專利名稱：一種車前子提取物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種車前子提取物及其應(yīng)用，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
當(dāng)前，糖尿病已成為嚴(yán)重危害現(xiàn)代人類健康的三大慢性疾病之一。糖尿病主要表現(xiàn)為飯量大，飲水多，排尿多，體重減少的“三多一少”的癥狀，同時(shí)隨著得病時(shí)間的延長(zhǎng)，可導(dǎo)致多種組織、器官的并發(fā)癥。目前用于治療糖尿病的藥物主要有磺脲類、格列奈類、雙胍類、噻唑烷二酮類化合物及α-糖苷酶抑制劑等。這些藥物對(duì)糖尿病具有一定的治療作用， 但同時(shí)也伴隨著許多副作用，如消化道的不良反應(yīng)及一定的肝腎毒性等。同時(shí)由于糖尿病是體內(nèi)幾個(gè)系統(tǒng)代謝發(fā)生紊亂的結(jié)果，是多原因的慢性終身性疾病，在長(zhǎng)期治療的過(guò)程中患者和政府付出了經(jīng)濟(jì)和精神上的巨大代價(jià)，因此在中藥中尋找治療糖尿病的新方法具有較大的社會(huì)效益。車前子為常用中藥，《中國(guó)藥典》QOlO版)以車前科車前屬植物車前Plantago asiatica L.或平車前Plantago depressa Willd.的干燥成熟種子作為車前子的基源， 具有清熱利尿，滲濕通淋，明目祛痰等功效，傳統(tǒng)上用于治療急性腎小球腎炎、咳喘和黃疸性肝炎等。車前子也可配伍其他中藥使用，例如復(fù)方龍膽瀉肝湯中配伍車前子起到清熱利濕的作用。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)車前科植物平車前的變種毛平車前(P. cbpressa var. montata Kitag.)的醇提取物對(duì)四氧嘧啶所致糖尿病小鼠具有一定降血糖調(diào)血脂的作用，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，主要為熊果酸、齊墩果酸、芹菜素、木犀草素、梓醇、martynoside、高車前苷、高車前素等。另有研究者發(fā)現(xiàn)，車前(P. asiatica L.)的甲醇提取物對(duì)糖基化終末產(chǎn)物的形成也有抑制作用，顯示出其潛在的糖尿病治療作用，并提出該提取物中主要的糖基化抑制物是大車前苷(plantamajoside)。同時(shí)，歐車前(P. ovata)的籽殼具有通便、降低膽固醇、改善糖尿病患者的血糖水平，并已被開發(fā)成營(yíng)養(yǎng)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種車前子提取物及其應(yīng)用。所述的車前子提取物，是由車前子經(jīng)過(guò)2 6倍體積的體積分?jǐn)?shù)為60 90%的乙醇水溶液回流提取2 6次得到，含有麥角留苷、異麥角留苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素 A和車前素B。進(jìn)一步，所述的車前子提取物，是由車前子經(jīng)過(guò)3 5倍體積的體積分?jǐn)?shù)為70 80%的乙醇水溶液回流提取3 5次得到。更進(jìn)一步，所述的車前子提取物，是由車前子經(jīng)過(guò)4倍體積的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液回流提取4次得到。所述的車前子推薦為車前科植物車前(Plantago asiatica L.)和/或平車前 (Plantago depressa ffilld.)的干燥成熟種子。所述的車前子推薦粉碎成直徑小于或等于6mm的顆粒。
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所述的車前子提取物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應(yīng)用。所述的車前子提取物與藥學(xué)上可接受的藥物載體組成的組合物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應(yīng)用。所述的糖尿病為I型和/或II型糖尿病。所述的藥物制劑形式可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴劑、貼劑；優(yōu)選口服劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、膏劑等。所述的口服劑型可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色齊U、調(diào)味劑和濕潤(rùn)劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適宜的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑；適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉；適宜的潤(rùn)滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤(rùn)劑包括十二烷基硫酸鈉。本發(fā)明利用HepG2細(xì)胞進(jìn)行體外葡萄糖消耗試驗(yàn)，同時(shí)利用四氧嘧啶導(dǎo)致的I型糖尿病小鼠，鏈脲佐菌素導(dǎo)致的I型糖尿病小鼠，鏈脲佐菌素加高脂飼料導(dǎo)致的II型糖尿病大鼠進(jìn)行體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明提供的車前子提取物在體內(nèi)試驗(yàn)中可促進(jìn)葡萄糖的消耗，且對(duì)細(xì)胞的毒性低，同時(shí)在體外試驗(yàn)中可明顯提高血清胰島素水平，降低空腹血糖水平，顯示出良好的治療糖尿病(I型和II型)的藥用價(jià)值。


圖1為實(shí)施例1得到的車前子提取物在正離子模式下得到的指紋圖譜。圖2為實(shí)施例1得到的車前子提取物在負(fù)離子模式下得到的指紋圖譜。圖3為實(shí)施例1得到的車前子提取物在正離子模式下得到的質(zhì)譜圖。圖4為實(shí)施例1得到的車前子提取物在負(fù)離子模式下得到的質(zhì)譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)、完整的說(shuō)明。實(shí)施例1去除沙石及雜質(zhì)，將車前子粉碎為4mm的小顆粒，過(guò)篩，用4倍體積的75%乙醇回流提取4次，提取液過(guò)濾后回收溶劑至干，使用前用生理鹽水混懸。稱取車前子提取物樣品適量，用0.1% (V V)甲酸的水溶液與甲醇按體積比為 90 10混合的溶液溶解在容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，制成每ImL溶液含Ig樣品，并利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(UPLC-MQ進(jìn)行分析，分析條件如下色譜條件=Waters, Acquity UPLC BEH C18 (50 X 2. 1讓)色譜柱；流動(dòng)相A相為含 0. 1 % (V V)甲酸的水溶液，流動(dòng)相B相為甲醇；流速為0. 3min ；柱溫為40°C ；進(jìn)樣量為 2μ L ；檢測(cè)模式為正負(fù)離子全掃描監(jiān)測(cè)。質(zhì)譜條件采用電噴霧離子源，正離子全掃描檢測(cè)模式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集時(shí)，離子源溫度為120°C ；去溶劑溫度為300°C ；氮?dú)鉃槿ト軇┖湾F孔氣，流速分別為500L/h和50L/h ；毛細(xì)管電壓為2. 2千伏；錐孔電壓為23伏。負(fù)離子全掃描檢測(cè)模式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集時(shí)，離子源溫度為120°C ；去溶劑溫度為300°C ；氮?dú)鉃槿ト軇┖湾F孔氣，流速分別為500L/h和50L/h ； 毛細(xì)管電壓為2. 5千伏；錐孔電壓為32伏。圖1為得到的車前子提取物在正離子模式下得到的指紋圖譜，其中主要色譜峰鑒定為阿魏酸、車前素B、車前素A和麥角留苷，圖2為得到的車前子提取物在負(fù)離子模式下得到的指紋圖譜，其中主要色譜峰鑒定為京尼平苷酸、車前素A、麥角留苷和異麥角留苷；圖3 為得到的車前子提取物在正離子模式下得到的質(zhì)譜圖，圖4為得到的車前子提取物在負(fù)離子模式下得到的質(zhì)譜圖；結(jié)合圖1至圖4可見(jiàn)得到的車前子提取物中含有麥角留苷、異麥角甾苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素A和車前素B。實(shí)施例2將!fepG2細(xì)胞接種于96孔板，待細(xì)胞長(zhǎng)至60%融合，換上含0. 2%牛血清白蛋白 (BSA)的不同濃度車前子提取物的培養(yǎng)液，溫育24h后，檢測(cè)培液中的葡萄糖殘量，按下式計(jì)算24h各孔細(xì)胞的葡萄糖消耗率。葡萄糖消耗率=(實(shí)驗(yàn)孔Oh實(shí)測(cè)值-實(shí)驗(yàn)孔24h實(shí)測(cè)值)/ (對(duì)照孔Oh實(shí)測(cè)值-對(duì)照孔24h實(shí)測(cè)值)X 100%。表1車前子提取物對(duì)HepG2細(xì)胞糖代謝的促進(jìn)作用
權(quán)利要求
1.一種車前子提取物，其特征在于是由車前子經(jīng)過(guò)2 6倍體積的體積分?jǐn)?shù)為60 90%的乙醇水溶液回流提取2 6次得到，含有麥角留苷、異麥角留苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素A和車前素B。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的車前子提取物，其特征在于是由車前子經(jīng)過(guò)3 5倍體積的體積分?jǐn)?shù)為70 80%的乙醇水溶液回流提取3 5次得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的車前子提取物，其特征在于是由車前子經(jīng)過(guò)4倍體積的體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液回流提取4次得到。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的車前子提取物，其特征在于所述的車前子為車前科植物車前和/或平車前的干燥成熟種子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的車前子提取物，其特征在于所述的車前子粉碎成直徑小于或等于6mm的顆粒。
6.權(quán)利要求1所述的車前子提取物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1所述的車前子提取物與藥學(xué)上可接受的藥物載體組成的組合物在制備治療糖尿病藥物制劑中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于所述的糖尿病為I型和/或II型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種車前子提取物及其應(yīng)用。所述的車前子提取物，是由車前子經(jīng)過(guò)2～6倍體積的體積分?jǐn)?shù)為60～90％的乙醇水溶液回流提取2～6次得到，含有麥角甾苷、異麥角甾苷、京尼平苷酸、阿魏酸、車前素A和車前素B。本發(fā)明提供的車前子提取物在體內(nèi)試驗(yàn)中可促進(jìn)葡萄糖的消耗，且對(duì)細(xì)胞的毒性低，同時(shí)在體外試驗(yàn)中可明顯提高血清胰島素水平，降低空腹血糖水平，顯示出良好的治療糖尿病的藥用價(jià)值，可單一或與藥學(xué)上可接受的藥物載體組成的組合物應(yīng)用于制備治療糖尿病藥物制劑中。
文檔編號(hào)A61K36/68GK102228517SQ20111017251
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者季光, 廖立平, 楊莉, 王崢濤, 祁萌, 耿放 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)