專利名稱：一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別涉及一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物組合物。
背景技術(shù)：
創(chuàng)面愈合是外科學(xué)中的常見(jiàn)問(wèn)題，由于傷口愈合不良消耗的醫(yī)療費(fèi)用巨大。進(jìn)一步改善治療措施，在病人手術(shù)后減速其傷口的愈合以縮短療程，降低醫(yī)療費(fèi)用是當(dāng)務(wù)之急。生長(zhǎng)因子是生物體細(xì)胞增殖、分化、成熟的調(diào)控依賴多種活性蛋白質(zhì)、多肽分子。 生長(zhǎng)因子直接調(diào)節(jié)正常創(chuàng)傷修復(fù)的許多關(guān)鍵步驟，包括炎性細(xì)胞趨向性遷移，成纖維細(xì)胞、 角化細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖，新生血管的形成，細(xì)胞間質(zhì)成分的合成和降解。它可以促進(jìn)與創(chuàng)傷修復(fù)有關(guān)的細(xì)胞迅速增殖和分化，誘導(dǎo)炎性細(xì)胞向創(chuàng)傷部位移動(dòng)，能有效促進(jìn)新生血管形成，加速創(chuàng)面肉芽組織生成和上皮細(xì)胞增殖，并能有效改善創(chuàng)面微循環(huán)和組織營(yíng)養(yǎng)狀況，改善修復(fù)組織的結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度，從而縮短創(chuàng)面愈合的時(shí)間，改善創(chuàng)傷組織的愈合質(zhì)量。生長(zhǎng)因子傳統(tǒng)的應(yīng)用方法是將生長(zhǎng)因子配成溶液噴灑于創(chuàng)面，其長(zhǎng)處是生長(zhǎng)因子能與修復(fù)組織快速而均勻地結(jié)合發(fā)揮作用，但由于溶液的流失和蒸發(fā)，在一定程度上限制了生長(zhǎng)因子與修復(fù)細(xì)胞的結(jié)合。生長(zhǎng)因子雖然具有促進(jìn)傷口愈合的作用，但由于其活性較弱，半衰期也很短，僅有幾個(gè)小時(shí)或更短，臨床效果不能令人滿意。纖維蛋白膠(fibrin glue, TO)，又稱纖維蛋白粘合劑或者纖維蛋白封閉劑 (fibrin sealant, FS)，是一種從人或者動(dòng)物血漿中提取的生物制品，主要由凝血酶/鈣離子和纖維蛋白原/XIII因子等組成。它模仿血液凝固的最后階段，即在凝血酶和鈣離子的作用下，纖維蛋白原分子激活，裂解出纖維蛋白肽A和肽B，形成纖維蛋白單體，同時(shí)激活因子參與纖維蛋白的交叉聯(lián)結(jié)，使纖維蛋白固化物形成。纖維蛋白膠主要具有控制出血、組織粘合/封閉、縫合支持、傳遞藥物、抑菌、防止組織粘連六大功能。止血效果優(yōu)于凝血酶和常規(guī)紗布處理，特別是對(duì)急性動(dòng)脈出血優(yōu)勢(shì)更明顯。然而因纖維蛋白膠促進(jìn)傷口愈合的速度和療效均不夠好，仍不能解決病人手術(shù)后傷口愈合時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題。申請(qǐng)?zhí)?00510038463. 8，發(fā)明名稱能夠促進(jìn)腹腔感染條件下腸組織愈合的復(fù)配藥的申請(qǐng)文獻(xiàn)公開(kāi)了一種由纖維蛋白膠和生長(zhǎng)激素復(fù)配而成的藥物。從該文獻(xiàn)可知，因生長(zhǎng)激素和纖維蛋白膠均具有促進(jìn)傷口愈合的作用，與單獨(dú)使用纖維蛋白膠相比，同時(shí)使用生長(zhǎng)激素和纖維蛋白膠可以更好地促進(jìn)腸組織愈合。同時(shí)，由于生長(zhǎng)因子的種類繁多，不同生長(zhǎng)因子的理化性質(zhì)不同，僅根據(jù)生長(zhǎng)激素可以與纖維蛋白膠組合不能得知所有的生長(zhǎng)因子均可以與纖維蛋白膠組合使用。角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-l(keratinocyte growthfactor-2，KGF-1)是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族的一員，其生物學(xué)功能研究結(jié)果顯示=KGF-I在體外不僅能夠促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，而且對(duì)其凋亡具有抑制作用，還對(duì)細(xì)胞的移行具有影響。KGF-I與其他FGF家族成員不同之處在于它僅作用于上皮細(xì)胞，而不作用于成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，其藥理作用比較專一，選擇性好，主要用于促進(jìn)淺表的創(chuàng)面組織的傷口愈合，而且效果優(yōu)于其他生長(zhǎng)因子。動(dòng)物模型研究表明，KGF-I在促進(jìn)皮膚創(chuàng)口愈合，預(yù)防放療引起的粘膜炎，以及治療潰瘍和腸炎等方面都有顯著療效。目前，沒(méi)有將角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1與纖維蛋白膠組合用于促進(jìn)創(chuàng)面愈合的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種新的促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物組合物。本發(fā)明提供了一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物組合物，它包含角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠的用量配比為每Irnl纖維蛋白膠中含有 50 200 μ g角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1 ；所述纖維蛋白膠是纖維蛋白原在凝血酶、第VIII因子和Ca2+催化下制備而成的，其中，每Iml纖維蛋白膠由20 30mg纖維蛋白原、160IU凝血酶、4 20IU第VIII因子、0. 06 0. 18mol Ca2制備而成。所述纖維蛋白膠每Iml由25mg纖維蛋白原、160IU凝血酶、12IU第VIII因子、 0. 12mol Ca2制備而成。所述角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠的用量配比為每Iml纖維蛋白膠中含有 100 μ g角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1。本發(fā)明還提供了一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物制劑，它是以權(quán)利要求1 3任意一項(xiàng)所述的角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的藥物制劑；所述輔料包含油酸鈉，十二烷基硫酸鈉，膽酸鈉或者硬脂酸鈉中的一種或兩種以上的混合。所述輔料為膽酸鈉。所述膽酸鈉與角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1的摩爾比為0. 5 4 1。所述膽酸鈉與角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1的摩爾比為2 1。所述制劑為外用制劑，優(yōu)選為噴霧劑、涂膜劑。本發(fā)明最后提供了一種制備前述藥物制劑的方法，它包含如下步驟a、稱取角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子、Ca2+和藥學(xué)上可接受的輔料；b、將角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、輔料、纖維蛋白原和第VIII因子溶于0. 6ml無(wú)菌水/ 生理鹽水中，混合，得主體膠溶液；C、將凝血酶和Ca2+溶于0. 6ml無(wú)菌水/生理鹽水中，得催化劑溶液；d、將步驟b所得主體膠溶液與步驟c所得催化劑溶液混勻，即得Iml所述藥物組合物。本發(fā)明最后提供了前述藥物組合物在制備促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物中的用途。本發(fā)明提供的藥物組合物可促進(jìn)創(chuàng)面組織快速愈合，提高創(chuàng)面組織蛋白含量和創(chuàng)面組織中羥脯氨酸含量，可用于制備促進(jìn)創(chuàng)面恢復(fù)的藥物。顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1本發(fā)明藥物組合物中纖維蛋白膠和KGF-I的配比對(duì)傷口殘留面積百分比的影響圖2本發(fā)明藥物組合物中纖維蛋白膠和KGF-I的配比對(duì)創(chuàng)面組織蛋白含量的影響圖3本發(fā)明藥物組合物中纖維蛋白膠和KGF-I的配比對(duì)創(chuàng)面組織羥脯氨酸含量的影響圖4不同輔料對(duì)本發(fā)明藥物釋放速度的影響圖5不同含量的輔料對(duì)本發(fā)明藥物釋放速度的影響，右側(cè)比例表示表示膽酸鈉與 KGF-I的摩爾比，如，0. 5 1表示膽酸鈉與KGF-I的摩爾比0.5 1圖6本發(fā)明藥物協(xié)同增效實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖7本發(fā)明藥物協(xié)同增效實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖8本發(fā)明藥物協(xié)同增效實(shí)驗(yàn)結(jié)果
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明藥物組合物的制備1、原料纖維蛋白膠試劑盒(2. 5ml規(guī)格)，廣州倍繡生物工程公司，其中包含纖維蛋白原、 凝血酶、第VIII因子、主體膠溶解液(無(wú)菌液體狀，PH6. 5-8. 0生理鹽水/蒸餾水)和催化劑溶解液(無(wú)菌液體狀態(tài)，含有10-30mg/ml CaCl2的PH6. 5-8. 0的生理鹽水/蒸餾水)。其中，Iml纖維蛋白膠的配比如下主體膠溶液纖維蛋白原20-30mg(優(yōu)選為15mg)，第VIII因子4_20IU(優(yōu)選為 12IU)，主體膠溶解液(無(wú)菌液體狀，PH6. 5-8. 0生理鹽水/蒸餾水0. 6ml)；催化劑溶液凝血酶160IU，催化劑溶解液(無(wú)菌液體狀態(tài)，含有0. 06-0. 18mol CaCl2的PH6. 5-8. 0的生理鹽水/蒸餾水0. 6ml, CaCl2濃度優(yōu)選為0. 12mol)。角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、輔料均為市售品。輔料處理精密稱取膽酸鈉等輔料 lOOmg，加水IOmL水浴超聲溶解，配制成濃度為10mg/mL的儲(chǔ)備液；精密移取ImL儲(chǔ)備液，用水稀釋成濃度適宜的供試液。2、制備方法(1)按照廣州倍繡生物工程公司說(shuō)明書(shū)制備纖維蛋白膠(2. 5ml規(guī)格)取纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子CaCl2 ；取50_75mg纖維蛋白原和10-50IU第VIII因子加入主體膠溶解液(無(wú)菌液體狀， PH6. 5-8. O生理鹽水/蒸餾水1. 5ml)中，振搖，直至主體膠完全溶解，得主體膠溶液；用催化劑溶解液(無(wú)菌液體狀態(tài)，含有10_30mg/ml CaCl2的PH6. 5-8. O的生理鹽水/蒸餾水1. 5ml)溶解400IU凝血酶，得催化劑溶液；取一次性專用雙聯(lián)注射器(其包含雙聯(lián)注射架1件，推桿1件，2ml三件套注射器 2支，復(fù)式注射座(也稱Y型接頭)2件，噴嘴2支，平頭針2支，備用尖頭針2支)，一只專用于抽取主體膠溶液，另一只專用于抽取催化劑溶液，分別卡入推液支架上，將兩注射器錐頭牢固地連接到連接針座上(注意兩注射器內(nèi)的液體體積要相等)，再把噴嘴安裝到連接
5針座的錐頭，檢查無(wú)松動(dòng)滲漏后，同時(shí)推動(dòng)兩支注射器，即得纖維蛋白膠。(2)本發(fā)明藥物組合物的制備方法a、稱取角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子、Ca2+和藥學(xué)上可接受的輔料；b、精密移取膽酸鈉等輔料供試液、100 μ g KGF-I、15mg纖維蛋白原和12IU第VIII 因子加入主體膠溶解液中，振搖，直至主體膠完全溶解，得總體積為0. 6ml的主體膠溶液；
C、用0. 6ml催化劑溶解液溶解400IU凝血酶，得催化劑溶液；d、嚴(yán)格按不含KGF的纖維蛋白膠配制說(shuō)明操作。即取一次性專用雙聯(lián)注射器(其包含雙聯(lián)注射架1件，推桿1件，2ml三件套注射器2支，復(fù)式注射座(也稱Y型接頭)2件， 噴嘴2支，平頭針2支，備用尖頭針2支)，一只專用于抽取含有KGF的主體膠溶液，另一只專用于抽取催化劑溶液，分別卡入推液支架上，將兩注射器錐頭牢固地連接到連接針座上 (注意兩注射器內(nèi)的液體體積要相等)，再把噴嘴安裝到連接針座的錐頭，檢查無(wú)松動(dòng)滲漏后，同時(shí)推動(dòng)兩支注射器，即得Iml本發(fā)明藥物組合物。實(shí)施例2本發(fā)明藥物組合物的配比篩選試驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠(四川大學(xué)華西動(dòng)物中心提供)，體重200g(180-230g)左右，共100 只，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境一周，自由飲水與攝食。100只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為傷后3，7， 10，14，21 d組，每組各有5只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)分組組合物按實(shí)施例1所述方法制備，其中輔料為膽酸鈉，且膽酸鈉和KGF 的復(fù)合摩爾比為2 1。A組每Iml本發(fā)明組合物中角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子_1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII 因子和 Ca2+的配比為 10 μ g 15mg 160IU 12IU 0. 12molB組每Iml本發(fā)明組合物中角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子_1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII 因子和 Ca2+的配比為 50 μ g 15mg 160IU 12IU 0. 12molC組每Iml本發(fā)明組合物中角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII 因子和 Ca2+的配比為 100 μ g 15mg 160IU 12IU 0. 12molD組每Iml本發(fā)明組合物中角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII 因子和 Ca2+的配比為 200 μ g 15mg 160IU 12IU 0. 12mol2、實(shí)驗(yàn)方法(1)造模動(dòng)物經(jīng)腹腔注射10g/L戊巴比妥麻醉后，備皮，背位固定，碘伏消毒，無(wú)菌條件下在背部肩胛稍靠后脊柱兩側(cè)2cm處用特制打孔器切割1個(gè)直徑約1. 5cm的圓形創(chuàng)面，深度及全層皮膚，并破壞少許肌肉組織。(2)給藥將往A、B、C、D四組藥分別噴于不同組大鼠創(chuàng)面上。(3)結(jié)果測(cè)定a、傷口創(chuàng)面的測(cè)定圓形切除全層皮膚后，用消毒的半透明油酸紙貼于創(chuàng)面，沿創(chuàng)緣劃線，再貼于坐標(biāo)紙上計(jì)算所測(cè)面積，作為傷口原始面積。然后于傷后3，7，10，14，21d測(cè)傷口殘留面積，計(jì)算殘留面積百分率=殘留面積/原始面積xioo%。b、創(chuàng)面組織中蛋白含量將創(chuàng)面組織稱重后剪碎，勻漿，將組織勻漿液按Lowry法測(cè)定，結(jié)果以每克創(chuàng)面組織所含蛋白量的毫克數(shù)表示。C、羥脯氨酸測(cè)定將創(chuàng)面組織稱重后剪碎，放入20mL玻璃安瓿中，加入6mol/L鹽酸2mL，封口，置 135攝氏度烤箱內(nèi)水解3. 5h,冷卻后打開(kāi)封口，加入2滴甲基紅指示劑使之呈紅色，用6mol/ L氫氧化鈉2mL中和該液至中性呈微黃色，然后用蒸餾水稀釋至50mL，過(guò)濾，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管內(nèi)分別加入ImL雙蒸水、羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液和創(chuàng)面組織水解液，每管再加入檸檬酸緩沖液0. 5mL、氯氨TlmL，混勻，6min后加高氯酸lmL，6min后再于每管加100g/L對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液lmL，在100攝氏度水浴中加熱;3min，冰水冷卻，分光光度計(jì)上比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管A值，回歸校正曲線，按校正曲線計(jì)算出測(cè)定管的羥脯氨酸含量，再計(jì)算創(chuàng)面組織中羥脯氨酸含量(mg/g)。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論如圖1-3所示，傷口愈合速度、創(chuàng)面組織蛋白含量和創(chuàng)面羥脯氨酸含量從小到大依次為A組< B組< C組< D組。說(shuō)明隨著KGF-I纖維蛋白膠緩釋組合物中KGF-I的量增加，創(chuàng)面愈合速度加快、創(chuàng)面平均愈合時(shí)間顯著縮短、創(chuàng)面蛋白含量和羥脯氨酸均提高，且C 組藥物組合物與D組藥物組合物的療效無(wú)顯著差異。因此，KGF-I纖維蛋白膠緩釋組合物的最優(yōu)復(fù)配比為角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子和Ca2+的配比為 IOOyg 15mg 160IU 12IU 0. 12mol。實(shí)施例3緩釋輔料的篩選實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料油酸鈉，十二烷基硫酸鈉，膽酸鈉，硬脂酸鈉，市售品。分別精密稱取油酸鈉，十二烷基硫酸鈉，膽酸鈉和硬脂酸鈉各50mg，組合物按實(shí)施例1所述方法制備，其中，每Iml本發(fā)明組合物中角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-I、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子和Ca2+的配比為 IOOyg 15mg 160IU 12IU 0. 12mol。2、實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例2所述方法。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖4為含有不同輔料的KGF-I纖維蛋白膠組合物的體外累積釋放曲線，往KGF-I 纖維蛋白膠組合物中加入輔料能減小藥物突釋，減慢藥物的釋放速度，延長(zhǎng)纖維蛋白膠藥物的釋放時(shí)間，其中KGF-I與硬脂酸鈉和膽酸鈉復(fù)合后KGF-I的釋放速度最緩慢，綜合考慮 KGF-I的釋放速度和輔料的毒性，KGF-I纖維蛋白膠組合物的最佳輔料為膽酸鈉。實(shí)施例4輔料加入量的篩選實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)材料組合物按實(shí)施例1所述方法制備，其中，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子和Ca2+的配比為IOOyg 15mg 160IU 12IU 0. 12mol，其中膽酸鈉與 KGF-I 的摩爾比分別為 0. 5 1,1 1,2 1,3 1,4 1。2、實(shí)驗(yàn)方法
取制備的本發(fā)明藥物組合物，分別于0. 5，1，2，4，6，8，1 精密吸取0. 5ml釋放液， 并立即補(bǔ)充0. 5ml生理鹽水。將吸取的釋放液以15000r/min的速度離心30min，取上層液體，按照購(gòu)買(mǎi)的Elisa試劑盒中的操作步驟測(cè)定上清液中的KGF含量。(Elisa試劑盒 Duoset ELISA Development kit (Catalog Number :DY251,生產(chǎn)廠家R&D systems Co., Ltd)。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖5為含有不同濃度膽酸鈉的KGF纖維蛋白膠組合物的體外累積釋放曲線，結(jié)果表明，初始，隨著膽酸鈉與KGF的摩爾比增大，KGF的釋放速度減慢，當(dāng)膽酸鈉與KGF的摩爾比為2 1時(shí)，KGF的釋放速度最慢；繼續(xù)增大膽酸鈉與KGF的復(fù)合摩爾比，KGF的釋放速度反而加快。該定結(jié)果與肉眼觀察的懸液狀態(tài)變化一致。膽酸鈉與KGF的復(fù)合摩爾小于 2 1時(shí)，增大復(fù)合摩爾比，懸液的濁度增加；膽酸鈉與KGF的復(fù)合摩爾比大于2 1時(shí)，增大復(fù)合摩爾比，懸液逐漸變澄清。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明膽酸鈉與KGF的復(fù)合摩爾比為2 1時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物的緩釋效果最佳。實(shí)施例5KGF、纖維蛋白膠和緩釋輔料的協(xié)同增效實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物II雄性SD大鼠(四川大學(xué)華西動(dòng)物中心提供)，體重200g(180-230g)左右，共150
只，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境一周，自由飲水與攝食。實(shí)驗(yàn)分組根據(jù)不同處理手段分為6個(gè)大組，每組25只，照隨機(jī)數(shù)字表法分為傷后處理3，7，10，14，21天組，每組各有5只動(dòng)物I組纖維蛋白膠(采用廣州倍繡生物工程公司生產(chǎn)的2. 5ml規(guī)格的產(chǎn)品)II 組KGF-IIII組纖維蛋白膠+KGF-IIV組纖維蛋白膠+生長(zhǎng)激素(生長(zhǎng)激素采用默克雪蘭諾公司的重組人生長(zhǎng)激素(rhGH)的產(chǎn)品(5IU規(guī)格)，按實(shí)施例1所述方法制備，直接用生長(zhǎng)激素代替KGF-I即可，生長(zhǎng)激素、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子和Ca2+的配比為 5IU 15mg 160IU 12IU 0. 12mol)V組纖維蛋白膠+KGF-I (按實(shí)施例1所述方法制備，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子_1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子和Ca2+的配比為100 μ g 15mg 160IU 12IU 0. 12mol)VI組纖維蛋白膠+KGF-I+膽酸鈉(按實(shí)施例1所述方法制備， 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子和Ca2+的配比為 100 μ g 15mg 160IU 12IU 0. 12mol，膽酸鈉與角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1的摩爾比為 2 1)2、實(shí)驗(yàn)方法(1)造模動(dòng)物經(jīng)腹腔注射10g/L戊巴比妥麻醉后，備皮，背位固定，碘伏消毒，無(wú)菌條件下在背部肩胛稍靠后脊柱兩側(cè)2cm處用特制打孔器切割1個(gè)直徑約1. 5cm的圓形創(chuàng)面，深度及全層皮膚并破壞少許肌肉組織。(2)給藥方法I組的大鼠每個(gè)創(chuàng)面給予纖維蛋白膠1ml，均勻噴灑于創(chuàng)面上；II組的大鼠每個(gè)創(chuàng)面給予KGF100 μ g，均勻噴灑于創(chuàng)面上；
III組的大鼠每個(gè)創(chuàng)面給予KGF50 μ g，然后再給予纖維蛋白膠0. 5ml ；IV組的大鼠每個(gè)創(chuàng)面給予含有生長(zhǎng)激素的纖維蛋白膠0.5ml，均勻噴灑于創(chuàng)面上；V組的大鼠每個(gè)創(chuàng)面給予含有KGF的纖維蛋白膠0. 5ml，均勻噴灑于創(chuàng)面上；VI組的大鼠每個(gè)創(chuàng)面給予含有KGF、膽酸鈉的纖維蛋白膠0. 5ml，均勻噴灑于創(chuàng)面上。(3)結(jié)果測(cè)定a、傷口創(chuàng)面的測(cè)定圓形切除全層皮膚后，用消毒的半透明油酸紙貼于創(chuàng)面，沿創(chuàng)緣劃線，再貼于坐標(biāo)紙上計(jì)算所測(cè)面積，作為傷口原始面積。然后于傷后3，7，10，14，21d測(cè)傷口殘留面積，計(jì)算殘留面積百分率=殘留面積/原始面積X 100%。b、創(chuàng)面組織中蛋白含量將創(chuàng)面組織稱重后剪碎，勻漿，將組織勻漿液按Lowry法測(cè)定，結(jié)果以每克創(chuàng)面組織所含蛋白量的毫克數(shù)表示。C、羥脯氨酸測(cè)定將創(chuàng)面組織稱重后剪碎，放入20mL玻璃安瓿中，加入6mol/L鹽酸2mL，封口，置 135攝氏度烤箱內(nèi)水解3. 5h,冷卻后打開(kāi)封口，加入2滴甲基紅指示劑使之呈紅色，用6mol/ L氫氧化鈉2mL中和該液至中性呈微黃色，然后用蒸餾水稀釋至50mL，過(guò)濾，在空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管內(nèi)分別加入ImL雙蒸水、羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)液和創(chuàng)面組織水解液，每管再加入檸檬酸緩沖液0. 5mL、氯氨T lmL，混勻，6min后加高氯酸lmL，6min后再于每管加100g/L對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液lmL，在100攝氏度水浴中加熱3min，冰水冷卻，分光光度計(jì)上比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管A值，回歸校正曲線，按校正曲線計(jì)算出測(cè)定管的羥脯氨酸含量，再計(jì)算創(chuàng)面組織中羥脯氨酸含量(mg/g)。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1-3及圖6-8所示表1不同藥物對(duì)傷口殘留面積百分比的影響
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物組合物，其特征在于它包含角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠的用量配比為每Irnl纖維蛋白膠中含有50 200 μ g角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1 ；所述纖維蛋白膠是纖維蛋白原在凝血酶、第VIII因子和Ca2+ 催化下制備而成的，其中，每Iml纖維蛋白膠由20 30mg纖維蛋白原、160IU凝血酶、4 20IU第VIII因子、0. 06 0. 18mol Ca2制備而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述纖維蛋白膠每Iml由25mg纖維蛋白原、160IU凝血酶、12IU第VIII因子、0. 12mol Ca2制備而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠的用量配比為每Iml纖維蛋白膠中含有100 μ g角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1。
4.一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物制劑，其特征在于它是以權(quán)利要求1 3任意一項(xiàng)所述的角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的藥物制劑；所述輔料包含油酸鈉，十二烷基硫酸鈉，膽酸鈉或者硬脂酸鈉中的一種或兩種以上的混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其特征在于所述輔料為膽酸鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物制劑，其特征在于所述膽酸鈉與角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1 的摩爾比為0.5 4 1。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其特征在于所述膽酸鈉與角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1 的摩爾比為2 1。
8.根據(jù)權(quán)利要求4-7任意一項(xiàng)所述的藥物制劑，其特征在于所述制劑為外用制劑，優(yōu)選為噴霧劑、涂膜劑。
9.一種制備權(quán)利要求3-8任意一項(xiàng)所述藥物制劑的方法，其特征在于它包含如下步驟a、稱取角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、纖維蛋白原、凝血酶、第VIII因子、Ca2+和藥學(xué)上可接受的輔料；b、將角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、輔料、纖維蛋白原和第VIII因子溶于0.6ml無(wú)菌水/生理鹽水中，混合，得主體膠溶液；c、將凝血酶和Ca2+溶于0.6ml無(wú)菌水/生理鹽水中，得催化劑溶液；d、將步驟b所得主體膠溶液與步驟c所得催化劑溶液混勻，即得Iml所述藥物組合物。
10.權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述藥物組合物在制備促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物組合物，它包含角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1和纖維蛋白膠的用量配比為每1ml纖維蛋白膠中含有50～200μg角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1；所述纖維蛋白膠是纖維蛋白原在凝血酶、第VIII因子和Ca2+催化下制備而成的，其中，每1ml纖維蛋白膠由20～30mg纖維蛋白原、160IU凝血酶、4～20IU第VIII因子、0.06～0.18mol Ca2制備而成。還提供了前述藥物組合物的制備方法以及在制備促進(jìn)創(chuàng)面愈合的藥物中的用途。本發(fā)明提供的藥物組合物能促進(jìn)創(chuàng)面組織快速愈合，提高創(chuàng)面組織蛋白含量和創(chuàng)面組織中羥脯氨酸含量，可用于制備促進(jìn)創(chuàng)面恢復(fù)的藥物。
文檔編號(hào)A61P17/02GK102302770SQ20111022578
公開(kāi)日2012年1月4日 申請(qǐng)日期2011年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月8日
發(fā)明者張寶華, 彭紅衛(wèi), 楊偉, 董佳里, 譚楓于, 趙凱, 趙斌 申請(qǐng)人:成都金凱生物技術(shù)有限公司, 蘇州金盟生物技術(shù)有限公司