專利名稱：副干酪乳酸桿菌株gmnl-133、用于改善異位性皮膚炎或其它過敏疾病的組合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種乳酸桿菌株及其用途，特別是涉及一種副干酪乳酸桿菌株及包括它的用于改善過敏疾病的組合物及用途。
背景技術：
過敏是一種后天獲得的對正常無害物質產生免疫上的不良反應。過敏反應引起的癥狀有瘙癢、咳嗽、氣喘、噴嚏、淚眼、發(fā)炎及疲乏等。人們認為過敏反應包括早期專一性免疫反應及晚期炎癥反應。據(jù)報導，過敏原(如花粉及塵螨)通過刺激高親和力免疫球蛋白 E(IgE)中介早期的過敏反應。具體而言，當肥大細胞及嗜堿性粒細胞受到過敏原刺激時，會釋放組織胺及細胞激素。細胞激素隨后通過聚集發(fā)炎細胞中介晚期的過敏反應。亦有報導指出嗜酸性粒細胞、巨噬細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞和血小板的匯集開啟晚期惡性的炎癥反應循環(huán)。晚期的過敏反應增強最初的免疫反應，轉而促使釋放更多的發(fā)炎細胞。現(xiàn)已有多種療法用于治療過敏癥狀，包含使用抗過敏劑及組織胺H-受體拮抗劑 (抗組織胺)?？菇M織胺可減輕由組織胺作用于目標組織引起的充血、瘙癢及腫脹等癥狀， 并且可預防或緩和諸多由肥大細胞去顆粒引起的癥狀。但是，同時亦有報導，指出抗組織胺會產生一些副作用，例如警覺性降低、反應遲鈍及嗜睡。異位性皮膚炎是兒童最常見的一種過敏癥。治療異位性皮膚炎的傳統(tǒng)方法為局部類固醇療法，但其實異位性皮膚炎癥狀很難根除，且停藥后經常復發(fā)。再者，長期使用類固醇療法容易產生副作用，例如皮膚萎縮變薄、皮膚色素改變、長毛、長痘等。因此，副作用少且安全性高，可以放心使用的藥劑成為病人和臨床上所期望。益生菌近年來被醫(yī)學界和科學界認定有助人體健康，且無副作用。聯(lián)合國糧食農業(yè)組織(FAO)以及世界衛(wèi)生組織(WHO)將益生菌(probiotics)定義為活的微生物，當它呈適當數(shù)量給藥時，可賦予宿主一健康益處(health benefit) 0目前可作為益生菌使用的微生物有許多種類，例如乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、雙叉桿菌屬(Bifidobacterium)、 乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)、酵母菌屬(yeasts)、鏈球菌屬 (Streptococcus)等等。乳酸桿菌屬是一群革蘭氏陽性的兼性厭氧菌，普遍存在于人類的胃腸道與陰道內，能夠發(fā)酵糖類并以乳酸為主要代謝產物。有許多的研究以及臨床試驗皆陸續(xù)證實乳酸桿菌與健康之間存在有重要的相關性。目前，乳酸桿菌已被發(fā)現(xiàn)的功效包括(1)增進腸道微生物群的菌相平衡；(2)預防腹瀉；(3)降低結腸癌的危險性；(4)刺激胃腸上皮黏膜系統(tǒng)的正常發(fā)展與功能；(5)產生各種維生素與營養(yǎng)素；以及(6)預防與治療陰道炎。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一方面在于提供一種經分離的副干酪乳酸桿菌株GMNL-133，其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，CCTCC)，保藏編號為 CCTCC M 2011331。本發(fā)明的另一方面在于提供一種副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的用途，其用于制造治療異位性皮膚炎的組合物。根據(jù)本發(fā)明的上述方面，提出一種用于治療異位性皮膚炎的組合物，包括副干酪乳酸桿菌株GMNL-133，且該副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的含量可有效改善異位性皮膚炎。本發(fā)明的又一方面在于提供一種副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的用途，其用于制造治療過敏疾病的組合物。根據(jù)本發(fā)明的上述方面，提出一種用于治療過敏疾病的組合物，包括副干酪乳酸桿菌株GMNL-133，且副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的含量可有效改善過敏疾病。根據(jù)本發(fā)明一實施例，副干酪乳酸桿菌株GMNL-133可為活菌或是經過熱處理的死菌。而治療異位性皮膚炎或過敏疾病的組合物可為醫(yī)藥組合物或食品組合物。根據(jù)本發(fā)明另一實施例，治療異位性皮膚炎或過敏疾病的組合物可進一步包含至少一種其它菌株，該其它菌株選自于由嗜酸性乳酸桿菌(LactcAacillus acidophilus)、植物乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、發(fā)酵乳酸桿菌(Lactobacillus fermentum)、保力口利亞乳酸桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、奶酷乳酸桿菌(Lactobacillus cremors)、鼠李糖乳酸桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、羅伊氏乳酸桿菌(Lactobacillus reuteri)及上述菌的任意組合所組成的族群。附圖簡要說明

圖1為分離株GMNL-133于顯微鏡下的形態(tài)圖。圖2為副干酪乳酸桿菌株GMNL-133與其它市售產品中副干酪乳酸桿菌株的RAPD 電泳圖。圖3為副干酪乳酸桿菌株GMNL-133與其它市售產品中副干酪乳酸桿菌株分別刺激小鼠脾臟細胞產生的IFN-Y表達量的柱形圖。圖4A至4B分別為致敏小鼠模式實驗中，各組的血清中IgE與IgGh表達量以安慰劑組的表達量標準化的柱形圖，*標記表示與安慰劑組相比具有統(tǒng)計學上的顯著差異(P < 0. 05)。圖5A至5D分別為致敏小鼠模式實驗中，各組的脾臟細胞培養(yǎng)液中的TGF-β、 IFN- y、IL-10以及IL-17表達量以安慰劑組的表達量標準化的柱形圖，*標記表示與安慰劑組相比具有統(tǒng)計學上的顯著差異(P < 0. 05)。圖6A為異位性皮膚炎小鼠模式實驗中，各組小鼠右耳厚度結果的柱形圖，*標記表示與安慰劑組相比具有統(tǒng)計學上的顯著差異(P < 0. 05)。圖6B至6C分別為異位性皮膚炎小鼠模式實驗中，各組小鼠血清中的IgE以及 IgGl表達量以安慰劑組的表達量標準化的柱形圖，*標記表示與安慰劑組相比具有統(tǒng)計學上的顯著差異(P <0.05)。圖6D為異位性皮膚炎小鼠模式實驗中，各組小鼠耳部組織中的TNF-α的表達量以安慰劑組的表達量標準化的柱形圖，*標記表示與安慰劑組相比具有統(tǒng)計學上的顯著差異(P < 0. 05)。
具體實施例方式目前有報導指出通過調節(jié)細胞激素可治療過敏。其中，Y-干擾素(IFN-Y)可抑制II型輔助T細胞(Th2)的細胞激素的過度表達，特別是抑制介白素-4(IL-4)的分泌，進而降低B淋巴細胞的增殖。此外，IFN-Y還可刺激I型輔助T細胞(Thl)的免疫反應，抑制IgE的合成。因此，相信IFN-Y對于治療過敏有效。因此，本發(fā)明提供一新穎的副干酪乳桿菌株GMNL-133，所述菌株GMNL-133具刺激小鼠的脾臟細胞分泌IFN-Y的能力，可用于制造治療過敏疾病的組合物。副干酪乳桿菌株GMNL-133依據(jù)布達佩斯條約的規(guī)定，于2011年9月沈日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)(中國，武漢，武漢大學，430072)，保藏號為CCTCCM2011331。此副干酪乳桿菌株GMNL-133 (CCTCC M 2011331)可包含至少一種藥學上可接受的賦形劑和/或稀釋劑等其它成分，例如葡萄糖、麥芽糊精、嬰兒奶粉、果寡糖、硬脂酸鎂、優(yōu)格香料、其它難以分離的成分、或上述的任意組合，且此其它成分以及配制方法為本發(fā)明技術領域所屬技術人員所熟知。另外，副干酪乳桿菌株GMNL-133 (CCTCC M 2011331)的用量可為每千克約1 X 106至約 1X1011個菌落形成單位(CFU/g)。所謂“過敏疾病”是指異位性皮膚炎、過敏性鼻炎與氣喘、以及一些特定的食物與昆蟲叮咬引起的過敏。這些疾病會導致相當程度的發(fā)炎反應，造成皮膚、黏膜組織或是血管的慢性發(fā)炎。根據(jù)本發(fā)明一實施例，治療過敏疾病的組合物包含副干酪乳桿菌株GMNL-133，且副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的含量可有效改善過敏疾病。上述副干酪乳酸桿菌株GMNL-133可為活菌或是經過熱處理的死菌。治療過敏疾病之組合物可為口服組合物，例如醫(yī)藥組合物或食品組合物。根據(jù)本發(fā)明另一實施例，治療過敏疾病的組合物可進一步包含至少一種其它菌株。其它菌株選自于由嗜酸性乳酸桿菌(LactcAacillus acidophilus)、植物乳酸桿菌 (Lactobacillus plantarum)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、發(fā)酵乳酸桿菌 (Lactobacillus fermentum)、保加利亞乳酸桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、奶酷乳酸桿菌(Lactobacillus cremors)、鼠李糖乳酸桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、羅伊(Lactobacillus reuteri)及上述白勺7[壬意組合所組成的族群。一般而言，其它菌株的菌量可為約lX107CFU/g或以上。實施例1、菌株的分離、篩選及鑒定本發(fā)明人自健康人體胃腸道檢體分離百余株乳酸桿菌，并建立一分離株菌種庫。為尋找具有減緩治療過敏相關疾病潛力的乳酸桿菌，分別將菌種庫中的各乳酸桿菌與小鼠脾臟細胞共培養(yǎng)，進行小鼠脾臟細胞IFN-Y分泌量的分析，進而從中篩選出分離株 GMNL-133為一可刺激小鼠脾臟細胞分泌大量IFN-Y的乳酸桿菌。將此分離株GMNL-133進行各項菌種鑒定分析。圖1為分離株GMNL-133于顯微鏡下的形態(tài)圖。分離株GMNL-133初步試驗結果顯示為革蘭氏陽性桿菌，不具觸酶、氧化酶及運動性，在好氧及厭氧環(huán)境下皆會生長。再進一步以16S rDNA序列及API 50 CHL鑒定系統(tǒng)分析。分離株GMNL-133的16S rDNA部分序列如SEQ ID No 1所示。表一為分離株GMNL-133以API50CHL鑒定系統(tǒng)分析的結果。
表一分離株GMNL-133的API 50CHL鑒定系統(tǒng)的分析結果
權利要求
1.一種經分離的副干酪乳酸桿菌株GMNL-133，其保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心 (CCTCC)，保藏編號為 CCTCC M 2011311。
2.根據(jù)權利要求1的副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的用途，用于制造治療異位性皮膚炎的組合物。
3.根據(jù)權利要求1的副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的用途，用于制造治療過敏疾病的組合物。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的用途，其中該副干酪乳酸桿菌株GMNL-133為活菌。
5.根據(jù)權利要求2或3所述的用途，其中該組合物為一醫(yī)藥組合物或一食品組合物。
6.一種用于治療異位性皮膚炎的組合物，包括根據(jù)權利要求1的副干酪乳酸桿菌株 GMNL-133,且該副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的含量可有效改善異位性皮膚炎。
7.一種用于治療過敏癥狀的組合物，包括根據(jù)權利要求1的副干酪乳酸桿菌株 GMNL-133,且該副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的含量可有效改善過敏疾病。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的組合物，其中該副干酪乳酸桿菌株GMNL-133為活菌。
9.根據(jù)權利要求6或7所述的組合物，其中該組合物為一醫(yī)藥組合物或一食品組合物。
10.根據(jù)權利要求6或7所述的組合物，進一步包含至少一種其它菌株，該其它菌株選自于由嗜酸性乳酸桿菌(LactcAacillus acidophilus)、植物乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、發(fā)酵乳酸桿菌(Lactobacillus fermentum)、保加利亞乳酸桿菌(Lactobacillus bulgaricus)、口譽熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、奶酷IL酸桿菌(Lactobacillus cremors)、鼠李糖乳酸桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、羅伊氏乳酸桿菌(Lactobacillus reuteri)及上述的任意組合所組成的一族群。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種經分離的副干酪乳酸桿菌株GMNL-133，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為CCTCC M 2011331。所述副干酪乳酸桿菌株GMNL-133可用于制造治療異位性皮膚炎或其它過敏疾病的組合物。此外，本發(fā)明涉及一種包括所述副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的組合物，且副干酪乳酸桿菌株GMNL-133的含量可有效治療異位性皮膚炎或其它過敏疾病。
文檔編號A61P37/08GK102399718SQ20111031940
公開日2012年4月4日 申請日期2011年10月14日 優(yōu)先權日2011年10月14日
發(fā)明者呂英震, 謝豐欽 申請人:景岳生物科技股份有限公司