專利名稱：土茯苓黃酮類提取物在制備治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取物在醫(yī)學(xué)中的新用途，具體地說是涉及土茯苓黃酮提取物在制備治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
高尿酸血癥是痛風(fēng)發(fā)展的一個關(guān)鍵性因素，血尿酸產(chǎn)生過多、腎臟尿酸排泄障礙或者兩個因素的綜合作用導(dǎo)致高尿酸血癥的發(fā)生，目前發(fā)病率高已成為僅次于糖尿病的第二大代謝病。黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, X0D)能催化黃嘌呤和次黃嘌呤氧化生成尿酸，并產(chǎn)生過氧化物自由基。因此XOD抑制劑通過抑制XOD的活性來減少尿酸生成，用作降尿酸藥物。目前臨床上常用的XOD抑制劑別嘌呤醇及促進(jìn)尿酸排泄藥痛風(fēng)利仙，由于副作用大限制了其在臨床上的應(yīng)用，因此從中草藥及天然藥中尋找新型抗痛風(fēng)和高尿酸血癥藥物成為藥學(xué)研究的一個熱點(diǎn)。土茯苓，別名土萆蘚，為百合科植物光葉菝葜Wira Roxb.的干燥根莖， 具有除濕、解毒、通利關(guān)節(jié)的功效。臨床常用土茯苓治療高尿酸血癥及通風(fēng)[中國藥典.一部[S]. 2005:14;][倪青，任建文，時振聲.治療痛風(fēng)性腎病47例臨床總結(jié)[J].北京中醫(yī)，1997，(1) :3.]。研究顯示，土茯苓具有降尿酸作用，對體外XOD活性具有明顯的抑制作用[羅六保，謝志鵬.紫外分光光度法測定中藥中黃嘌呤氧化酶抑制活性研究[J].化學(xué)世界，2009,5:273]。土茯苓主要有黃酮類成分及有機(jī)酸類等成分，其中黃酮類成分有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用[秦汝蘭，黃田玉，高璐.土茯苓中總黃酮提取方法及藥理作用[J].通化師范學(xué)院學(xué)報，2010，31 (2) :39.]，但土茯苓降尿酸、抑制XOD活性的物質(zhì)基礎(chǔ)不清。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以體外XOD活性為指標(biāo)，系統(tǒng)分離篩選土茯苓抑制XOD活性有效部位，再用比色法分析有效部位黃酮含量，明確土茯苓抑制XOD活性的物質(zhì)基礎(chǔ)是黃酮類成分，可用于制備治療高尿酸血癥藥物。本發(fā)明的目的在于提供土茯苓黃酮類提取物在醫(yī)學(xué)中的新用途，具體的說是涉及土茯苓黃酮類提取物在制備治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的 (一)土茯苓抑制XOD活性部位篩選
1、制備方法 (1) 土茯苓提取物
土茯苓藥材粉末，用6-12倍藥材量的50%-90%乙醇滲漉提取，待滲漉完畢后，回收滲漉液至Ig生藥/ mL，即為土茯苓提取物(T); (2)四種溶劑部位提取物
取土茯苓提取物(T)一定量，分別用2-5倍體積的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取3-5次， 三個萃取液及水層回收至干，用70%乙醇溶解并定容至10 mL，得土茯苓氯仿部位(TC)、乙酸乙酯部位(TE)、正丁醇部位(TB)及水部位(TH)提取物。
2、抑制XOD活性評價
吸取1. 2 mL pH7. 9磷酸緩沖液到5 mL容量瓶中，再分別加入1. 5 mL 2. 0 mmol · L—1 黃嘌呤溶液和0. 2 mLl. 8 mg · mL—1氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)，搖勻，為XOD活性測定用空白溶液。取土茯苓(T)及各溶劑部位提取物(C、E、B、H)適量，揮干溶劑，DMSO溶解，精密吸取一定量置于空白溶液中為樣品測定液。往該空白溶液及樣品測定液中加入1. 2 mL XOD溶液(0. 08U · mL—1)，搖勻，以XOD 溶液的加入開始計時，25°C反應(yīng)30 min后，置于UV-2401紫外分光光度計中，以空白溶液為對照，檢測波長為560 nm，測定XOD溶液的吸光度Atl，測定土茯苓及各萃取部位吸光度As。抑制率％ = (A0-As) /A0 X 100%
結(jié)果見表1。土茯苓提取物對XOD活性具有較強(qiáng)的抑制作用。在各萃取溶劑部位中，僅乙酸乙酯部位具有抑制XOD活性，且強(qiáng)于土茯苓，表明乙酸乙酯部位為土茯苓抑制XOD活性的有效部位。表1 土茯苓及各萃取部位抑制XOD活性結(jié)果(n=3)
權(quán)利要求
1.土茯苓黃酮類提取物在制備預(yù)防和治療高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用；其中土茯苓黃酮類提取物的提取方法如下(1)稱取土茯苓藥材粉末1kg，用6-12L50%-90%乙醇滲漉提取，滲漉完畢后，回收滲漉液至Ig生藥/ mL得土茯苓提取物；(2)取土茯苓提取物用2-5L氯仿萃取3-5次，氯仿層棄去，水層用2-5L乙酸乙酯萃取分2-5次萃取，乙酸乙酯層合并回收溶劑，60°C減壓干燥得土茯苓黃酮類提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的土茯苓黃酮類提取物中黃酮的純度為 90%ο
全文摘要
本發(fā)明公開了土茯苓黃酮類提取物在制備治療和預(yù)防高尿酸血癥藥物中的應(yīng)用。土茯苓用6-12倍藥材量的50%-90%乙醇滲漉提取，回收滲漉液至1g生藥/mL，用2-5倍體積的氯仿萃取后，水層用2-5倍量的乙酸乙酯萃取3-5次，萃取液濃縮，60℃減壓干燥為土茯苓黃酮類提取物，黃酮純度為92%，是土茯苓總黃酮的62.5%。該黃酮類提取物能抑制黃嘌呤氧化酶(XOD)的活性強(qiáng)于土茯苓藥材，在125~500ug范圍內(nèi)對XOD活性的抑制率為50%-60%。因此，可作為預(yù)防和治療高尿酸血癥的醫(yī)藥用途。
文檔編號A61P19/06GK102389548SQ201110313808
公開日2012年3月28日 申請日期2011年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月17日
發(fā)明者尹蓮, 徐婷婷, 承志凱 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)