專利名稱：用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液及其制備方法。
背景技術(shù)：
當(dāng)前人口老齡化已經(jīng)成為一種世界性的趨勢(shì)，中國(guó)的老齡化問(wèn)題更加突出。據(jù)統(tǒng)計(jì)，從1999年開(kāi)始我國(guó)已經(jīng)提前進(jìn)入了老齡化社會(huì)，目前正是老齡化發(fā)展的快速時(shí)期。當(dāng)前我國(guó)的老齡化人口為1. 3億，2015年老年人口將突破2億人。2027年將超過(guò)3億人，2044 年將達(dá)到4億人。人一旦進(jìn)入老年，身體的各個(gè)組織結(jié)構(gòu)和生理水平都將發(fā)生重大變化，適應(yīng)環(huán)境的能力將減弱，免疫力降低。與此同時(shí)我們也看到隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們生活水平得到不斷提高，生活工作步伐也不斷加快，尤其是城市節(jié)奏的加快，讓人身心相當(dāng)?shù)钠v。相當(dāng)一部分中青年人處于亞健康狀態(tài)，免疫力下降。如何提高人們的免疫力，增強(qiáng)體質(zhì)是整個(gè)社會(huì)都在關(guān)注的問(wèn)題。基于這一點(diǎn)市面上出現(xiàn)了很多保健口服液，多數(shù)保健口服液中含有添加劑和防腐劑，對(duì)人們的身體帶來(lái)不利影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種以天然植物為原料，不含任何添加劑，人體吸收快的用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液及其制備方法。本發(fā)明提供的這種用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液，按重量份計(jì)其原料組份是
靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=(8-12) (3. 5-10. 5) (2-6) (1-5) 本發(fā)明保健口服液的藥理功效
(1)本保健口服液中的總多糖，主要為靈芝多糖，具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、強(qiáng)心、降壓、 改善內(nèi)臟循環(huán)、抑制血小板聚集、鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、保肝護(hù)肝、降血糖、抗炎、抗損傷、抗衰老、抗突變、抗輻射、抗病毒、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用；
(2)本保健口服液中的總黃酮，有消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老等功能；
(3)經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明a、經(jīng)口給予小鼠30天的喂養(yǎng)，分5.0ml/kg-bwU0. 0ml/kg-bw, 20. 0ml/kg · bw三個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較能提高小鼠的半數(shù)溶血值、抗體生成細(xì)胞數(shù)、單核-巨噬細(xì)胞碳廓清、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的能力。對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)、腺體體重比值、ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力、NK細(xì)胞的活性均無(wú)明顯影響。結(jié)果表明有增強(qiáng)免疫力的保健功能；b、經(jīng)口給予小鼠30天的喂養(yǎng)，分5. Oml/kg · bw、 10. 0ml/kg · bw、20. Oml/kg · bw 三個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，10. 0ml/kg · bw、20. 0ml/kg · bw 劑量組能明顯延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間(P < 0. 05) ；10. Oml/kg · bw劑量組能顯著降低小鼠運(yùn)動(dòng)后的血清尿素水平、降低運(yùn)動(dòng)后小鼠血乳酸曲線下面積(P < 0. 05)。結(jié)果表明有緩解體力疲勞的保健功能；c、表觀吸收率大大高于對(duì)照組，說(shuō)明吸收效果好。因此本發(fā)明保健口服液具有增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的功效。同時(shí)本發(fā)明原料來(lái)源廣泛，菌類養(yǎng)殖工序簡(jiǎn)單、對(duì)環(huán)境無(wú)污染，可以規(guī)?；⒐I(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明還提供了所述保健口服液的制備方法，包括以下步驟
(1).取靈芝菌絲體洗凈，破碎備用；茯苓洗凈，切成丁狀；
(2).將破碎的靈芝菌絲體和洗凈的茯苓丁、杜仲葉、菟絲子放入中藥提取罐中，加水浸泡，然后煎提過(guò)濾，獲得一次濾液于另貯罐冷卻；
(3).將步驟(2)的濾渣加水煎提，過(guò)濾，獲得二次濾液；
(4).將一次濾液與二次濾液合并，然后濃縮至相對(duì)密度約為1.1，熱測(cè)溫度為 60-65 °C，獲得濃縮液；
(5).將步驟(4)獲得的濃縮液用高速管式離心機(jī)離心；
(6).將離心后的上清液用無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾，然后冷藏；
(7).用濾紙多層精濾，然后分裝，滅菌，獲得本保健口服液。本發(fā)明方法保證了本保健口服液的有效成分和功效，使人們服用本保健口服液能達(dá)到預(yù)期效果。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明保健口服液在原料組分為如下范圍內(nèi)的任意配比均可制得 靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=(8-12) (3.5-10.5) :(2-6) :(1-5)。以下給出了四個(gè)實(shí)施方式，來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明保健口服液及其制備方法。實(shí)施方式一
(1).原料準(zhǔn)備精選靈芝菌絲體和茯苓，按照下列重量份計(jì)的比例稱量各原料 靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=8: 3.5 6:5;
(2).將靈芝菌絲體洗凈，破碎備用；茯苓洗凈，切成丁狀；
(3).將破碎的靈芝菌絲體和丁狀的茯苓杜仲葉、菟絲子放入中藥提取罐中，加原料8 倍水浸泡1小時(shí)；
(4).將步驟(3)的浸泡液連同原料一起在100°C下，煎提2小時(shí)，過(guò)濾，獲得一次濾液，并將該濾液置于另一貯罐冷卻；
(5).將步驟(4)的濾渣加原料6倍水，100°C下，煎提1.5小時(shí)，過(guò)濾，獲得二次濾液， 將一次濾液與二次濾液合并；
(6).步驟(5)合并后的濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.1 (熱測(cè)6(T65°C)；
(7).將步驟(6)獲得的濃縮濾液用高速管式離心機(jī)離心(離心速度為16000r/min);
(8).將離心后的上清液用無(wú)機(jī)陶瓷膜(孔徑0.45 μ m)過(guò)濾，然后冷藏M小時(shí)；
(9).用濾紙多層精濾，得到保健口服液，檢測(cè)其粗多糖含量為1.8g/100ml；總黃酮含量為:0. 4g/100ml ；
(10).將步驟9獲得的保健口服液分裝到棕色鎖口玻璃瓶中，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌 (0. 14Mpa, 12rC，30min)。棕色鎖口玻璃瓶已經(jīng)超聲波洗瓶機(jī)洗凈、170°C烘干、滅菌的，瓶型大小可為 IOml,20ml,60ml, 120ml,240ml 等。實(shí)施方式二
(1).原料準(zhǔn)備精選靈芝菌絲體和茯苓，按照下列重量份計(jì)的比例稱量各原料 靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=12: 10.5 2:1;(2).將靈芝菌絲體洗凈，破碎備用；茯苓洗凈，切成丁狀；
(3).將破碎的靈芝菌絲體和丁狀的茯苓杜仲葉、菟絲子放入中藥提取罐中，加原料8 倍水浸泡1小時(shí)；
(4).將步驟(3)的浸泡液連同原料一起在100°C下，煎提1.5小時(shí)，過(guò)濾，獲得一次濾液，并將該濾液置于另一貯罐冷卻；
(5).將步驟(4)的濾渣加原料6倍水，100°C下，煎提1.5小時(shí)，過(guò)濾，獲得二次濾液， 將一次濾液與二次濾液合并；
(6).步驟(5)合并后的濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.1(熱測(cè)6(T65°C);
(7).將步驟(6)獲得的濃縮濾液用高速管式離心機(jī)離心(離心速度為16000r/min);
(8).將離心后的上清液用無(wú)機(jī)陶瓷膜(孔徑0.45 μ m)過(guò)濾，然后冷藏M小時(shí)；
(9)用濾紙多層精濾，即得到本發(fā)明所述保健口服液，
檢測(cè)其粗多糖含量為2. 8g/100ml ；總黃酮含量為0. lg/100ml ；
(10).將步驟9獲得的保健口服液分裝到棕色鎖口玻璃瓶中，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。實(shí)施方式三
(1).原料準(zhǔn)備精選靈芝菌絲體和茯苓，按照下列重量份計(jì)的比例稱量各原料 靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=12: 10.5 6:5;
(2).將靈芝菌絲體洗凈，破碎備用；茯苓洗凈，切成丁狀；
(3).將破碎的靈芝菌絲體和丁狀的茯苓杜仲葉、菟絲子放入中藥提取罐中，加原料8 倍水浸泡1小時(shí)；
(4).將步驟(3)的浸泡液連同原料一起在110°C下，煎提1小時(shí)，過(guò)濾，獲得一次濾液，并將該濾液置于另一貯罐冷卻；
(5).將步驟(4)的濾渣加原料6倍水，100°C下，煎提1.5小時(shí)，過(guò)濾，獲得二次濾液， 將一次濾液與二次濾液合并；
(6).步驟(5)合并后的濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.1(熱測(cè)6(T65°C);
(7).將步驟(6)獲得的濃縮濾液用高速管式離心機(jī)離心(離心速度為16000r/min);
(8).將離心后的上清液用無(wú)機(jī)陶瓷膜(孔徑0.45 μ m)過(guò)濾，然后冷藏M小時(shí)；
(9)用濾紙多層精濾，即得到本發(fā)明所述保健口服液，
檢測(cè)其粗多糖含量為2. 4g/100ml ；總黃酮含量為0. 25g/100ml ； (10 ).將步驟9獲得的保健口服液分裝到棕色鎖口玻璃瓶中，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。實(shí)施方式四
(1).原料準(zhǔn)備精選靈芝菌絲體和茯苓，按照下列重量份計(jì)的比例稱量各原料 靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=10: 7.5 43；
(2).將靈芝菌絲體洗凈，破碎備用；茯苓洗凈，切成丁狀；
(3).將破碎的靈芝菌絲體和丁狀的茯苓杜仲葉、菟絲子放入中藥提取罐中，加原料8 倍水浸泡1小時(shí)；
(4).將步驟(3)的浸泡液連同原料一起在90°C下，煎提2小時(shí)，過(guò)濾，獲得一次濾液，并將該濾液置于另一貯罐冷卻；
(5).將步驟(4)的濾渣加原料6倍水，100°C下，煎提1.5小時(shí)，過(guò)濾，獲得二次濾液， 將一次濾液與二次濾液合并；(6).步驟(5)合并后的濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.1 (熱測(cè)6(T65°C)；
(7).將步驟(6)獲得的濃縮濾液用高速管式離心機(jī)離心(離心速度為16000r/min);
(8).將離心后的上清液用無(wú)機(jī)陶瓷膜(孔徑0.45 μ m)過(guò)濾，然后冷藏M小時(shí)；
(9)用濾紙多層精濾，即得到本發(fā)明所述保健口服液，
其粗多糖含量為2. 5g/100ml ；總黃酮含量為0. 3g/100ml ；
(10).將步驟9獲得的保健口服液分裝到棕色鎖口玻璃瓶中，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。以下是從幾個(gè)方面對(duì)本發(fā)明所述保健口服液的增強(qiáng)免疫力的效果評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn) (一).實(shí)驗(yàn)一
1材料和方法
1. 1樣品即本發(fā)明所述保健口服液由湖南森康生物技術(shù)有限公司提供，為棕褐色口服液，人口服推薦量為60ml/人/天。1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供的清潔級(jí)昆明種雄性小鼠120只，體重為18g 22g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(湘M003-0003。 每40只分為1組，共三組。免疫I組，進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)；免疫II組，進(jìn)行臟體比值測(cè)定、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、半數(shù)溶血值(HC5tl)的測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)的測(cè)定；免疫III組，進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞的活性測(cè)定。1. 3實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件溫度23°C 25°C，濕度54% 68%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為 SYXK (湘)2003-0002。1. 4劑量選擇及樣品處理?yè)?jù)人體口服推薦量，相當(dāng)于每日1. Oml/kg *bw，設(shè)本發(fā)明保健口服液低、中、高劑量分別為5. 0ml/kg-bwU0. 0ml/kg-bw,20. Oml/kg · bw (分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、20倍)。取樣品加蒸餾水配至所需濃度，對(duì)照組予以等體積的蒸餾水，分別給予受試動(dòng)物灌胃，每天灌胃一次，灌胃體積為0. 2ml/10g · bw，連續(xù)30天。1. 5主要儀器與試劑動(dòng)物臺(tái)秤、分析天平、潔凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、722分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、液體閃爍儀、酶標(biāo)儀、顯微鏡等。無(wú)菌手術(shù)器械、游標(biāo)卡尺、微量注射器、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、M孔和96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板，96孔U型細(xì)胞培養(yǎng)板、玻璃平皿、紗布、試管、玻片架、200目篩網(wǎng)、計(jì)時(shí)器、血色素吸管、 載玻片等。綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、Hank's液(pH7. 2-7. 4)、RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、青鏈霉素、ConA, 1%冰醋酸，lmol/L的HCL溶液酸性異丙醇(96mL異丙醇加lmol/L的 HCL溶液細(xì)1)、補(bǔ)體(豚鼠血清)、SA緩沖液、其瓊脂糖、都氏試劑、YAC-I細(xì)胞、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶1、0. 2mol/L的1Tris-HCL緩沖液、1%的NP40、 印度墨汁、0. 1%的碳酸鈉、雞紅細(xì)胞、甲醇、Giemsa染液等。1.6實(shí)驗(yàn)方法
1.6. 1臟器/體重比值測(cè)定稱重后處死小鼠，取出脾臟和胸腺，在電子分析天平上稱重，計(jì)算臟/體比值。1.6.2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)(足跖增厚法)
小鼠腹腔注射洲(v/v) SRBC (O.aiil/每鼠)致敏后4天，測(cè)量左后足跖厚度，然后在測(cè)量部位皮下注射20% (v/v)SRBC (20ul/每鼠)，于注射后24h測(cè)量左后足跖部厚度，同一部位測(cè)量三次，取平均值。以攻擊前后足跖厚度差值(足跖腫脹度)來(lái)表示DTH的程度。
1. 6. 3 ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法)
無(wú)菌取脾，置于盛有適量無(wú)菌Hank’ s液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過(guò)濾。用Hank’ s液洗3次，每次離心10分鐘(lOOOrpm)。然后將細(xì)胞懸浮于2mL完全培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5 X IO6個(gè)/mL。再將細(xì)胞懸液分兩孔加入M孔培養(yǎng)板中，每孔lmL，在其中一孔加50μ ΧοηΑ液(相當(dāng)于5Pg/mL)，另一孔作為對(duì)照，置5% 二氧化碳，37°C培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0. 7mL，加入不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5mg/mL)5(^L/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后將此液體用酶標(biāo)儀測(cè)定，波長(zhǎng)570nm。淋巴細(xì)胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表不。1. 6. 4抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jerne改良玻片法)
取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心(2000r/min)10min，將壓積SRBC用生理鹽水配成洲(￥八)的細(xì)胞懸液，每鼠腹腔注射O.aiil。將免疫后4天的小鼠處死，取脾，輕輕撕碎， 用Hank’ s液制成細(xì)胞懸液，200目篩網(wǎng)過(guò)濾，洗滌、離心2次，最后將細(xì)胞懸浮在5ml Hank's 液中。將表層培養(yǎng)基加熱溶解后與等量的PH7. 4、2倍濃度的Hank’ s液混合，分裝小試管， 每管0. 5ml，再向管內(nèi)加入用SA液配置的10%SRBC50ul (v/v)、20ul脾細(xì)胞懸液，迅速混勻后傾倒于已刷薄層瓊脂糖的玻片上，待瓊脂糖凝固后將玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后用SA液稀釋的補(bǔ)體(1:10)加入到玻片凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育 1. 后計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。1.6.5半數(shù)溶血值(HC5tl)的測(cè)定
取羊血，用生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射m (ν/ν,用生理鹽水配制)壓積 RBCO. 2mL進(jìn)行免疫。5天后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置約lh，將凝固血與管壁剝離，使血清充分析出，2000rpm離心lOmin，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為200倍，取ImL 置試管內(nèi)，依次加入10% (v/v，用SA緩沖液配制)壓積SRBCO. 5mL,補(bǔ)體ImL (用SA緩沖液按1:10稀釋)。另設(shè)不加血清的對(duì)照管(以SA緩沖液代替)。置37°C恒溫水浴中保溫30min 后，冰浴終止反應(yīng)。2000rpm離心lOmin，取上清lmL，加都氏試劑3mL。同時(shí)取10%(v/v，用 SA緩沖液配制)壓積SRBCO. 25mL，加都氏試劑至4mL于另一試管中，充分混勻，放置IOmin 后，與MOnm處以對(duì)照管作空白，分別測(cè)定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC5tl) 表示，按下式計(jì)算
半數(shù)溶血值(HC5tl)=樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值X稀釋倍數(shù) 1.6.6小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
小鼠尾靜脈注射以生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射0. ImL,墨汁注入后立即計(jì)時(shí)，于注入墨汁后第2、10min，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20ul，加入到^iil Na2CO3溶液中，搖勻。以Na2CO3溶液作空白對(duì)照，用722型分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處比色側(cè)光密度值 (OD)0將小鼠處死，取肝、脾，稱重，計(jì)算吞噬指數(shù)a。1.6.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)
小鼠腹腔注射20%(￥八，用生理鹽水配制)壓積的雞紅細(xì)胞(2000印111，IOmin)懸液lmL， 間隔30min，頸椎脫臼處死，取腹腔巨噬細(xì)胞洗液lmL，滴于載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細(xì)胞。晾干，以甲醇丙酮(1:1)固定，4% (v/v) Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計(jì)數(shù)，每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)
吞噬率％ =吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100 吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù) 1. 6. 8 NK細(xì)胞活性的測(cè)定(同位素3H-TdR測(cè)定法)
取傳代后24h生長(zhǎng)良好的YAC-I細(xì)胞(存活率> 95%)按IX 106mL YAC-I細(xì)胞懸液加 3H-TdRlOP Ci進(jìn)行標(biāo)記，于37°C，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h，每30min振蕩1次，標(biāo)記后的細(xì)胞用培養(yǎng)液洗滌3次，重懸于培養(yǎng)液中，使細(xì)胞濃度為IXlO5個(gè)/mL。受試小鼠頸椎脫臼處死，無(wú)菌取脾，制成脾細(xì)胞懸液，用Hank’ s液洗3次，每次IOOOrpm離心lOmin，再用 2mL含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液懸浮，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)(活細(xì)胞數(shù)應(yīng)在95%以上)，調(diào)整細(xì)胞濃度為1 X IO7個(gè)/mL。在96孔板中每孔加ΙΟΟμ L標(biāo)記的靶細(xì)胞，試驗(yàn)孔加 100μ L效應(yīng)細(xì)胞，空白對(duì)照孔加100μ L培養(yǎng)液，最大釋放孔加100μ LTriton X-IOO0每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔，置5% 二氧化碳，37°C培養(yǎng)4h。用多頭細(xì)胞取集器取集于玻璃纖維濾紙上， 用液閃儀測(cè)定每分鐘脈沖數(shù)(cpm )。NK細(xì)胞活性=(1-實(shí)驗(yàn)孔cpm/ (空白對(duì)照孔cpm-最大釋放孔cpm)) X 100%
1.7實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用Excel、Spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2 結(jié)果
2.1本發(fā)明保健口服液對(duì)小鼠體重的影響，見(jiàn)表1-表4
.表1各組小鼠的初始體重(χ 士幻
權(quán)利要求
1.一種用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液，按重量份計(jì)其原料組份是靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=(8-12) (3.5-10.5) :(2-6) :(1-5)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液，其特征是按重量份計(jì)其原料組份是靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=10:7. 5:4:3。
3.—種權(quán)利要求1或2所述用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液的制備方法， 包括以下步驟(1).取靈芝菌絲體洗凈，破碎備用；茯苓洗凈，切成丁狀；(2).將破碎的靈芝菌絲體和洗凈的茯苓丁、杜仲葉、菟絲子放入中藥提取罐中，加水浸泡，然后煎提過(guò)濾，獲得一次濾液于另貯罐冷卻；(3).將步驟(2)的濾渣加水煎提，過(guò)濾，獲得二次濾液；(4).將一次濾液與二次濾液合并，然后濃縮至相對(duì)密度約為1.1，熱測(cè)溫度為 60-65 °C，獲得濃縮液；(5).將步驟(4)獲得的濃縮液用高速管式離心機(jī)離心；將離心后的上清液用無(wú)機(jī)陶瓷膜過(guò)濾，然后冷藏；用濾紙多層精濾，然后分裝，滅菌，獲得本保健口服液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的保健口服液制備方法，其特征在于步驟(2)煎提時(shí)間1-2小時(shí)，溫度90-1IO0C ；步驟(3)煎提時(shí)間1-2小時(shí)，溫度IOO-IlO0C0
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的保健口服液制備方法，其特征在于步驟(2)加原料8倍水浸泡1小時(shí)，步驟(3)加原料6倍的水煎提。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于增強(qiáng)免疫力緩解體力疲勞的保健口服液及其制備方法，所述保健口服液的按重量份計(jì)其原料組份是靈芝菌絲體茯苓菟絲子杜仲葉=(8-12):(3.5-10.5)(2-6)(1-5)。制備方法主要是煎提、過(guò)濾、分裝、滅菌。本發(fā)明保健口服液能增強(qiáng)增強(qiáng)免疫力，緩解體力疲勞，適合于老年人和亞健康狀態(tài)的年輕人。
文檔編號(hào)A61K9/00GK102283883SQ20111022202
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月4日
發(fā)明者劉安球, 張國(guó)洪, 張志光, 張景元, 李政委, 楊大偉, 鐘麗萍, 黃紹均 申請(qǐng)人:湖南森康生物技術(shù)有限公司