行食療保健也是眾之所歸，如蜂膠糖、蜂膠奶、蜂膠可樂等。蜂膠保健食品溫和有效、性平無毒，四季皆宜，可以放心食用。大量實踐證明常食蜂膠保健食品，有益于人體健康。需要注意的是，過敏體質(zhì)者慎用。璽源堂蜂膠是蜂膠中的極品，其總黃酮含量為每IOOg彡9300mg，是目前同類產(chǎn)品中含量最高的，且其余成分黃金配比，協(xié)同作用。科學(xué)家給予璽源堂蜂膠很多美稱血管清道夫、血糖守護(hù)神、抗癌勇士、天然免疫增強(qiáng)劑。蜂膠在臨床上的應(yīng)用(1)在外科上的應(yīng)用由于蜂膠抗菌消炎作用強(qiáng)，局部止痛快，能促進(jìn)上皮增生和肉芽生長，減輕疤痕形成程度，改善血液和淋巴循環(huán)，所以在治療慢性下腿潰瘍、肛裂等外科疾病上應(yīng)用較多且效果較好。(2)在皮膚上的應(yīng)用蜂膠制劑可用于治療雞眼、帶狀皰疹、扁平疣、尋常疣、毛囊炎、汗腺炎、曬斑、射線皮炎、皮裂、濕疹、搔癢癥、神經(jīng)性皮炎、銀屑病、尋常痤瘡、斑禿等皮膚病。有醫(yī)院用蜂膠制劑治療化膿性皮膚病，治愈率為75%。用蜂膠制劑治療1000例各種皮炎患者，其中浸潤性禿發(fā)病療效率100%，斑禿療效率為82% ；用蜂膠治療腳雞眼治愈率達(dá) 90%。(3)在耳、鼻、咽喉科的應(yīng)用用蜂膠制劑(油膏劑或滴劑)治療中耳炎或鼻炎，一般用藥3 4次，10 15天可痊愈，個別3 4天可痊愈。另外，用蜂膠浸膏治療急性和慢性鼻炎、委縮性鼻炎、鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎、上呼吸道炎、外耳炎、中耳炎、聽力障礙等都有較好的效果。(4)在口腔科上的應(yīng)用早在50年代，國外就應(yīng)用蜂膠軟膏成功地治療了復(fù)發(fā)性口瘡、口腔糜爛、潰瘍等口腔疾病。(5)在內(nèi)科上的應(yīng)用胃及十二指腸潰瘍是比較頑固的慢性病，臨床實踐證明，用蜂膠酊治療胃及十二指腸潰瘍，其中90%以上的患者3 5天就有明顯好轉(zhuǎn)，胃酸度趨于正常，胃分泌機(jī)能恢復(fù)正常。蜂膠片治療高血脂癥有明顯的降血脂作用，治療冠心病也收到良好的效果。3. 2日用化工蜂膠有消炎、止痛、殺菌、促進(jìn)組織再生作用，有利于保護(hù)皮膚，防止某些皮膚病， 有助于壞死皮脫落；促進(jìn)表皮更新，目前有蜂膠牙膏、洗發(fā)水、沐浴露、護(hù)膚霜、蜂膠酊、洗面奶、洗手液、香皂等產(chǎn)品熱銷，并且蜂膠中萜烯類、芳香酸及酯等物質(zhì)的存在，有特殊香氣， 用作香水不僅香氣溢人，而且可以用來驅(qū)逐蚊蠅。3. 3農(nóng)牧業(yè)方面
蜂膠有抗氧化、抗菌、抑制植物萌芽等生長的作用，并且蜂膠中酮類、酚類、醇類、 醛類物質(zhì)有抗菌、防腐的作用。故用于蜂膠植物調(diào)節(jié)劑、防腐劑、殺蟲劑等方面。蜂膠有促進(jìn)動物生長發(fā)育的作用，可用作飼料添加劑，有試驗研究用添加蜂膠的飼料喂養(yǎng)豬，同等時間內(nèi)比沒添加蜂膠的飼料喂養(yǎng)的豬體重增加多，并且節(jié)省飼料。并且最近報道，蜂膠對蜂螨有麻醉殺滅作用，一旦蜂膠殺螨劑出現(xiàn)將使蜂產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留和蜂螨產(chǎn)生抗藥性的問題得到解決。3. 4食品貯藏和保鮮由于蜂膠提取液能夠形成保護(hù)膜，降低了果蔬的新陳代謝，減少水分蒸發(fā)，從而起到保鮮作用，延長了保存期，品質(zhì)得到保證；蜂膠還有抗氧化作用，對油類食物的貯藏效果較好，現(xiàn)在已用于柑橘、蔬菜、水產(chǎn)品加工以及豬油和花生仁的保鮮和貯存。有人將蜂膠用于禽蛋保鮮，用10. 4%蜂膠乙醇提取液處理，107天后蛋重?fù)p失率平均為2. 25%，未見變質(zhì)，對照組存60天時蛋白呈稀水棒，全部變黑腐臭。4.食用標(biāo)準(zhǔn)蜂膠的食用方法并不像服用其他蜂產(chǎn)品那么簡便，必須經(jīng)過提取過程，將有害物質(zhì)剔除后方可應(yīng)用，千萬不可服用原蜂膠。直接服用原蜂膠或自行用白酒浸泡服用，雖也有一定程度的作用，卻存在著潛在的負(fù)面影響，這是很危險的。當(dāng)前，提取蜂膠和除鉛技術(shù)雖已過關(guān)，可準(zhǔn)確掌握這一技術(shù)的單位和個人并不很多，有些道聽途說簡便行事，甚至用白酒泡一泡就服用，這是不科學(xué)的。一定要食用廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，如蜂膠膠囊、蜂膠液。如何鑒別蜂膠市場上的蜂膠產(chǎn)品？由于廠商很多，品質(zhì)良莠不齊。(1)關(guān)于蜂膠產(chǎn)品的合法性蜂膠未列入2002年衛(wèi)生部(衛(wèi)法監(jiān)發(fā)2002. 51號) 發(fā)布的食品和既是食品又是藥品的名單，即蜂膠產(chǎn)品不能以食品名義生產(chǎn)銷售。衛(wèi)生部在同一文件中將蜂膠列入保健食品原料名單，就是說蜂膠類產(chǎn)品必須通過申報，獲得保健食品批準(zhǔn)證書后方取得合法生產(chǎn)銷售資格。目前仍有相當(dāng)多的蜂膠產(chǎn)品，利用當(dāng)?shù)匦l(wèi)生部門核發(fā)的普通食品衛(wèi)生許可證，或 QS認(rèn)證以普通食品的名義進(jìn)行生產(chǎn)經(jīng)營，使相當(dāng)多的沒有獲得保健號食品批文的蜂膠產(chǎn)品 “合法化”。在美國和歐盟等國，蜂膠是作為普通食品銷售的。既然蜂膠是普通食品，就不能對人體造成任何傷害。國家質(zhì)檢總局、衛(wèi)生部在2009年7月22日發(fā)布(關(guān)于進(jìn)口食品、食品添加劑檢驗有關(guān)適用標(biāo)準(zhǔn)問題的公告)，在其中的附件1 (進(jìn)口食品及對應(yīng)適用標(biāo)準(zhǔn)目錄)中， 第198頁已確定將進(jìn)口蜂膠膠囊定為普通進(jìn)口食品(蜂膠液及其他蜂膠制品不在此類)， 其標(biāo)準(zhǔn)參照SB/T10096-1992《蜂膠》，GB2760-2007食品中添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。蜂膠膠囊檢測方法標(biāo)準(zhǔn)GB4789. 2-1994食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定，GB4789. 3-1994食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群測定，GB4789. 4-1994食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗，GB4789. 5-1994 食品微生物學(xué)檢驗志賀氏菌檢驗，GB4789. 10-1994食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗，GB4789. 15-1994食品微生物學(xué)檢驗霉菌和酵計數(shù)，GB/T5009. 11食品中總砷及無機(jī)砷的測定方法，GB/T5009. 12食品中鉛的測定方法，GB/T5009. 17食品中總汞及有機(jī)汞的測定方法，GB7718-1994食品標(biāo)簽通用標(biāo)準(zhǔn)，JJF1070定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則。進(jìn)口蜂膠膠囊作為普通食品必須經(jīng)過中華人民共和國進(jìn)出口檢驗檢疫局法定檢驗，還要做到一批一檢，經(jīng)檢驗合格后由中華人民共和國進(jìn)出口檢驗檢疫局核發(fā)《衛(wèi)生證書》，而且給每瓶合格的進(jìn)口蜂膠瓶上，加貼中華人民共和國進(jìn)出口檢驗檢疫局CIQ防偽標(biāo)識。(2)蜂膠黃酮含量最近制定的《蜂膠國家標(biāo)準(zhǔn)(報批稿)》對總酮含量有具體規(guī)定指標(biāo)范圍，超出正常含量范圍是不可能的。蜂膠產(chǎn)品中的蜂膠含量是有一定比例的，有的企業(yè)把蜂膠原料折總黃酮含量檢測結(jié)果當(dāng)作產(chǎn)品的總黃酮含量進(jìn)行宣傳是一種欺騙行為。 總黃酮含量僅是一個標(biāo)志性成分指標(biāo)，除黃酮外蜂膠還含有萜烯類和有機(jī)酸等多種功效成分，總黃酮含量高并不意味其它功效成分也同比例提高。蜂膠的保健作用是多種功效成分共同作用的結(jié)果，并非只是黃酮類物質(zhì)在起作用。所以單純宣傳黃酮高是不科學(xué)的也是不符合實際的。(3)蜂膠中的含鉛量蜂膠保健效果明顯，食用蜂膠不應(yīng)間斷。蜂膠的鉛含量超標(biāo)問題，主要表現(xiàn)在原料上。蜂膠中的鉛并不是在原膠中就有的，而是與蜂膠的采集環(huán)境、生產(chǎn)環(huán)節(jié)中受的污染，所以我們才說原料蜂膠不能直接食用；因此，蜂膠保健品的生產(chǎn)有特殊的要求，尤其是蜂膠中鉛的分離技術(shù)。蜂膠中鉛分離技術(shù)是一項食品加工基礎(chǔ)技術(shù)，符合保健食品生產(chǎn)條件的蜂膠生產(chǎn)企業(yè)，在蜂膠技術(shù)人員指導(dǎo)下都能解決，均能達(dá)到國家制定的鉛含量標(biāo)準(zhǔn)要求。衛(wèi)生部、國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的蜂膠保健食品，都通過指定權(quán)威機(jī)構(gòu)嚴(yán)格的安全毒理性評價和保健功效評價，食用是安全的，也是有效的。其實鉛含量問題不是蜂膠特有的，所有的食品、藥品、化妝品等都有鉛含量問題， 國家有關(guān)部門早就制定了相關(guān)產(chǎn)品的鉛含量標(biāo)準(zhǔn)，超標(biāo)產(chǎn)品就判定為不合格。一些廠家借題發(fā)揮炒作過分的渲染，以至誤導(dǎo)，起到一些負(fù)面影響。正規(guī)的保健食品都必須進(jìn)行鉛、砷、 汞的檢測，只要合格產(chǎn)品盡可放心消費(fèi)，不必談鉛色變。5、蜂膠中抗腫瘤成分的研究蜂膠作為一種天然藥物，已證明其具有抗病原微生物、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤作用，特別是其抗腫瘤作用引起人們廣泛的關(guān)注。研究表明蜂膠對人鼻咽癌、子宮頸癌、乳腺癌、腎癌、大腸癌等人癌細(xì)胞株均具有強(qiáng)烈的毒殺作用。已有多種抑制腫瘤細(xì)胞生長的有效成分已被鑒定出來，主要是咖啡酸及肉桂酸類的衍生物和黃酮類化合物等。(1)咖啡酸類衍生物咖啡酸苯乙酯(簡稱CAPE)是蜂膠中一種較早被確認(rèn)的抗腫瘤成分。近年國外研究報道，作為蜂膠抗腫瘤作用的主要活性成分，對人白血病細(xì)胞和多種實體瘤細(xì)胞具有明顯的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，而且能顯著抑制NIH/3T3細(xì)胞被肉瘤相關(guān)病毒MuSV-124 的惡性傳染。CAPE能抑制兩種腫瘤細(xì)胞系的生長，調(diào)節(jié)兩種細(xì)胞系中與腫瘤相關(guān)抗體的表達(dá)。CAPE可選擇性誘導(dǎo)癌細(xì)胞株的DNA斷裂。如鼠高肝轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌26-1 j細(xì)胞株、鼠高肝轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤BL6細(xì)胞株、鼠肺癌LLC細(xì)胞株、人纖維肉瘤HT-1080細(xì)胞株、人肺腺癌A549細(xì)胞株和人宮頸癌HeLa細(xì)胞株的生長均有抑制作用，但不同的細(xì)胞株對，CAPE的敏感性不同。結(jié)腸癌26-L5細(xì)胞的半數(shù)致死濃度(簡稱EC50)為0. 15 μ mol · L—1，而HeLa 細(xì)胞為10. 7 μ mol ·Ι^。CAPE還可減少由致癌物氧化偶氮甲烷導(dǎo)致的小鼠結(jié)腸畸形腺窩灶(簡稱ACF)的形成和腫瘤的產(chǎn)生，而目前認(rèn)為結(jié)腸黏膜ACF的形成是導(dǎo)致大腸癌發(fā)生的關(guān)鍵階段。更值得研究人員興奮的是CAPE及其衍生物對不同細(xì)胞具有選擇性的毒性作用，對舌鱗癌、頸部牙齦轉(zhuǎn)移癌等腫瘤細(xì)胞生長具有明顯的抑制作用，但對黏膜成纖維細(xì)胞
16等正常細(xì)胞卻沒有作用。CAPE的抗腫瘤作用部分機(jī)理已經(jīng)被闡明。Hye等認(rèn)為具有潛在的抑制腫瘤入侵及轉(zhuǎn)移作用，這種作用是由細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶的調(diào)節(jié)決定的。細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶是一種 Zn-依賴的蛋白水解酶，在細(xì)胞外基質(zhì)的分裂增殖過程中起著關(guān)鍵作用。用不同劑量CAPE 處理人成纖維肉瘤發(fā)現(xiàn)CAPE能夠顯著下調(diào)基因的表達(dá)水平。另外，也觀察到CAPE能抑制 MMP-2活化的全過程，如人侵、活動、細(xì)胞遷移、聚集，為CAPE抗腫瘤提供了有力證據(jù)。CAPE抗腫瘤作用可能與CAPE能夠修復(fù)細(xì)胞間縫隙連接有關(guān)。用CAPE處理縫隙連接缺失的WB-ras2細(xì)胞后，可引起細(xì)胞生長受抑，細(xì)胞縫隙連接明顯恢復(fù)，其細(xì)胞連接相關(guān)蛋白連接素-43的表達(dá)上調(diào)并定位于細(xì)胞膜。 CAPE能夠抑制腫瘤基因的表達(dá)。CAPE對TPA引起的腫瘤增長和5_經(jīng)甲基_2’ -脫氧尿嘧啶形成有潛在的抑制活性，在Hela細(xì)胞培養(yǎng)基中1.25、2. 5、5、10、20mmol · L—1的 CAPE對DNA合成抑制率分別為32 %、44 %、56 %、79 %、95 % ；對RNA合成抑制率分別為 39%、43%、58%、64%、75%，對蛋白質(zhì)合成抑制率分別為 29 %、30 %、37 %、32 %、47 %。 CAPE處理兩個p53腫瘤突變異種細(xì)胞系NCI-H358和SK0V-3及缺乏型p53細(xì)胞引起 cas-pase-3 和 DNA 斷裂。CAPE引起腫瘤細(xì)胞凋亡作用還可由p38絲裂原活化蛋白激酶通路介導(dǎo)。 CAPE (50 μ mol -L"1)處理C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞漿，激活 CPP32,也上調(diào)了 p53、Bax和Bak基因的表達(dá)。活化了細(xì)胞外的ERKs/p38 MAPK通路，p38 激酶和P53形成一個復(fù)合體，誘導(dǎo)p53磷酸化，使得C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡。另外，從荷蘭蜂膠中提取得到CAPE類似物咖啡酸苯乙酯、咖啡酸苯丙酯、咖啡酸肉桂醇酯。3種成分對鼠肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌26-L5細(xì)胞都顯示了抑制作用，EC50分別為0. 288、 1. 76 禾口 0. 114 μ mol · Γ1。(2)肉桂酸類衍生物近年來研究人員發(fā)現(xiàn)，阿替匹林(Artepillin C)及其結(jié)構(gòu)衍生物是蜂膠中一類獨(dú)特的對腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用的活性成分。實驗中發(fā)現(xiàn)，在體外腫瘤細(xì)胞抑制試驗中， IOOyml-I Anepillin C發(fā)現(xiàn)具有明顯的細(xì)胞毒作用，能夠強(qiáng)烈抑制人肺癌HLC細(xì)胞(腺癌)、腸癌HGC細(xì)胞、鼠肝癌HTSA細(xì)胞、鼠惡性腫瘤Colon 26和B-16細(xì)胞、喉癌KB細(xì)胞、和鼠黑素瘤上皮細(xì)胞Clone M-3的DNA合成，并能引起HLC、HGC、Colon 26、人白血病細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。在裸鼠移植HLC、HGC、Colon 26、HTSA、PLC/PRF/5、黑色素瘤細(xì)胞動物實驗中，每只裸鼠瘤內(nèi)注射Artepillin C 500 μ g，即檢測到細(xì)胞凋亡、有絲分裂中止、腫瘤細(xì)胞核溶解、腫瘤細(xì)胞死亡，最后癌病變組織被膠原限制，腫瘤細(xì)胞入侵浸潤也被阻止，而人正常細(xì)胞的生長不受影響。低劑量Artepillin C(500 μ g)還可以預(yù)防鐵-氮基三醋酸酯(簡稱 FeNTA)誘發(fā)的小鼠支氣管和細(xì)支氣管腺瘤惡性轉(zhuǎn)化，阻止肺癌的發(fā)展。Artepllin C對于不同系列的人白血病細(xì)胞如T-淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞、β-淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞、髓性白血病細(xì)胞、非淋巴、非髓性白血病顯示了明顯的細(xì)胞毒作用， 100 μ ml · Γ1 “處理24h，能顯著誘導(dǎo)這些白血病腫瘤細(xì)胞凋亡，其中對T-淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞作用最強(qiáng)。所有細(xì)胞都觀察到了凋亡小體和DNA碎片。所有白血病細(xì)胞的DNA合成都受到抑制，同時顯微鏡觀察到細(xì)胞被瓦解。白血病細(xì)胞的凋亡可能與Fas抗原的表達(dá)增強(qiáng)和喪失線粒體膜電位有關(guān)。試驗證明Art印Ilin C有抗白血病作用，但對正常的淋巴細(xì)胞僅僅是有限的抑制作用。氧化偶氮甲烷處理DDY小鼠造成結(jié)腸癌模型，灌胃80和leOmgkg—1蜂膠或 IOmgkg-1Art印ill in C(相當(dāng)160mg蜂膠)能夠顯著將結(jié)腸畸形腺窩灶的發(fā)生率降低 39. 2%，43. 7%和43. 4%。Shimizu等將Art印Ilin C加到人結(jié)腸癌腺細(xì)胞WiDr中，發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期G(O)肥(1)期，并抑制腫瘤細(xì)胞生長。通過增強(qiáng)腫瘤關(guān)鍵蛋白Cipl/p21 的活性，刺激Cipl/p21的表達(dá)來影響腫瘤細(xì)胞周期。Akao等報道了另外兩種肉桂酸的衍生物drupanin、Baccharin對結(jié)腸癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞的抑制活性。濃度為150μπιΟ1 · L—1時，它們對以上所有細(xì)胞均有顯著抑制作用，抑制效果為art印illin C > Baccharin > drupanin0從試驗結(jié)果推測出該類化合物苯環(huán)上3位異戊二烯基團(tuán)有助于抗腫瘤活性。但Drupanin似乎體現(xiàn)了比art印illin C更小的副作用，對于Con-A誘導(dǎo)的人正常血中淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，Drupanin要弱于 Artepillin C。(3)黃酮類化合物蜂膠中對腫瘤起作用的黃酮類化合物主要是黃酮及黃酮醇類、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物，這些物質(zhì)對致癌物有抑制作用。試驗中用抗微核實驗?zāi)Ｐ蛯σ恍S酮和黃酮醇衍生物進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)黃酮醇有抗苯并花的作用，其中高良姜黃素活性最強(qiáng)。蜂膠中的蘆丁、桑黃素、槲皮素均能抑制苯并芘對小鼠皮膚的致癌作用；芹黃素、山奈酚、槲皮素對黃曲霉素Bl與DNA加合物的形成有抑制作用，并能明顯抑制對二甲基苯并蒽誘導(dǎo)的小鼠皮膚癌作用；槲皮素對TPA、3-甲基膽恿、N-甲基-N-亞硝基脂等引起的皮膚癌也有抑制作用。Kyimg等的實驗發(fā)現(xiàn)蜂膠中的白楊素(Chrysin)能夠誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞U937細(xì)胞凋亡，并闡明了機(jī)理。在U937細(xì)胞中，如使用PI3K抑制劑，抑制了 Akt的磷酸化，就會發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)了 Chrysin的誘導(dǎo)凋亡作用；而如果Akt的過度表達(dá)，則會抑制Chrysin誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。提示了 Akt信號途徑在chrysin誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞凋亡過程中起著重要作用， 即有可能是建立了 ChrYsin和P13K從kt_相關(guān)的通路之間的連接。這對惡性血液疾病提供了一個新的治療策略。還有研究表明Chrysin能夠顯著下調(diào)NF-IL6，抑制了 NF-IL6與 DNA的結(jié)合，抑制和阻斷癌基因表達(dá)。Chen等從臺灣蜂膠中分離到三種新異戊二烯基黃酮， PropolinA, B、C。Propolin A和B對3個癌細(xì)胞系的都顯示了細(xì)胞毒性，DNA含量和DNA 片段分析，Propolin A有效地誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，并表現(xiàn)出強(qiáng)力的抗大部分自由基的消除作用。Propolin C對于人黑色素瘤細(xì)胞也觀察到細(xì)胞毒作用(IC50為8. 5 μ mol化4)，能夠劑量或時間依賴性地降低幾種能夠引起人黑色素瘤細(xì)胞凋亡的蛋白的水平如Procaspase-8， Bid蛋白、procaspase-3，而且能使細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞漿中，提示了 Propolin C的細(xì)胞毒作用是由線粒體介導(dǎo)。(4)雙萜烯酸類化合物試驗用高效液相色譜從巴西蜂膠甲醇提取液中分離出一種抗腫瘤物質(zhì)，定性為新clerodane 二萜烯(簡稱PMS_1)，分子式C2tlH32O3 (分子量320)。該化合物能夠抑制DNA的合成減少皮膚癌的發(fā)生率，并且通過降低DNA的合成抑制腫瘤的生長。日本研究人員根據(jù)對人肝細(xì)胞癌細(xì)胞毒性的檢驗，從巴西蜂膠甲醇提取液中分離出兩個clerodane雙萜異構(gòu)體，分別為15-氧代_3，13Z-kolavadien_17-含氧酸和15-氧代-3z-13E-kolavadien-17-含氧酸。(5)苯并吡喃類Luo從巴西蜂膠中分離出活性成分苯并-Y-毗喃衍生物PM-3，能夠抑制人胸腺癌 MCF-7細(xì)胞生長。在Gl階段用PM-3處理MCF-7細(xì)胞，結(jié)果導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白Dl和E蛋白水平的降低，PM-3也抑制了轉(zhuǎn)錄水平上的細(xì)胞周期蛋白Dl的表達(dá)。從巴西蜂膠分離出 (Z)-2，2-甲基-8-(3-甲基-2-丁基)-苯并吡喃-6-丙烯酸(A)和(E)-2，2-甲基-8-(3-甲基-2- 丁基)-苯并吡喃-6-丙烯酸(B)。在紫外線(365nm)照射下B迅速變成A，也觀察到相反的反應(yīng)。反應(yīng)從A或B開始，A和B的比率到達(dá)2. 3，達(dá)到一個光穩(wěn)定態(tài)。在抗人肺癌細(xì)胞HLC-20方面，A比B的細(xì)胞毒性強(qiáng)7倍。蜂膠的抗腫瘤作用早已為人所知，但是一些研究報道值得注意。烏拉圭蜂膠的乙醇提取物是乳腺癌的一種抑制劑，而巴西蜂膠的水提取物和乙醇提取物對乳腺癌影響不大。說明蜂膠的來源和制備對于抑制腫瘤非常重要。還有報道，在成年大鼠抗艾氏癌實驗中，蜂膠醇提液與博來霉素合用時的大鼠存活率要低于二者單獨(dú)使用時的存活率。近十年來，蜂膠以及其中的抗腫瘤活性成分的研究取得了巨大進(jìn)展。不少效果良好的抗腫瘤成分成分結(jié)構(gòu)新穎、有藥用前途的先導(dǎo)化合物。我國是世界上養(yǎng)蜂和蜂產(chǎn)品生產(chǎn)大國，蜂膠資源豐富，隨著對蜂膠抗腫瘤作用及其作用機(jī)理的不斷深入研究，蜂膠在征服癌癥中必將發(fā)揮應(yīng)有的作用。(三)常用中草藥有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對活性成分溶解度大，對不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料(需適當(dāng)粉碎)中時，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動態(tài)平衡時，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為親水性有機(jī)溶劑及親脂性有機(jī)溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其極性小而疏于水。各類溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。這樣，發(fā)明人就可以通過對中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計它們的此類性質(zhì)和選用的溶劑。總的說來，只要中草藥成分的親水性和親脂性與溶劑的此項性質(zhì)相當(dāng)，就會在其中有較大的溶解度，即所謂“相似相溶”的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自中草藥中提取所需要成分的依據(jù)之一。(2)溶劑的選擇運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇Ｈ軇┻x擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)①溶劑對有效成分溶解度大，對雜質(zhì)溶解度??；②溶劑不能與中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。常見的提取溶劑可分為以下三類①水水是一種強(qiáng)的極性溶劑。中草藥中親水性的成分，如無機(jī)鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽及苷類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。
②親水性的有機(jī)溶劑也就是一般所說的與水能混溶的有機(jī)溶劑，如乙醇(又稱 酒精)、甲醇(又稱木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對中草藥細(xì)胞的穿透能力較強(qiáng)。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時間短，溶解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機(jī)溶劑，雖易燃，但毒性小，價格便宜，來源方便，有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低(64°C)，但有毒性，使用時應(yīng)注意。③親脂性的有機(jī)溶劑也就是一般所說的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，如石油醚、 苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提出親水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價格較貴，設(shè)備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長時間反復(fù)提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取中草藥原料時，直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。(3)提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。同時，原料的粉碎度、提取時間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。①浸漬提取法(簡稱浸漬法)浸漬法系將中草藥粉末或碎塊裝入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎＂跐B漉提取法(簡稱滲漉法)滲漉法是將中草藥粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉、溶出成分比重加大而向下移動時，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過程中隨時自藥面上補(bǔ)充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時，便可認(rèn)為基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。③煎煮提取法(簡稱煎煮法)煎煮法是中國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個煎煮器通過管道互相連接，進(jìn)行連續(xù)煎浸。④加熱回流提取法應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶內(nèi)裝藥材約為容量的20% 60%， 溶劑浸過藥材表面約1 2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰3 6小時，放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。⑤連續(xù)回流提取法應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取中草藥有效成分，不論小型實驗或大型生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實驗室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時才能提取完全。提取成分受熱時間較長，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。2、分離和純化方法上述提取法所得到的中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)， 分離并進(jìn)行精制。(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行分離純化， 是最常用的方法。(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。萃取時如果各成分在溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強(qiáng)的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過，一般有機(jī)溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因為能使較多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對有效成分進(jìn)一步精制影響很大。②逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時的接觸面。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)， 而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢查。③逆流分配法逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來在逆流分配法基礎(chǔ)上改進(jìn)的溶劑萃取法。對溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時間內(nèi)分離成，并可生成有效的液滴。由于移動相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附樹脂法大孔吸附樹脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一類有機(jī)高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來逐漸被應(yīng)用于中草藥化學(xué)成分的提取分離和中藥新藥的開發(fā)研制。大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理， 有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開。這使得有機(jī)化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡化。大孔吸附樹脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹脂的極性發(fā)生改變，按照樹脂的表面性質(zhì)，吸附樹脂一般分為非極性、中極性和極性三類。非極性吸附樹脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹脂，如D101、XAD-l、DiaiOnHP-10大孔吸附樹脂。中極性吸附樹脂指含酯基的吸附樹脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯(lián)的一類共聚物。它是在非極性大孔吸附樹脂的基礎(chǔ)上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國國內(nèi)經(jīng)常使用的AB-8大孔吸附樹脂。極性吸附樹脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹脂。 此外，有時把含氮、氧、硫等配體基團(tuán)的離子交換樹脂稱作強(qiáng)極性吸附樹脂，強(qiáng)極性吸附樹脂與離子交換樹脂的界限很難區(qū)別。極性大孔吸附樹脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類縮聚而成，如日本三菱化工的Diaion HP 2MG、美國Rohm-hass公司的XAD-IO， XAD-9大孔吸附樹脂。與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹脂具有很多的優(yōu)點(diǎn)，如對某種物質(zhì)的吸附選擇性較高；物理化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度較好；品種規(guī)格較多，可根據(jù)需要改變樹脂物理或化學(xué)結(jié)構(gòu)；吸附樹脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，近年來關(guān)于大孔吸附樹脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用研究報道越來越多。大孔吸附樹脂對中草藥化學(xué)成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類成分都有一定的吸附作用。對糖的吸附能力很差，對色素的吸附能力較強(qiáng)。(4)沉淀法是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀， 故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。(5)鹽析法鹽析法是在中草藥的水提液中，加入無機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常用作鹽析的無機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。(6)透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制。(7)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化合物，可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行分離精制。一般地說，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶體的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來達(dá)到分離精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關(guān)，在真空狀態(tài)下，水的沸點(diǎn)降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下營養(yǎng)成分如維生素等的破壞，同時提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用，中國也開發(fā)和引進(jìn)了各種真空干燥設(shè)備，其結(jié)構(gòu)形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統(tǒng)的真空干燥裝置主要采用熱風(fēng)，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導(dǎo)、對流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內(nèi)部。真空干燥具有干燥溫度低，干燥室內(nèi)相對缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優(yōu)點(diǎn)，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設(shè)備成本、干燥費(fèi)用也相對較低。(2)噴霧干燥是流化技術(shù)用于液態(tài)物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產(chǎn)品質(zhì)量好，保持原來的色香味，且易溶解。利用噴霧干燥來制備微囊的研究正在進(jìn)行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經(jīng)離心噴霧器將其噴入熱氣流中， 所得的產(chǎn)品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、 糖漿劑或混懸劑。(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達(dá)到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報道了一種噴霧通氣凍干新技術(shù)，是利用冷的空氣或氮?dú)庾鳛榻橘|(zhì)，迅速流經(jīng)凍結(jié)物使水升華，噴霧凍干制得的產(chǎn)品微粒小、干燥快、時間短、均勻、流動性好，并具良好的速溶性。近年來，對膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進(jìn)展，流態(tài)化技術(shù)、噴射技術(shù)、惰性載體技術(shù)，則是在此研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。旋轉(zhuǎn)閃蒸干燥機(jī)、熱噴射氣流干燥機(jī)、惰性載體干燥機(jī)均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產(chǎn)，將大大改善中藥加工的技術(shù)水平，提高生產(chǎn)效率。(4)遠(yuǎn)紅外加熱干燥法是一項新的干燥技術(shù)，其干燥原理是將電能轉(zhuǎn)變?yōu)檫h(yuǎn)紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產(chǎn)生共振，引起分子和原子的振動和轉(zhuǎn)動，導(dǎo)致物體變熱， 經(jīng)過熱擴(kuò)散、蒸發(fā)和化學(xué)變化，最終達(dá)到干燥的目的。遠(yuǎn)紅外干燥可節(jié)省電能20 % 50 %， 效果較好。(5)微波干燥法是一項20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來的新技術(shù)，微波干燥實際上是通過感應(yīng)加熱和介質(zhì)加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃繌亩_(dá)到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國生產(chǎn)的微波加熱成套設(shè)備有915mhz和M50mhz兩個頻率。4、超臨界CO2萃取方法(1)有關(guān)動、植物成分的提取方法有水煮法、水媒分離法、分子蒸餾和減壓蒸餾法、金屬加合法、萃取結(jié)晶法、分盤冷凍壓榨法和有機(jī)溶劑法等。采用水煮加熱法，因加熱時間長、溫度高，易使對熱不穩(wěn)定的揮發(fā)成分發(fā)生變化， 如一些不飽和脂肪酸的氧化。水媒分離法，此分離法的明顯優(yōu)點(diǎn)是消除了有機(jī)溶劑法造成的高費(fèi)用和公害，但是這種技術(shù)的缺點(diǎn)是得到的飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的純度或級別不如有機(jī)溶劑分離法高。分子蒸餾和減壓蒸餾法為減少熱變性，需用尿素加合物等方法來除去大部分飽和脂肪酸，在得到的產(chǎn)品中必須將其除去；雖然可得到較純的脂肪酸，但需幾步才能達(dá)到目標(biāo)，較費(fèi)時、費(fèi)力，增加了生產(chǎn)成本。金屬加合法分離需要較低的低溫處理， 最后還要設(shè)法去除金屬離子，清除不盡還會造成金屬離子污染。萃取結(jié)晶法得到脂肪酸純度較高，在較低的溫度下進(jìn)行，能防止脂肪酸的氧化，但時間較長，不太適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。分盤冷凍壓榨法缺點(diǎn)是，安放盤架和液壓機(jī)的冷凍室需要數(shù)千平方米的面積和龐大的冷卻系統(tǒng)，大的設(shè)施需要多人操作，勞動強(qiáng)度高，分離速度緩慢，效率低，不能連續(xù)操作。有機(jī)溶劑法是采用石油醚或乙醚有機(jī)溶劑在水浴上加熱情況下，進(jìn)行回流循環(huán)提??；由于所采用的有機(jī)溶劑如石油醚或乙醚等均為一種低沸點(diǎn)物質(zhì)，易燃易爆，同時，有機(jī)溶劑的使用一方面會污染環(huán)境，另一方面有機(jī)溶劑有可能在提取物中有殘留，會影響提取物在醫(yī)藥上的進(jìn)一步應(yīng)用。(2)有關(guān)動、植物成分的超臨界CO2萃取方法一種流體當(dāng)處在其臨界溫度和壓力狀態(tài)時，被稱為超臨界流體。由于超臨界流體的密度接近于液體，具有與液體溶劑相當(dāng)?shù)妮腿∧芰?。又具有與氣體相當(dāng)?shù)牡驼扯?，擴(kuò)散能力比液體要大100倍，因而具有較高的傳質(zhì)性。采用超臨界萃取的時候，利用超臨界流體的這些性質(zhì)，使之與待分離的物質(zhì)相接觸穿透基體，從中萃取出目標(biāo)物質(zhì)。然后利用降壓和/或升溫的辦法降低其密度，從而降低溶質(zhì)在其中的溶解度，使被萃取物與溶劑分離。因為不同的物質(zhì)在相同的萃取條件下溶解度是不同的，因而有可能借助這種差異將它們進(jìn)一步分開。超臨界流體萃取常常選用0)2等臨界溫度低且化學(xué)惰性的物質(zhì)為萃取劑，它特別適用于熱敏物質(zhì)和易氧化物質(zhì)的分離，因此非常適用于對于動物油脂的提取分離。因此，本發(fā)明采取該方法，能夠制備高純度的被提取物。超臨界(X)2萃取方法是這樣提取的把干燥的被提取物的粗粉放在超臨界萃取設(shè)備中用ω2進(jìn)行萃取，減壓后即得被提取物，室溫條件下呈淺黃色透明狀；被提取物的純度在40 %以上，優(yōu)于其他提取方法。超臨界(X)2萃取被提取物的方法包括如下步驟(1)將干燥的被提取物粉碎至10 30目后，置于超臨界萃取釜中，連續(xù)地通入超臨界狀態(tài)下的(X)2進(jìn)行萃取，優(yōu)選的條件一般是ω2流量10 55kg/h -kg原料、壓力5 50Mpa、溫度15 75°C、時間0. 5 6h ；進(jìn)一步優(yōu)選的條件一般是0)2流量45kg/h · kg原料、壓力3aipa、溫度50°C、時間Ih ；(2)將萃取了被提取物的CO2減壓至1 12MPa，即可獲得在室溫條件下被提取物， 被提取物的純度在40%以上，萃取物的理化性狀和純度都優(yōu)于其他提取方法。萃取條件的選擇是通過以下辦法實現(xiàn)的首先選定四因素、三水平，根據(jù)正交設(shè)計方法，按L9(34)交設(shè)計表安排實驗(正交實驗設(shè)計安排參考郭祖超主編的《醫(yī)學(xué)統(tǒng)計學(xué)》， 人民軍醫(yī)出版社，1999年第一版)。從正交實驗結(jié)果，分析得到萃取工藝條件。對超臨界(X)2萃取的被提取物進(jìn)行甲酯化后，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析。超臨界(X)2萃取被提取物的制備方法不使用有機(jī)溶劑等物質(zhì)，不會污染環(huán)境，也不存在有害溶劑殘留等問題，而且操作簡便、萃取時間短、產(chǎn)品純度高，使用的(X)2廉價而且可重復(fù)循環(huán)使用，工業(yè)生產(chǎn)成本低廉?？傊?，經(jīng)文獻(xiàn)檢索等現(xiàn)有的技術(shù)資料分析表明，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有確保重金屬低含量、黃酮類成分高含量、保持產(chǎn)品“原汁原味”的蜂膠加工方法等方面的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，即確保重金屬低含量、提高黃酮類成分含量的蜂膠加工方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說，本發(fā)明通過臨床試驗等研究及理論探索，目的在于提供一種新的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法。
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(一 )技術(shù)構(gòu)思發(fā)明人經(jīng)過研究的發(fā)現(xiàn)是蜂膠現(xiàn)有產(chǎn)業(yè)化的工藝，主要是以高濃度乙醇，超聲或者微波提取，上清液濃縮回收，干燥粉碎，既有除雜質(zhì)的效果，也有一定脫鉛效果。針對重金屬的問題，也有采用冰醋酸來進(jìn)行脫鉛的工藝；也有以熱水直接超聲或微波提取，有除雜質(zhì)的效果，但是黃酮類成分損失會很大。帕金森患者或L-芳香族氨基酸脫羧酶缺乏的病人特別是帕金森患者越來越多， 嚴(yán)重影響中國人口的健康和生存質(zhì)量，給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)，研制預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究有利于帕金森患者或L-芳香族氨基酸脫羧酶缺乏的病人等方面的產(chǎn)品，特別是藥物、診斷試劑和保健品等，具有顯著的社會效益、經(jīng)濟(jì)效益。根據(jù)此想法和思路，發(fā)明人通過反復(fù)的實驗研究和分析，已成功得到預(yù)期的研究結(jié)果和應(yīng)用產(chǎn)品。( 二)含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法本發(fā)明提供一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，對蜂膠提取工藝、方法等方面進(jìn)行了多方面的試驗和研究，評估蜂膠提取過程中有效成分和重金屬含量的變化。含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，包括以下步驟(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料以75 95 %乙醇加熱浸漬，處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品；所述的75 95%乙醇優(yōu)選95%乙醇；所述的處理方法是包括超聲處理方法、微波處理方法或以活性炭+活性白土加熱脫色處理方法等中的一種或多種，優(yōu)選以活性炭+活性白土加熱脫色處理方法；(2)精制蜂膠浸膏以乙醇溶解蜂膠浸膏粗品，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80%乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏；上述干燥方法均優(yōu)選噴霧干燥，若性狀不好可以添加輔料，效果更好；為了獲得更高黃酮類成分含量的提取物，在步驟( 進(jìn)行進(jìn)一步改進(jìn)如下將步驟(1)獲得的蜂膠浸膏粗品以95%乙醇溶解，再以活性炭+活性白土脫色劑脫色，然后過濾、離心，上清液濃縮回收，于燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏；為了獲得更高黃酮類成分含量的提取物，在步驟( 進(jìn)行進(jìn)一步改進(jìn)的方法也可以如下將步驟(1)獲得的蜂膠浸膏粗品以80%乙醇溶解，過樹脂純化，分段洗脫，濃縮回收，干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏；所述的樹脂是包括大孔樹脂或kphadex樹脂中的一種或多種，優(yōu)選大孔樹脂；所述的大孔樹脂優(yōu)選苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹脂，是包括DlOl大孔吸附樹脂、XAD-I大孔吸附樹脂或Diaion HP-10大孔吸附樹脂中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選DlOl 大孔吸附樹脂。(三)技術(shù)特長本發(fā)明為各類疾病的預(yù)防保健提供了一種新的蜂膠提取物來源，從而對現(xiàn)有的蜂膠制備質(zhì)量保證體系進(jìn)行了完善和提高。本發(fā)明有針對性地研究蜂膠制備方法，發(fā)現(xiàn)了一種新的蜂膠制備工藝，作出了意想不到的成績本發(fā)明得到的蜂膠提取物安全低毒，性質(zhì)穩(wěn)定，藥理作用較強(qiáng)，使用安全，且使用范圍特別廣，實用性較強(qiáng)，各類疾病的預(yù)防保健效果顯著。本發(fā)明方法成本低，其制備工藝簡單，有效成分得率高，能夠獲得高含量的黃酮類成分提取物，且重金屬大大低于其他方法，特別是鉛含量遠(yuǎn)低于國際標(biāo)準(zhǔn)，制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，容易操作，更適于工業(yè)化生產(chǎn)；因此，該蜂膠提取物容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益?？傊?，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療保健和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，本發(fā)明為研究開發(fā)蜂膠產(chǎn)品提供了新的蜂膠提取物來源，對改進(jìn)和提高現(xiàn)有的預(yù)防保健水平具有重要價值。
具體實施例方式本發(fā)明研究了現(xiàn)有的蜂膠制劑的來源，提供了一種新的蜂膠提取物及其制備方法，便于醫(yī)療保健行業(yè)的便捷和安全使用。下面就實施的具體實驗過程進(jìn)行進(jìn)一步闡述和說明。蜂膠提取物的制備方法之一(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料以95%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品；(2)精制蜂膠浸膏以乙醇溶解蜂膠浸膏粗品，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80 %乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏；蜂膠提取物的制備方法之二 (1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料以75 %乙醇加熱浸漬，超聲或微波處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品；(2)精制蜂膠浸膏以乙醇溶解蜂膠浸膏粗品，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80 %乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏；蜂膠提取物的制備方法之三(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料以85%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品；(2)精制蜂膠浸膏以95%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品，再以活性炭+活性白土脫色劑脫色，然后過濾、離心，清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏；
蜂膠提取物的制備方法之四(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料以95 %乙醇加熱浸漬，超聲或微波處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品；(2)精制蜂膠浸膏以80%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品，過大孔樹脂純化，分段洗脫，濃縮回收，干燥粉碎， 得到精制的蜂膠浸膏；本發(fā)明最終需要制備成蜂膠提取物進(jìn)行應(yīng)用，下面列舉實施例進(jìn)行進(jìn)一步說明。在本發(fā)明中，以上所述的具體實施方式
和以下所述的實施例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。下面通過實施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述。實施例1、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以75%乙醇加熱浸漬，超聲處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品445g ；(2)精制蜂膠浸膏以95%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品445g，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80%乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏^3g，黃酮類成分含量9. 2%，鉛含量0. OUmg/Kg。實施例2、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以85%乙醇加熱浸漬，微波處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品456g ；(2)精制蜂膠浸膏以95%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品456g，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80%乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏310g，黃酮類成分含量9. 8%，鉛含量0. OHmg/Kg。實施例3、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以95%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品488g ；(2)精制蜂膠浸膏以95%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品488g，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80%乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏339g，黃酮類成分含量11. 7%，鉛含量0. Ollmg/Kg。實施例4、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以95%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品485g ；(2)精制蜂膠浸膏
以95 %乙醇溶解蜂膠浸膏粗品485g，再以活性炭+活性白土脫色劑脫色，然后過濾、離心，清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏396g，黃酮類成分含量 14. 8%,鉛含量 0. 013mg/Kg。實施例5、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以95%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品491g ；(2)精制蜂膠浸膏以80%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品491g，過XAD-I大孔吸附樹脂純化，分段洗脫，濃縮回收，干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏411g，黃酮類成分含量15. 6%，鉛含量0. 008mg/Kg。實施例6、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以95%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品488g ；(2)精制蜂膠浸膏以80%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品488g，過Diaion HP-10大孔吸附樹脂純化，分段洗脫，濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏413g，黃酮類成分含量15. 9 %，鉛含量 0.009mg/Kgo實施例7、(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料IOOOg以95%乙醇加熱浸漬，以活性炭+活性白土加熱脫色處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品493g ；(2)精制蜂膠浸膏以80%乙醇溶解蜂膠浸膏粗品493g，過DlOl大孔吸附樹脂純化，分段洗脫，濃縮回收，噴霧干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏432g，黃酮類成分含量18. 1 %，鉛含量0. 006mg/ Kg。
權(quán)利要求
1.一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟(1)制備蜂膠浸膏粗品蜂膠原料以75 95%乙醇加熱浸漬，處理后，放冷，過濾或離心，上清液濃縮回收，干燥粉碎，得到蜂膠浸膏粗品；(2)精制蜂膠浸膏以乙醇溶解蜂膠浸膏粗品，加鹽酸水解，得黃酮類成分的苷元，濃縮至浸膏，浸膏以大于80%乙醇溶解，過濾或離心，上清液濃縮回收，干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的 75 95%乙醇優(yōu)選95%乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的處理方法是包括超聲處理方法、微波處理方法或以活性炭+活性白土加熱脫色處理方法中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的處理方法是以活性炭+活性白土加熱脫色的處理方法。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的干燥方法是噴霧干燥；若性狀不好可以添加輔料，效果更好。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的步驟(2)改進(jìn)如下將步驟(1)獲得的蜂膠浸膏粗品以95%乙醇溶解，再以活性炭+活性白土脫色劑脫色， 然后過濾、離心，上清液濃縮回收，干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的步驟(2)改進(jìn)如下將步驟(1)獲得的蜂膠浸膏粗品以80%乙醇溶解，過樹脂純化，分段洗脫，濃縮回收， 干燥粉碎，得到精制的蜂膠浸膏。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的樹脂是包括大孔樹脂或Sephadex樹脂中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的樹脂是大孔樹脂。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的大孔樹脂是苯乙烯_ 二乙烯苯體系的吸附樹脂。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹脂是包括DlOl大孔吸附樹脂、XAD-I大孔吸附樹脂或 Diaion HP-10大孔吸附樹脂中的一種或多種。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，其特征在于，所述的苯乙烯_ 二乙烯苯體系的吸附樹脂是DlOl大孔吸附樹脂。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品、飲料等技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含高純度黃酮類成分的蜂膠提取方法，即確保重金屬低含量、黃酮類成分高含量、保持產(chǎn)品“原汁原味”的蜂膠加工方法。本發(fā)明有針對性地研究蜂膠制備方法，得到的蜂膠提取物安全低毒，性質(zhì)穩(wěn)定，藥理作用較強(qiáng)，且使用范圍特別廣，實用性較強(qiáng)，各類疾病的預(yù)防保健效果顯著。該方法成本低，其制備工藝簡單，有效成分得率高，能夠獲得高含量的黃酮類成分提取物，且重金屬大大低于其他方法，特別是鉛含量遠(yuǎn)低于國際標(biāo)準(zhǔn)，制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，容易操作，更適于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供了一種新的蜂膠提取物來源，對現(xiàn)有的蜂膠制備質(zhì)量保證體系進(jìn)行了完善，對提高現(xiàn)有的預(yù)防保健水平具有重要價值。
文檔編號A61P29/00GK102283866SQ20111016268
公開日2011年12月21日 申請日期2011年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月16日
發(fā)明者張大輝, 戴沛, 管孝君, 韓婷 申請人:張大輝