專利名稱：：一種治療乳癌的醫(yī)藥組成物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于一種抗介白素-19抗體治療乳癌的用途。
背景技術(shù)：
：乳癌，如乳腺管癌(ductalcarcimona)及小葉性乳癌(lobularcarcinoma)系為女性最常見的癌癥之一。其中，每八位女性中有一位女性會(huì)罹患乳癌。治療乳癌的方法包括化學(xué)療法、放射療法、及手術(shù)。早期乳癌的治療效果良好，但晚期乳癌患者的5年存活率卻低于50%。因此，目前仍需發(fā)展一種新穎的乳癌治療法，以期能于各期癌癥中均可展現(xiàn)極高治療效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明發(fā)現(xiàn)對(duì)人類介白素-19(IL_19)具有專一性的單株抗體IBBl可有效抑制乳癌細(xì)胞增生及乳癌生長，并延長罹患乳癌老鼠的壽命。因此，本發(fā)明的一實(shí)施態(tài)樣提供一種以一有效劑量的抗介白素-19抗體治療乳癌的醫(yī)藥組成物，其中抗介白素-19抗體可單獨(dú)使用、或與抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體一同使用。于本發(fā)明中，“治療”一詞意指采用或投予包含一種或以上活性劑的組成物至主體，且該主體為一個(gè)患有乳癌、具乳癌病癥、或具有罹患乳癌傾向的主體，以達(dá)到治療、治愈、減輕、舒緩、改變、補(bǔ)救、改善、改進(jìn)或影響癌癥、癌癥病癥、或癌癥傾向的目的。于本發(fā)明中，“有效劑量”一詞意指投予個(gè)體所需的每種活性劑的劑量，不論是單獨(dú)使用或與其它一種或以上的活性劑共同使用，以達(dá)到治療的效果。有效劑量為本領(lǐng)域技術(shù)人員可依據(jù)投藥方式、使用的賦形劑(excipient)及合并使用(co-usage)其它活性劑的不同而改變有效劑量的多寡。本發(fā)明所使用的抗介白素-19抗體、抗介白素-20抗體、或抗介白素-20R1抗體可為能與介白素-19、介白素-20、或介白素-20R1的天然抗體(naturally-occurringantibody)(如單株抗體)、其抗原結(jié)合片段(antigen-bindingfragment)(如F(ab')2、Fab、或Fv)、或基因工程抗體(geneticallyengineeredantibody)(如嵌合抗體(chimericantibody)、人類化單株抗體(humanizedantibody)、或單鏈抗體(singlechainantibody))，其可與抗原結(jié)合且通過此抗體可阻斷訊息傳導(dǎo)路徑?？菇榘姿?19抗體可包含(1)一包含抗體IBBl的Vh中所有互補(bǔ)性決定區(qū)(complementarity-determiningregions,CDR)的重鏈變異區(qū)(Vh)(SEQIDNO2)；及(2)一包含抗體IBBl的\中所有互補(bǔ)性決定區(qū)的輕鏈變異區(qū)(\)(SEQIDNO6)。例如，抗介白素-19抗體包含與IBBl相同的Vh及Vl。抗介白素-20抗體可包含(1)一包含抗體7E的Vh中所有互補(bǔ)性決定區(qū)的重鏈變異區(qū)(Vh)(SEQIDNO12)；及(2)—包含抗體7E的\中所有互補(bǔ)性決定區(qū)的輕鏈變異區(qū)(Vl)(SEQIDN0:16)。例如，抗介白素-20抗體包含與抗體7E相同的Vh及八。當(dāng)上述組成物含有兩種抗體時(shí)(即，抗介白素-19抗體與抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體)，此兩種抗體可形成一雙專一性復(fù)合物(bi-specificcomplex)。例如，此兩種抗體皆為Fab片段，而可形成雙專一性抗體。本發(fā)明亦提供(1)一治療乳癌的醫(yī)藥組成物，此組成物包含抗介白素-19抗體，且選擇性的包含抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體；以及(此組成物于制造治療乳癌藥物的用途。本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例細(xì)節(jié)如以下所述，而其它本發(fā)明的特征或優(yōu)點(diǎn)則以下列附圖、多項(xiàng)實(shí)施例細(xì)節(jié)的描述、及申請(qǐng)專利范圍加以詳述。圖IA為以抗介白素-19抗體IBBl抑制乳癌細(xì)胞MCF-7增生效果圖，其中*代表與OBS控制組比較P<0.05，#代表與以介白素-19治療細(xì)胞組比較P<0.05。圖IB為以抗介白素-19抗體IBBl抑制乳癌細(xì)胞4T1增生效果圖，其中*代表與OBS控制組比較P<0.05，#代表與以介白素-19治療細(xì)胞組比較P<0.05。圖2顯示IBBl可增加帶有乳癌的小鼠存活率的結(jié)果圖。圖3顯示以抗體IBBl抑制小鼠中乳癌細(xì)胞生長的結(jié)果圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種乳癌治療的醫(yī)藥組成物，其提供抗介白素-19抗體至一所需治療的主體(S卩，乳癌患者或具罹患乳癌風(fēng)險(xiǎn)的患者)，且抗介白素-19抗體可單獨(dú)使用、或與抗介白素-20抗體或抗介白素-21R1抗體一同使用。于本發(fā)明中，“抗體”一詞意指天然的免疫球蛋白(immunoglobulin)、其抗原結(jié)合片段、或本
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的基因工程抗體。天然的抗介白素-19抗體、抗介白素-20抗體及抗介白素-21R1抗體的多株抗體或單株抗體，可使用介白素-19蛋白、介白素-20蛋白、介白素-20R1蛋白、或其片段作為一誘發(fā)抗原，以公知方法制備。此部分可參見HarlowandLane,(1988)Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork。此夕卜，“單株抗體，，一詞意指同源性抗體群(homogeneousantibodypopulation)，而“多株抗體”一詞意指異源性抗體群(heterogeneousantibodypopulation)。單株抗體及多株抗體并未限定抗體來源或其制備方法。介白素-19及介白素-20均為本領(lǐng)域公知的生物激素，而介白素-20R1為介白素-20的受體。人類介白素-19、介白素-20及介白素-20R1可依照下述編號(hào)由基因數(shù)據(jù)庫(GenBank)中取得。人類介白素-19異構(gòu)體(isoform)l:NP_715639(蛋白質(zhì))及ΝΜ_153758·1(基因)人類介白素-19異構(gòu)體2:ΝΡ_037503(蛋白質(zhì))及NM_013371.2(基因)人類介白素-20:ΝΡ_061194(蛋白質(zhì))及NM_018724(基因)人類介白素-2ORl:ΝΡ_055^7(蛋白質(zhì))及NM_014432·2(mRNA)制備抗介白素-19抗體、抗介白素-20抗體、或抗介白素-20R1抗體的方法為蛋白質(zhì)或其勝肽片段與一如KLH的承載蛋白(carrierprotein)結(jié)合，再與輔劑混合后，注射入宿主動(dòng)物體內(nèi)。其中，動(dòng)物體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體，可再通入一蛋白質(zhì)A管柱及/或親合性管柱進(jìn)行純化。一般所使用的宿主通常包括兔子(rabbits)、老鼠(mice)、天竺鼠(guineapigs)、及大白鼠(rats)。許多輔劑能依據(jù)不同宿主提升其免疫反應(yīng)，包括Freimd’s輔劑(完全與不完全)、如氫氧化鋁的礦物膠、CpG、如溶血軟磷脂(lysolecithin)的表面活性物質(zhì)、復(fù)合多醇(pluronicpolyols)、聚陰離子(polyanions)、勝肽(ρ印tides)、油乳劑(oilemulsions)、血氰蛋白(keyholelimpethemocyanin)與二硝基酷(dinitrophenol)。對(duì)人類有效的輔劑則包含卡介苗(BacilleCalmette-Guerin,BCG)及小棒桿菌(Corynebateriumparvum)。多株抗體出現(xiàn)于免疫個(gè)體的血清，而單株抗體則能以標(biāo)準(zhǔn)融合瘤細(xì)胞(hybridoma)技術(shù)制備(參考Kohleretal.(1975)Nature256,495；Kohleretal.(1976)Eur.J.Immunol.6,511；Kohleretal.(1976)EurJImmunol6,292；以及Hammerlingetal.(1981)MonoclonalAntibodiesandTCellHybridomas,Elsevier,N.Y.)。牛寺另Ui，單株抗體能通過使用連續(xù)細(xì)胞株于培養(yǎng)基中產(chǎn)生抗體的任何技術(shù)所制備，如Kohler等人于1975年在自然雜志256，495及美國專利第4，376，110號(hào)中發(fā)表的技術(shù)；也能通過使用人類B細(xì)胞融合瘤細(xì)胞技術(shù)所制備(Kosboretal.(1983)ImmunolToday4,72；Coleetal.(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA80,2026)；還可通過EBV-融合瘤細(xì)胞技術(shù)來制備(Coleetal.(1983)MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96)。在此，上述抗體可為任何免疫球蛋白抗體，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD，及其任一亞型。本發(fā)明中，該融合瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的單株抗體能培養(yǎng)于活體或試管中。因單株抗體具有于活體內(nèi)生產(chǎn)高效價(jià)(titer)的能力，故較佳使用單株抗體制備本發(fā)明所需的抗體。在獲得對(duì)介白素-19或介白素-20具有專一性抗體后，即可由本領(lǐng)域中的公知實(shí)驗(yàn)，偵測(cè)抗體中和(neutralize)介白素-19或介白素-20的能力。表現(xiàn)于基因改造動(dòng)物的完整人類抗介白素-19抗體、抗介白素-20抗體、及抗介白素-20R1抗體亦為本發(fā)明特征之一，可參考:See,e.g.，Greenetal.，NatureGenetics713(1994)、及美國專利第5，545，806與5，569，825號(hào)。天然抗體的抗原結(jié)合片段(如F(ab’)2、Fab、或Fv)能使用公知技術(shù)來制備。例如，可使用胃液素(P印sin)分解抗體分子而獲得F(ab’)2片段，以及可由還原F(ab’)2片段雙硫鍵獲得Fab片段。本發(fā)明所使用的抗介白素-19抗體、抗介白素-20抗體、抗介白素-20R1抗體可為基因工程抗體，如人類化單株抗體、嵌合抗體、單鏈抗體(scFv)或單一模塊抗體(adomainantibody)(dAb；參考Ward，et.Al.，1989，Nature,341:544-546)。這類抗體基本上具有與其衍生的天然抗體相同的抗原結(jié)合殘基/區(qū)域，故可保持與天然抗體相同的抗原專一性。人類化單株抗體包含一人類免疫球蛋白(即，受予抗體(recipientantibody)),其中抗原結(jié)合區(qū)的蛋白區(qū)域/殘基(region/residues)(即，互補(bǔ)性決定區(qū)，尤其是專一決定性的殘基)系被非人類免疫球蛋白(即，贈(zèng)予抗體(donorantibody))的抗原結(jié)合區(qū)的蛋白區(qū)域/殘基所取代。在某些情況下，受予抗體的抗原結(jié)合片段中會(huì)有一個(gè)或多個(gè)殘基被贈(zèng)予抗體的片段取代，據(jù)此，人類抗體可能包含了受予抗體或贈(zèng)予抗體的殘基。這些所包含殘基可進(jìn)一步提升抗體效力且使抗體效力最佳化。通過本領(lǐng)域公知技術(shù)，如重組技術(shù)，可制作出人類化抗體。嵌合抗體為一源自不同物種的不同抗體片段所獲得的分子，如變異區(qū)(variable6region)源自老鼠單株抗體，而保留區(qū)(constantregion)源自人類免疫球蛋白。并且，可通過公知技術(shù)制備嵌合抗體，如參考Morrisonetal.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81,6851；Neubergeretal.(1984)Nature312，604；及Takedaetal.(1984)Nature314452所述。單鏈抗體則可通過將Vh的核酸序列與\的核酸序列串連，并使用重組技術(shù)所制備。較佳為，單鏈抗體其可折迭的連結(jié)片段(flexiblelinker)包含于兩變異區(qū)間。或者，可使用單鏈抗體的制備技術(shù)(美國專利第4，946，778及4，704，692號(hào))建立病毒scFv基因庫，且對(duì)介白素-19具有專一性的scFv克隆(clone)也能以公知技術(shù)從基因庫中加以鑒定。最后，可再進(jìn)一步確認(rèn)正確的克隆其抑制介白素-19或介白素-20的活性。于實(shí)施例中，本發(fā)明的抗介白素-19抗體來自單株抗體IBBl(參見Hsingetal.,Cytokine44:221-228;2008)、其抗原結(jié)合片段、或其基因工程功能變異抗體。下列為此單株抗體的重鏈與輕鏈的胺基酸序列、以及其編碼核酸序列重鏈胺基酸序列MRVLILLriFJyiFPG/I^DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITiDYAWNWTROFPGNKΤ,EWMVYTTYSGTTGYNPSΤ,KSRTSTTRDTSKNQFFLQLNSVTTGDTATYYCARYTTTAFDYWGQGTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVOFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQIDNO:1)斜體區(qū)域單一肽鏈粗體區(qū)域變異鏈(SEQIDNO2)粗體及底線區(qū)域互補(bǔ)性決定區(qū)正常字體區(qū)域序列固定區(qū)域底線區(qū)域樞紐區(qū)(hingeregion)重鏈核酸序列ATGAGAGTGCTGATTCTTTTGTGGCTGTTCACAGCCTTTCCTGGTATCCTGTCTGkTGTGCkGCTTCAGGAGTCGGGACCTGGCCTGGTGAAACCTTCTCAGTCTCTGTCCCTCACCTGCACTΟΤΓΑΓΤΟΟΓΤΑΓΤΓΑΑΤΓΑΓΓΑΟΤΟΑTTATGCCTGGAArTGGATrrGGrAGTTTrrAGΟΑΑΑΓΑΑΑΓΤΟΟΑΟΤΟΟΑΤΟΟΤΓΤΑΓΑΤΑΑΓΓΤΑΓΑΟΤΟΟΤΑΤΓΑΓΤΟΟΓΤΑΤΑΑΓΓΓOiZT￡T￡AAAA￡ICGGATCTCTATCACTCGAGACACATCCAAGAACCAGTTCTTCCTGCAGTTGAATTCTGTGACTACTGGGGACACAGCCACCTATTACTGTGCAAGAIATA￡TA￡￡￡ACTGCGTTTGArTACTGGGGCCAAΟΟΓΑΓΓΑΓΤΓΤΓΑΓΟΟΤΓΤΓΓΤΓΑGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGGATGTGCTCACCATTACTATGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQIDNO3)斜體區(qū)域單一肽鏈編碼序列粗體區(qū)域變異鏈編碼序列(SEQIDNO4)粗體及底線區(qū)域互補(bǔ)性決定區(qū)編碼序列正常字體區(qū)域序列固定區(qū)域編碼序列底線區(qū)域樞紐區(qū)編碼序列輕鏈胺基酸序列M^IPFiiIIFIMFr/Pyi^ii^DIVMTQTPLSLPVSLGDQASISCR^SiISiDFTLKISRVEAEDLGVYFCSOSTHVPffTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQIDNO:5)斜體區(qū)域單一肽鏈粗體區(qū)域變異鏈(SEQIDNO6)粗體及底線區(qū)域互補(bǔ)性決定區(qū)正常字體區(qū)域序列固定區(qū)域底線區(qū)域連接區(qū)段(joiningsegment)輕鏈核酸序列ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGGATTCCTGCTTCCAGGAGJGATATTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGCCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTΟΓΑΟΑΤΓΤΑΟΤΓΑΟΑΟΓΓΤΤΟΤΑΓΑΓΑΟΤΑΑΤΟΟΑΑΑΑΑΓΓΤΑΤΤΤΑΓΑΤΤΟΟΤΑΓΓΤΟCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTAAGCTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTGGGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTTrTGrTrTrAAAGrArArATGTTrrGrGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGQClQklQClQCkCCkkClQlklCCklCllCCCkCCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQIDNO7)斜體區(qū)域單一肽鏈編碼序列粗體區(qū)域變異鏈編碼序列(SEQIDNO8)粗體及底線區(qū)域互補(bǔ)性決定區(qū)編碼序列正常字體區(qū)域序列固定區(qū)域編碼序列底線區(qū)域連接區(qū)段編碼序列抗體IBBl可使用公知方式制備，即由如融合瘤細(xì)胞株制備(如Hsingetal.,Cytokine44=221-228；2008所述)、化學(xué)合成制備、或通過重組技術(shù)表現(xiàn)。IBBl的功能性變異抗體，包含:VH，其與IBBl(SEQIDNO4)至少具有75%(80%,85%、90%、或95%)的一致性；及\，其與IBBl(SEQIDNO:6)至少具有75%(80%,85^、卯1^、或95%)的一致性。于本發(fā)明中，兩胺基酸序列的“同源性百分比”(percenthomology)可依照一已知的算法所決定，其中該算法可參考KarlinandAltschul,Proc,Natl.Acad.Sci.USA87:2264-2268,1990所述，并參考KarlinandAltschul,Proc,Natl.Acad.Sci.USA5873-5877，1993所述的方法加以修飾。此算法便成為NBLAST及XBLAST兩程序的演算基礎(chǔ)(Altschuletal.，J.Mol.Biol.215:403-410,1990)。BLAST蛋白質(zhì)搜尋由XBLAST程序在分?jǐn)?shù)(score)為50及字符長度(wordlength)為3的設(shè)定條件下所執(zhí)行，以獲得多勝肽樣本的同源胺基酸序列。使用在「Altschuletal.,NucleicAcidsRes.253389-3402,1997J中揭示的間隔BLAST(gappedBLAST)程序，以比較多條序列的間隔排比(gappedalignments)結(jié)果。當(dāng)使用BLAST及間隔BLAST程序運(yùn)算時(shí)，各程序(例如XBLAST及NBLAST)分別使用其預(yù)設(shè)參數(shù)，詳細(xì)說明請(qǐng)參考www.ncbi.nih.gov。IBBl(如，人類化抗體)的功能變異抗體，能由將突變導(dǎo)入IBBl的Vh或\的框架區(qū)(frameregion,FR)內(nèi)，以維持完整的互補(bǔ)性決定區(qū)(OTR)而獲得，特別是導(dǎo)入?yún)^(qū)域中的專一性決定殘基。已知互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)與抗體的專一性有關(guān)，因此框架區(qū)上的突變并不影響抗體的專一性。抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)及框架區(qū)(frameregion)可由Vh及Vl胺基酸序列決定，可參考www.bioinf.org.uk/abs。于本發(fā)明中，抗體功能結(jié)合專一性可由公知技術(shù)分析，如酵素免疫分析法(ELISA)、或西方墨點(diǎn)法(western-blot)分析。另一方面，IBBl的功能變異抗體為一種基因工程抗體，包含與IBBl相同的乂11與八。這類的變異抗體(如嵌合抗體或單鏈抗體)可由上述方法制得。能與抗介白素-19抗體一同使用以治療乳癌的抗介白素-20抗體可為能中和介白素-20活性的單株抗體7E、或其功能變異區(qū)，且由融合瘤細(xì)胞株所生產(chǎn)的mAb7E寄存于(AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBoulevard,Manassas,VA20110-2209，U.S.A.)編號(hào)PTA-8687。請(qǐng)參見美國專利第7，435，800號(hào)及第20090048432號(hào)。此融合瘤細(xì)胞株將會(huì)在美國專利申請(qǐng)后自行無限制/條件地公開，并且將其保存于美國菌種保存中心(ATCC)，其保存期限自即日起的五年內(nèi)，而在維持本專利有效性的前提下，其保存期限自寄存當(dāng)日起算至少三十年。mAb7E的重鏈與輕鏈的胺基酸序列/cDNA序列如下mAb7E重鏈的核酸序列(SEQIDNO9)及胺基酸序列(SEQIDNO10)atgtacttgggactgaactatgtattcatagtttttctcttaaatMYLGLNYVFIVFLLN15ggtgtccagagtgaattgaagcttgaggagtctggaggaggcttgGVQSELKLEESGGGL30gtgcagcctggaggatccatgaaactctcttgtgetgcctctggaVQPGGSMKLSCAASG45ttcacttttagtgacgcctggatggactgggtccgccagtctccaFTFSDAWMDWVRQSP60gagaaggggcttgagtggattgetgaaattagaageaaagetaatEKGLEWIAEIRSKAN75aattatgcaacatactttgetgagtctgtgaaagggaggttcaccNYATYFAESVKGRFT90ateteaagagatgattccaaaagtggtgtctacctgcaaatgaacISRDDSKSGVYLQMN105aacttaagagetgaggacactggcatttatttctgtaccaagttaNLRAEDTGIYFCTKL120teactacgttactggttcttcgatgtctggggcgcagggaccacgSLRYWFFDVWGAGTT135gtcaccgtctccteagccaaaacgacacccccatctgtctatccaVTVSSAKTTPPSVYP150ctggcccctggatctgetgcccaaactaactccatggtgaccctgLAPGSAAQTNSMVTL165ggatgcctggtcaagggctatttccctgagccagtgacagtgaccGCLVKGYFPEPVTVT180tggaactctggatccctgtccageggtgtgcacaccttcccagetWNSGSLSSGVHTFPA195gtcctgcagtctgacctctacactctgageageteagtgactgtcVLQSDLYTLSSSVTV210ccctccageacctggcccagegagaccgtcacctgcaacgttgccPSSTWPSETVTCNVA225cacccggccageageaccaaggtggacaagaaaattgtgcccagg0097]HPASSTKVDKKIVPR0098]gattgtggttgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatea0099]DCGCKPCICTVPEVS0100]tctgtcttcatettcCCCccaaagcccaaggatgtgctcaccan0101]SVFIFPPKPKDVLTI0102]actCtgactcctaaggtcacgtgtgttgtggtagacateageaag0103]TLTPKVTCVVVDISK0104]gatgatCCCgaggtccagttcagetggtttgtagatgatgtggag0105]DDPEVQFSWFVDDVE0106]gtgcacacagetcagacgcaaCCCCgggaggagcagttcaacage0107]VHTAQTQPREEQFNS0108]actttcCgCteagtcagtgaaCttCCCateatgcaccaggactgg0109]TFRSVSELPIMHQDW0110]ctcaatggcaaggagttctgcagggtcaacagtgcagetttc0111]LNGKEFKCRVNSAAF0112]cctgccCCCategagaccatetccaccggcagaCCg0113]PAPIEKTISKTKGRP0114]aaggetccacaggtgtacaccattccacctCCCaaggagcagatg0115]KAPQVYTIPPPKEQM0116]gccaaggataaagtcagtCtgacctgcatgataacagacttcttc0117]AKDKVSLTCMITDFF0118]cctgaagacattactgtggagtggcagtggaatgggcagccagcg0119]PEDITVEWQWNGQPA0120]gagaactacaagaacactcagcccateatggacacagatggctct0121]ENYKNTQPIMDTDGS0122]tacttcgtctacageaagctcaatgtgcagaagageaactgggag0123]YFVYSKLNVQKSNWE0124]gcaggaaatactttcacctgctctgtgttacatgagggcctgcac0125]AGNTFTCSVLHEGLH0126]aaccaccatactgagaagagectctcccactctcctggtTGA0127]NHHTEKSLSHSPGK-0128]粗體字區(qū)域表示mAb7E重鏈的Vh(DNA序列SEQIDNO11；蛋白質(zhì)序列SEQ2)。0129]mAb7E輕鏈的核酸序列(SEQIDNO:13)及胺基酸序列(SEQIDNO:14)0130]atgatgagtcctgcccagttcctgtttctgttagtgctctggatt0131]MMSPAQFLFLLVLW150132]egggaaaccaacggtgattttgtgatgacccagactccactcact0133]RETNGDFVMrΓQ1PLT300134]240255270285300315330345360375390405420435450464ttgtcggttaccattggacaaccagcctccatetcttgcaagteaLSVTIGQPASISCKS45agtcagagectcttggatagtgatggaaagacatatttgaattggSQSLLDSDGKTYLNW60ttgttacagaggccaggccagtctccaaagcacctcatetatctgLLQRPGQSPKHLIYL75gtgtctaaactggactctggagtccctgacaggttcactggcagtVSKLDSGVPDRFTGS90ggateagggaccgatttcacactgagaateageagagtggaggetGSGTDFTLRISRVEA105gaggatttgggagtttattattgctggcaaagtacacattttccgEDLGVYYCWQSTHFP120tggacgttcggtggaggcaccaagctggaaateaaaegggctgatWTFGGGTKLEIKRAD135getgcaccaactgtatccatettcccaccatccagtgagcagttaAAPTVSIFPPSSEQL150acatctggaggtgccteagtcgtgtgcttcttgaacaacttctacTSGGASVVCFLNNFY175aagtggaagattgatggcagtgaacgacaaaatggcgtcctgaacPKDINVKWKIDGSER180agttggactgatcagcccaaagacateaatgtcgacageaaagacQNGVLNSWTDQDSKD195ageacctacageatgageageaccctcacgttgaccaaggacgagSTYSMSSTLTLTKDE210tatgaacgacataacagetatacctgtgaggccactcacaagacaYERHNSYTCEATHKT225teaactteacccattgtcaagagettcaacaggaatgagtgttagSTSPIVKSFNRNEC-239粗體字區(qū)域代表mAb7E輕鏈的Vl(DNA序列SEQIDNO:15；蛋白質(zhì)序列SEQIDNO16)。當(dāng)使用兩種抗體治療乳癌時(shí)，此兩種抗體可形成一雙專一性復(fù)合物(即，雙專一性抗體)，其包含兩種抗原結(jié)合區(qū)段(即，兩重鏈-輕鏈對(duì))，其中的一對(duì)介白素-19具有專一性，另一則對(duì)介白素-20具有專一性。此外，雙專一性抗體可使用公知方法制備。當(dāng)治療乳癌時(shí)，本發(fā)明所述的任一抗介白素-19抗體可與一醫(yī)藥上可接受的載體混合，其中抗介白素-19抗體可單獨(dú)使用、或與抗介白素-20抗體或抗介白素-20R1抗體一同使用，以形成一醫(yī)藥組成物?！翱山邮堋币庵篙d體須能與該組成物的活性成分兼容(較佳是能穩(wěn)定活性成分)，且不可在治療過程中危害個(gè)體。適宜的載體可包括微晶質(zhì)纖維素(microcrystallinecellulose)、甘露糖醇(mannitol)、葡萄糖、脫脂奶粉、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylprrolidone)、及淀粉，或其組合。上述的醫(yī)療組成物可經(jīng)已知服藥管道進(jìn)行投藥，如口服、腸胃外(parentally)、噴劑吸入、局部給予(topically)、直腸、鼻、口頰(buccally)、陰道或植入式藥物儲(chǔ)槽等傳統(tǒng)途徑完成投藥，以治療乳癌。其中，所稱的經(jīng)“腸胃外(parenteral)”投藥一詞可包括經(jīng)皮下(subcutaneous)、皮內(nèi)(intracutaneous)、靜脈內(nèi)(intravenous)、月/L肉內(nèi)(intramscular)>^；iP^(intraarticular)、1內(nèi)(intraarterial)、胃^夜內(nèi)(intrasynovial)、月匈骨內(nèi)(intrasternal)、腦脊髓膜內(nèi)(intrathecal)、腦病灶內(nèi)(intralesional)、及頭蓋骨內(nèi)(intracarnial)的注射或注入方式。制備含上述抗體的無菌注射型醫(yī)療組成物，例如無菌注射型水溶性或脂溶性懸浮液，其調(diào)配方法可利用相關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
中適宜使用的分散劑(dipersingagent)或潤濕劑(wettingagent)(例如Tween80)以及懸浮劑(suspendingagent)。無菌注射型制劑亦可為以無毒性可腸胃外接受的稀釋劑或溶劑所制成的無菌注射型溶液或懸浮液，其中，無毒性可腸胃外接受的稀釋劑或溶劑的例子可為1，3-丁二醇(l，3-bUtanediol)。其它能運(yùn)用的可接受醫(yī)藥載體及溶劑可包括甘露醇(mannitol)、水、林格式劑(Ringer’ssolution),及等滲透壓氯化鈉溶液(isotonicsodiumchloridesolution)。此外，亦可使用無菌或不揮發(fā)性(fixed)油類等(例如合成的單或雙酸甘油脂(mono-ordiglyceride))，作為溶劑或懸浮用介質(zhì)。若系考慮天然油類，其它如油酸(oleicacid)及其甘油脂衍生物，亦可以用于注射型制劑的制備，而這類脂肪酸制成的制劑其組成相似于天然的醫(yī)藥用可接受性油類，如橄欖油或蓖麻油(castoroil)，特別是此二油類的多氧乙基化(polyoxyethylated)型態(tài)。于此，可接受的油類溶液或懸浮液中亦可加入一長鏈的乙醇稀釋劑或懸浮劑，又或加入羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose)或其相似的懸浮劑。至于制劑調(diào)配過程亦可添加常用的界面劑，如Tweens、Spans或其相似的乳化劑(emulsifyingagent),又或是普遍使用在藥物生產(chǎn)上可接受性固體、液體或其它劑型的生物可利用強(qiáng)化劑(bioavailabilityenhancer)。此外，上述的醫(yī)藥組成物尚可通過注射型藥劑(inectabled印ot)的途徑投予受試者，如投予一、三或六個(gè)月的注射型或生物可分解性質(zhì)的材料及方法。本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員在不需詳述下即能通過上述說明實(shí)施本發(fā)明，以下實(shí)施例僅需以說明內(nèi)容即能推斷，不限于任何形式的揭示。所有本發(fā)明引用的出版物皆并入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)。實(shí)施例1抗介白素-19抗體IBBl抑制乳癌細(xì)胞增生人類MCF-7及小鼠4T1乳癌細(xì)胞系在含有胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)16小時(shí)。接著，將2X105個(gè)MCF-7或4T1細(xì)胞種殖并培養(yǎng)于一含有2%FBS的培養(yǎng)基中M小時(shí)，其中此培養(yǎng)基含有PBS、人類介白素-19(用于MCF-7細(xì)胞，含量為200或400μg/mL)、小鼠介白素-19(用于4T1細(xì)胞，含量為200或400μg/mL)、抗體IBBl(8μg/mL)、或介白素-19及抗體IBBl的混合物(110)。而后，將細(xì)胞置于一含有3-，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑氮溴化物(3-，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium13bromide,MTT)(lmg/ml；Sigma-AIdrich)中培養(yǎng)3小時(shí)。將二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMS0)添加至培養(yǎng)機(jī)中，并在500nm下測(cè)量吸收值。在此，是以FBS(10%)(Sigma-Aldrich)作為正控制組。如圖1所示，人類介白素-19及小鼠介白素-10會(huì)分別誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞及4T1細(xì)胞增生，且呈現(xiàn)劑量依賴性。此外，抗介白素-19抗體IBBl則可成功抑制乳癌細(xì)胞增生。實(shí)施例2以抗體IBBl治療乳癌抗介白素-19抗體IBBl對(duì)于帶有乳癌的小鼠存活效果研究如下所述。將小鼠乳癌細(xì)胞4T1于適當(dāng)條件下培養(yǎng)、收集、并于PBS再懸浮，得到最終濃度為2X105/100μL。先將6周大雌鼠BALB/c給予戊巴比妥(pentobarbital)進(jìn)行普通麻醉(以小鼠體重的50mg/kg比率給予)，再將4T1細(xì)胞(2Χ105/100μL)以注射器(29gauge,BDUltra-Fine；BectonDickinson)，直接注射于6周大雌鼠BALB/c的左心室(leftventricle)。將每只小鼠隨機(jī)分為三組(n=6/組)，每一組是以每周三次注射載體(PBS)、控制小鼠抗體(mIgG，10mg/kg)、或抗體lBBl(10mg/kg)。未注射有4T1細(xì)胞的小鼠是作為健康控制組。每天測(cè)量三組及健康控制組的存活率直到實(shí)驗(yàn)終了。本實(shí)施例所得到的結(jié)果顯示，以抗體IBBl處理的第三組小鼠存活率遠(yuǎn)高于分別以PBS或mlgG處理的第一組或第二組小數(shù)，如圖2所示。此外，亦觀察抗體IBBl治療乳癌腫瘤生長的效果。小鼠癌細(xì)胞4T1OXIO6細(xì)胞)是注射于小鼠的乳腺脂肪護(hù)墊(mammaryfatpads)，以使腫瘤生長。而后，通過皮下注射，將PBS(控制組)、抗體IBBl(15mg/kg)、或小鼠控制組抗體mlgG(15mg/kg)以每周三次注射至小鼠。于腫瘤細(xì)胞注射三十天后，犧牲小鼠且收集并測(cè)量腫瘤的重量。如圖3所示，以IBBl處理的小鼠其腫瘤重量遠(yuǎn)低于以PBS處理或以mlgG處理小鼠的腫瘤重量(P<0.05)。其它實(shí)施例本說明書中揭示的所有特征可以任何組合方式合并，且本說明書中所揭示的特征可被相同、相當(dāng)、或類似目的的另一種特征所取代。因此，除非有其它特別的敘述，否則所揭示的各個(gè)特征僅為一般的相當(dāng)或類似特征的實(shí)例。上述實(shí)施例僅為了方便說明而舉例而已，本發(fā)明所主張的權(quán)利范圍自應(yīng)以申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍所述為準(zhǔn)，而非僅限于上述實(shí)施例。權(quán)利要求1.一種治療乳癌的醫(yī)藥組成物，包括一有效劑量的抗-介白素19抗體。2.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一人類化抗體、一嵌合抗體、一天然抗體或其抗原結(jié)合片段。3.如權(quán)利要求2所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一重鏈變異區(qū)及一輕鏈變異區(qū)，其中該重鏈變異區(qū)包含SEQIDNO:2序列中所有互補(bǔ)性決定區(qū)，而該輕鏈變異區(qū)包含SEQIDNO6序列中所有互補(bǔ)性決定區(qū)。4.如權(quán)利要求3所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一包含SEQIDNO2序列的重鏈變異區(qū)、以及一包含SEQIDNO6序列的輕鏈變異區(qū)。5.如權(quán)利要求4所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一嵌合抗體或一單鏈抗體。6.如權(quán)利要求4所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一單株抗體IBBl或其抗原結(jié)合片段。7.如權(quán)利要求2所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為衍伸自單株抗體IBBl的人類化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體。8.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組成物，其中，該醫(yī)藥組成為一治療乳癌轉(zhuǎn)移的醫(yī)藥組成物。9.如權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一人類化抗體、一嵌合抗體、一單鏈抗體、一天然抗體或其抗原結(jié)合片段。10.如權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一重鏈變異區(qū)、及一輕鏈變異區(qū)，其中該重鏈變異區(qū)包含SEQIDNO:2序列中所有互補(bǔ)性決定區(qū)，而該輕鏈變異區(qū)包含SEQIDNO:6序列中所有互補(bǔ)性決定區(qū)。11.如權(quán)利要求10所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體包括一包含SEQIDNO2序列的重鏈變異區(qū)、以及一包含SEQIDNO6序列的輕鏈變異區(qū)。12.如權(quán)利要求11所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一嵌合抗體或一單鏈抗體。13.如權(quán)利要求11所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為一單株抗體IBBl或其抗原結(jié)合片段。14.如權(quán)利要求9所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體為衍伸自單株抗體IBBl的人類化抗體、嵌合抗體或單鏈抗體。15.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組成物，其中，包括一有效劑量的抗-介白素20抗體。16.如權(quán)利要求15所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素20抗體為一單株抗體7E、其抗原結(jié)合片段或一衍伸自單株抗體7E的基因工程抗體。17.如權(quán)利要求15所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素20抗體與該抗-介白素19抗體形成一雙專一性復(fù)合物。18.如權(quán)利要求17所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素20抗體及該抗-介白素19抗體為Fab片段。19.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組成物，其中，包括一有效劑量的抗-介白素20R1抗體。20.如權(quán)利要求19所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素20R1抗體為一單株抗體、其抗原結(jié)合片段或一衍伸自單株抗體的基因工程抗體。21.如權(quán)利要求19所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素20R1抗體與該抗-介白素19抗體形成一雙專一性復(fù)合物。22.如權(quán)利要求21所述的醫(yī)藥組成物，其中，該抗-介白素19抗體及該抗-介白素20R1抗體為Fab片段。全文摘要本發(fā)明是有關(guān)于一種利用抗介白素-19抗體治療乳癌的醫(yī)藥組成物，其可單獨(dú)使用、或與抗介白素-20抗體及/或抗介白素-20R1抗體合并使用。文檔編號(hào)A61P35/00GK102343089SQ201110221199公開日2012年2月8日申請(qǐng)日期2011年8月3日優(yōu)先權(quán)日2010年8月3日發(fā)明者張明熙申請(qǐng)人:張明熙