專(zhuān)利名稱(chēng)：抗葉酸藥物在制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于應(yīng)用基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，涉及抗葉酸藥物在制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)管畸形(neural tube defects，NTDs)是由于葉酸缺乏導(dǎo)致的一類(lèi)常見(jiàn)的、嚴(yán)重的出生缺陷疾病，在世界范圍內(nèi)，其發(fā)病率平均占到0.05^-0.2 ^而在中國(guó)，NTDs的發(fā)病率遠(yuǎn)高于上述比例，為0. 2% 0. 4%，是世界上已知的神經(jīng)管畸形高發(fā)國(guó)家。NTDs是胎兒、新生兒和嬰兒死亡的主要原因，又是導(dǎo)致兒童智力發(fā)育障礙、終身殘疾的主要因素， 不僅給國(guó)家經(jīng)濟(jì)造成很大負(fù)擔(dān)，也給家庭生活帶來(lái)痛苦不幸。建立合適的動(dòng)物模型有助于了解人類(lèi)NTDs的病因、發(fā)病機(jī)制和病理特點(diǎn)，對(duì)預(yù)防和篩選治療藥物具有重大意義。葉酸缺乏與NTDs關(guān)系的研究一直是該領(lǐng)域的研究焦點(diǎn)和熱點(diǎn)，目前已證明，孕婦體內(nèi)的葉酸缺乏是造成NTDs形成的重要危險(xiǎn)因素，補(bǔ)充0.4 4. Omg/d的葉酸能夠預(yù)防大約50% 70% NTDs的發(fā)生。但是，由于食物中的葉酸及動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)狀況較難控制，短時(shí)間的葉酸不足可以通過(guò)機(jī)體的代償作用，提高葉酸利用率來(lái)滿(mǎn)足機(jī)體的需要；母體還可以通過(guò)自身組織消融供給胎兒，所以通過(guò)食物建立葉酸直接缺乏的 NTDs動(dòng)物模型尚未見(jiàn)有成功報(bào)道?，F(xiàn)有NTDs動(dòng)物模型主要有以下幾種構(gòu)建方法1)物理因素誘發(fā)，通過(guò)妊娠期高溫、高糖構(gòu)建NTDs動(dòng)物模型；幻化學(xué)因素誘發(fā)，通過(guò)環(huán)磷酰胺、 維甲酸、丙戊酸等注射孕鼠，誘導(dǎo)胚胎神經(jīng)管發(fā)育畸形；3)基因敲除技術(shù)，利用基因敲除 Cbs、Mthfdl, Mthfr, NOG等誘發(fā)NTDs。上述方法所采用的動(dòng)物模型通常選用ICR、SWISS、 C57BL/6J、kunming、SELH/BC、Wistar等品系的小鼠和大鼠。然而，這些動(dòng)物模型的構(gòu)建均未能從影響葉酸及葉酸代謝角度思考，有的方法構(gòu)建的動(dòng)物模型具有破環(huán)基因組結(jié)構(gòu)的傾向，是否能夠很好地模擬出人類(lèi)NTDs的發(fā)病機(jī)制尚待商榷。葉酸缺乏對(duì)細(xì)胞和機(jī)體的影響，是通過(guò)葉酸的代謝及不同的代謝產(chǎn)物如四氫葉酸，一碳單位，單核苷酸，甲基化作用等實(shí)現(xiàn)的。葉酸在體內(nèi)經(jīng)過(guò)二氫葉酸還原酶作用后轉(zhuǎn)化為四氫葉酸，四氫葉酸是葉酸的活性形式，是一碳單位的運(yùn)載體。一碳單位一方面通過(guò) S-腺苷甲硫氨酸提供甲基，進(jìn)行體內(nèi)廣泛的甲基化反應(yīng)，包括DNA和組蛋白等甲基化，另一方面作為合成嘌呤和嘧啶的原料，影響單核苷酸的生物合成。單核苷酸除了作為DNA和RNA 合成原料以外，還參與體內(nèi)廣泛的生物學(xué)過(guò)程，涉及到幾乎所有的代謝和代謝調(diào)控。迄今為止，通過(guò)葉酸代謝障礙構(gòu)建神經(jīng)管畸形的動(dòng)物模型，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有相關(guān)報(bào)道。因此，迫切需要設(shè)計(jì)和建立新的思路來(lái)制備葉酸缺乏及代謝障礙的神經(jīng)管畸形小鼠模型，以便順利開(kāi)展疾病機(jī)制及防治方法的研究。通過(guò)對(duì)葉酸代謝途徑中關(guān)鍵酶二氫葉酸還原酶的特異抑制，可以模擬出葉酸缺乏和葉酸代謝障礙的生物效應(yīng)狀態(tài)。從化學(xué)結(jié)構(gòu)看，二氫葉酸還原酶抑制劑可分為經(jīng)典和非經(jīng)典兩大類(lèi)。經(jīng)典的二氫葉酸還原酶抑制劑均含有谷氨酸殘基結(jié)構(gòu)，需要經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜上還原葉酸載體蛋白的載運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞，然后在葉酸多聚谷氨酸合成酶的催化下多聚谷氨酸化，多聚谷氨酸形式增加了藥物分子在細(xì)胞內(nèi)的滯留時(shí)間，使細(xì)胞對(duì)藥物接觸時(shí)間延長(zhǎng)和細(xì)胞內(nèi)藥物濃度增加，同時(shí)加強(qiáng)與二氫葉酸還原酶的結(jié)合，從而加大其對(duì)二氫葉酸還原酶的抑制。最早作為二氫葉酸還原酶抑制劑使用的藥物氨基蝶呤(AMT)和氨甲喋呤(MTX)， 其化學(xué)結(jié)構(gòu)與葉酸相似，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制二氫葉酸還原酶，阻斷二氫葉酸還原成四氫葉酸， 從而使N5，N10-甲烯四氫葉酸減少，最終影響DNA、RNA、蛋白的生物合成；對(duì)AMT和MTX結(jié)構(gòu)進(jìn)一步進(jìn)行修飾、設(shè)計(jì)篩選而來(lái)的伊打曲沙(EDX)作為蝶呤類(lèi)似物，可以在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行更廣泛的多谷氨酸化，對(duì)二氫葉酸還原酶有強(qiáng)效的抑制作用，對(duì)胸苷合成酶亦有抑制作用； PDX是EDX的延續(xù)，較EDX更易被還原葉酸載體蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)；TNP-351作為一種新結(jié)構(gòu)類(lèi)型的二氫葉酸還原酶抑制劑，利用2，4-二氨基吡咯并嘧啶代替蝶啶結(jié)構(gòu)，并在5-位引入可塑性大的三亞甲基橋，以提供最有利的構(gòu)象，滿(mǎn)足抑制劑與二氫葉酸還原酶活性部位最大限度的氫鍵和疏水鍵相互作用；AAG120-292-3及其類(lèi)似物是含呋喃的二氫葉酸還原酶抑制劑； 培美曲塞二鈉(LY231514)是一種新型多點(diǎn)位抗葉酸代謝藥，通過(guò)細(xì)胞還原型載體和胞膜表面葉酸鹽結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體系進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)化為多聚谷氨酸鹽，抑制細(xì)胞體內(nèi)與胸腺嘧啶核苷酸和嘌呤核苷酸合成有關(guān)的多種酶系，包括胸甘酸合成酶、二氫葉酸還原酶、甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲?；?。非經(jīng)典二氫葉酸還原酶抑制劑不含谷氨酸殘基，脂溶性好，可被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞， 進(jìn)入細(xì)胞不需要谷氨酸化。三甲氧苯氨喹唑啉(TMQ，三甲曲沙)為氨甲喋呤的衍生物，是一種非經(jīng)典抗葉酸代謝藥，其作用機(jī)理與MTX相似，也是作用于二氫葉酸還原酶。葉酸需要通過(guò)還原型葉酸載體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)葉酸多谷氨酸化合成酶催化形成谷氨酸化物參與代謝。 TMQ不依賴(lài)葉酸正常的載體轉(zhuǎn)運(yùn)，側(cè)鏈缺少谷氨酸，亦不會(huì)多谷氨酸化，避免由于轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制不良引起的耐藥。其他非經(jīng)典的二氫葉酸還原酶抑制劑還包括派利特林(PTX)、PT-523、MobiltreX、 甲氧芐氨嘧啶(TMP)及其類(lèi)似物、乙胺嘧啶等。PTX是無(wú)谷氨酸的化合物，苯環(huán)上有2個(gè)甲氧基，作用機(jī)理和TMQ相似。TMP抗菌譜與磺胺藥相近，有抑制二氫葉酸還原酶的作用。乙胺嘧啶是含氯的非經(jīng)典二氫葉酸還原酶抑制劑，使二氫葉酸不能還原成四氫葉酸。本項(xiàng)研究的宗旨是，通過(guò)抑制母體二氫葉酸還原酶阻礙葉酸代謝通路，產(chǎn)生葉酸代謝障礙的神經(jīng)管畸形小鼠，影響胚胎基因組穩(wěn)定性，并且利用葉酸和或四氫葉酸干預(yù)母體以減少、抑制葉酸代謝障礙引起的胚胎神經(jīng)管發(fā)育畸形的發(fā)生。葉酸代謝障礙包括影響葉酸及有關(guān)代謝生化指標(biāo)，涉及葉酸、四氫葉酸、5-甲基四氫葉酸、5-甲酰四氫葉酸、蛋氨酸、同型半胱氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、組氨酸、S-腺苷蛋氨酸、S-腺苷同型半胱氨酸、胱硫醚、還原性谷胱甘肽或腺苷等。葉酸代謝障礙的神經(jīng)管畸形小鼠胚胎基因組穩(wěn)定性受到影響，表現(xiàn)為彗星電泳實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象(DNA受損)；比較基因組雜交芯片分析存在基因組拷貝數(shù)嚴(yán)重變化；測(cè)序結(jié)果表明，染色體片段部分丟失和或擴(kuò)增等。如上所述，目前神經(jīng)管畸形(NTDs)動(dòng)物模型主要采用物理因素誘發(fā)、化學(xué)因素誘發(fā)或基因敲除誘發(fā)。本發(fā)明所述抗葉酸藥物用于制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型，迄今尚未見(jiàn)有相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明的目的是，提供一種抗葉酸藥物在制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所提供抗葉酸藥物制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型技術(shù)方案是選用年齡、體重符合要求的小鼠，雌雄鼠合籠后，將孕鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組采用抗葉酸代謝藥物進(jìn)行干預(yù)，對(duì)照組采用等體積生理鹽水處理，處理后，在孕至規(guī)定天數(shù)時(shí)，對(duì)鼠胚胎發(fā)育影響進(jìn)行逐項(xiàng)研究，包括身長(zhǎng)、體重測(cè)量；形態(tài)學(xué)觀(guān)察，是否發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常，神經(jīng)管閉合出現(xiàn)障礙，表現(xiàn)為無(wú)腦、露腦、腦膨出、脊柱裂、顱脊柱裂、 脊髓脊膜膨出等畸形表型；同時(shí)對(duì)孕鼠和胚胎進(jìn)行葉酸及相關(guān)生化代謝指標(biāo)、基因組穩(wěn)定性檢測(cè)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明中，選擇的是C57BL/6J小鼠，此品系的小鼠屬近交系，生殖周期僅19 21 天，因而用其進(jìn)行致畸實(shí)驗(yàn)周期短，見(jiàn)效快。成熟的7 8周小鼠體重為19 20克，容易操作，且其對(duì)致畸因子敏感性較高，非常適合用于致畸實(shí)驗(yàn)。模型建立之后的后續(xù)研究將有廣泛的適用范圍。本發(fā)明所述模型，是在國(guó)內(nèi)外首次建立的葉酸代謝障礙神經(jīng)管畸形小鼠模型，為NTDs的發(fā)病機(jī)制研究奠定了良好的基礎(chǔ)，提供了廣闊的前景。本發(fā)明所采用的方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，致畸效果穩(wěn)定，致畸率高，致死率低。通過(guò)阻礙葉酸正常代謝，模擬出了與人NTDs發(fā)病機(jī)制相近的動(dòng)物模型，為進(jìn)一步研究出生缺陷，特別是NTDs提供了便利。處于發(fā)育分化中的器官對(duì)致畸因子最敏感，受到作用后最易出現(xiàn)畸形。因此，致畸因子的投放時(shí)間決定了是否出現(xiàn)或出現(xiàn)何種畸形。小鼠胚胎神經(jīng)發(fā)育過(guò)程是從妊娠E6. Od開(kāi)始，大約在E10. Od后神經(jīng)孔最后封閉，在此期間進(jìn)行抗葉酸藥物的干預(yù)，均可以導(dǎo)致神經(jīng)管發(fā)育畸形的出現(xiàn)。此外，通過(guò)選取不同抗葉酸代謝藥物的劑量和干預(yù)方式，可以控制胚胎發(fā)育的影響程度，不會(huì)造成細(xì)胞與組織的全部死亡。本發(fā)明涉及的動(dòng)物模型用于NTDs發(fā)病機(jī)制的研究，葉酸缺乏與NTDs關(guān)系的研究一直是目前該領(lǐng)域的研究焦點(diǎn)和熱點(diǎn)，通過(guò)食物建立葉酸直接缺乏的動(dòng)物模型至今尚未見(jiàn)有成功報(bào)道，因此葉酸與NTDs的直接關(guān)系及其機(jī)制尚未闡明。本發(fā)明可在模型中開(kāi)展時(shí)間動(dòng)力學(xué)多項(xiàng)指標(biāo)的取材、示蹤以及相關(guān)因素協(xié)同影響胚胎發(fā)育尤其是神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的研本發(fā)明的動(dòng)物模型還可用于篩選感興趣的化合物進(jìn)行NTDs的防治，例如，認(rèn)為能夠預(yù)防NTDs發(fā)生的葉酸、肌醇及其類(lèi)似物等；可以給予孕鼠上述藥物，與正常對(duì)照組相比， 降低致畸率或延遲神經(jīng)系統(tǒng)疾病，均被視為一種保護(hù)性指標(biāo)。


圖1-神經(jīng)管畸形小鼠胚胎與正常小鼠胚胎形態(tài)學(xué)觀(guān)察其中Α-正常胚胎；B-露腦(后腦)畸形；C-露腦(全腦)畸形；D-顱脊柱裂畸形。圖2-神經(jīng)管畸形小鼠胚胎、孕鼠的葉酸代謝指標(biāo)的變化其中Α-甲氨蝶呤注射以后小鼠胚胎二氫葉酸還原酶活性；B、C_甲氨蝶呤注射以后孕鼠血漿同型半胱氨酸、葉酸濃度。圖3-神經(jīng)管畸形小鼠胚胎與正常小鼠胚胎后腦HE染色其中A、B-正常胚胎、后腦畸形胚胎的腦組織切片病理改變，50X ；C、D-正常胚胎、后腦畸形胚胎的腦組織切片病理改變，200 X。圖4-神經(jīng)管畸形小鼠胚胎與正常小鼠胚胎前腦HE染色其中A、B-正常胚胎、前腦畸形胚胎的腦組織切片病理改變，50X ；C、D圖為正常胚胎、前腦畸形胚胎的腦組織切片病理改變，200X。圖5-神經(jīng)管畸形小鼠胚胎與正常小鼠胚胎比較基因組雜交芯片結(jié)果分析其中A-正常胚胎；B-NTDs胚胎(橫坐標(biāo)為染色體上的所有探針，縱坐標(biāo)為 ratio)ο
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例僅為本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明?！秾?shí)施例》神經(jīng)管畸形小鼠模型的構(gòu)建1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料SPF級(jí)成年C57BL/6J小鼠，雌雄各半，7 8周齡，體重19 20g。購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)SCXK (京)2006-0009。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用遵循中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部令(第55號(hào))_醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理實(shí)施細(xì)則，遵循首都兒科研究所醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)章程。鼠繁殖飼料喂養(yǎng)(購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司)，常規(guī)飲水。MTX 購(gòu)自 Merck 公司，C存液濃度為 25mg/ml。Cell Lytic MT Cell Lysis Reagent、Dihydrofolate Reductase Assay Kit、蘇木精、伊紅、BSA(bovine serum albumin)、多聚賴(lài)氨酸均購(gòu)自Sigma公司。葉酸、同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒(北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司)。2.實(shí)驗(yàn)儀器連續(xù)變倍體視顯微鏡、眼科鑷、手術(shù)剪、眼科手術(shù)剪、電子天平、醫(yī)用超凈工作臺(tái)、 超低溫冰箱、分光光度計(jì)、pH計(jì)、離心機(jī)、LeicaRM2255全自動(dòng)切片機(jī)、Leica HI1210攤片機(jī)、Leica HI1220烘片機(jī)、Leica BOND-Max全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)、LEICA EG1150石蠟包埋機(jī)、Leica ASP 200S智能化組織脫水機(jī)、Leica DM3000智能型生物顯微鏡、Leica Qwin V3圖像分析系統(tǒng)、Leica AUT STainer XL染色機(jī)、高壓鍋、移液器、無(wú)菌注射器、培養(yǎng)皿、玻璃比色皿、光學(xué)顯微鏡。3.模型制備購(gòu)入的C57BL/6J小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后，隨機(jī)分組，每組15只。分組后的雌鼠與同一批雄鼠合籠過(guò)夜。第二天早晨發(fā)現(xiàn)陰道栓被定為孕0.5天。胚胎神經(jīng)發(fā)育E6. Od時(shí)， 實(shí)驗(yàn)組孕鼠給予:3mg/kg的MTX水溶液腹腔注射；正常對(duì)照組孕鼠給予等體積的生理鹽水。懷孕11. 5天時(shí)，對(duì)孕鼠進(jìn)行摘眼球采血。在滴血的過(guò)程中可以輕輕按摩小鼠的心臟，有助于加速滴血，增加采血量。操作正常時(shí)采血量一般在0.5ml lml。取血至離心管后，離心取上清，貯存于-70°C冰箱，備用。采血后的小鼠斷頸處死，75%酒精消毒。沿腹中線(xiàn)剖腹取出妊娠子宮，將子宮成串取下置于盛有磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4)的培養(yǎng)皿中， 體視顯微鏡下小心取出胚胎，并仔細(xì)觀(guān)察每窩胚胎，記錄活胎數(shù)、死胎數(shù)、吸收胎數(shù)、畸形胎數(shù)，觀(guān)察體視顯微鏡下可見(jiàn)的畸形情況，計(jì)算畸形率。測(cè)量胚胎的體長(zhǎng)和體重，并對(duì)胚胎進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查，結(jié)果如圖1所示。A圖是正常胚胎；B圖是露腦(后腦)畸形；C圖是露腦 (全腦)畸形；D圖是顱脊柱裂畸形。4. 二氫葉酸還原酶活性測(cè)定及葉酸代謝生化指標(biāo)檢測(cè)4. 1組織總蛋白的提取與蛋白濃度的測(cè)定按照試劑(CelLytic MT Cell Lysis Reagent)使用說(shuō)明提取胚胎組織中的總蛋白。首先稱(chēng)量胚胎組織的重量，加入適量的CelLytic MT試劑，轉(zhuǎn)移至提前預(yù)冷的微量勻漿器中，研磨組織，將研磨好的組織轉(zhuǎn)移至EP管，離心10分鐘，取上清。用Bradford法測(cè)定胚胎總蛋白濃度。制作蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)按下表配制標(biāo)準(zhǔn)溶液及操作(雙管平行法)。
權(quán)利要求
1.抗葉酸藥物在制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型中的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用是采用抗葉酸代謝藥物干預(yù)孕鼠，造成葉酸代謝障礙，引起鼠胚胎發(fā)育異常，從而建立神經(jīng)管畸形小鼠模型。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗葉酸代謝藥物為二氫葉酸還原酶抑制劑，以其干預(yù)孕鼠，阻斷葉酸在體內(nèi)的活性形式四氫葉酸的形成。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述二氫葉酸還原酶抑制劑選自經(jīng)典和非經(jīng)典兩大類(lèi)抑制劑氨基蝶呤、氨甲喋呤、伊打曲沙、TNP-351、培美曲塞二鈉、三甲曲沙、派利特林、甲氧芐氨嘧啶TMP及其類(lèi)似物或乙胺嘧啶。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述神經(jīng)管畸形小鼠模型表型包括無(wú)腦、露腦、腦膨出、脊柱裂、顱脊柱裂、脊髓脊膜膨出。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，抗葉酸藥物的干預(yù)方式包括口服、灌胃、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、靜脈注射、局部涂抹。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，抗葉酸代謝藥物的劑量范圍在0.Olmg/ kg-5000mg/kgo
7.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述葉酸代謝障礙包括葉酸及其相關(guān)代謝生化指標(biāo)的改變，涉及葉酸、四氫葉酸、5-甲基四氫葉酸、5-甲酰四氫葉酸、蛋氨酸、同型半胱氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、組氨酸、S-腺苷蛋氨酸、S-腺苷同型半胱氨酸、胱硫醚、還原性谷胱甘肽或腺苷。
8.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，葉酸代謝障礙的神經(jīng)管畸形小鼠胚胎發(fā)育異常，表現(xiàn)為基因組穩(wěn)定性發(fā)生改變，出現(xiàn)基因拷貝數(shù)變異。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗葉酸藥物在制備構(gòu)建神經(jīng)管畸形小鼠模型中的應(yīng)用，具體而言，是采用抗葉酸代謝藥物干預(yù)孕鼠，造成葉酸代謝障礙，引起鼠胚胎發(fā)育異常，從而建立起神經(jīng)管畸形小鼠模型；本發(fā)明所采用的方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，致畸率高，效果穩(wěn)定，通過(guò)阻礙葉酸正常代謝，模擬出了與人NTDs發(fā)病機(jī)制相近的動(dòng)物模型，為進(jìn)一步研究出生缺陷，特別是NTDs提供了便利。
文檔編號(hào)A61K49/00GK102228690SQ201110174559
公開(kāi)日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月27日
發(fā)明者關(guān)濤, 向前, 官臻, 張?chǎng)? 朱智強(qiáng), 牛勃, 王國(guó)亮, 王建華, 王明生, 王秀偉, 謝秋 申請(qǐng)人:首都兒科研究所