專利名稱：一種肝水解肽注射液藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療肝炎、肝硬化疾病的藥物組合物，進(jìn)一步講是提供了一種肝水解肽注射液藥物組合物，屬于生化藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的“肝水解肽注射液”為我國(guó)處方類藥物，肌肉注射，用于慢性肝炎、肝硬化等疾病的輔助治療，是由健康牛、豬的肝臟經(jīng)酶水解提取制得的含有多肽類、核酸類、氨基酸類物質(zhì)的無(wú)菌水溶液。肝水解肽能促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，減少蛋白質(zhì)分解，促進(jìn)正常肝細(xì)胞的增殖和再生，對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷有較好的保護(hù)作用，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，促進(jìn)病變組織恢復(fù)；但該藥物對(duì)于肝炎、肝硬化疾病的治療效果還是非常有限，根據(jù)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素活性測(cè)定法(MTT法)測(cè)定，肝水解肽注射液具有體外促進(jìn)人肝細(xì)胞生長(zhǎng)的活力，但活力刺激指數(shù)為僅為2. 9左右。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)一種肝水解肽注射液藥物組合物，克服了“肝水解肽注射液”的活力刺激指數(shù)較低，治療效果有限的缺欠。本發(fā)明還提供了該藥物的制備方法，工藝簡(jiǎn)單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供的肝水解肽注射液組合物，其特征在于是由以下原料制成的 濃度為9. 2^12. 2mg/ml的肝水解肽溶液1000ml、維生素C 2飛g、門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液
20 30ml、聚乙二醇 200 10 20g。所述的門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液為每Iml含L-門(mén)冬氨酸85mg 鉀11. ^ig :4. ^ig。本發(fā)明提供肝水解肽注射液組合物的制備方法，包括如下步驟
1、肝水解肽溶液
?；蜇i的肝臟，去除結(jié)締組織后，按0. 83、. 85 1的重量份數(shù)與注射用水混合后，用高速組織搗碎機(jī)勻漿，升溫至37 40°C，用HCL調(diào)PH值為2. (Γ2. 5，按3g/升加入胃蛋白酶，水解10 15小時(shí)，水解液用NaOH調(diào)節(jié)PH值為6. 2 6. 4，加Ig/升硅藻土，90°C，加熱30分鐘， 小型板框壓濾機(jī)壓濾，用0. 45 μ m微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，8000分子量超濾膜超濾得肝水解肽溶液，測(cè)定多肽含量，加注射用水調(diào)整溶液多肽濃度為9. 2^12. 2mg/ml ；
2、在步驟1制備的肝水解肽溶液1000ml，加入2 5g的維生素C，加入2(T30ml的門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液，加入l(T20g的聚乙二醇200，分裝后121°C高壓滅菌20分鐘，經(jīng)檢驗(yàn)合格得肝水解肽注射液組合物成品藥物制劑。以下實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物體外促進(jìn)人肝細(xì)胞生長(zhǎng)活力大為提高
實(shí)驗(yàn)方法促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素溶液國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素活性測(cè)定法(MTT法， 標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)WS-10001-(HD-0860)-2002)。試驗(yàn)樣品 1. 1供試品原配方肝水解肽溶液，含多肽11 mg/ml。維生素C:用RPMI-1640培養(yǎng)液制成的每Iml中含維生素C 50 μ g的溶液。門(mén)冬氨酸鉀鎂用RPMI-1640培養(yǎng)液制成的每Iml中含L-門(mén)冬氨酸25. 5 μ g、鉀 3. 42μ g、鎂 1. ^μ g 的溶液。實(shí)施例1制劑； 實(shí)施例2制劑； 實(shí)施例3制劑； 實(shí)施例4制劑；
1.2對(duì)照品注射用促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素，規(guī)格為20mg
2.材料
2. 1儀器C02培養(yǎng)箱、水平臺(tái)式離心機(jī)、酶標(biāo)儀、甩板機(jī)、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞培養(yǎng)板、一次性針頭濾器。
2.2試劑
氯化鈉、氯化鉀、無(wú)水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、RPMI-1640 MEDIUM、碳酸氫鈉、鹽酸、 氫氧化鈉、小牛血清、胰蛋白酶、EDTA 二鈉、MTT、二甲基亞砜、人肝細(xì)胞株。方法
3.1試劑的配制
3. 1. 1 0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液(ρΗ7· 3) 取氯化鈉8. 0g、氯化鉀0. 2g、磷酸氫二鈉 (Na2HP04) 1. 15g及磷酸二氫鉀0. 2g，加超純水IOOOml溶解后，高壓滅菌。3. 1. 2 RPMI-1640培養(yǎng)液取碳酸氫鈉2. OOg及RPMI-164010. Og加超純水約 800ml溶解后，用lmol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 9，加超純水稀釋至1000ml，過(guò)濾除菌。3. 1. 3 10%小牛血清培養(yǎng)液取上述RPMI-1640培養(yǎng)液900ml，加已滅活的新生小牛血清100ml。0.25%胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液取0.25g胰蛋白酶及0.02g 乙二胺四醋酸二鈉，加0. 0lmol/L磷酸鹽緩沖液100ml溶解后，用5. 6%碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH值至7. 2，過(guò)濾除菌，一 20°C保存。3. 1. 4噻唑藍(lán)(MTT)溶液取MTT50mg，加0. 01mol/L磷酸鹽緩沖液IOml溶解后， 過(guò)濾除菌(保存于冷處，使用不超過(guò)二周)
3. 2測(cè)定方法
3. 2. 1供試品溶液的制備取供試品適量，用RPMI-1640培養(yǎng)液制成每Iml中含多肽 100 μ g的溶液。3. 2. 2測(cè)定法用10%小牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)SMMC-7721細(xì)胞至對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期，用 0. 25%胰蛋白酶-乙二胺四醋酸二鈉消化液消化，加10%小牛血清培養(yǎng)液稀釋至每Iml中含O.5X10<4>) (5X10<4>)個(gè)細(xì)胞，將上述細(xì)胞懸液在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上鋪板，每孔 100 μ 1，其中留3孔加10%小牛血清培養(yǎng)液100 μ 1作為空白對(duì)照，置37°C，5%二氧化碳飽和水汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3、小時(shí)使其貼壁。供試品組，每孔加供試品溶液100 μ 1，每批供試品均做3孔，細(xì)胞對(duì)照組和空白對(duì)照組每孔分別加RPMI-1640培養(yǎng)液100 μ 1，置37°C，5 % 二氧化碳飽和水汽培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，結(jié)束培養(yǎng)前4小時(shí)取出培養(yǎng)板，吸去培養(yǎng)液，每孔加入O.Olmol/L磷酸鹽緩沖液(pH7. 3)洗一次，然后再在每孔中加入上述磷酸鹽緩沖液 (pH7. 3) 100 μ 1和MTT溶液20 μ 1，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)束后，吸出培養(yǎng)液，每孔加入100 μ 1二甲基亞砜，搖勻，在酶標(biāo)儀上以550nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸收度A值。
權(quán)利要求
1.一種肝水解肽注射液藥物組合物，其特征在于是由以下原料制成的濃度為9. 2^12. 2mg/ml的肝水解肽溶液1000ml、維生素C 2飛g、門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液 20 30ml、聚乙二醇 200 10 20g ；所述的門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液為每Iml含L-門(mén)冬氨酸85mg 鉀11. ^ig :4. ang。
2.權(quán)利要求1所述肝水解肽注射液組合物的制備方法，包括如下步驟1)肝水解肽溶液牛或豬的肝臟，去除結(jié)締組織后，按0. 83、. 85 1的重量份數(shù)與注射用水混合后，用高速組織搗碎機(jī)勻漿，升溫至37 40°C，用HCL調(diào)PH值為2. (Γ2. 5，按3g/升加入胃蛋白酶，水解10 15小時(shí)，水解液用NaOH調(diào)節(jié)PH值為6. 2 6. 4，加Ig/升硅藻土，90°C，加熱30分鐘， 小型板框壓濾機(jī)壓濾，用0. 45 μ m微孔過(guò)濾膜過(guò)濾，8000分子量超濾膜超濾得肝水解肽溶液，測(cè)定多肽含量，加注射用水調(diào)整溶液多肽濃度為9. 2^12. 2mg/ml ；2)在步驟1制備的肝水解肽溶液IOOOml中加入2 5g的維生素C、加入2(T30ml的門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液、加入l(T20g的聚乙二醇200，分裝后121°C高壓滅菌20分鐘，得肝水解肽注射液組合物成品藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種肝水解肽注射液藥物組合物，由肝水解肽溶液、維生素C、門(mén)冬氨酸鉀鎂注射液、聚乙二醇200制成，克服了“肝水解肽注射液”的活力刺激指數(shù)較低，治療效果有限的缺欠。本發(fā)明還提供了該藥物的制備方法，工藝簡(jiǎn)單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/198GK102228676SQ20111018976
公開(kāi)日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月7日
發(fā)明者王巍 申請(qǐng)人:白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠