專利名稱：斑蝥酸鈉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品、保健品、飲料技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及一種化合物的制備方法，更具體地說是涉及一種來源于中藥斑蝥提取物的抗腫瘤藥物的制備方法，再具體地說是涉及化合物斑蝥酸鈉的一種高效制備方法。
背景技術(shù)：
(一 )斑蝥與斑蝥素的研究概況1、概述斑蝥(Canthari)在漢英詞典中的解釋(來源百度詞典)a Chinese blister beetle ;CantharideS。斑蝥具有破結(jié)攻毒、除血積、利水道的功能。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明 斑蝥還具有抗腫瘤、抗病毒的作用。斑蝥素則是從中藥斑蝥中提取的具有抗腫瘤活性的化合物。但斑蝥素的有效劑量和毒性劑量相近，對泌尿系統(tǒng)刺激作用強烈，限制了其應(yīng)用。2、斑蝥的基本概況斑蝥為動物界節(jié)肢動物門(Arthropoda)單枝動物亞門昆蟲綱(Insecta)有翅亞綱(Pterygote)鞘翅目(Coleoptera)芫青科(Mylabris)昆蟲南方大斑蝥(Mylabris phalerata Pallas) ^HH/JnJS^ (MyIabris cichorii Linnaeus)白勺〒 &。(1)基本信息來源中藥材斑蝥為芫青科昆蟲南方大斑蝥(大斑芫青)Mylabrisphalerata Pallas或黃黑小斑蝥(眼斑芫青)M. cichorii Linnaeus的干燥體。夏、秋二季于清晨露水未干時捕捉。悶死或燙死，去頭、足、翅，曬干生用或與糯米同炒至黃黑色，去米，研末用。性味、歸經(jīng)辛，熱；有大毒。歸肝、胃、腎經(jīng)。功效破血逐瘀消漱，攻毒散結(jié)。產(chǎn)地分布全國大部分地區(qū)均有，主產(chǎn)于河南、廣西、安徽、江蘇、湖南、貴州等省區(qū)。藥材特征南方大斑蝥呈長圓形，長約為15 22毫米，寬5 8毫米。頭及口器向下垂，有較大的復(fù)眼及觸角各一對，觸角多已脫落。背部具革質(zhì)鞘翅1對，黑色，有3條黃色或棕黃色的橫紋；鞘翅下面有棕褐色薄膜狀透明的內(nèi)翅2片。胸腹部烏黑色，胸部有足 3對。有特殊的臭氣。黃色小斑蝥體型較小，長1 1. 5cm，是一種有特殊臭氣的昆蟲。化學成分南方大斑蝥主含斑蝥素(Caantharidin)1 1. 2%。此外，尚含脂肪油12%、樹脂、蟻酸、色素等。黃黑小斑蝥含斑蝥素0.97 1.3%(2)市場供應(yīng)斑蝥對農(nóng)作物和蔬菜來說是一種害蟲，它往往把寄主植物的花朵花蕾全部吃完后又轉(zhuǎn)移到其他植株為害，造成嚴重減產(chǎn)。
近年來，農(nóng)民對斑蝥防治加強，目前農(nóng)作物上使用大量殺蟲藥劑，斑蝥數(shù)量銳減， 價格不斷上漲，市場仍供不應(yīng)求。據(jù)商家反映，近二三年里，年上市量正以20%以上向下遞減，故使市場上的銷勢年比年看好，價一年上一個新的臺階。斑蝥各地有產(chǎn)，是近年來廣西市場上的走銷品種。(3)早期應(yīng)用情況①發(fā)現(xiàn)19世紀采集斑蝥的情況古希臘時期，醫(yī)學家希波克拉底早在記載西班牙蒼蠅的藥效，而斑蝥的翅亦會用作研制消退水泡的膏布，并用作抗刺激藥。在古代中國，曾出現(xiàn)世上首個有記錄的臭彈(stinkbomb)，就是以這些斑蝥昆蟲類，混合砒霜、附子和人類的糞便而成。在桑特利亞(Santeria)，這些斑蝥則會用作制香。②最初藥用而斑蝥更早已是世界知名的春藥，羅馬帝國開國君主屋大維的妻子莉薇規(guī)，會將斑蝥混入賓客的食物當中，引誘賓客輕薄自己，其后再以此勒索。據(jù)記載，神圣羅馬皇帝亨利四世(1050 1106)亦因曾服用斑蝥而有損健康。1572年，法國外科學醫(yī)生巴雷 (AmbroisePare)曾記錄了一位男子服用一定份量的蕁麻(nettle)和斑蝥后，出現(xiàn)一種最可怕的淫亂癥。670年代，法國黑魔法師La Voisin會混和烘乾的鼴鼠(moles)和蝙蝠的血液制成，滲入路易十四的食物，以維持路易十四對他的情婦蒙提斯斑夫人(Fran&ccedil ； oise-Athena&iuml ；s,marquis de Montespan)的需索。18世紀斑蝥昆蟲在歐洲流行，在法國稱之pastillesRichelieu，薩德侯爵更被指在1772年，給妓女服用大茴香(anise)味的香碇和西班牙蒼蠅，強行與妓女群交及雞奸她們，薩德侯爵因此被判處死，但及后上訴得到緩刑。③弊端除了用于畜牧業(yè)和供注冊醫(yī)護人員治療疣外，美國法例禁止使用斑蝥。一些以郵購或網(wǎng)路售賣催情藥，以西班牙蒼蠅的名稱作招徠，但不少都是由卡宴辣椒粉 (cayennepepper)制成的膠囊，有時則混以人參、巨藻(kelp)、姜、崩大碗。在德國有一種產(chǎn)品名為《Spanische Fliege (西班牙蒼蠅)》，只是順勢療法的藥物，有效成份極低，一般服用風險不大。而一種產(chǎn)自北非的果醬《Dawamesk》，除大麻制劑(Hashish)、杏仁漿、開心果、砂糖、橙或羅望子皮、丁香外，有時亦會加入西班牙蒼蠅。在摩洛哥以及其他北非地方，其中一種名為《Rasel hanout))的香料，成份亦曾包括斑蝥，不過摩洛哥已在1990年代禁售。(4)物種特征斑蝥為芫青科昆蟲的一種小昆蟲，和螞蚱、蝗蟲一樣，是一種危害農(nóng)作物的害蟲， 斑蝥分兩個品系，分南方大斑蝥和北方黃黑小斑蝥，兩者體長雖有長短之分。但體貌基本一致，體被黑毛，頭呈圓三角形，有粗密刺點，復(fù)眼大，略呈腎形，觸角一對，前胸長稍大于寬，鞘翅基部各有二個大黃斑，翅中前后各有一黃色波紋狀橫帶。翅面黑色部分刻點密集，黃色部分刻點甚粗，鞘翅下面有2片薄膜狀透明的內(nèi)翅，胸部突起，足3 對。(5)應(yīng)用與配伍①用于癥積，經(jīng)閉等。本品豐散而入血分，能破血瘀，消癥散結(jié)，通經(jīng)。治經(jīng)閉不適《濟陰綱目》以本品配桃仁、大黃用之。近代用治多種癌腫，尤以肝癌為優(yōu)，可以斑蝥1 3 只放入雞蛋內(nèi)煮食，若以斑螯素片內(nèi)服更佳，(每次0. 25 0. 5mg)能使癥狀改善，部分病例瘤體縮小。②用于癰疽惡瘡，頑癬，等。本品為辛散有毒之品，能以毒攻毒，消腫散結(jié)。治癰疽腫硬不破，《仁齋直指方》用本品研末，和蒜搗膏貼之，可攻毒拔膿；治頑癬，《外臺》以本品微炒研末，蜜調(diào)敷，近代有以本品配甘遂研末，醋調(diào)外搽治牛皮癬者；治瘰疬瘺瘡，配白礬、白砒、青黛等，研末外摻，如《證治準繩》生肌干膿散。(6)藥用價值斑蝥喜群體棲息和取食，每年春季開始孵化，危害大豆、花生、茄子、棉花等作物的葉、芽及花等器官，分布甚廣，中國各地幾乎均有，在莊稼葉上產(chǎn)卵繁殖，它是一種害蟲。同時還是一種貴重的中藥材，明代大醫(yī)學家李時珍在《本草綱目》巨著中稱斑蝥性味辛、寒有大毒，有主治寒熱、鬼疰盅毒、鼠瘺、瘡疽、蝕死肌、破石癃、血積、傷人肌、治疥癬、 墮胎、治瘰疬、通利水道、療淋疾、傅惡瘡瘺爛、治疝、解癤毒，治狂犬病等功效。現(xiàn)代科學研究，斑蝥素對治療惡性腫瘤、皮膚病、白癜風及頑癬有特效，同時對斑禿還有毛發(fā)再生的功效，對病毒性肝炎亦有較好抑制作用，因其有毒，臨床一般提倡以外用為主，一個患者身患牛皮癬，花了幾萬元不能治愈，后用斑蝥和酒精泡制，小面積涂抹，然后擴大外用，藥到病除。上述屬民間流傳小偏方，因人而異，還是謹遵醫(yī)囑。(7)藥理研究①藥理斑蝥的現(xiàn)代藥理研究人類用斑蝥治療疾病已有2000多年的歷史，斑蝥為芫青科昆蟲南方大斑蝥或黃黑小斑蝥的干燥體?！赌窘?jīng)》中稱其昧辛，熱、有大毒，歸肝、胃。腎大腸和小腸經(jīng)，具有攻毒蝕瘡，逐瘀散結(jié)的功效。近年來對斑蝥的研究主要集中于對其有效成分斑蝥素抗癌機制的探討、衍生物的研制和新劑型的開發(fā)方面，相繼合成了多種斑蝥素衍生物，如斑蝥酸鈉、羥基斑蝥胺、甲基斑蝥胺、去甲斑蝥素等…?，F(xiàn)代臨床研究證實斑蝥在治療一些疑難雜癥方面，具有獨特的療效，如治療風濕痛、神經(jīng)痛、梅核氣、斑禿、乳腺增生、鼻炎、傳染性疣、肝炎、癌腫等。利用斑蝥及其衍生物制成的一些療效顯著的中成藥、化學藥、 生化藥等相繼問世，如鵝掌風藥水、治癬藥用紅膏、治癌藥斑蝥素及斑蝥素片、斑蝥素注射液、去甲斑蝥素片、斑蝥酸鈉片、復(fù)方斑蝥酸鈉片、斑蝥素乳膏等”?，F(xiàn)就其現(xiàn)代藥理研究和臨床研究的近況作一綜述。②化學成分化學成分的研究20世紀70年代人們將斑蝥粉碎，經(jīng)濃鹽酸酸化、丙酮提取、濃縮、 重結(jié)晶，得到了斑蝥的藥用成分斑蝥素。而后又相繼合成了多種斑蝥素衍生物，去甲斑蝥素和斑蝥酸鈉等。其中去甲斑蝥素便是由呋喃及順丁烯二酸酐通過Diles Aider反應(yīng)經(jīng)催化加氫合成制得。而斑蝥酸鈉是斑蝥素經(jīng)過氫氧化鈉水解生成。目前我國正在研究開發(fā)的新型鉬類抗癌藥物斑鉬是斑蝥素衍生物與鉬配合而成的一類化合物。最近又有報道，周氏”’等選擇有機磷基團對斑蝥素的結(jié)構(gòu)骨架進行修飾改造，以外式雙環(huán)庚-5-烯_2，3- 二甲酸酐為原料，設(shè)計合成出了一系列含膦二肽的斑蝥素類似物。去甲斑蝥素(NCTD) =NcTD 是斑蝥素的衍生物，是從斑蝥中提取斑蟄素并經(jīng)人工合成的一種新型低毒的抗癌藥物，由呋喃與馬來酸酐按iels Alder’加成反應(yīng)后催化氫化制得的人工全合成的一種新化合物，構(gòu)型與斑蝥素相似，唯一，2位無甲基。具有抗癌和升高白細胞數(shù)的作用，是當今國際上第1個有升高白細胞作用的抗癌藥物。③范氏研究范氏等研究發(fā)現(xiàn)，DNTD對GBC SD細胞的生長有明顯的抑制殺傷作用，而且隨濃度升高或時間延長作用增強，具有劑量一時間效應(yīng)關(guān)系。說明NcTD抑制膽囊癌GB-SD細胞增殖的作用機制可能與干擾細胞的有絲分裂，將細胞阻滯于生長周期的G2/M期，并抑制、 干擾細胞DNA合成、代謝有關(guān)。此后，范氏等又發(fā)現(xiàn)，NC’ rD能夠降低MVD，抑制腫瘤血管生成，可通過誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，或通過抑制細胞PcNA表達而抑制腫瘤細胞增殖，從而遏制腫瘤生長。安氏等采用MTT法、形態(tài)學觀察、DNA凝膠電泳、乳酸脫氫酶(LDH)檢測及免疫印記法(westemblot)，研究去甲斑蝥素通過半胱氨酸天冬氨酸酶(caspasc)途徑誘導(dǎo)人宮頸癌細胞(Hela)凋亡的機制發(fā)現(xiàn)，去甲斑蝥素能顯著誘導(dǎo)Hela細胞發(fā)生凋亡。④趙氏研究趙氏等研究表明，去甲斑蝥素對體外人肝癌細胞SMM-7721的生長有抑制作用。李氏等報道，去甲斑蝥素微球介入治療能夠延長肝癌大鼠的生存期；其介入治療肝癌的機制與抑制Ki-67、6c-2其因表達，上調(diào)caspase-3表達，從而抑制肝癌細胞增殖和促進細胞凋亡有關(guān)。劉氏等研究發(fā)現(xiàn)，NcTD具有誘導(dǎo)人早幼粒白血病細胞株HL60細胞凋亡的作用。此外，NCTD能刺激骨髓引起白細胞數(shù)升高。誤服斑蝥中毒的病例，幾乎白細胞數(shù)全部升高，在斑蝥素的動物實驗中，骨髓檢查可見白細胞增生活躍斑蝥酸鈉斑蝥酸鈉是斑蝥素與氫氧化鈉共熱時水解生成。斑蝥酸鈉不僅保持了斑蝥素特有的抗癌活性，且不良反應(yīng)比斑蝥素小。⑤研究現(xiàn)代研究中，本品含有斑蝥素、單萜烯類脂肪、樹脂、蟻酸及色素等成份，但抗癌活性成份為斑蝥素(亦稱芫青素)。近十余年來，國內(nèi)已經(jīng)合成的各種斑蝥素衍生物達100余種，主要有斑蝥酸納、甲基斑蝥胺、丙烯基斑蝥胺、羥基斑蝥胺等。實驗研究表明，本品的水醇或丙酮提取物，體外試驗結(jié)果證明能抑制Hela細胞和人體食道癌、賁門癌、胃癌、肝癌、 肺癌、乳腺癌等細胞的代謝。斑蝥素對小鼠腹水型肝癌和網(wǎng)織細胞肉瘤ARS均有一定的抑制作用，并能引起肝癌細胞明顯萎縮、退化、胞漿多空泡等形態(tài)學改變，其作用機制與抑制癌細胞的蛋白質(zhì)合成，影響RNA和DNA的合成有關(guān)。而斑蝥素的衍生物均有與斑蝥素類似的抗腫瘤作用，以羥基斑蝥胺的化療指數(shù)較高及毒性最小。斑蝥素納的抗腫瘤譜比較廣，除能抑制小鼠腹水肝癌和ARS外，還能抑制小鼠肉瘤S180、宮頸癌U14、艾氏腹水癌實體型等腫瘤株，體外亦能抑制Hela細胞株、人食管鱗癌CaEsl7細胞株及人肝癌BES7402細胞株；同時能使小鼠外周白細胞明顯增多，對紅細胞數(shù)目沒有影響，發(fā)現(xiàn)此藥對骨髓造血干細胞有一定的刺激作用，在抗癌藥物中，這種具有升高白細胞的藥物尚不多見。(8)醫(yī)學藥理作用化學成分含斑蝥素(斑蝥酸酐cantharidirOl^ 2%；尚含脂肪12%、甲酸、 色素及樹脂等。另含F(xiàn)e、Al、Zn、Mn、P等微量元素。斑蝥素為抗癌有效成分。另報道尚含羥基斑蝥素，亦具抗癌活性。斑蝥素毒性大，其半合成品羥基斑蝥胺(hydroxylcantharamine) 的毒性只有斑蝥素的1/500，療效類似。尚有斑蝥酸鈉、甲基斑蝥胺等衍生物，目的均為減小毒性。另報道如在結(jié)構(gòu)中連接氨基酸如谷氨酸可增強對靶細胞的作用。理化鑒別粉末行微量升華，得柱形或棱形斑蝥素結(jié)晶。①將升華物用石油醚洗2 3次，加硫酸2 3滴，微熱溶解，轉(zhuǎn)入試管內(nèi)，小火加熱至發(fā)生氣泡，稍冷，加二甲氨基苯甲醛硫酸溶液1滴，顯櫻紅色或紫紅色。②將升華物加硫酸2 3滴，微熱溶解，轉(zhuǎn)入試管內(nèi)，加間苯二酚粉末少許，小火加熱至沸，溶液顯紅色，在紫外燈下觀察顯綠色熒光。③將升華物滴加氫氧化鋇水溶液封藏后鏡檢，可見斑蝥酸鋇鹽的針晶束。④薄層層析(i)斑蝥素(ii)斑蝥(對照藥材)(iii)斑蝥(商品)樣品液取斑蝥粉末0. 5g，加氯仿15ml，振搖提取15分鐘，室溫放置過夜，過濾，濾液作為供試液。對照品液取斑蝥素對照品lmg，加氯仿1ml，作為對照品液。展開硅膠薄層板，以氯仿丙酮(97 3)為展開劑，展開。顯色噴以0. 04%溴甲酚綠乙醇試液，110°C加熱10分鐘，供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯1個黃色斑點。含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以甲基硅橡膠(SE—30)為固定液，涂布濃度為3.5% ；柱溫為175°C 士 10°C。理論板數(shù)按斑蝥素峰計算應(yīng)不低于2600。對照品溶液的制備取斑蝥素對照品適量，精密稱定，加氯仿制成每Iml含Img的溶液，即得(必要時可稀釋)。供試品溶液的制備取本品粗粉約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氯仿30ml， 振搖15分鐘，置6小時，濾過，濾液置50ml量瓶中，用氯仿洗滌殘渣與濾紙，洗液濾人同一量瓶中，加氯仿至刻度，勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各2 μ 1，注人氣相色譜儀，計算， 即得。本品含斑蝥素(CltlH12O4)不得少于0.35%。藥理作用①斑蝥對多種實驗動物移植性腫瘤有明顯抑制作用；斑蝥素對小鼠肉瘤-ISOHela細胞，腹水型網(wǎng)狀細胞瘤和腹水型肝癌有抑制作用，因斑蝥素干擾癌細胞中蛋白質(zhì)和核酸的合成。②水浸劑(1 4)試管內(nèi)對堇色毛癬菌等皮膚致病真菌有抑制作用。③斑蝥有強烈刺激性，但對組織的穿透力較小，故刺激皮膚生成的泡很快痊愈，不留疤痕；口服可引起胃腸炎和腎炎。此外尚有抗病毒，升高白細胞，促進雄性激素樣作用，有用于治療乙肝。(9)臨床應(yīng)用①臨床臨床運用中，斑蝥素及其衍生物對肝癌確有較好療效。據(jù)統(tǒng)計以斑蝥素制劑為主治療原發(fā)性肝癌中，有效率60%左右，可改善肝癌患者的臨床癥狀，延長生存期，部份病例腫塊縮小，白細胞多不下降，治療后1年生存率為12. %。也有用甲基斑蝥胺治療II、III 期原發(fā)性肝癌時，半年以上生存率明顯高于5-Fu組，若將甲基斑蝥胺的單次用量增大5 10倍，半年以上生存率可得到明顯提高(由18. 9%升至57. )，且未見明顯毒副作用。
②民間偏方民間早就有用斑蝥治療肝癌的偏方技法(i)斑蝥蒸雞蛋法，鮮雞蛋一個，斑蝥2 3只。在蛋殼上開一小孔，將斑蝥去頭足翅后，放入蛋中，用紙封口，隔水蒸熟，去斑蝥，吃雞蛋，每日或隔日1次，連服5天停5天，3 個月為一療程。(ii)斑蝥炒糯米，斑蝥100克，糯米100克，陳皮100克。斑蝥合糯米入鍋微火炒黃，去斑蝥，將炒黃的糯米與陳皮混合為未，每次服5 6克，每天3次。以上均為前人的經(jīng)驗，不得不承認，均有一定療效，但書本的東西和聽來的經(jīng)驗， 一定要經(jīng)自己臨床證實才可放心使用。曾有一年的臨床試驗，既使用了斑蝥生品，又使用了斑蝥成藥，沒發(fā)現(xiàn)明顯有效病例，此后已有6年沒再使用。據(jù)了解，曾喧囂一時的斑蝥及斑蝥制劑，由于有效率有限，臨床醫(yī)生已很少使用。因此，不必一味追求“民間偏方”。醫(yī)生選用什么藥，不是憑道聽途說，而按自己的臨床體驗決定。③抗癌機制其抗癌機制主要包括以下三個方面①減少癌細胞DNA、RNA的前體物攝入，抑制核酸的代謝；②減少癌細胞對氨基酸的攝取，抑制蛋白質(zhì)的合成；③影響線粒體膜的通透性，增強氧化磷酸化的偶聯(lián)過程，從而影響癌細胞的能量代謝平衡，控制和緩解癌變發(fā)生。陳氏等報道，斑蝥酸鈉注射液配合放療治療中晚期惡性腫瘤(肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、食道癌等)，能提高治療效果，降低放療不良反應(yīng)，改善患者生活質(zhì)量，具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)雙重作用。趙氏等也報道(中國社區(qū)醫(yī)師2007 第16期(綜臺版)(第9卷總第169 1)， 用胃癌細胞原代培養(yǎng)藥敏檢測，結(jié)果顯示斑蝥酸鈉的敏感率高于5-Fu、DNR、DDP、ADM等常規(guī)化療藥物。梁氏等研究結(jié)果也證實，斑蝥酸鈉對人胃癌BGC823細胞生長有抑制作用，可誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡。陳氏等報道，斑蝥酸鈉聯(lián)合肝動脈化療栓塞治療中晚期肝癌，能明顯對化療栓塞起到增效作用，同時可減輕化療藥對白細胞抑制作用。桂氏等報道，斑蝥酸鈉在體外作用于人肝癌細胞系Bel-7402，不僅可誘導(dǎo)肝癌細胞的凋亡，還能抑制肝癌細胞的生長增殖。④升白作用此外，斑蝥酸鈉亦有升白作用，能減輕放、化療對骨髓造血系統(tǒng)的毒性，改善患者一般狀況。梁氏等報道，斑蝥酸鈉升高白細胞的機制主要是縮短白細胞的骨髓成熟、釋放時間，促進骨髓造血干細胞(cFu s)向粒一單核系祖細胞(cFu GM)分化，從而導(dǎo)致白細胞升高。甲基斑蝥胺甲基斑蝥胺系斑蝥素的衍生物，對動物實體瘤作用優(yōu)于斑蝥素，毒性則較低，對肝臟毒性小，但對腎臟仍有一定毒性。對肝癌細胞的核酸和蛋白質(zhì)合成有干擾作用，且能增強機體巨噬細胞的吞噬作用，對腫瘤細胞有抑制和殺傷作用。目前，對甲基斑蝥胺的報道較少。綜上所述，斑蝥的主要成分斑蝥素及其衍生物對多種腫瘤，尤其是原發(fā)性肝癌有肯定的治療效果。誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞蛋白質(zhì)合成以及升高白細胞數(shù)，提高免疫力可能是其抗腫瘤的機制。但其更詳細的抗癌機制尚待深入研究。對斑蝥類藥物的研究方面，應(yīng)該是開發(fā)斑蝥素的新衍生物，既要發(fā)揮其抗腫瘤作用，又能最大可能的降低毒性。目前我國正在研究開發(fā)的新型抗癌藥物斑鉬，是斑蝥素衍生物與鉬配合而成的一類化合物，期望能夠接近這個目標。
(10)現(xiàn)代研究①化學成分主要含有斑蝥素(Canthavidin)O. 060% 1. 825 %，并含羥基斑蝥素(Hydroxycan-thavidin)，其含量為斑蝥素含量的1/2 1/3。尚含脂肪12%及樹脂、蟻
酸、色素等。南方大斑蝥除去頭、足和翅的蟲體含磷23. 785mg/g、鎂7. 114mg/g、鈣1. 691mg/g, 并含有鐵、鋁、鋅、鉻、錳、鎘、鍶和銅等微量元素。全蟲及頭、足、翅等部分亦含有一定量的上述元素和鉛元素。人工合成的斑蝥素的衍生物有斑蝥酸鈉、羥基斑蝥胺、甲基斑蝥胺、去甲斑蝥、丙烯基斑蝥胺等。②藥理作用1. 1斑蝥素(cantharidin)研究表明斑蝥素是斑蝥抗癌的有效成分，也是其毒性的主要成分。斑蝥素為無色無味發(fā)亮結(jié)晶，是斑蝥酸的內(nèi)酐，其化學成分為單萜烯類，結(jié)構(gòu)為外型-1，2-順-二甲基-6-氧橋六氫化鄰苯二甲酸酐。此外，斑蝥蟲體內(nèi)還含有脂肪、蠟質(zhì)、乙酸、色素和多種微量元素等物質(zhì)。斑蝥蟲體內(nèi)含有17種微量元素，總量為10. 53mg ·_、 其中與抗癌作用有關(guān)的元素Mn和Mg的含量均較高，分別為0. 41和27. 7 μ g ·、與此相反， 致癌元素Ni、Cr，As、Cd和Be等極低，其他有害元素Hg、Pb、Sn含量也很低。因此，斑蝥能治療癌癥的原因，可能與其所含Mn、Mg元素的量較高有關(guān)。傳統(tǒng)的斑蝥炮制方法是凈選后去除頭、足、翅再入藥，這是非常重要的。藥化研究表明，去除頭、足和翅的斑蝥與未去者相比，其抗癌成分Mg、Zn、Cu等元素的含量均有所提高，因而抗癌作用增強。臨床應(yīng)用研究業(yè)證實。同時，對缺乏Zn、Mg、Cu而致癌的患者，使用該種斑蝥還有扶正抗癌的雙重作用。斑蝥素有抗癌作用，尤其對小鼠腹水型肝癌及網(wǎng)狀細胞肉瘤有抑制作用，它能抑制癌細胞蛋白質(zhì)的合成，從而抑制其生長分化；斑蝥素還有免疫增強作用、抗病毒、抗菌作用以及促雌激素樣作用。此外，斑蝥素可刺激人和動物皮膚發(fā)紅起泡。斑蝥素能引起小鼠腹腔積液肝癌細胞明顯萎縮、退化，胞質(zhì)多空泡等形態(tài)學改變。 其抗癌的機制主要是抑制癌細胞的蛋白質(zhì)合成，降低癌毒激素水平及影響癌細胞的核酸代謝。然而，斑蝥素毒性強烈。內(nèi)服斑蝥可引起胃腸炎癥，黏膜壞死，可使腎小球上皮細胞產(chǎn)生嚴重濁腫白細胞升高，出現(xiàn)蛋白尿、管型尿、血尿及血清非蛋白氮升高。中毒的動物還可發(fā)生肝細胞腫脹，肝淋巴細胞纖維性損傷和肝細胞壞死，心肌腫脹、出血，肺淤血，并可引起毛細血管和神經(jīng)系統(tǒng)的損害。其中毒量為1.(^，致死量為3.(^。有鑒于此，人們合成了一系列毒性較低的斑蝥素衍生物以滿足臨床需要。斑蝥素的各種衍生物能刺激骨髓而有升高白細胞的作用。斑蝥丹灸對家兔實驗踝關(guān)節(jié)炎有明顯消腫作用。臨床研究(抗腫瘤方面)，斑蝥素對胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌效果好。而羥基斑蝥胺毒性僅為斑蝥素的1/500，對原發(fā)性肝癌有一定療效，對賁門癌、胃癌及腸癌等略有療效。1. 2去甲斑蝥素(norcantharidin，簡稱NCTD) NCTD是由呋喃與馬來酐按 Diels-Alder加成反應(yīng)后催化氫化制得的人工全合成的一種新化合物。孫銘等以聚乳酸聚乙醇酸共聚物(簡稱PLGA)作為基質(zhì)材料，采用超聲乳化/溶劑揮發(fā)法制備PLGA包載NCTD 的納米級微粒(簡稱NP)，觀察微粒形態(tài)、粒徑分布、載藥率及體外釋放曲線，進行體內(nèi)抑瘤實驗、動物急性毒性等試驗表明，PLGA納米粒子可以作為抗腫瘤藥物NCTD的有效載體， 并可成功制備其靜脈注射劑型，發(fā)揮藥物更佳的抗腫瘤作用。NCTD在體內(nèi)外對人卵巢癌細胞株3A0和AO均有較強的抑制作用，其抑制作用呈劑量和時間依賴性。梁福佑等用大鼠單克隆抗體3A5與NCTD制備偶聯(lián)物，實驗表明該偶聯(lián)物在腫瘤的導(dǎo)向治療中有較好的療效。 關(guān)于NCTD抗癌作用機制的報道已經(jīng)有很多。NCTD抗腫瘤細胞增殖的機制可能與其將腫瘤細胞特異阻抑于G2+M期有關(guān)。誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡可能是NCTD抗腫瘤作用的分子機制之一。 孫震曉等的實驗表明，NCM能夠誘導(dǎo)人紅白血病K562細胞凋亡，凋亡大部分發(fā)生在細胞周期的M期，也有少量發(fā)生在間期，是多點啟動的，另外，NCTD可以誘導(dǎo)人肝癌細胞發(fā)生凋亡， 該凋亡過程與癌基因蛋白bcl-2表達下調(diào)相關(guān)?？烧T導(dǎo)人早幼粒白血病細胞株HLbO細胞凋亡，抑制瘤細胞分裂生長，且有明顯的時間和劑量效應(yīng)。黃雪強等報道，一定劑量范圍內(nèi)的NCM可在直接殺傷作用較小的情況下明顯誘導(dǎo)人T淋巴細胞白血病細胞株(6T-CEM)細胞凋亡，不會因細胞壞死而引起炎癥反應(yīng)，這對于NCM應(yīng)用于臨床將有十分重要意義。戴書靜等報道，NCM有良好的抗腫瘤效應(yīng)，其作用機制可能與其能增強核轉(zhuǎn)錄因子NF-γ B的抑制分子I κΒ α的表達有關(guān)。1.3甲基斑蝥胺(methylcantharidimide)甲基斑蝥胺系斑蝥素的衍生物，對動物實體瘤作用優(yōu)于斑蝥素，毒性則較低，對肝臟毒性小，但對腎臟仍有一定毒性。對肝癌細胞的核酸和蛋白質(zhì)合成有干擾作用，且能增強機體巨噬細胞的吞噬作用，對腫瘤細胞有抑制和殺傷作用，其抗癌機制有待進一步深入研究。臨床研究(抗腫瘤方面)，甲基斑蝥胺對原發(fā)性肝癌有一定療效，能使患者癥狀減輕，體征改善。以下是具有抗腫瘤作用的常見斑蝥制劑。表1-1、斑蝥制劑一覽表
權(quán)利要求
1.一種斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥酸鈉的制備方法包括如下步驟將斑蝥素加入氫氧化鈉水溶液中，加熱溶解后，再加活性炭回流脫色0. 5 1小時，熱濾，水洗，減壓濃縮，加入乙醇，冷卻至室溫，析出固體烘干得到白色粉末，即為斑蝥酸鈉；所述的斑蝥素與氫氧化鈉的當量比為12 3;所述的斑蝥素與乙醇的重量比為1 3 10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥素與氫氧化鈉的當量比為1 2 2. 2.
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥素與乙醇的重量比1 3 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥酸鈉的制備方法包括如下步驟將斑蝥素20克加入500毫升三口瓶中，加入220毫升IN氫氧化鈉，加熱回流反應(yīng)lh， 加活性炭1克脫色回流30分鐘，熱濾，水洗兩次，減壓濃縮至20 30毫升，加入80毫升乙醇，冷卻至室溫，攪拌30分鐘，過濾，用乙醇洗滌2 3次，60°C真空干燥得白色粉末23. 4g。 收率89%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥酸鈉的制備方法包括如下步驟將斑蝥素20克加入500毫升三口瓶中，加入220毫升IN氫氧化鈉，加熱回流反應(yīng)lh， 加活性炭1克脫色回流1分鐘，熱濾，水洗兩次，減壓濃縮至20 30毫升，加入80毫升乙醇，冷卻至室溫，攪拌30分鐘，過濾，用乙醇洗滌2 3次，烘干得到白色粉末23. Sg,收率 88. 7%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥素是通過常規(guī)制備方法，從斑蝥蟲中提取并結(jié)晶得到斑蝥素精品。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥素精品的常規(guī)制備方法包括如下步驟將斑蝥蟲粉碎成40 60目粗粉，然后用3倍量丙酮30 40°C保溫12小時，保溫期間每隔1小時攪拌5分鐘；過濾，收取提取液，再重復(fù)以上操作兩次，合并提取液，加壓濃縮回收提取中的丙酮，得到深色濃縮油狀物，油狀物中有大量結(jié)晶析出，加石油醚10倍量，洗滌，過濾，產(chǎn)物再用石油醚洗滌兩次，收集結(jié)晶，即得斑蝥素粗品；粗品用34倍量丙酮結(jié)晶得到精品。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的斑蝥酸鈉的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥素是直接從市場購買的斑蝥素。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品和保健品等技術(shù)領(lǐng)域，公開了抗腫瘤藥物斑蝥酸鈉的高效制備方法。將斑蝥素精品加入氫氧化鈉水溶液中，加熱溶解后，再加活性炭回流脫色0.5～1小時，熱濾，水洗，減壓濃縮，加入乙醇，冷卻至室溫，析出固體烘干得到白色粉末。其中斑蝥素精品與氫氧化鈉的當量比為1∶2～3，斑蝥素與乙醇的重量比為1∶3～10。斑蝥酸鈉合成和活性碳脫色精制同步完成，并用乙醇-水體系進行結(jié)晶。本發(fā)明提供了斑蝥酸鈉合成和活性碳脫色精制同步進行的方法，制備工藝更簡單，縮短了反應(yīng)周期，反應(yīng)過程中省去了大量的丙酮和異丙醇的應(yīng)用，降低了生產(chǎn)成本，減小對環(huán)境的污染，質(zhì)量控制更簡便，提高了生產(chǎn)效率，便于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/34GK102276619SQ20111016796
公開日2011年12月14日 申請日期2011年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月21日
發(fā)明者張濤濤, 張芝庭 申請人:貴州金橋藥業(yè)有限公司