專利名稱：預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物預(yù)防醫(yī)藥領(lǐng)域，具體為一種預(yù)防動(dòng)物疫病發(fā)生的注射液的制備方法。
背景技術(shù)：
鴨瘟是由病毒引起的急烈性傳染病，涉及面廣、發(fā)病率高，死亡率有時(shí)在90 %以上，給飼養(yǎng)單位或個(gè)人帶來極大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)，由于對(duì)病亡的鴨處理不當(dāng)，往往造成病毒的漫延，產(chǎn)生更大的惡果。目前預(yù)防鴨瘟主要疫苗存在的問題是免疫期短(一般為3個(gè)月左右)、使用次數(shù)多、產(chǎn)生作用的時(shí)間長(14天)，保護(hù)率低(50-80%)等問題，因此，給家禽飼養(yǎng)業(yè)帶來的危害深重，且造成經(jīng)濟(jì)損失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種預(yù)防鴨瘟的注射液，該注射液對(duì)鴨瘟具有較好的預(yù)防效果。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為
預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液，所述預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液由蜂膠水溶液、接種鴨瘟病毒并感染后死亡的鴨胚勻漿組織和滅活液組成，所述蜂膠水溶液、鴨胚勻漿組織的重量比為 8-9 1-2，所述蜂膠水溶液為體積分?jǐn)?shù)為0. 1-2% ；所述滅活劑為青霉素、鏈霉素和福爾馬林液，預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含有2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，所述福爾馬林在預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液中體積分?jǐn)?shù)為0. 4%。
本發(fā)明的目的之二在于提供一種預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，該方法操作簡單，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為
所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液的制備方法，具體包括以下步驟a將接種鴨瘟種毒并感染死亡后鴨胚制成鴨胚勻漿組織，與蜂膠及水介質(zhì)混合均勻，得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，所述鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中蜂膠與水介質(zhì)組成體積濃度為0. 1-2%的蜂膠水溶液，所述蜂膠水溶液與鴨胚勻漿組織的體積比為8-9:1-2 ；
b在步驟a所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液， 37-39°C滅活，得預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液。進(jìn)一步，所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液的制備方法，所述鴨瘟種毒具體為
a在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟，放入組織搗碎機(jī)中搗碎； b取占總量為10-20%的被搗碎的鴨組織與占總重量為80-90%的濃度為0.8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液；c將混合組織懸液放入離心機(jī)中，在離心20-40分鐘后取其上清液； d在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素，得鴨瘟種毒；
進(jìn)一步，所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，步驟a中所述死亡的鴨內(nèi)臟為心、 肝、脾、肺和腦中任一種或多種。進(jìn)一步，所述鴨瘟種毒接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中的劑量為0. lmL。用本發(fā)明所述制備方法制成的預(yù)防鴨瘟蜂膠注射液對(duì)于預(yù)防鴨瘟具有顯著效果， 保護(hù)率提高到90-100%，保護(hù)期延長到6-12個(gè)月，產(chǎn)生作用時(shí)間縮短到5天，僅需一次注射即可達(dá)到預(yù)期效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的10%的被搗碎的鴨組織，占總重量的90%濃度為0. 8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4 000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8%的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于9日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48 小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚，放入組織搗碎機(jī)中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計(jì)取 10份的鴨勻漿組織與90份的蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達(dá)到0. 1 %，形成混合組織懸液， 并將其放入離心機(jī)中，在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預(yù)預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實(shí)施例2
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機(jī)中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計(jì)取15份的鴨勻漿組織與85份得蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達(dá)到2%，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中，在4 000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預(yù)預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實(shí)施例3在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的20%的被搗碎的鴨組織，占總重量的80%濃度為0.8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4 000轉(zhuǎn)/分條件下離心20分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8%的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于12日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在48 小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機(jī)中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計(jì)取20 份的鴨勻漿組織與80份蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達(dá)到1%，形成混合組織懸液，并其放入離心機(jī)中，在4 000轉(zhuǎn)/分條件下離心40分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液， 37-39°C滅活，得預(yù)預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實(shí)施例4
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟種稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80 小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機(jī)中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計(jì)取15 份的鴨勻漿組織與85份水介質(zhì)混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中，在4 000 轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000 單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預(yù)預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實(shí)施例5
在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0.1毫升劑量的鴨瘟種毒稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80 小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機(jī)中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計(jì)取15 份的鴨勻漿組織與85份蜂膠水溶液混合，蜂膠終濃度達(dá)到3%，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中，在4 000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預(yù)預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實(shí)施例6在無菌條件下取因患鴨瘟死亡的鴨內(nèi)臟(包括心、肝、脾、肺、腦)放入組織搗碎機(jī)中搗碎，取占總重量的15%的被搗碎的鴨組織，占總重量的85%濃度為0. 8%的生理鹽水混合，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中在4000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘，取其上清液，在上清液中按每毫升上清液各加入2 000單位青霉素和2 000單位鏈霉素后即形成鴨瘟種毒。將鴨瘟種毒放入濃度為0. 8 %的生理鹽水中體積稀釋100倍，形成鴨瘟種毒稀釋液，用0. 1毫升劑量的鴨瘟稀釋液接種于11日齡的鴨胚尿囊中，接種后選取在80小時(shí)出血、水腫等特征死亡的鴨胚放入組織搗碎機(jī)中搗碎，得鴨勻漿組織，以重量份計(jì)取15份的鴨勻漿組織與85份白油乳化液混合，白油乳化液終濃度達(dá)到2%，形成混合組織懸液，并將其放入離心機(jī)中，在4 000轉(zhuǎn)/分條件下離心30分鐘后，取其上清液，即鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，在所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液，37-39°C滅活，得預(yù)預(yù)防鴨病毒性鴨瘟蜂膠注射液。實(shí)施例7鴨瘟病毒的檢測
取實(shí)施例1-6中的勻漿組織用TRIzol Reagent DNA提取試劑盒進(jìn)行病毒 DNA 的提取，以如 SEQ ID N0:1 5’ -AGTCGTCGCAGTTTGTG-3，所示的，SEQ ID NO:2 5’ -GGTGTTGTTCTACGCCTTT-3’所示的引物[李子劍等鴨瘟病毒基因組核酸的提取方法比較。山東師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)2008,1 :134-136]，應(yīng)用PCR的方法進(jìn)行鴨瘟病毒的檢測，檢測結(jié)果均為陽性。實(shí)施例8無菌檢測
取實(shí)施例1-6制備的注射液分別接種于普通肉湯培養(yǎng)基和血瓊脂平板，經(jīng)37°C培養(yǎng)M 小時(shí)，按常規(guī)方法觀察，雜菌檢測為陰性。實(shí)施例9安全試驗(yàn)
選用未免疫的11日齡的肉鴨，每組10只，按實(shí)施例1-6制備的注射液劃分，6組和生理鹽水空白組，共計(jì)7組；每只注射lmL，隔離飼養(yǎng)15天，每日作體溫、呼吸、精神、食欲、糞便、 等臨床觀測，注射上述疫苗后，免疫注射組均未引起疫苗發(fā)病與死亡，注射部位未見明顯的病理變化，無不良反應(yīng)，精神、食欲佳。實(shí)施例10抗體檢測
選用未免疫的11日齡的肉鴨，每組10只，按實(shí)施例1-6制備的注射液劃分，6組和生理鹽水空白組，共計(jì)7組；
檢測方法間接ELISA方法[馬秀麗，宋敏訓(xùn)，王莉莉等，間接ELISA檢測鴨瘟抗體的研究和應(yīng)用。山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，20051 :62-64]。結(jié)果詳見表1。
權(quán)利要求
1.預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液，其特征在于，所述預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液由蜂膠水溶液、 接種鴨瘟病毒并感染后死亡的鴨胚勻漿組織和滅活液組成，所述蜂膠水溶液、鴨胚勻漿組織的重量比為8-9 :1_2，所述蜂膠水溶液為體積分?jǐn)?shù)為0. 1-2% ；所述滅活劑為青霉素、鏈霉素和福爾馬林液，預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含有2000單位的青霉素和2000單位的鏈霉素，所述福爾馬林在預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液中體積分?jǐn)?shù)為0. 4%。
2.權(quán)利要求1所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟a將接種鴨瘟種毒并感染死亡后鴨胚制成鴨胚勻漿組織，與蜂膠及水介質(zhì)混合均勻， 得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液，所述鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中蜂膠與水介質(zhì)組成體積濃度為0. 1-2%的蜂膠水溶液，所述蜂膠水溶液與鴨胚勻漿組織的體積比為8-9:1-2 ；b在步驟a所得鴨胚勻漿組織蜂膠混合液中加入滅活液，使所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液中每毫升含2000單位青霉素和2000單位鏈霉素，及體積分?jǐn)?shù)為0. 4%的福爾馬林液， 37-39°C滅活，得預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于，所述鴨瘟種毒具體為a在無菌條件下取因患鴨瘟的死亡的鴨內(nèi)臟，放入組織搗碎機(jī)中搗碎； b取占總量為10-20%的被搗碎的鴨組織與占總重量為80-90%的濃度為0.8 %的生理鹽水混合，形成混合組織懸液；c將混合組織懸液放入離心機(jī)中，在離心20-40分鐘后取其上清液； d在其上清液中，按每毫升上清液各加入2000單位青霉素和2000單位鏈霉素的配比加入青霉素和鏈霉素，得鴨瘟種毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于，步驟a中所述死亡的鴨內(nèi)臟為心、肝、脾、肺和腦中任一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液的制備方法，其特征在于所述鴨瘟種毒接種于9-12日齡的鴨胚尿囊中的劑量為0. lmL。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物預(yù)防醫(yī)藥領(lǐng)域，具體為一種預(yù)防動(dòng)物疫病發(fā)生的注射液的制備方法，所述預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液由蜂膠水溶液、接種鴨瘟病毒并感染后死亡的鴨胚勻漿組織和滅活液組成；其制備方法為在鴨胚勻漿組織蜂膠混合液加入滅活液，得預(yù)防鴨瘟的蜂膠注射液；用本發(fā)明所述制備方法制成的預(yù)防鴨瘟蜂膠注射液對(duì)于預(yù)防鴨瘟具有顯著效果，保護(hù)率提高到90-100％，保護(hù)期延長到6-12個(gè)月，產(chǎn)生作用時(shí)間縮短到5天，僅需一次注射即可達(dá)到預(yù)期效果。
文檔編號(hào)A61K35/407GK102258539SQ20111017712
公開日2011年11月30日 申請日期2011年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月28日
發(fā)明者付利芝, 彭祥偉, 楊金龍, 殷素會(huì), 粟劍 申請人:重慶市畜牧科學(xué)院