專利名稱：一種術(shù)中自體血液回收方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血液回收方法，具體涉及一種術(shù)中自體血液回收方法。
背景技術(shù)：
術(shù)中自體血液回收對很多人來說已不是一個(gè)新的名詞，它主要通過負(fù)壓吸引將自體血液與一定量的肝素混合吸入儲血罐內(nèi)，通過高速離心將紅細(xì)胞離心濃縮于處理容器 (離心杯)內(nèi)，而較輕的物質(zhì)(血漿、凝血因子、沖洗液、游離血紅蛋白、細(xì)胞碎片)則從處理容器中溢出排入廢液袋中。當(dāng)處理容器中充滿紅細(xì)胞時(shí)，注入生理鹽水清洗。細(xì)胞被生理鹽水清洗處理，白細(xì)胞、血小板、游離血紅蛋白等被反復(fù)稀釋和排出，停止離心處理，洗滌后的紅血球被泵入輸血袋中即完成了自體血液的回收。上述整個(gè)過程可以通過血液回收機(jī)來實(shí)現(xiàn)，在手術(shù)中已被廣泛應(yīng)用。術(shù)中自體血液回收具有顯著的優(yōu)越性，表現(xiàn)在①為病人節(jié)約了開支，尤其是出血量較多需大量輸血的病人；②為特殊血型的病人(如血型為Mi陰性的病人)解決了術(shù)中用血的后顧之憂；③大大減少了通過異體輸血傳播的各種傳染性疾病的發(fā)生，如乙肝、艾滋病等；④大大減少了因異體輸血所致的過敏反應(yīng)的發(fā)生；⑤節(jié)約血源，減少血庫面臨的用血壓力。但術(shù)中自體血液回收也有它的禁忌證，因血液回收機(jī)不具備消毒和去除腫瘤細(xì)胞的功能，故開放性損傷及腫瘤病人的血液不能回收，以防止因敗血癥而導(dǎo)致的全身感染及腫瘤擴(kuò)散。另外，經(jīng)過生理鹽水洗滌的紅細(xì)胞數(shù)量和功能都有很大損傷。如何能夠在術(shù)中自體血液回收中保證回收血液的安全性，并最大限度地保護(hù)所洗滌血液紅細(xì)胞的數(shù)量和功能，以達(dá)到最佳的血液回收質(zhì)量，一直是本領(lǐng)域的學(xué)者們不斷探索的課題。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種術(shù)中自體血液回收方法，該方法能夠保證所回收血液的安全性，并能最大限度地保護(hù)所洗滌血液紅細(xì)胞的數(shù)量和功能。本發(fā)明提供一種術(shù)中自體血液回收方法，采用血液回收機(jī)對術(shù)中自體血液進(jìn)行回收，其中洗滌液采用MAP (甘露醇一腺嘌呤一磷酸鹽)紅細(xì)胞保存液，抗凝液由所述MAP紅細(xì)胞保存液與肝素鈉以1000ml 200-400mg的比例配制，血液回收機(jī)處理后的血液經(jīng)孔徑為11-20μπι的7-40層疊壓的醋酸酯無紡布濾膜過濾后存于血袋內(nèi)。所述MAP (甘露醇一腺嘌呤一磷酸鹽)紅細(xì)胞保存液，其IOOOml的主要組分為枸櫞酸鈉(C6H5O7Na3 · 2H20) 1. 5g、枸櫞酸(C6H8O7 -H2O) 0. 2g、葡萄糖(C6H12O6 -H2O) 7. 93g、磷酸二氫鈉(NaH2PO4 ·2Η20)0· 94g、腺嘌呤(C5H5N5) 0. 14g、氯化鈉(NaCl) 4. 97g、甘露醇(C6H14O6) 14. 57g。進(jìn)一步，所述濾膜為一次性使用，每12 200 cm2濾膜過濾血量50 1200ml。進(jìn)一步，所述7-40層疊壓濾膜形成的過濾器經(jīng)并聯(lián)后使用。
進(jìn)一步，所述7-40層疊壓濾膜形成的過濾器經(jīng)串聯(lián)后使用，串聯(lián)個(gè)數(shù)為2-6個(gè)。進(jìn)一步，所述過濾中驅(qū)動(dòng)血液通過濾膜的的正向壓強(qiáng)差為37. OmmHg- 148. ImmHgo本發(fā)明方法的有益效果在于
1.能夠去除血液內(nèi)所有完整有核細(xì)胞，包括腫瘤細(xì)胞；
2.與現(xiàn)有的技術(shù)相比，最大限度地保護(hù)了紅細(xì)胞數(shù)量和功能，保證了所回收血液的質(zhì)量。


圖1 為血液回收機(jī)安裝示意圖2A 為本發(fā)明術(shù)中自體血液回收方法中經(jīng)醋酸酯無紡布濾膜過濾前的細(xì)胞HE染色圖(采用MAP液洗滌)；
圖2B 為本發(fā)明術(shù)中自體血液回收方法中經(jīng)醋酸酯無紡布濾膜過濾后的細(xì)胞HE染色圖(采用MAP液洗滌)；
圖3 回收血液內(nèi)CK19/⑶133免疫熒光染色； 圖4 技術(shù)處理前后回收血液內(nèi)有核細(xì)胞培養(yǎng)后的熒光染色； 圖5A 為采用MAP液洗滌后紅細(xì)胞的形態(tài)； 圖5B 為采用生理鹽水洗滌液洗滌后紅細(xì)胞的形態(tài)。其中1-廢液袋，2-離心杯，3-抗凝劑袋，4-儲血罐，5-洗滌液袋，
6-血袋I，7-細(xì)胞過濾器，8-血良U
具體實(shí)施例方式以下將參照附圖，對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述，優(yōu)選實(shí)施例僅為了說明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1
本發(fā)明的一種實(shí)施方式，如圖1所示，采用血液回收機(jī)對術(shù)中自體血液進(jìn)行回收，其中洗滌液5采用MAP紅細(xì)胞保存液，抗凝液3由MAP紅細(xì)胞保存液與肝素鈉按1000ml :300mg 的比例配制，血液回收機(jī)處理后的血液經(jīng)疊壓形成的16層孔徑為Ilym醋酸酯無紡布濾膜過濾后存于血袋內(nèi)。實(shí)施例2
本發(fā)明的另一種實(shí)施方式，如圖1所示，采用血液回收機(jī)對術(shù)中自體血液進(jìn)行回收， 其中洗滌液5采用MAP紅細(xì)胞保存液，抗凝液3由MAP紅細(xì)胞保存液與肝素鈉按IOOOml 200mg的比例配制，血液回收機(jī)處理后的血液經(jīng)孔徑為20μπι醋酸酯無紡布濾膜7層過濾后存于血袋內(nèi)。實(shí)施例3
本發(fā)明提供的一種術(shù)中自體血液回收方法，如圖1所示，采用血液回收機(jī)對術(shù)中自體血液進(jìn)行回收，其中洗滌液5采用MAP紅細(xì)胞保存液，抗凝液3由MAP紅細(xì)胞保存液與肝素鈉按1000ml :400mg的比例配制，血液回收機(jī)處理后的血液經(jīng)孔徑為15 μ m醋酸酯無紡布濾膜觀層過濾后存于血袋內(nèi)。
4
以下提供本發(fā)明技術(shù)效果的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
(1)最大限度減少有核細(xì)胞數(shù)量通過采用本發(fā)明技術(shù)中的紅細(xì)胞洗滌液，改變了有核細(xì)胞的粘附特性，使其與濾膜的粘附能力進(jìn)一步增強(qiáng)，從而對有核細(xì)胞的去除能力大大增強(qiáng)
剩余細(xì)胞核數(shù)量比較
表1.使用不同洗滌液洗滌紅細(xì)胞，然后使用相同層數(shù)的醋酸酯無紡布濾膜過濾后
表1可見，如使用NS洗滌紅細(xì)胞，再使用醋酸酯無紡布濾膜過濾處理，則僅能將有核細(xì)胞數(shù)量從109/L降低至107L，而且通過醋酸酯無紡布濾膜過濾的紅細(xì)胞內(nèi)，隨處可見完整的有核細(xì)胞(不能排除腫瘤細(xì)胞的可能性);當(dāng)將洗滌液變成MAP紅細(xì)胞保存液后，再使用醋酸酯無紡布濾膜過濾處理，則能將有核細(xì)胞數(shù)量從109/L降低至105/L，而且通過醋酸酯無紡布濾膜過濾的紅細(xì)胞液內(nèi)，僅見裸露細(xì)胞核(見下，僅剩細(xì)胞核的不完整細(xì)胞不能存活)。根據(jù)有核細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，本研究中發(fā)明人將僅存在細(xì)胞核(藍(lán)色)的細(xì)胞定義為 “裸核”，同時(shí)存在細(xì)胞核和細(xì)胞漿(紅色)的細(xì)胞定義為“完整細(xì)胞”。為觀察通過醋酸酯無紡布濾膜過濾的有核細(xì)胞的形態(tài)，發(fā)明人取20 ml經(jīng)醋酸酯無紡布濾膜過濾處理后的回收血液(n=10)，經(jīng)溶血、濃縮、涂厚片、HE染色后發(fā)現(xiàn)，90%均為裸核(圖2B)，“完整細(xì)胞”僅為通過濾器的細(xì)胞核的10. 9%(5%-16%，表2)，而在處理前的血標(biāo)本內(nèi)，97%的細(xì)胞均是“完整” 細(xì)胞(圖2A)。這一結(jié)果提示當(dāng)將洗滌液變成MAP紅細(xì)胞保存液后，再使用醋酸酯無紡布濾膜過濾處理，能夠明顯破壞有核細(xì)胞。因此，上述洗滌液變成MAP紅細(xì)胞保存液后對實(shí)際有核細(xì)胞清除率至少為5個(gè)log。(2)進(jìn)一步，采用本發(fā)明技術(shù)，可完全清除回收血液中腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞
采用熒光染色的方法尋找回收血液內(nèi)的腫瘤細(xì)胞。如圖3所示，在使用上述技術(shù)處理前，20例肝癌患者的回收血液內(nèi)均能找到大量CK19+ (腫瘤細(xì)胞)和CK19+/⑶133+細(xì)胞(腫瘤干細(xì)胞)，干細(xì)胞約占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的50%，遠(yuǎn)高于腫瘤組織內(nèi)干細(xì)胞/腫瘤細(xì)胞的比例， 提示腫瘤干細(xì)胞更容易脫落。然而，使用本發(fā)明技術(shù)處理后，20例患者血液內(nèi)未見有核細(xì)胞，更未見腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞。(3)進(jìn)一步，采用本發(fā)明技術(shù)，能夠完全清除回收血液內(nèi)的活性腫瘤細(xì)胞
為避免腫瘤細(xì)胞的漏檢，使用細(xì)胞培養(yǎng)的方法檢測本發(fā)明技術(shù)對剩余細(xì)胞活性和增殖能力的影響。分別將使用本發(fā)明技術(shù)處理前、后的血液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，染色鑒定細(xì)胞的性質(zhì)。結(jié)果顯示，處理前的8ml回收血液內(nèi)，20例患者中17例(85%)培養(yǎng)出細(xì)胞克隆株，將克隆株使用CD133和CK19同時(shí)標(biāo)記后發(fā)現(xiàn)，這些細(xì)胞均為雙陽性細(xì)胞，提示這些細(xì)胞為腫瘤干細(xì)胞。因此，如直接輸入這些未經(jīng)本發(fā)明技術(shù)處理的回收血液可能造成醫(yī)源性腫瘤轉(zhuǎn)移。經(jīng)本發(fā)明技術(shù)處理后，將標(biāo)本量擴(kuò)大5倍，培養(yǎng)后觀察，無一例出現(xiàn)細(xì)胞附壁生長，如圖4所示，提示使用本發(fā)明技術(shù)處理后的回收血液內(nèi)無增殖能力細(xì)胞，可以安全用于腫瘤患者術(shù)中的血液回收。
( 4 )采用本發(fā)明技術(shù)中的紅細(xì)胞洗滌液，紅細(xì)胞破壞減少游離血紅蛋白含量(mg/L)比較
權(quán)利要求
1.一種術(shù)中自體血液回收方法，其特征在于，采用血液回收機(jī)對術(shù)中自體血液進(jìn)行回收，其中洗滌液采用MAP紅細(xì)胞保存液，抗凝液由所述MAP紅細(xì)胞保存液與肝素鈉以 1000ml 200-400mg的比例配制，血液回收機(jī)處理后的血液經(jīng)孔徑為11_20 μ m的7_40層疊壓的醋酸酯無紡布濾膜過濾后存于血袋內(nèi)。
2.按照權(quán)利要求1所述的術(shù)中自體血液回收方法，其特征在于，所述濾膜為一次性使用，每12 200 cm2濾膜過濾血量50 1200ml。
3.按照權(quán)利要求1所述的術(shù)中自體血液回收方法，其特征在于，所述7-40層疊壓濾膜形成的過濾器經(jīng)并聯(lián)后使用。
4.按照權(quán)利要求1所述的術(shù)中自體血液回收方法，其特征在于，所述7-40層疊壓濾膜形成的過濾器經(jīng)串聯(lián)后使用，串聯(lián)個(gè)數(shù)為2-6個(gè)。
5.按照權(quán)利要求1所述的術(shù)中自體血液回收方法，其特征在于，所述過濾中驅(qū)動(dòng)血液通過濾膜的的正向壓強(qiáng)差為37. OmmHg- 148. ImmHgo
全文摘要
本發(fā)明提供一種術(shù)中自體血液回收方法，采用血液回收機(jī)對術(shù)中自體血液進(jìn)行回收，其中洗滌液采用MAP(甘露醇—腺嘌呤—磷酸鹽)紅細(xì)胞保存液，抗凝液由所述MAP紅細(xì)胞保存液與肝素鈉以1000ml:200-400mg的比例配制，血液回收機(jī)處理后的血液經(jīng)孔徑為11-20μm的7-40層疊壓的醋酸酯無紡布濾膜過濾后存于血袋內(nèi)。與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的術(shù)中自體血液回收方法，去除了包括腫瘤細(xì)胞在內(nèi)的血液內(nèi)有核細(xì)胞，最大限度的保護(hù)了紅細(xì)胞數(shù)量和功能，保證了所回收血液的質(zhì)量。
文檔編號A61M1/38GK102430163SQ201110258399
公開日2012年5月2日 申請日期2011年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月2日
發(fā)明者丁五行, 劉進(jìn), 杜磊 申請人:四川大學(xué)華西醫(yī)院, 賽普瑞特血液技術(shù)(北京)有限公司