專利名稱：一種高純度肝素芐酯鹽及其制法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及由一種高純度肝素芐酯鹽，及其制備方法與在制備低分子肝素中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝素是動物(豬或牛)來源的硫酸多糖混合物，由于它們具有良好的抗血栓形成性質(zhì)，因而得到了廣泛應(yīng)用，例如制備抗血栓形成藥物、治療心血管疾病的藥物、和治療腦血管疾病的藥物等。
然而，天然肝素有許多缺陷，這些缺陷限制肝素的應(yīng)用。一個主要缺陷是肝素用藥過多可致自發(fā)性出血，故每次注射前應(yīng)測定凝血時間。此外，長期使用，肝素還可引起過敏反應(yīng)、血小板減少、骨質(zhì)疏松和自發(fā)性骨折。
肝素鈉自發(fā)性出血危險很大，臨床使用中必須監(jiān)測凝血時間，這給醫(yī)生和患者均帶來很大不便。同時，血小板減少和骨質(zhì)疏松等不良反應(yīng)也讓醫(yī)生在使用中有所顧忌。低分子肝素使用過程中無須監(jiān)測凝血時間，并且大大降低了肝素長期使用產(chǎn)生 的上述不良反應(yīng)。
目前，制備低分子肝素的主要方法有亞硝酸鹽降解法、過氧化氫降解法、肝素酶降解法以及肝素芐酯的堿降解法等。其中，肝素芐酯的堿降解法是將肝素與季銨鹽成鹽，然后將肝素季銨鹽與氯化芐在二氯甲烷中發(fā)生酯化反應(yīng)生成肝素芐酯季銨鹽，往此溶液中加入醋酸鈉甲醇溶液，過濾獲得肝素芐酯鈉鹽，根據(jù)酯化率的高低，選擇相應(yīng)的降解條件，將此鈉鹽在堿性溶液中進行降解，獲得低分子肝素。由此可見，如何準確測定酯化率在整個制備方法中非常關(guān)鍵。另外，由于低分子肝素是混合物，過程控制雜質(zhì)變得非常重要。因此，高純度的肝素芐酯堿金屬或堿土金屬鹽是獲得高質(zhì)量低分子肝素的前提。
然而，上述制備方法具有如下缺點(I)肝素芐酯鈉鹽純度低當醋酸鈉甲醇溶液與肝素芐酯季銨鹽反應(yīng)生成肝素芐酯鈉鹽時，由于肝素為大分子長鏈，肝素芐酯鈉鹽在甲醇中溶解度很低，隨著醋酸鈉甲醇溶液的加入，來不及反應(yīng)的含有季銨鹽的肝素芐酯鈉鹽同時被沉淀出，這樣導致反應(yīng)不完全。實驗證明，即使進行長時間的攪拌或多次與醋酸鈉甲醇溶液重復(fù)反應(yīng)，但畢竟是混懸狀態(tài)，仍有相當部分的季銨鹽不能全部反應(yīng)，從而殘留在肝素芐酯鈉鹽鏈上。(2)肝素芐酯鈉鹽的酯化率難以精確測定由于反應(yīng)為非溶液狀態(tài)，反應(yīng)物和產(chǎn)物均為沉淀，每次反應(yīng)的程度均不易重現(xiàn)，季銨鹽、氯化芐和醋酸鈉殘留每次都會有差異，這給酯化率的測定帶來了不確定性，從而影響后續(xù)的降解條件的選擇，進而影響產(chǎn)品的質(zhì)量，甚至會影響生產(chǎn)的成功率。(3)最終產(chǎn)品的安全性隱患反應(yīng)過程中生成的季銨鹽和過量的氯化芐、醋酸鈉均不易被甲醇洗掉，會殘留在肝素芐酯鈉鹽中。在后續(xù)降解中也會產(chǎn)生新的雜質(zhì)，給產(chǎn)品的安全性帶來隱患。
也有文獻中提到，生成肝素芐酯季銨鹽后，先將反應(yīng)溶媒四氫呋喃直接蒸餾除去， 然后加入甲醇混懸沉淀，過濾獲得肝素芐酯季銨鹽，然后將其加入醋酸鈉的水溶液，生成肝素芐酯鈉鹽。這種制備方法需要先蒸餾除去反應(yīng)溶媒，而實驗證明，肝素芐酯季銨鹽易溶于甲醇，因此蒸去反應(yīng)溶媒后加入甲醇并不能得到沉淀，同時大大增加了產(chǎn)業(yè)化的難度和成本。
因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)高純度的肝素芐酯鹽，以及簡單可行、適合產(chǎn)業(yè)化的制備方法及其在低分子肝素制備中的應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種高純度的肝素芐酯鹽，以及其簡單可行、適合產(chǎn)業(yè)化的制備方法及其在低分子肝素制備中的應(yīng)用。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種高純度肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽的制備方法，包括步驟
(a)將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽，與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液進行混合，從而反應(yīng)生成肝素節(jié)酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；和
(b)在步驟(a)所形成反應(yīng)混合物中，加入對于肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，從而沉淀并分離出所述肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽。
在另一優(yōu)選例中，所述的含有季銨鹽的肝素芐酯鹽是肝素季銨鹽與芐基鹵化物在有機溶劑中發(fā)生酯化反應(yīng)生成的反應(yīng)產(chǎn)物。
肝素來源于牛、豬的肝素，即豬肝素或牛肝素及其衍生物。
在另一優(yōu)選例中，所述芐基鹵化物為鹵化芐，較佳為氯化芐或溴化芐，更佳為氯化節(jié)。
在另一優(yōu)選例中，所述有機溶劑為二氯甲烷。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽為氯化鈉、醋酸鈉、氯化鉀、或硫酸鈉；所述堿土金屬鹽為氯化鈣、或氯化鎂。
較佳為醋酸鈉，更佳地為氯化鈉。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為O. lw/v% 95w/v%。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為3w/v% 50w/ 。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為5w/v% 25w/ 。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O.1 10 I。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O. 2 5 I。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O. 5 1:1。
在另一優(yōu)選例中，所述的水性溶液的溶劑，是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其組合的水溶液。
在另一優(yōu)選例中，所述的不溶性溶劑選自下組醇、酮、或其組合。
更佳地，所述的醇為甲醇、乙醇、或其組合；所述酮為丙酮。
本發(fā)明的第二方面，提供一種高純度的肝素芐基堿金屬鹽或堿土金屬鹽，雜質(zhì)季銨鹽的含量< 5wt%。
在另一優(yōu)選例中，所述雜質(zhì)季銨鹽的含量< Iwt %，較佳的，所述雜質(zhì)季銨鹽的含量< O. 5wt%,更佳地所述雜質(zhì)季銨鹽的含量< O.1wt %。
在另一優(yōu)選例中，所述的肝素芐酯金屬鹽包括肝素芐酯鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽或鎂鹽形式。
在另一優(yōu)選例中，所述的肝素芐酯金屬鹽為肝素芐酯鈉鹽。
在另一優(yōu)選例中，所述的肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽是用第一方面所述方法制備的。
本發(fā)明的第三方面，提供一種制備肝素衍生的多糖混合物的方法，包括以下步驟
(a)將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽，與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液進行混合，從而反應(yīng)生成肝素節(jié)酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；和
(b)在步驟(a)所形成反應(yīng)混合物中，加入對于肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，從而沉淀并分離出所述肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；
(C)將肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽進行堿降解獲得所述肝素衍生的多糖混合物。
在另一優(yōu)選例中，所述的含有季銨鹽的肝素芐酯鹽是肝素季銨鹽與芐基鹵化物在有機溶劑中發(fā)生酯化反應(yīng)生成的反應(yīng)產(chǎn)物。
肝素來源于牛、豬的肝素，即豬肝素或牛肝素及其衍生物。
在另一優(yōu)選例中，所述芐基鹵化物為鹵化芐，較佳為氯化芐或溴化芐，更佳為氯化節(jié)。
在另一優(yōu)選例中，所述有機溶劑為二氯甲烷。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽為氯化鈉、醋酸鈉、氯化鉀、或硫酸鈉；所 述堿土金屬鹽為氯化鈣、或氯化鎂。
較佳為醋酸鈉，更佳地為氯化鈉。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為O. lw/v% 95w/v%。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為3w/v% 50w/V% O
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為5w/v% 25w/ 。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O.1 10 I。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O. 2 5 I。
在另一優(yōu)選例中，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O. 5 1:1。
在另一優(yōu)選例中，所述的水性溶液的溶劑，是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其組合的水溶液。
在另一優(yōu)選例中，所述的不溶性溶劑選自下組醇、酮、或其組合。
更佳地，所述的醇為甲醇、乙醇、或其組合；所述酮為丙酮。
本發(fā)明的第四方面，提供一種肝素衍生的多糖混合物，具有以下特征
其是通過第三方面所述的方法制備；
重均分子量為不大于8000道爾頓；
抗凝血因子Xa與抗凝血因子IIa的活性比值為不低于1. 5 ；
在其非還原末端，含有4-吡喃糖醛酸結(jié)構(gòu)。
在另一優(yōu)選例中，肝素衍生的多糖混合物，具有以下特征
其是通過第三方面所述的方法制備；
重均分子量為3800-5000道爾頓；
分子量低于2000道爾頓的含量為總重量的12 20% ；
分子量介于2000-8000道爾頓的含量為總重量的68% -82% ；
抗凝血因子Xa與抗凝血因子I Ia的活性比值為3. 3-5. 3 ；
在其非還原末端，含有4-吡喃糖醛酸結(jié)構(gòu)，還原末端含有15 25%的1，6_脫水環(huán)結(jié)構(gòu)。
在另一優(yōu)選例中，通過第三方面所述的方法制備的肝素衍生的多糖混合物，具有以下特征
重均分子量為1500-5000道爾頓；
抗凝血因子Xa與抗凝血因子IIa的活性比值為不低于10 ；
在其非還原末端，含有4-吡喃糖醛酸結(jié)構(gòu)。
在另一優(yōu)選例中，所述多糖混合物呈堿金屬鹽或堿土金屬鹽形式，其中，優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽。
本發(fā)明的第五方面，提供一種藥物組合物，所述組合物含有作為活性組分的第四方面所述的肝素衍生的多糖混合物和藥學上可接受的載體。
本發(fā)明的第六方面，提供了高純度肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽的用途，被用于制備高純度的肝素衍生的多糖混合物，包括以下制備步驟
(a)將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽，與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液進行混合，從而反應(yīng)生成肝素節(jié)酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；和
(b)在步驟(a)所形成反應(yīng)混合物中，加入對于肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，從而沉淀并分離出所述肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；
(c)將肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽進行堿降解獲得所述肝素衍生的多糖混合物
本發(fā)明提供的高純度肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽純度高，特別是季銨鹽殘留低，制備方法簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)，可用于制備高純度的低分子肝素，收率高。
具體實施方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，通過改進肝素芐酯鹽的制備方法，意外地發(fā)現(xiàn)， 將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽與堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液進行反應(yīng)，可以高效、簡便、快速地制備高純度且季銨鹽、氯化芐及醋酸鈉殘留低的肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的肝素芐酯鹽具有以下主要優(yōu)點(1)純度高季銨鹽殘留量通常低于 3wt%，氯化芐殘留通常低于O.1wt %，醋酸鈉殘留量通常低于O.1wt %。(2)酯化率易于測定及控制，有利于在低分子肝素制備中的應(yīng)用。(3)易溶于水，有利于其在低分子肝素制備中的應(yīng)用，即在制備低分子肝素時更容易選擇適宜的降解條件。(4)制備低分子肝素時，無季銨鹽、氯化芐及醋酸鈉等引入的雜質(zhì)，色素含量低且易于除去，質(zhì)量好，收率高。
如本文所用，術(shù)語“肝素”是指分子量范圍2000 30000道爾頓的多糖。
在本發(fā)明中，可使用水溶劑或含水溶劑,所形成溶液通稱為水性溶液。換言之,堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液，是指溶質(zhì)為堿金屬或堿土金屬，溶解于溶劑為(a)水或 (b)水與有機溶劑(如甲醇、乙醇等)形成的混合溶劑(例如，醇含量低于90% (V/V)的混合溶劑可視為水性溶液的溶劑)所形成的溶液。
一類優(yōu)選的水性混合溶劑是水與有機溶劑(如甲醇、乙醇等)體積比為 10-100 O. 01-90(較佳地 20-100 O. 1-80，更佳地 50-100 1-50)的混合溶劑。
肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽
本發(fā)明的肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽可以采用如下方法制備含有季銨鹽的肝素芐酯鹽與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液反應(yīng)，獲得肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽，往此反應(yīng)體系中加入對于肝素芐酯金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，從而沉淀分離出本發(fā)明所述的肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，所述的制備方法包括步驟
(a)含有季銨鹽的肝素芐酯鹽與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液反應(yīng)，獲得肝素節(jié)酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽混懸液；和
(b)往上述體系中加入對于肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑， 從而沉淀分離出本發(fā)明所述的肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽。
在本發(fā)明中，作為堿金屬鹽或堿土金屬鹽，優(yōu)選地是鈉、鉀、鈣和鎂鹽。
所述的不溶性溶劑選自下組醇、酮、或其組合。
更佳地，所述的醇為甲醇、乙醇、或其組合；所述酮為丙酮。
本發(fā)明的肝素芐酯鹽，它們與通過已有文獻制備的肝素芐酯鹽相比，具有更高的純度和更易于質(zhì)量控制。換言之，肝素芐酯鹽純度很高，而季銨鹽、氯化芐及醋酸鈉等雜質(zhì)含量很低。例如，本發(fā)明肝素芐酯鹽中季銨鹽雜質(zhì)含量<3wt%，較佳地< lwt%，更佳地 ^ O. 5wt%。
這些肝素芐酯鹽可以呈堿金屬鹽或堿土金屬鹽形式，其中，優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽。
肝素衍生的多糖混合物
根據(jù)高純度的肝素芐酯鹽的酯化率，可采用相應(yīng)條件對其進行降解，獲得高純度的肝素衍生的多糖混合物，如依諾肝素鈉等低分子肝素。在這些肝素衍生的多糖混合物中， 在其一端具有不飽和的4，5-葡萄糖醛酸2-0-硫酸酯結(jié)構(gòu)單元。
藥物組合物和施用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的肝素衍生的多糖混合物可以用作抗血栓形成劑，預(yù)防靜脈血栓栓塞性疾病(預(yù)防靜脈內(nèi)血栓形成)，特別是與骨科或普外手術(shù)有關(guān)的血栓形成。治療已形成的深靜脈栓塞，伴或不伴有肺栓塞。治療不穩(wěn)定心絞痛及非Q波心梗，用于血液透析體外循環(huán)中， 防止血栓形成。
此外，本發(fā)明的肝素衍生的多糖混合物還可用于治療或輔助治療心血管疾病和腦血管疾病。
因此，本發(fā)明還提供一種藥物組合物，它含有作為活性組分的本發(fā)明的肝素衍生的多糖混合物和藥學上可接受的載體。通常，在藥物組合物中，本發(fā)明的肝素衍生的多糖混合物的含量為O. 01-50wt%，更佳地為O. l-30wt%。一種優(yōu)選的藥物組合物劑型為注射劑 (包括溶液和凍干劑)。
本發(fā)明的藥物組合物可用常規(guī)方法制備和施用。一種優(yōu)選的施用方法是皮下或靜脈內(nèi)給藥。
本發(fā)明的主要優(yōu)點在于
(I)肝素芐酯鹽純度高，季銨鹽、氯化芐及醋酸鹽殘留量低，通常重量含量低于 5%。
(2)肝素芐酯鹽質(zhì)量控制簡單，特別是關(guān)鍵指標酯化率可以準確測定及控制。
(3)應(yīng)用高純度肝素芐酯鹽制備的肝素衍生的多糖混合物，產(chǎn)品純度高，安全性好，不會引入由于中間體不純而產(chǎn)生的雜質(zhì)，如季銨鹽含量< O. lwt%。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件(如《歐洲藥典》中所述的條件)，或按照制造廠商所建議的條件。
通用測定方法
(I)肝素酯或肝素酯鹽的酯化程度可以用常規(guī)的HPLC來測定，即通過測定在0°C 下由酯的皂化所產(chǎn)生的苯甲醇量來確定酯化程度。
(2)分子量和分子量分布以及抗Xa和抗IIa效價均采用歐洲藥典中常規(guī)的低分子肝素質(zhì)量標準的方法進行。
實施例1
肝素芐氧乙銨鹽的制備
向芐索氯銨(250g)的水溶液(1250ml)中，加入含市售的肝素鈉(IOOg)的水 (IOOOml)溶液(注豬來源的肝素)。攪拌下放置30分鐘，形成肝素芐氧乙銨鹽沉淀。然后， 將反應(yīng)混合物在室溫下過濾，獲得濾餅，用水洗滌后真空干燥，獲得肝素芐氧乙銨鹽(300 克)。
實施例2
肝素芐酯鈉鹽的制備
將芐基氯(IOOml)加入到肝素芐氧乙銨鹽(IOOg) 二氯甲烷(500ml)溶液中。將溶液加熱到35°C，維持25小時 。然后加入10%的醋酸鈉甲醇溶液(600ml)。攪拌，析出沉淀，過濾，少量甲醇頂洗，干燥，得到淡黃色的肝素芐酯鈉鹽粗品(38克)。
將干燥后的肝素芐酯鈉鹽粗品溶于800ml水中，加入IOOg氯化鈉，攪拌下加 Λ 2400ml甲醇，過濾析出的沉淀，少量甲醇頂洗，干燥得到高純度的白色肝素芐酯鈉鹽 (35g)。
經(jīng)HPLC法測定，所述肝素芐酯鈉鹽中，季銨鹽的殘留量< O. 4wt%，醋酸鈉的殘留量<0.1wt%，氯化芐的殘留量< O.化率為12.3% (w/w) O
實施例3
肝素芐酯鈉鹽的制備
將芐基氯(IOOml)加入到肝素芐氧乙銨鹽(IOOg) 二氯甲烷(500ml)溶液中。將溶液加熱到35°C，維持20小時。然后加入10%的醋酸鈉甲醇溶液(700ml)，攪拌，析出沉淀，離心，干燥，得到淡黃色的肝素芐酯鈉鹽粗品(38克)。
將干燥后的肝素芐酯鈉鹽粗品溶于800ml水中，加入80g氯化鈉，攪拌下加入 2400ml甲醇，過濾析出的沉淀，干燥得高純度的白色肝素芐酯鈉鹽(34g)。
經(jīng)HPLC法測定，在所述肝素芐酯鈉鹽中，季銨鹽的殘留量< O. 5wt%，醋酸鈉的殘留量< O. lwt%,氯化節(jié)的殘留量< O. lwt%,酯化率為11. 9% (w/w)。
實施例4
肝素芐酯鈉鹽的制備
將芐基氯(IOOml)加入到肝素芐氧乙銨鹽(IOOg) 二氯甲烷(500ml)溶液中。將溶液加熱到35°C，維持25小時。然后加入10%的醋酸鈉乙醇溶液(800ml)，析出沉淀，過濾，干燥，由此得到淡黃色的肝素芐酯鈉鹽粗品(37克)。
將干燥后的肝素芐酯鈉鹽粗品溶于800ml水中，加入80g氯化鈉，攪拌下加入 2400ml乙醇，過濾析出的沉淀，干燥得高純度的白色肝素芐酯鈉鹽(35g)。
經(jīng)HPLC法測定，在所述肝素芐酯鈉鹽中，季銨鹽的殘留量< O. 5wt%，醋酸鈉的殘留量< O. lwt%,氯化節(jié)的殘留量< O. lwt%,酯化率為13. 1% (w/w)。
實施例5
肝素芐酯鈉鹽的制備
將芐基氯(IOOml)加入到肝素芐氧乙銨鹽(IOOg) 二氯甲烷(500ml)溶液中。將溶液加熱到40°C，維持20小時。然后加入10%的醋酸鈉甲醇溶液(IOOOml)后，析出沉淀， 過濾，少量甲醇頂洗后，將肝素芐酯鈉鹽粗品濾餅溶于800ml水中，加入80g氯化鈉，攪拌下加入2400ml乙醇，過濾析出的沉淀，干燥得高純度的白色肝素芐酯鈉鹽(33g)。
經(jīng)HPLC法測定，在所述肝素芐酯鈉鹽中，季銨鹽的殘留量< O. 4wt%，醋酸鈉的殘留量< O. lwt%,氯化節(jié)的殘留量< O. lwt%,酯化率為10. 8% (w/w)。
實施例2-5結(jié)果表明，本發(fā)明制備方法簡單，重現(xiàn)性好，肝素芐酯鈉鹽純度高，均為白色，季銨鹽、醋酸鈉及氯化芐殘留低。
實施例6
肝素芐酯鹽的應(yīng)用
將實施例2得到的肝素芐酯鈉鹽(IOg)溶于水(250ml)中，加熱至62°C。向此溶液中加入氫氧化鈉(Ig)，反應(yīng)1. 5小時，從而使肝素芐酯鈉鹽降解。然后將反應(yīng)混合物冷卻至約20°C，加入稀鹽酸進行中和。再加入氯化鈉使得反應(yīng)混合物中的氯化鈉濃度為10% (w/v)。向反應(yīng)混合物中加入甲醇(750ml)，析出沉淀，過濾獲得濾餅，甲醇洗滌后，將濾餅溶于IOOml水中。用IM NaOH調(diào)節(jié)pH至8. 4±O.1。將硼氫化鈉(按10g/kg肝素芐酯鈉鹽計)加入到該溶液中，靜置I個小時，然后用3M鹽酸將pH調(diào)節(jié)至4. 0-4.4以消除過多的硼氫化物。靜置30分鐘，并用2M NaOH調(diào)節(jié)pH至7. O。加入氯化鈉，使鹽濃度為10w/v%，然后加入溶液體積3倍體積的甲醇，析出沉淀，過濾獲得濾餅，用甲醇洗滌后，真空干燥，從而得到高純度的低分子肝素(白色，7. 9g)。以肝素鈉計，收率為83. 0%。
經(jīng)測定，所述的肝素衍生的多糖混合物的性質(zhì)如下
權(quán)利要求
1.一種高純度肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽的制備方法，其特征在于，包括步驟 (a)將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽，與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液進行混合，從而反應(yīng)生成肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；和 (b)在步驟(a)所形成反應(yīng)混合物中，加入對于肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，從而沉淀并分離出所述肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述堿金屬鹽為氯化鈉、醋酸鈉、氯化鉀、或硫酸鈉；所述堿土金屬鹽為氯化鈣、或氯化鎂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽的水性溶液濃度為O. lw/v% 95w/v%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述堿金屬鹽或堿土金屬鹽與所述含有季銨鹽的肝素芐酯鹽的重量比為O.1 10 I。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的水性溶液的溶劑，是水或含有甲醇、乙醇、丙酮或其組合的水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的不溶性溶劑選自下組醇、酮、或其組合。
7.一種高純度的肝素芐基堿金屬鹽或堿土金屬鹽，其特征在于，雜質(zhì)季銨鹽的含量<5wt % ο
8.一種制備肝素衍生的多糖混合物的方法，其特征在于，包括以下步驟 (a)將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽，與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液進行混合，從而反應(yīng)生成肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽；和 (b)在步驟(a)所形成反應(yīng)混合物中，加入對于肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，從而沉淀并分離出所述肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽； (C)將肝素芐酯堿金屬鹽或堿土金屬鹽進行堿降解獲得所述肝素衍生的多糖混合物。
9.一種肝素衍生的多糖混合物，其特征在于，具有以下特征 通過權(quán)利要求8所述的方法制備； 重均分子量為不大于8000道爾頓； 抗凝血因子Xa與抗凝血因子IIa的活性比值為不低于1. 5 ； 在其非還原末端，含有4-吡喃糖醛酸結(jié)構(gòu)。
10.一種藥物組合物，其特征在于，所述組合物含有作為活性組分的權(quán)利要求9所述的肝素衍生的多糖混合物和藥學上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種高純度肝素芐酯鹽及其制法和應(yīng)用。具體地，本發(fā)明的肝素芐酯鹽是將含有季銨鹽的肝素芐酯鹽與堿金屬或堿土金屬鹽的水性溶液反應(yīng)后，加入對于肝素芐酯金屬鹽或堿土金屬鹽而言的不溶性溶劑，沉淀分離制得，并具有以下特性肝素芐酯鹽純度高，特別是季銨鹽殘留低，制備方法簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)，可用于制備高純度的低分子肝素，收率高。
文檔編號A61K31/727GK103012621SQ20111028882
公開日2013年4月3日 申請日期2011年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月26日
發(fā)明者徐美英 申請人:徐美英