專利名稱：突變神經(jīng)胚素的聚合物偶聯(lián)物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)化學(xué)、分子生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、神經(jīng)病學(xué)及疼痛治療(pain management)令頁域。
背景技術(shù)：
神經(jīng)營養(yǎng)因子是天然存在的蛋白質(zhì)，其調(diào)節(jié)發(fā)育過程中的神經(jīng)元存活，并調(diào)節(jié)成熟神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性及結(jié)構(gòu)完整性。神經(jīng)營養(yǎng)因子可從神經(jīng)組織和非神經(jīng)組織中分離出來。最近20年里已發(fā)現(xiàn)許多，神經(jīng)營養(yǎng)因子根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)和功能這些神經(jīng)營養(yǎng)因子可歸類為超家族、家族、亞家族和個(gè)別種類。神經(jīng)營養(yǎng)因子超家族包括成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)超家族、神經(jīng)營養(yǎng)蛋白超家族及轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β)超家族。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子(⑶NF)相關(guān)的配體是TGF- β超家族內(nèi)的一種蛋白家族。⑶NF相關(guān)的配體包括⑶NF、pers印hin (PSP)、 neurturin (NTN)及神經(jīng)胚素(Neublastin) (NBN ；已知為 artemin 或 enovin)。GDNF 相關(guān)的配體家族成員以其七個(gè)保守的半胱氨酸殘基為一種特征。這些殘基形成分子內(nèi)和分子間的二硫鍵，并產(chǎn)生二聚化多肽配體的三級及四級結(jié)構(gòu)。這個(gè)家族的成員也共享通過多成分受體復(fù)合體來誘導(dǎo)信號的能力，所述多成分受體復(fù)合體由GFRa家族的糖基磷脂酰肌醇 (GPI)錨著的共同受體、GDNF相關(guān)的配體亞家族的成員及RET酪氨酸激酶受體組成?；罨腞ET引發(fā)可至少部分引起⑶NF相關(guān)配體的下游效應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)。因此，RET的活化可代表通過GFR α受體途徑影響下游細(xì)胞過程而起作用的療法的一個(gè)可取的方面。神經(jīng)胚素歸類在GDNF家族內(nèi)，因?yàn)樗c其它含有七個(gè)半胱氨酸基序的GDNF配體 (如，在EP02/(^69IPCT公報(bào)US02/02319以及US02/06388描述的)共享同源區(qū)，并且因?yàn)樗哂薪Y(jié)合、活化作為GFRa復(fù)合體一部分的RET受體的能力。具體來說，神經(jīng)胚素對與 GFRa 3-RET受體復(fù)合體的結(jié)合具有高選擇性。在那方面，神經(jīng)胚素與GDNF相關(guān)的配體家族的其他成員相比在其氨基酸序列內(nèi)含有獨(dú)特亞區(qū)。目前的數(shù)據(jù)提示神經(jīng)胚素在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)可具有保護(hù)性和再生性的作用， 因此它可用作針對神經(jīng)變性疾病的治療劑。例如，資料提示神經(jīng)胚素對所培養(yǎng)的來源于背根神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)節(jié)的感覺神經(jīng)元以及培養(yǎng)的黑質(zhì)(substantia nigra)多巴胺能神經(jīng)元可具有促進(jìn)存活的效應(yīng)(Baloh等，Neuron 21 1四1_1302 (1998))。所以看來神經(jīng)胚素可促進(jìn)包括感覺神經(jīng)元和多巴胺能神經(jīng)元的神經(jīng)元群體的存活。由于神經(jīng)元的退化和功能異常與疾病的狀態(tài)有關(guān)，因此這點(diǎn)是重要的。例如，感覺神經(jīng)元和多巴胺能神經(jīng)元的病理學(xué)分別是外周神經(jīng)病變和帕金森病的致病基礎(chǔ)。因而，給予神經(jīng)胚素可用于例如治療與神經(jīng)元的退化和功能異常相關(guān)的疾病。 但是，神經(jīng)胚素很快被機(jī)體清除，這可能影響神經(jīng)胚素在治療應(yīng)用中所需的劑量范式 (closing paradigm)。因而需要具有增強(qiáng)的生物利用率的經(jīng)修飾的神經(jīng)胚素多肽。因此， 本發(fā)明的一個(gè)目的是識別顯示增強(qiáng)的生物利用率的神經(jīng)胚素的修飾形式。發(fā)明概述本發(fā)明提供了聚合物偶聯(lián)的、突變的神經(jīng)胚素二聚體。每一種二聚體含有包含第一氨基末端氨基酸的第一多肽和包含第二氨基末端氨基酸的第二多肽。每一種多肽各自含有(a)以與SEQ ID NO :1的氨基酸8-113具有至少70%、80%、90%或95%的序列同一性為特征的氨基酸序列；(b)在位置16、43、47、80、81、109及111(按SEQ ID N0:1編號)中的每個(gè)位置的半胱氨酸殘基；(c)如下氨基酸殘基16位C、18位L、25位VJ8位LJ9位 G、30 位 L、31 位 G、36 位 E、40 位 F、41 位 R、42 位 F、43 位 C、45 位 G、47 位 C、80 位 C、81 位 C、82 位 R、83 位 P、91 位 F、93 位 D、105 位 S、106 位 A、109 位 C 及 111 位 C ；以及(d) LGLG 重復(fù)、FRFC基序、QPCCRP基序以及SATACGC基序。這種二聚體包括至少一種氨基酸取代(相對于SEQ ID NO :1)，其可提供與聚合物偶聯(lián)的內(nèi)部聚合物偶聯(lián)位點(diǎn)。本發(fā)明也提供聚合物偶聯(lián)的、突變的神經(jīng)胚素二聚體，其含有第一多肽和第二多肽，其中每種多肽含有具有1-6個(gè)氨基酸取代的、SEQ ID NO :6的氨基酸90-140，如95-120 或100-110，每個(gè)取代提供了與聚合物偶聯(lián)的聚合物偶聯(lián)位點(diǎn)。本發(fā)明多肽的具體例子包括 NBNl13(SEQ ID NO :2)、NBN140 (SEQ ID NO 6),NBNl16(SEQ ID NO 7),NBNl12(SEQ ID NO: 8)、NBNlll (SEQ ID NO :9)、NBNllO (SEQ ID NO :10)、NBN109 (SEQ ID NO :11)、NBN108 (SEQ ID NO :12)、NBN107(SEQ ID NO : 13)、NBN106 (SEQ ID NO : 14)、NBN105 (SEQ ID NO :15)、 NBN104(SEQ ID NO : 16)、NBN103 (SEQ ID NO : 17)、NBN102 (SEQ ID NO : 18)、NBNlOl (SEQ ID NO :19)、NBNlOO(SEQ ID NO :20)及 NBN99(SEQ ID NO :21)。優(yōu)選地，二聚體中兩個(gè)氨基末端氨基酸的至少一個(gè)偶聯(lián)于聚合物。優(yōu)選的氨基酸取代包括賴氨酸殘基取代精氨酸殘基(Raa#K ；aa#是基于SEQ ID NO 1的氨基酸編號)，及賴氨酸殘基(Naa#K)或天冬氨酸殘基(Naa#D)取代天冬酰胺殘基。這種取代的具體例子是 R14K、R39K、R68K、N95D及N95K (基于SEQ ID N0:1編號)。特別優(yōu)選的取代是N卯K。優(yōu)選地，二聚體上的聚合物的總復(fù)合分子量(total combined molecular weight)是20，000-40, OOODa0優(yōu)選地，每種聚合物的平均分子量是2，000-100, OOODa ；更優(yōu)選5，000-50, OOODa ；及最優(yōu)選大約10，000到20，OOODa0所述聚合物可為線性的或分支的。優(yōu)選地，聚合物是一種聚亞烷基二醇組分，如，聚乙二醇(PEG)組分。在一些實(shí)施方案中，至少一種多肽是糖基化的。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，聚合物偶聯(lián)的二聚體含有第一多肽和第二多肽，其中(a)每一種多肽各自包含SEQ ID NO 1的100到110位氨基酸，(b)每一種多肽包含位于 SEQ ID NO 1中的氨基酸95的天冬酰胺-到-賴氨酸的取代，(c)以及該二聚體包含3或 4個(gè)PEG組分，其中每個(gè)PEG組分的分子量大約10，OOODa,并且每種PEG組分在氨基末端或 95位賴氨酸處偶聯(lián)。優(yōu)選的實(shí)施方案是含有一對命名為3(4，) X IOkDa PEG NBN106-N95K單體的同源二聚體。本發(fā)明包括包含依照本發(fā)明的二聚體的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，該組合物包含兩種或更多種不同的依據(jù)本發(fā)明的二聚體。本發(fā)明包括核酸，如，一種編碼用于摻入本發(fā)明二聚體的多肽的DNA表達(dá)載體。本發(fā)明也包括由該核酸轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。本發(fā)明包括一種治療哺乳動物神經(jīng)性疼痛的方法。該方法包括給予哺乳動物治療有效量的本發(fā)明的二聚體。在一些實(shí)施方案中，該治療有效量為從0. 1 μ g/kg到IOOOyg/ kg,從1 μ g/kg到100 μ g/kg,或從1 μ g/kg到30 μ g/kg。該二聚體的給藥可通過各種途徑， 如，經(jīng)肌肉內(nèi)，皮下或靜脈內(nèi)。依據(jù)發(fā)明的一些方法，該二聚體每周被給予三次。本發(fā)明也提供在哺乳動物中活化RET受體的方法。該方法包括給予哺乳動物有效量的所述二聚體。更具體地，本發(fā)明涉及1.與聚合物偶聯(lián)的二聚體，其包含含有第一氨基末端氨基酸的第一多肽以及含有第二氨基末端氨基酸的第二多肽，其中每一種多肽各自包含a)以與SEQ ID NO=I的氨基酸8-113具有至少70%的序列同一性為特征的氨基酸序列；b)當(dāng)所述多肽與SEQ ID NO 1的編號一致時(shí)，在位置16、43、47、80、81、109及111
中每一位置的半胱氨酸殘基；c)當(dāng)與SEQ ID NO=I的編號一致時(shí)，如下每一種氨基酸殘基16 位 C、18 位 L、25 位 VJ8 位 LJ9 位 G、30 位 L、31 位 G、36 位 E、40 位 F、41 位 R、 42 位 F、43 位 C、45 位 G、47 位 C、80 位 C、81 位 C、82 位 R、83 位 P、91 位 F、93 位 D、105 位 S、 106位A、109位C及111位C;以及d) LGLG 重復(fù)、FRFC 基序、QPCCRP 基序以及 SATACGC 基序；其中至少第一多肽與SEQ ID NO 1相比包含至少一種氨基酸取代、插入或融合，并且其中所述取代、插入或融合提供與聚合物偶聯(lián)的內(nèi)部聚合物偶聯(lián)位點(diǎn)。2.項(xiàng)1的二聚體，其中該氨基酸序列的特征在于其與SEQ ID NO :1的氨基酸8_113 具有至少95%的序列同一性。3.與聚合物偶聯(lián)的二聚體，其包含含有第一氨基末端氨基酸的第一多肽以及含有第二氨基末端氨基酸的第二多肽，其中每一種多肽各自包含SEQ ID NO :6的90到140位氨基酸且其中具有1-6個(gè)氨基酸取代，每一種取代提供與聚合物偶聯(lián)的聚合物偶聯(lián)位點(diǎn)。4.項(xiàng)1的二聚體，其中該第一多肽選自由NBN113、NBm40、NBN116、NBN112、 NBN111、NBN110、NBN109、NBN108、NBN107、NBN106、NBN105、NBN104、NBN103、NBN102、NBN101、 NBNlOO 及 NBN99(分別為 SEQ ID NO =2,6-21)組成的組中。5.項(xiàng)1或3的二聚體，其中所述第一氨基末端氨基酸或第二氨基末端氨基酸與聚合物偶聯(lián)。6.項(xiàng)5的二聚體，其中所述第一氨基末端氨基酸及第二氨基末端氨基酸與聚合物偶聯(lián)。7.項(xiàng)3的二聚體，其中至少一種取代選自下組除精氨酸以外的氨基酸，其在所述第一多肽和/或第二多肽的氨基酸序列中的位置14;
除精氨酸以外的氨基酸，其在所述第一多肽和/或第二多肽的氨基酸序列中的位置39 ；除精氨酸以外的氨基酸，其在所述第一多肽和/或第二多肽的氨基酸序列中的位置68;以及除天冬酰胺以外的氨基酸，其在所述第一多肽和/或第二多肽的氨基酸序列中的位置95 ；其中所述氨基酸位置的編號與SEQ ID NO=I的多肽序列一致。8.項(xiàng)1的二聚體，其中所述氨基酸取代是賴氨酸取代天冬酰胺。9.項(xiàng)3的二聚體，其中所述氨基酸取代是賴氨酸取代天冬酰胺。10.利要求1的二聚體，其中所述氨基酸取代是賴氨酸取代精氨酸。11.項(xiàng)3的二聚體，其中所述氨基酸取代是賴氨酸取代精氨酸。12.項(xiàng)1的二聚體，其中所述氨基酸取代是中性或酸性氨基酸取代48、49或51位的精氨酸。13.項(xiàng)12的二聚體，其中所述中性或酸性氨基酸選自谷氨酸或天冬氨酸。14.項(xiàng)9的二聚體，其中所述取代在95位。15.項(xiàng)1的二聚體，其中所述取代是天冬氨酸取代95位天冬酰胺。16.項(xiàng)1或2的二聚體，其中所述聚合物的平均分子量是約2000Da到約 100，OOODa017.項(xiàng)11的二聚體，其中所述聚合物的平均分子量是約5000Da到約50，OOODa018.項(xiàng)12的二聚體，其中所述聚合物的平均分子量是約10，OOODa到約20，OOODa019.項(xiàng)1或3的二聚體，其中所述聚合物是線性的。20.項(xiàng)1或3的二聚體，其中所述聚合物是分支的。21.項(xiàng)1或3的二聚體，其中所述聚合物基本上由聚亞烷基二醇組分組成。22.項(xiàng)16的二聚體，其中所述聚亞烷基二醇組分是PEG組分。23.項(xiàng)1或3的二聚體，其中至少一種多肽是糖基化的。24.與聚合物偶聯(lián)的二聚體，其包含第一多肽及第二多肽，其中(a)每一種多肽各自包含SEQ ID NO 1的100到110個(gè)氨基酸，(b)每一種多肽在SEQ ID NO 1中的氨基酸95包含天冬酰胺-到-賴氨酸的取代，(c)且該二聚體包含3或4個(gè)PEG組分，其中每個(gè)PEG組分的分子量大約10，OOODa,且每個(gè)PEG組分在氨基末端或在95位賴氨酸處偶聯(lián)。25. —種組合物，其包含a)NBN106-N95K的同源二聚體，其與分子量大約10，OOODa的三個(gè)PEG聚合物相偶聯(lián)；b)NBN106-N95K的同源二聚體，其與分子量大約10，OOODa的四個(gè)PEG聚合物相偶聯(lián)；或c)至少兩種不同的根據(jù)項(xiàng)1或3所述的二聚體的混合物。26.核酸，其編碼項(xiàng)1或3的第一多肽。27.宿主細(xì)胞，其由項(xiàng)21的核酸轉(zhuǎn)化。28. 一種治療哺乳動物中的神經(jīng)性疼痛的方法，該方法包括給予哺乳動物治療有效量的項(xiàng)1或3的二聚體。
29.項(xiàng)23的方法，其中所述治療有效量為從0. 01 μ g/kg到1000 μ g/kg。30.項(xiàng)M的方法，其中所述治療有效量為從1 μ g/kg到100 μ g/kg。31.項(xiàng)25的方法，其中所述治療有效量為從1 μ g/kg到30 μ g/kg。32.項(xiàng)沈的方法，其中所述治療有效量為從3 μ g/kg到10 μ g/kg。33.項(xiàng)23的方法，其中所述二聚體通過經(jīng)肌肉內(nèi)遞送或經(jīng)皮下遞送給藥。34. 一種在哺乳動物中活化RET受體的方法，該方法包括給予該哺乳動物有效量的項(xiàng)1或3的二聚體。根據(jù)以下的詳細(xì)說明及權(quán)利要求，本發(fā)明的其他特點(diǎn)及優(yōu)點(diǎn)將顯而易見。附圖簡述

圖1是一個(gè)散點(diǎn)圖，概括了與野生型NBW13相比較，3，(4) X 10KPEG化的 NBN106-N95K 的 KIRA ELISA 分析數(shù)據(jù)。圖2是一個(gè)散點(diǎn)圖，概括了與野生型NBW13比較，3X IOK PEG化的NBm06_N%K 及 4X IOK PEG 化的 NBm06-N95K 的 KIRA ELISA 分析的數(shù)據(jù)。圖3是一個(gè)斷續(xù)的線圖，說明在脊神經(jīng)結(jié)扎的大鼠中，用10μ g/kg 3 X IOK PEG 化的 NBm06-N95K 及 4 X IOK PEG 化的 NBm06_N95K 的混合物(即〃 3 (，4) X IOkDa PEG NBN106-N95K)“)可幾乎完全逆轉(zhuǎn)已充分確定的觸覺異常性疼痛(allodynia)。圖4是一個(gè)斷續(xù)的線圖，說明在脊神經(jīng)結(jié)扎的大鼠體內(nèi)，用10yg/kg 3(, 4) X IOkDa PEG化的NBm06-N%K可幾乎完全逆轉(zhuǎn)已充分確定的熱痛覺過敏(thermal hyperalgesia)。發(fā)明詳述除非另作說明，神經(jīng)胚素氨基酸位置編號的任何引用將參照SEQ ID NO 1說明的編號。除非另行定義，本文所用所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意思相同。盡管與在此描述的相近的或等同的方法及材料可用于實(shí)施或測試本發(fā)明，合適的方法及材料描述如下。所有公開出版物、專利申請、專利及在此提及的其他參考文獻(xiàn)通過引用全部合并在本文中。如有沖突，以本說明書包括定義為準(zhǔn)。此外，材料、方法及實(shí)施例僅用于說明而非旨在限制。本文所用“野生型神經(jīng)胚素多肽”意思是天然存在的神經(jīng)胚素多肽序列。野生型神經(jīng)胚素多肽可通過神經(jīng)胚素的來源進(jìn)一步定義，例如，人、小鼠或大鼠的神經(jīng)胚素(見如 SEQ ID NO :2、3或4)。共有神經(jīng)胚素多肽序列提供為SEQ ID NO :1。本文所用“突變型神經(jīng)胚素多肽”意思是一種多肽，其含有相對于野生型神經(jīng)胚素多肽的至少規(guī)定的最低水平的序列同一性，其含有相對于野生型神經(jīng)胚素多肽的至少一種氨基酸取代、插入或融合，并且顯示神經(jīng)胚素活性。(如，國際專利申請?zhí)朠CT/ US02/02319(W0 02/060929)所述)。本文所用“內(nèi)部聚合物偶聯(lián)位點(diǎn)”意思是在突變型神經(jīng)胚素多肽中的非末端氨基酸殘基，該殘基提供適于偶聯(lián)聚合物的側(cè)鏈。本文所用“修飾的神經(jīng)胚素多肽”意思是含有至少一種附著的聚合物的多肽。本文所用“融合”意思是兩種或更多種多肽的共線性(co-linear)、共價(jià)連接，所述連接通過所述多肽各自的肽主鏈、通過同一讀碼框內(nèi)編碼那些蛋白的多聚核苷酸分子的基因表達(dá)而形成。本文所用“同一性”是指兩種多肽、分子間或兩種核酸間的序列相似性。當(dāng)兩種被比較的序列的位置為同一堿基或氨基酸單體亞單位所占時(shí)(例如，兩種DNA分子的每一種中的位置為腺嘌呤所占，或兩種多肽的每一種中的位置為賴氨酸所占)，每個(gè)分子便在那個(gè)位置是同源的。兩種序列間的“百分比同一性”是一個(gè)函數(shù)，用兩種序列共有的匹配位置數(shù)除以被比較的位置數(shù)再乘100。例如，如果兩種序列中10個(gè)位置有6個(gè)匹配，那么這兩種序列有60 %同一性。例如，DNA序列CTGACT及CAGGTT共享50 %同一性(共6個(gè)位置中有3個(gè)匹配)。一般的，當(dāng)兩種序列經(jīng)比對產(chǎn)生最大同源性時(shí)作比較。這種對比可用例如 Needleman 等 J. Mol Biol. 48 :443-453 (1970)用計(jì)算機(jī)程序諸如 Align 程序(DNAstar， Inc.)方便地實(shí)現(xiàn)的方法來提供。“相似的”序列是在比對時(shí)那些共享同樣且相似的氨基酸殘基的序列，其中相似的殘基是被比對參照序列中的相應(yīng)氨基酸殘基的保守取代殘基或 “容許的點(diǎn)突變(allowed point mutations) ”。在這一點(diǎn)上，參照序列的殘基的“保守取代” 是由物理上或功能上近似于相應(yīng)參照殘基的殘基進(jìn)行取代，如，這種殘基具有相似的大小、 形狀、電荷、化學(xué)性質(zhì)，包括形成共價(jià)鍵或氫鍵的能力等等。因此，“保守取代突變的”序列是一種不同于參照序列或野生型序列的序列，其不同之處在于其存在一種或更多種保守取代或容許的點(diǎn)突變。兩種序列間的“百分比陽性”是一個(gè)函數(shù)，用含有兩種序列共有的匹配殘基或保守取代的位置數(shù)除以被比較的位置數(shù)再乘100。例如，如果兩種序列10個(gè)位置中有 6個(gè)匹配且10個(gè)位置中有2個(gè)含有保守取代，那么這兩種序列有80%陽性同源性。突變的神經(jīng)胚素多肽本發(fā)明的突變的神經(jīng)胚素多肽與野生型神經(jīng)胚素多肽相比，其保留神經(jīng)營養(yǎng)活性并且具有提高的生物利用率。例如，在野生型神經(jīng)胚素活化RET的測定中本發(fā)明的突變的神經(jīng)胚素可活化RET基因產(chǎn)物。一般地，突變的神經(jīng)胚素多肽將保留以下特點(diǎn)中至少一種但可另外包含至少一種修飾，以使得產(chǎn)生出內(nèi)部聚合物偶聯(lián)位點(diǎn)⑴當(dāng)依照SEQ ID NO :1_4編號時(shí)，在16，、43、47、80、81、109及111位的七個(gè)保
守的半胱氨酸殘基；(ii)每一位置都依據(jù)SEQ ID NO :1_4編號時(shí)，如下氨基酸殘基16 位 C、18 位 L、25 位 VJ8 位 LJ9 位 G、30 位 L、31 位 G、36 位 E、40 位 F、41 位 R、 42 位 F、43 位 C、45 位 G、47 位 C、80 位 C、81 位 C、82 位 R、83 位 P、91 位 F、93 位 D、105 位 S、 106 位 A、109 位 C及 111 位C;(iii) LGLG 重復(fù)、FRFC 基序、QPCCRP 基序及 SATACGC 基序。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種截短的突變型的神經(jīng)胚素多肽，其中截短的神經(jīng)胚素多肽的氨基末端缺少一種或多種成熟的神經(jīng)胚素多肽的氨基末端氨基酸，但其被突變成具有內(nèi)部聚合物附著物。優(yōu)選地，截短的突變型神經(jīng)胚素多肽在二聚化時(shí)可活化RET 多肽。在一些實(shí)施方案中，突變型神經(jīng)胚素多肽誘導(dǎo)RET多肽的二聚化。這種誘導(dǎo)可能需要額外的多肽或輔因子，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。人及鼠神經(jīng)胚素多肽的氨基酸序列在PCT公開W000/01815中已公開。本發(fā)明的野生型神經(jīng)胚素多肽的實(shí)施例在表IA中給出。神經(jīng)胚素的共有序列(相對于人、小鼠及大鼠的同一性)在表IB中列出。
權(quán)利要求
1.二聚體，其包含第一神經(jīng)胚素多肽以及第二神經(jīng)胚素多肽，其中(a)至少一種多肽是糖基化的，且(b)至少一種多肽在其N-末端與水溶性合成聚合物偶聯(lián)。
2.權(quán)利要求1的二聚體，其中所述水溶性合成聚合物是聚乙二醇(PEG)。
3.權(quán)利要求1的二聚體，其中所述第一和第二神經(jīng)胚素多肽的氨基酸序列是 NBN104(SEQ ID NO :16)。
4.權(quán)利要求2的二聚體，其中所述第一和第二神經(jīng)胚素多肽的氨基酸序列是 NBN104(SEQ ID NO :16)。
全文摘要
本發(fā)明公開一種二聚體，其包含與聚合物偶聯(lián)的突變的神經(jīng)胚素多肽。這些二聚體呈現(xiàn)延長的生物利用率，并且在優(yōu)選實(shí)施方案中，相對于神經(jīng)胚素的野生形式的延長的生物活性。
文檔編號A61K39/00GK102367277SQ20111023906
公開日2012年3月7日 申請日期2004年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月31日
發(fā)明者R.布萊克.佩平斯基, 勞拉.西爾維安, 安東尼.羅索曼多, 斯蒂芬.S.米勒, 葆拉.A.博里亞克-肖丁, 迪納.W.Y.薩 申請人:比奧根艾迪克Ma公司