專(zhuān)利名稱(chēng)：神經(jīng)變性疾病的治療的制作方法
神經(jīng)變性疾病的治療
本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?004800U982. 0(國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/GB2004/002089)、申請(qǐng)日為2004年5月14日、發(fā)明名稱(chēng)為“神經(jīng)變性疾病的治療”的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
本發(fā)明涉及治療神經(jīng)變性疾病的方法，尤其是治療其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGF-β) 特別是TGF-β 1的增加是有益的那些神經(jīng)變性疾病的方法。更具體而言，本發(fā)明提供了如多發(fā)性硬化癥和由于頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)和顱內(nèi)出血引起的退化后遺癥的治療方法，其中神經(jīng)功能從受損狀態(tài)下得到好轉(zhuǎn)或者恢復(fù)。本發(fā)明還提供包含不飽和脂肪酸部分的已知的和新的化合物在制備能夠有效治療上述病癥的藥物的新用途，更特別的是對(duì)于神經(jīng)功能恢復(fù)能夠達(dá)到以前不能到達(dá)的水平的成功。
η-3和η-6不飽和型必需脂肪酸(EFAs)對(duì)大多數(shù)人生理紊亂具有有益作用已有大量報(bào)道。WO 02/02105 (Laxdale有限公司)描述它們對(duì)于非常多的疾病的有益用途和作為全營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑的有益用途。Harbige (1998) Proc. Nut. Soc. 57，555-562綜述了在自身免疫疾病狀態(tài)下含η-3和η-6酸的飲食的補(bǔ)充給藥法，尤其特別提到富含γ-亞麻酸(GLA)和/或亞油酸(LA)的油酯如琉璃苣油在減少類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床重要體癥和癥狀的益處的跡象。
對(duì)多發(fā)性硬化癥患者的兩項(xiàng)研究特別提到指出使用含有η-6酸部分的油酯的治療方法可以減少該病的復(fù)發(fā)和嚴(yán)重度(Miller等人(197 和Bates等人(1978))，而確認(rèn)該效果的進(jìn)一步研究卻失敗了 O^aty等人(1978)。這些論文報(bào)道患者每天補(bǔ)充20g亞油酸 (18:2n-6)可影響多發(fā)性硬化癥復(fù)發(fā)的持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重度，和對(duì)照組相比，復(fù)發(fā)頻率更低、 嚴(yán)重度更輕和持續(xù)時(shí)間更短。Bates特別提到已在1957年被建議的亞油酸與Y -亞麻酸的混合物可在治療炎癥和自身免疫疾病中更有效，并開(kāi)始這項(xiàng)研究。然而，發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用該組合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，每天給予3g油的復(fù)發(fā)患者(Naudicelle月見(jiàn)草油)在試驗(yàn)組中病情比對(duì)照組更嚴(yán)重。
其它人的這些亞油酸研究的Meta分析(Dworkin等(1984))表明輕度多發(fā)性硬化癥患者在長(zhǎng)期的病癥進(jìn)程中復(fù)發(fā)率減少和嚴(yán)重度降低。后來(lái)對(duì)多發(fā)性硬化癥的開(kāi)放試驗(yàn)表明低脂肪飲食和/或控制飲食的η-3和η-6脂肪酸可能是有益的(Swank和 Grimsgaard (1988) ；Harbige 等人(1990)。
雖然MS的病因?qū)W尚不清楚，強(qiáng)有力的證據(jù)表明是疾病發(fā)病機(jī)制中存在自身免疫機(jī)制[Martino & Hartung 1999]。研究顯示，與健康對(duì)照相比，MS患者有較高量的處于激活增長(zhǎng)態(tài)的神經(jīng)抗原自體反應(yīng)T細(xì)胞，如髓磷脂堿性蛋白(MBP)和髓磷脂少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)自體激活的T細(xì)胞[Fredrikson等人1994，Kerlero de Rosbo等人1993， 1997，Chou 等人 1992，Ota 等人 1990，Burns 等人，1999，Zhang 等人 1994，Tejada-Simon 等人2001]。軸突損傷的實(shí)際過(guò)程，例如MS中的慢性炎癥、脫髓鞘和astrogliosis是復(fù)雜的， 但認(rèn)為白質(zhì)炎癥和脫髓鞘(作用)可確定該病嚴(yán)重度，近來(lái)研究表明MS中軸突損傷始于該病早期階段并導(dǎo)致殘疾(De Mefano等人，2001)。
實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是最常用的MS免疫介導(dǎo)作用的動(dòng)物模型。對(duì)豚鼠的研究顯示亞油酸部分地抑制了 EAE的發(fā)生率和嚴(yán)重度(Meade等人(1978))。使用真菌或者植物來(lái)源的富含Y-亞麻酸的油脂而得到的全面保護(hù)作用可在大鼠和小鼠尊中都得到證實(shí)(Harbige等人(1995)，1997b)。這些研究證實(shí)了亞油酸和Y -亞麻酸在EAE臨床和組織病理學(xué)上的疾病緩和作用。根據(jù)劑量，Y-亞麻酸對(duì)急性大鼠EAE具有全面保護(hù)作用，而亞麻酸對(duì)臨床嚴(yán)重度有劑量依賴(lài)作用但不能取消(abolish)它。盡管這些是實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)認(rèn)識(shí)到人類(lèi)疾病，多發(fā)性硬化癥是極其復(fù)雜的，可通過(guò)T細(xì)胞和其它免疫反應(yīng)因子的活性而可逆的惡化或者改善?；谥挥脕営退岬玫降纳鲜鼋Y(jié)果，認(rèn)為Π-6脂肪酸促進(jìn)自身免疫和炎癥疾病。體外飼喂小鼠γ-亞麻酸，TGF-β和 PEG2的產(chǎn)量顯示非特異性增加；但同時(shí)有報(bào)道在急性和復(fù)發(fā)期EAE中TGF-β具有保護(hù)作用((Racke等人(1993) ；Santambrogio等人(1993))，PG抑制劑如吲哚美辛，因而惡化疾病 (Ovadia & Paterson(1982))。MS的發(fā)病機(jī)制中涉及的細(xì)胞因子，許多研究顯示伴隨該病復(fù)發(fā)期致脫髓鞘性細(xì)胞因子(TNF-a ,IL-Ιβ和IFN-γ )增加。與此相反，抗炎癥和免疫抑制細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-βΙ)的水平在復(fù)發(fā)期出現(xiàn)降低，隨患者進(jìn)入緩解期而增加。因此，在MS復(fù)發(fā)-緩解期生物活性TGF-β 1與前炎性的TNF-α，IL-I β和IFN-γ之間的平衡出現(xiàn)失調(diào)。在EAE的自然恢復(fù)期，分泌TGF- β的T細(xì)胞抑制EAE效應(yīng)細(xì)胞TGF- β在CNS中的表達(dá)和在EAE中產(chǎn)生的口服-耐受-誘導(dǎo)保護(hù)作用，TGF- β和PEG2在腦部表達(dá)也受到抑制(Karpus 和 Swanborg (1991) ；Khoury 等人(1992))。Harbige (1998)推斷飲食中 Y-亞麻酸對(duì)EAE的作用是通過(guò)涉及TGF-β的樣機(jī)制以及可能通過(guò)超氧化物歧化酶的抗氧化活性調(diào)節(jié)。建議使用，尤其是富含Y-亞麻酸和亞油酸油的琉璃苣油作為提供多發(fā)性硬化癥的免疫抑制方法(us 4，058，594)。建議劑量是每天2. 4g油，沒(méi)有提供有效性的實(shí)際證據(jù)。琉璃苣油(典型的每100%脂肪酸含量中有23% Y-亞麻酸和37%亞油酸)顯示明顯減輕伴有活躍型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的自身免疫疾病的臨床重要體癥和癥狀(Leventhal et al(1993))。琉璃苣油和真菌油(見(jiàn)

圖1)顯示在用于鑒別MS候選者的EAE動(dòng)物模型中有效，然而從來(lái)沒(méi)有顯示對(duì)人類(lèi)疾病明顯有效。含有低水平Y(jié)-亞麻酸的高水平亞油酸(ΕΡ0 亞油酸Y -亞麻酸7 1)可部分抑制大鼠EAE的發(fā)生率和嚴(yán)重度(Mertin和 Stackpoole, 1978)，然而Naudicelle研究指出上述物質(zhì)可導(dǎo)致患者病情惡化。盡管在過(guò)去大約30年中多發(fā)性硬化癥患者使用琉璃苣油和其它含有GLA/LA的油如月見(jiàn)草油，但是大多數(shù)患者沒(méi)有從該病中恢復(fù)，沒(méi)有顯示明顯改善，隨著隱晦的疾病持續(xù)發(fā)展致死。其它更引人注目的免疫抑制劑療法，包括T細(xì)胞耗竭劑和調(diào)節(jié)劑例如環(huán)磷酰胺， 也顯示在EAE模型中有效，但在人類(lèi)多發(fā)性硬化癥使用這些方法癥狀改善，但隱晦的疾病持續(xù)發(fā)展。人類(lèi)中T細(xì)胞的確產(chǎn)生有益的細(xì)胞因子，例如TGF-β 1，同時(shí)產(chǎn)生有害的細(xì)胞因子。英國(guó)神經(jīng)研究所的David Baker總結(jié)了對(duì)于EAE和MS之間有效性的差異，以“都可以阻止 EAE，都不可以阻止 MS” ( "Everything stops EAE,nothing stops MS”)為題論文發(fā)表在2004年5月10日英國(guó)MS學(xué)會(huì)的2004英國(guó)MS前沿會(huì)議上。很顯然，單獨(dú)的免疫抑制不能治愈MS。由于MS患者基礎(chǔ)性潛在代謝紊亂導(dǎo)致膜異常、細(xì)胞因子失調(diào)和隨后的免疫免疫攻擊和損傷，這幾乎是肯定的。盡管患者進(jìn)入復(fù)發(fā)-緩解疾病的緩解期，潛在的脫髓鞘作用繼續(xù)作用。治療MS的“金標(biāo)準(zhǔn)”仍然是干擾素，例如β -Avonex 、Rebif ‘⑧和其它干擾素制齊U。該金標(biāo)準(zhǔn)治療只能滿(mǎn)足部分患者的需要，例如30%，甚至在這些患者中癥狀改善限于減輕復(fù)發(fā)嚴(yán)重度。同時(shí)，在一定比率患者中癥狀減輕，由于潛在的惡化，該病易于發(fā)展成進(jìn)一步的殘疾和死亡。
本發(fā)明人現(xiàn)令人驚訝的測(cè)定到用含有Y-亞麻酸的甘油三酯油伴有適宜的相應(yīng)脂肪酸含量的順應(yīng)“高劑量”療法，可實(shí)現(xiàn)MS幾乎所有的癥狀的顯著改善，該方法超過(guò)了金標(biāo)準(zhǔn)療法所能提供的?？紤]到以前使用其它含Y-亞麻酸制劑沒(méi)有如此顯著成功，上面成功尤其讓人驚奇。
在18月的時(shí)期里，服用高劑量挑選的琉璃苣油的患者顯示在EDSS得分有顯著(ρ < 0. 001)和明顯的改進(jìn)，復(fù)發(fā)率減少，肌肉痙攣和痛感癥狀得到緩解，對(duì)認(rèn)知功能的客觀測(cè)評(píng)得到改善。低劑量琉璃苣油沒(méi)有效果。
服用高劑量琉璃苣油的患者在試驗(yàn)期間維持他們的外周血單核細(xì)胞(PBMC)的 TGF-β 1產(chǎn)量水平，他們的前炎性細(xì)胞因子TNF-α和IL-β 1顯著和明顯(< 70% )地減少，他們既維持或者增加了 PMBC膜中長(zhǎng)鏈ω-6脂肪酸，二高-γ-亞麻酸(DHLA)和花生四烯酸(AA)，與此相反，服用安慰劑的患者在整個(gè)試驗(yàn)期間顯示脂肪酸丟失。
盡管期望用免疫抑制來(lái)減少活性損傷和神經(jīng)變性，本發(fā)明療法可明顯地靶向維持重要膜脂質(zhì)成分，否則這些成分在MS中特異性地丟失，這表明對(duì)代謝性缺陷的糾正，否則用當(dāng)前療法無(wú)法有效治療。對(duì)這個(gè)沒(méi)有任何效果低劑量(5g/天)的事實(shí)支持了該測(cè)定。
特別地，發(fā)明人測(cè)定到含有Y-亞麻酸和亞油酸在甘油三酯分子中具有特定的位置分布的甘油三酯的甘油三酯油，優(yōu)選油酸，對(duì)使用多年的多發(fā)性硬化癥能提供EDSS得分的顯著降低，這個(gè)結(jié)果是目前任何施藥療法所不能達(dá)到的。
已知γ-亞麻酸(18:3n-6，GLA)在體內(nèi)可迅速轉(zhuǎn)化為更長(zhǎng)鏈的ω-6多不飽和脂肪酸二高-Y-亞麻酸和花生四烯酸(Phylactos等人1994，Harbige等人1995，2000)。 因此，為在MS中提高了膜長(zhǎng)鏈ω-6脂肪酸水平，發(fā)明人對(duì)從一些將含GLA的油脂作為已知稱(chēng)作慢復(fù)發(fā)型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(CREAE)的體內(nèi)MS實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中的GLA 遞送系統(tǒng)得到的結(jié)果進(jìn)行綜述，所述油脂為真菌的(來(lái)自毛霉菌屬爪哇根霉(Mucor iavanicus))和植物的(琉璃苣(Borago officianalis))月見(jiàn)草夜來(lái)香或者黑醋栗)和合成的tri-GLA油。
實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的自身免疫疾病， 伴有或者不伴有脫髓鞘，可在嚙齒類(lèi)和其它哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)產(chǎn)生。然而在大鼠中誘導(dǎo)(用豚鼠堿性蛋白)并不產(chǎn)生脫髓鞘作用的組織學(xué)特征(Brosnan等人，1988)，而誘導(dǎo)出急性單相疾病模式，與以中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘作用和在臨床上復(fù)發(fā)-緩解為特征的MS不同。慢復(fù)發(fā)型和脫髓鞘EAE模型(CREAE)，以脫髓鞘作用和復(fù)發(fā)期為特征，因此當(dāng)前選作MS研究的動(dòng)物模型(Fazakerley 1997)。隨著證實(shí)髓磷脂突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)是MS中重要的神經(jīng)抗原靶(Genain等人1999)和證實(shí)在MS中與MBP相比外周血自體激活淋巴細(xì)胞對(duì)該抗原有更強(qiáng)烈的反應(yīng)(Kerlero de Rosbo等人1993，1997)，MOG誘導(dǎo)的CREAE成為具有與在MS 中觀察到的更相似特征的動(dòng)物模型的選擇(Fazakerely等人1997，Genain等人1999，Amor 等 1994)。
基于這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采納了兩個(gè)重要的選擇標(biāo)準(zhǔn)以用于挑選可獲得當(dāng)前目標(biāo)且改善的脂類(lèi)化合物。從CAEAE和大鼠EAE喂養(yǎng)研究的證據(jù)表明濃縮的黑醋栗種子油(72% w/ w 18:3ri-6，GLA)對(duì)抗EAE無(wú)保護(hù)作用(見(jiàn)表3)。重要的是黑醋栗種子油具有低sn-2GLA含量,且大部分GLA位于sn-Ι和sn-3位(Lawson和Hughes 1988)。此外，有包含三個(gè)GLA 的結(jié)構(gòu)化三酰甘油(TG-GLA)與CREAE中使用的琉璃苣油提供的保護(hù)作用相似(表2)。這也與sn-2 GLA是重要的相一致，即GLA的外對(duì)sn-Ι和sb_3在體內(nèi)可酶去除，并可能只有 sn-2 GLA留下進(jìn)行氧化。在體內(nèi)選擇性水解來(lái)自于公知特定功能的脂肪酶，該酶能從甘油三酯分子種去除sn-Ι和sn-3脂肪酸，但對(duì)sn-2位有明顯的保護(hù)作用(Lawson和Hughes 1988, Kyle 1990)。發(fā)明人對(duì)該數(shù)據(jù)的綜述也表明在MS的CREAE模型中亞油酸(LA)與γ -亞麻酸殘基的比率可能是包含LA和GLA的油的一個(gè)重要有效性特征(表1)。表I顯示了成分分析和真菌油、琉璃苣油、月見(jiàn)草油和紅花油在CREAE中的有效性。在減少CREAE的發(fā)生率上最有效的治療方法是含有LA GLA比為0. 85的真菌油。含有LA GLA比為1. 5的琉璃苣油也非常有效。此外，用在sn-1、Sn-2和sn-3含有GLA的結(jié)構(gòu)化甘油三酯(TG-GLA)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)GLA是活性組分。而且低劑量水平的TG-GLA也比琉璃苣油有效(見(jiàn)表2)。不同的琉璃苣種子油也在sn-2 GLA例如10% sn-2 GLA (Liu等人2000)和40% sn-2 (Lawson和Hughes 1988)水平上顯示有變化，這與我們對(duì)sn_2 GLA (范圍38-46% ) 未發(fā)表的觀察相一致，這可能是一些琉璃苣油不能在CREAE中產(chǎn)生全面保護(hù)作用的原因， 盡管其它因素如抗氧化成分可能也是重要的(未發(fā)表)。有報(bào)道琉璃苣油含有高達(dá)60%的 sn-2 GLA (Huang和Mills (1996) Y -亞麻酸代謝和它在營(yíng)養(yǎng)學(xué)和醫(yī)學(xué)中的作用第6章)， 并特別提到GLA進(jìn)入淋巴中是有效的。EP 0520624 (Efamol Holdings)的表3比較了月見(jiàn)草油和琉璃苣油中甘油三酯的含量，并教導(dǎo)在許多對(duì)GLA敏感的病癥中，前者比后者治療更有效。該文獻(xiàn)指出琉璃苣油具有27種不同的甘油三酯成分，其中只有20%是sn-2 GLA。第3頁(yè)第40-42行特別提到的生物學(xué)測(cè)試顯示當(dāng)GLA由不同油源供應(yīng)時(shí)，相同量的GLA確實(shí)具有非常不同的效果。重要的是，然后它向讀者指出月見(jiàn)草油(EPO)中存在一特殊成分，而琉璃苣油中沒(méi)有，該成分使得前者在提高PGEl (見(jiàn)EP 0520624第4頁(yè)圖和表2)和因此的抗炎作用具有優(yōu)越作用該組分是二亞油酸-單-Y -亞麻酸-丙三醇(DLMG)，表明其占EPO中總甘油三酯的18-19%。 第6頁(yè)明確教導(dǎo)GLA在sn-l、2或者3位上的位置對(duì)該作用并不重要。在1994年9月14-16日生理學(xué)會(huì)Aberdeen會(huì)議的會(huì)議記錄中Dines等人(1994) 報(bào)告了 EP 05206M提出的含有Y-亞麻酸的油類(lèi)對(duì)糖尿病性神經(jīng)病神經(jīng)損傷的治療研究， 并再次特別提到琉璃苣油對(duì)治療這種神經(jīng)變性不是非常有效，而月見(jiàn)草油卻有效。該論文得出的結(jié)論是琉璃苣油包含有干擾GLA活性的其它成分。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明人使用的選自與其它可在任意時(shí)間得到的樣品的低含量相比具有最高sn-2 GLA含量(>40%)的琉璃苣油用于試驗(yàn)。由于其低sn_2GLA含量，可在任意時(shí)間以相對(duì)較大量獲得的黑醋栗油并不認(rèn)為是最佳選擇，另一個(gè)選擇標(biāo)準(zhǔn)是總的長(zhǎng)鏈單烯脂肪酸應(yīng)保持低于5%。不同于不同來(lái)源的玻璃苣種子油(Borago officinalis)，其含有顯著水平的芥子酸02 ln_9)，即占總脂肪酸的 1. 4-2. 38 %，和其它長(zhǎng)鏈單烯脂肪酸24 ln-9 (神經(jīng)酸)和20 ln-9 (鱈油酸)(表4)。另外，由于維生素E對(duì)吸收、代謝和免疫作用的潛在影響(Harbige 1996,2003)， 試驗(yàn)用油只包含天然水平的維生素E (0. 05mg/g)而沒(méi)有額外添加維生素E，這是由于通常情況下使用的是市售琉璃苣種子油(如lmg/g)。
據(jù)信經(jīng)過(guò)這樣選擇的油酯具有免疫抑制作用，但也明顯具有代謝補(bǔ)充作用，這對(duì)降低免疫攻擊造成的損傷和創(chuàng)造修復(fù)所必需的環(huán)境是有益的，這是以前提供用于治療MS 的任何藥物所不能實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供用于治療需要治療的患者中神經(jīng)變性疾病的方法，包括施予患者治療有效劑量的包含Y-亞麻酸和亞油酸殘基的甘油三酯油如甘油三酯，在甘油三酯sn-2位上Y-亞麻油和亞油酸殘基的比率至少為0.8 ；在sn-2位的γ-亞麻酸殘基的量為至少18%，其中油以足以維持或者提高患者TGF-β 1水平在治療水平的劑量施予。治療水平是指至少與健康受試者相一致的水平。優(yōu)選劑量是例如在每日服藥18 個(gè)月后，患者血中產(chǎn)生的TGF- β 1/TNF- α的比率是0. 4至3，至少0. 5，更優(yōu)選至少0. 75，最優(yōu)選至少1。優(yōu)選劑量是例如在每日服藥18個(gè)月后，患者血中產(chǎn)生的TGF-i3 1/IL-li3的比率為至少0. 5，更優(yōu)選至是0. 75，最優(yōu)選至少1。優(yōu)選所說(shuō)的水平是在12個(gè)月后產(chǎn)生的，更優(yōu)選是在6個(gè)月后產(chǎn)生的。典型地，油的每日口服施用劑量是3-30克，更優(yōu)選5-20克，最優(yōu)選7_18克，典型地15克。最優(yōu)選的是，除了 Y -亞麻酸和亞油酸脂肪酸殘基之外，所述油包含非結(jié)構(gòu)化的酯化脂肪酸，即它代謝能產(chǎn)生能量，例如油酸殘基。殘基是指脂肪酸羧基與甘油分子中的一個(gè)羥基酯化后剩余的部分。最優(yōu)選地施予的油是來(lái)源于琉璃苣油或者真菌油例如來(lái)自爪灃根酶(Mucor javanicus)的油。典型地琉璃苣油和真菌油組分在表1中闡述，其中18:2n-6和18:3n_6分別代表按百分?jǐn)?shù)表示的亞油酸和Y-亞麻酸。典型地，琉璃苣油脂包含占油中脂肪酸殘基百分比為20-25%的Y-亞麻酸殘基和包含占油中脂肪酸殘基百分比為35-40%的亞油酸殘基。優(yōu)選的琉璃苣油是在sn-2位上的酯化Y-亞麻酸的量占該位脂肪酸殘基為至少35%的琉璃苣油，更優(yōu)選高于39%，仍更優(yōu)選高于40%。最優(yōu)選的油脂是在sn-2位上的酯化Y-亞麻酸的量占該位脂肪酸殘基高于41%的油，例如41至42% sn-2 GLA，同時(shí)理想地是超過(guò)45%。如前面Hutang所述， 60% sn-2 GLA琉璃苣已制得，并可得到以用于選擇。sn_l和sn-3位殘基優(yōu)選亞油酸、油酸和Y -亞麻酸，優(yōu)選油脂在這些位置中的至少一個(gè)，或者兩個(gè)，具有相對(duì)高的油酸含量，如高于12%，更優(yōu)選高于14%。適宜用于本發(fā)明用途的典型的琉璃苣油含有的脂肪酸分布如下Sn-I 14% 18 1 (油酸的)，54% 18 &ι_6 (亞油酸的)和 4% 18 3η_6 ( γ -亞麻酸的)Sn-2 14% 18:1 (油酸的)，42% 18:&ι_6(亞油酸的)和 40% 18:3η_6(γ-亞麻酸的)Sn-3 19% 18:1 (油酸的)，18% 18:&ι_6(亞油酸的)和 30% 18:3η_6(γ-亞麻酸的)當(dāng)使用真菌油如來(lái)自毛霉菌屬的油時(shí)，Y-亞麻酸殘基的總量可能會(huì)低于琉璃苣油，只要Sn-2Y-亞麻酸亞油酸比率為至少0.8，更優(yōu)選大于1。這是因?yàn)檎婢鸵子诤斜葋営退釟埢嗟摹按x”定向性油酸殘基。因此，優(yōu)選的真菌油是在sn-2位的酯化Y -亞麻酸的量至少占該位的脂肪酸殘基的18%，更優(yōu)選至少20%，最優(yōu)選至少22%的真菌油。優(yōu)選的真菌油含有高于45%，更優(yōu)選高于50%的sn-2位的脂肪酸殘基例如油酸。
Sn-I 25% 18:1(油酸的)，5% 18 &ι_6 (亞油酸的)和 13% 18 3η_6 ( γ -亞麻酸的)
Sn-2 54% 18:1 (油酸的)，19% 18:&ι_6(亞油酸的)和 20% 18:3η_6(γ-亞麻酸的)
Sn-3 40% 18:1(油酸的)，3% 18 &ι_6 (亞油酸的)和 20% 18 3η_6 ( γ -亞麻酸的)
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到通過(guò)測(cè)試在給定的油脂混合物中所述脂肪酸在每個(gè)位置的平均值的占多種甘油三酯的百分比來(lái)確定油酯的來(lái)源。這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的，例如英國(guó)蘇格蘭 Mylnefiled，Inverghowrie, Dundee DD2，OTA 的 Mylnefiled Research Services Ltd的Lipid Analysis Unit。申請(qǐng)人設(shè)法得到大量能夠達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)的油脂，在2003年新西蘭來(lái)源的油脂樣品中發(fā)現(xiàn)在sn-2上最高的數(shù)值是大約46% 當(dāng)然這會(huì)隨著年份不同而變化。然而，重要的是給予某些對(duì)低劑量(5g/天)的琉璃苣油不起反應(yīng)的患者上述油脂，想要痊愈的患者的效力可通過(guò)對(duì)比比需要的日常劑量更低的sn-2% GLA琉璃苣油的低劑量的等效性來(lái)確定。
在下面方法部分，還提供了 NMR方法用于在選擇過(guò)程中分析這些油脂。然而， 應(yīng)該認(rèn)識(shí)到在給定的標(biāo)準(zhǔn)下，所有可得到的油脂是低于35%的sn-2GLA值，如果他們低于40%或者45%，優(yōu)選地合成的甘油三酯或者甘油三酯混合物給藥是可以的。大量的適宜脂質(zhì)是本領(lǐng)域已知的，并可以是單獨(dú)使用或者與LGL、0G0、OGL、LGO或者在琉璃苣油中存在的其它已知成分的混合物混合(參見(jiàn)EP 05206M表3)。甚至可加入TriGLA(FR 2，617，161 (1988))，盡管對(duì)于本發(fā)明的目的而言，優(yōu)選禁止sn_l和sn-2位GLA水平過(guò)高， 因?yàn)槿鞧LA的過(guò)剩和因而產(chǎn)生的DHGLA和花生四烯酸池的溢出，導(dǎo)致處于過(guò)渡前炎性作用的危險(xiǎn)。例如，在 Y.-S. Huang，X. Lin, P. R. Redden and D. F. Horrobin, J Am.油脂化學(xué)學(xué)會(huì)(Oil Chem. Soc. ),72,625-631 (1995)含有天然的和合成的亞麻酸的三酰甘油被姨月旨醇的體夕卜水角軍禾口 K. Osada, K. Takahashi，M. Hatano 禾口 Μ. Hosokawa, Nippon Suisan Gakkaishi.，57，119-125 (1991).化學(xué)文摘，115 =278299富含酶合成的聚不飽和脂肪酸的甘油三酯的分子種類(lèi)中教導(dǎo)了 OGO的合成。
對(duì)于治療方案，當(dāng)任意的這些高Sn-2GLA油脂以高量施予時(shí)，推薦用量為潛在毒性長(zhǎng)鏈單烯脂肪酸如芥子酸(22:ln-9)和其它長(zhǎng)鏈單烯脂肪酸即M:ln-9(神經(jīng)酸)和 20:ln-9(鱈油酸)的量盡可能的低，優(yōu)選脂肪酸殘基低于5%，更優(yōu)選低于3%和更優(yōu)選低于2%。
優(yōu)選的油的另一個(gè)特征是低或者零添加的維生素E，其只能提供天然水平的維生素 E (0. 05mg/g)。
本發(fā)明還提供了如上所述的甘油三酯在制備治療神經(jīng)變性疾病的藥物中的用途， 尤其涉及潛在神經(jīng)變性的中止和神經(jīng)功能的恢復(fù)。特別地這些藥品是用于神經(jīng)膜組分的正?；⒔】档腡GF-β 1/TNF α比率和TGF-β 1與其它細(xì)胞因子的比率的恢復(fù)、在多發(fā)性硬化癥的神經(jīng)變性的中止、和部分或者全部神經(jīng)功能的恢復(fù)，這些可通過(guò)例如MRI或者CAT掃描或者EDSS得分來(lái)檢測(cè)。
也提供了經(jīng)過(guò)挑選的甘油三酯油，其在治療多發(fā)性硬化癥中具有特定功效，并影響細(xì)胞因子比率在體內(nèi)有益的變化，打算將這些油脂作為優(yōu)選用于上述方法。本發(fā)明所使用的油脂可通過(guò)藥學(xué)上任意常規(guī)載體施予。最常規(guī)地，它們以純油脂或者與食物混合以包含這些油脂的膠囊或者以腸包衣的形式施予。隨著遞送技術(shù)發(fā)展，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可想到其它形式。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到其它有益的試劑可與油脂聯(lián)合用于本發(fā)明中。所述試劑可以是離子通道阻滯劑如鈉通道阻滯劑、干擾素、T細(xì)胞耗竭劑、激素或者其它姑息劑。 還將認(rèn)識(shí)到對(duì)免疫和炎癥反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，考慮到這些系統(tǒng)的復(fù)雜性質(zhì)，這樣的聯(lián)合應(yīng)當(dāng)小心處理。然而，假如對(duì)本發(fā)明的油脂產(chǎn)生延遲反應(yīng)，只要附加的治療不阻礙TGF-β 1水平的正?；^(guò)程，在恢復(fù)該TGF-β 1水平正常之前在治療的第一個(gè)月短效劑可能是有效的。本發(fā)明將按照僅參照下述非限定性的表、實(shí)施例和附圖的實(shí)施例進(jìn)行描述。根據(jù)這些，落入本發(fā)明范圍的另外的實(shí)施方案可被本領(lǐng)域技術(shù)人員想到。表表1 顯示多種甘油三酯油脂中總脂肪酸的組分％和在EAE中的保護(hù)作用表2 顯示高sn-2 GLA琉璃苣油試驗(yàn)中三個(gè)治療組的參數(shù)表3 顯示各種形式的GAL對(duì)SJL小鼠的EAE發(fā)生率和臨床得分的影響表4 顯示富含黑醋栗油，高GLA含量但低sn-2 GLA的植物油與真菌油和琉璃苣油在EAE中的競(jìng)爭(zhēng)失敗表5 顯示對(duì)四批試驗(yàn)用琉璃苣油尤其是單烯的結(jié)果分析。表6 顯示對(duì)非試驗(yàn)用油尤其是單烯的分析。MM圖1 顯示在18個(gè)月用安慰劑和試驗(yàn)用油處理的MS患者的外周血單核細(xì)胞細(xì)胞因子生成量。圖2 顯示與高劑量(15g/天)相比，安慰劑和低劑量(5g/天)高sn-2 GLA琉璃苣油對(duì)人MS患者EDSS得分影響，以直方圖表示。圖3 顯示安慰劑、低劑量和高劑量高sri-2GLA琉璃苣油對(duì)人MS患者EDSS的影響，以曲線圖表示。圖4 顯示安慰劑、低劑量和高劑量高Sn-2GLA琉璃苣油對(duì)人MS患者平均復(fù)發(fā)率 (%)的影響，以直方圖表示。圖5 顯示安慰劑、低劑量和高劑量高sn-2 GLA琉璃苣油對(duì)人MS患者平均復(fù)發(fā)率 (%)的影響，以曲線圖表示。圖6 顯示油脂中一定比率的亞油酸Y-亞麻酸的作用相對(duì)于它們對(duì)小鼠CREAE 的保護(hù)作用。使用定量-iaC-NMR進(jìn)行琉璃苣油樣品中的Y-亞麻酸(GLA)的位置分析確定三?；视椭械闹舅峤M分和位置分布的分析方法通常需要用酶或者化學(xué)過(guò)程水解三?；视?，然后用色譜技術(shù)分析單和二?；视徒M分。這些方法具有破壞性且不能許回收原始樣品。水解過(guò)程通常引起某些?；w移，導(dǎo)致位置分布的大量錯(cuò)誤。1V核磁共振(NMR)具有的某些性質(zhì)使得其能有效地用于位置分析。首先，化學(xué)位移對(duì)分子結(jié)構(gòu)敏感，因此產(chǎn)生頻譜，其中每個(gè)原子對(duì)應(yīng)于特定頻率的峰。每種環(huán)境下原子核的分辨率決定于線寬和相鄰峰之間化學(xué)位移差異。第二，由每個(gè)原子核產(chǎn)生的峰下面積與所處環(huán)境中原子核數(shù)成比例的，因?yàn)樗械?V顯示出相同的吸收。因此，化學(xué)位移和每個(gè)峰的積分面積可用作每個(gè)原子核定性和定量的測(cè)量方法。第三，用于這種應(yīng)用的樣品制備簡(jiǎn)單。最后，NMR是一種非破壞性技術(shù)，它可以回收樣品以用于其它目的。13CNMR方法通常是基于對(duì)羰基碳信號(hào)束的分析。通?？捎^察到兩束信號(hào)對(duì)應(yīng)于sn 1，3_和2-位的酸。由于兩種環(huán)境產(chǎn)生大約0. 4ppm的間隔，它們很容易區(qū)分開(kāi)。在兩束信號(hào)中的每一束內(nèi)，都必須分離出酸中每種酸或者基團(tuán)的信號(hào)。當(dāng)酸中具有碳-碳雙鍵(即是不飽和的)且接近于羧基例如η = 4，5或者6時(shí)，這個(gè)準(zhǔn)則非常容易實(shí)現(xiàn)。具有同樣雙鍵基團(tuán)的酸的羰基碳信號(hào)(例如EPA和AA)通常不會(huì)被區(qū)分開(kāi)。這些方法似乎對(duì)分析含有GLA的三?；视秃苡袃r(jià)值，事實(shí)已證實(shí)了這點(diǎn)。
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Trinervonin(Tri-16:0) (Tri-18:0) (Tri-18:ln-9) (Tri-18:2n-6)(Tri-18:3n-6) (Tri-20:ln-9) (Tri-22:ln-9) (Tri-24:ln-9)
整個(gè)研究中使用了約180mg的脂質(zhì)的700 μ L氘代氯仿溶液
內(nèi)收集帶有抑制NOE的質(zhì)子去耦13C NMR數(shù)據(jù)Ε。選擇去耦模式并且在僅僅14. 89s的探測(cè)時(shí)間內(nèi)導(dǎo)通Waltz去耦。設(shè)置弛豫延遲為30秒和脈沖角度為90°。使用的光譜窗口為大約35ppm(173. 5至172. 6ppm)，并具有170ppm的偏轉(zhuǎn)。光譜內(nèi)置參考為77. Oppm的CDCl3 光譜。典型地，為得到足夠的信噪比，收集的大約掃描次數(shù)為300-1200次，其取決于混合物的復(fù)雜度。試驗(yàn)的總探測(cè)時(shí)間為l_4h (琉璃苣油1272次掃描/4h)。數(shù)據(jù)點(diǎn)65，536。
結(jié)論
在2-和1，3_位的GLA羰基信號(hào)可從三?；视筒ㄗV中所有的羰基峰中很好的分離出來(lái)。這使得在所有情形下測(cè)定的2-GLA/l，3-GLA比率具有可信度和精確度。通過(guò)分析測(cè)試混合物來(lái)證實(shí)所述方法，該測(cè)試組合物含有包括三Y -亞麻精的8種與琉璃苣油中存在的那些具有相似比率的三酰基甘油。粗組分先前已用GLC測(cè)定。使用了兩種計(jì)算方法。13C-NMR-數(shù)據(jù)在21°C下，在于125. 728MHz下運(yùn)行的Jeol 500MHz波譜儀中的mm的寬頻探測(cè)器第一種是自備的NMR方法，計(jì)算2-GLA百分比如下GLA 的 sn-2 峰的積分 X3X 100所有sn-Ι，2和3的積分的總和第二種使用從NMR得到的2-GLA/l，3GLA積分與通過(guò)GLC測(cè)定的粗組分的比率如下GLA的sn-2峰的積分X得自GC分析的％ GLA X 3Sn-I，2和3位的GLA的總積分兩種算法得到的結(jié)果是一致的。我們認(rèn)為復(fù)合NMR-GLC方法更精確，因?yàn)槭褂玫米园醋畲缶_度測(cè)定的每種方法的參數(shù)。GLA是琉璃苣油的主要成分，因此2-/1，3-GLA比率可用精確的NMR測(cè)定，1Π結(jié)果所示。通常GLC在測(cè)定更小的脂肪酸組分上優(yōu)于NMR，但不能給出位置信息。概述表格和光譜中已給出具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。概述如下。膠囊D和B是與下面報(bào)道的臨床實(shí)驗(yàn)中提供的相同的膠囊。1.8-TG-測(cè)試混合物sn-2 GLA 實(shí)測(cè)值22.2%實(shí)際值22.6%誤差1.8%(n) = 22.膠囊-D粗GLA 實(shí)測(cè)值 21.4% (n = 3) GLC 測(cè)得sn-2 GLA 實(shí)測(cè)值 42.5% (n = 2) 匪R 測(cè)得誤差+/-1%3 膠囊-B粗GLA 實(shí)測(cè)值 21.1% (n = 3) GLC 測(cè)得sn-2 GLA 實(shí)測(cè)值 40.8% (n = 2) 匪R 測(cè)得誤差+/-1%在這些琉璃苣油樣品中，在sn-2位的GLA的含量是41_42%，即幾乎兩倍 (1. 95X)于粗組分。文獻(xiàn)報(bào)道顯示一種可能的典型樣品是1. 8倍的粗組分?？墒褂肗MR方法提供在sn-2位上的GLA可靠的分析數(shù)據(jù)。事實(shí)上，由于存在的其它脂肪酸的不干擾，該方法尤其適于琉璃苣油。有趣的是，據(jù)報(bào)道從NMR方法得到的結(jié)果與從更早的衍生化-色譜法得到的數(shù)據(jù)是一致的。我們先前從那些舊方法得到的估計(jì)(40% ) 也與NMR結(jié)果一致。治療實(shí)施例觀個(gè)活性復(fù)發(fā)緩解型(在此前18個(gè)月中兩人復(fù)發(fā))多發(fā)性硬化癥患者(年齡18 至65歲)參加一項(xiàng)18個(gè)月的雙盲安慰劑對(duì)照實(shí)驗(yàn)以研究膠囊化琉璃苣油對(duì)臨床活性和實(shí)驗(yàn)室參數(shù)的影響。所用油具有高Sn-2 γ -亞麻酸(GLA)含量(GLA在Sn_2位置上> 40% ) 和低單烯含量(例如芥子酸)，并且不合有添加的公知免疫調(diào)節(jié)劑維生素E?；颊邚膬杉沂袃?nèi)醫(yī)院的神經(jīng)科門(mén)診患者中招募；在第一次(基線)就診即可得到醫(yī)院知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)包括任何形式的類(lèi)固醇或者免疫抑制藥物治療、懷孕、高脂血癥、在此前三個(gè)月內(nèi)固定使用阿司匹林或者相關(guān)藥物和補(bǔ)充維生素或者脂肪酸。
實(shí)驗(yàn)僅包括符合所有下列標(biāo)準(zhǔn)患者(a)能夠在治療前提供知情同意書(shū)，并充分了解在不帶有偏見(jiàn)下可隨時(shí)退出；(b)包含門(mén)診患者年齡18至60歲的男性或女性；(C)已確診為臨床定義的復(fù)發(fā)型MS ;(d)在過(guò)去兩年中至少有三次可證明的臨床復(fù)發(fā)；(e)如果他們證明是惡化的，應(yīng)具有包括0. 0-5. 5的基線值擴(kuò)大殘疾等級(jí)評(píng)分(EDSQ得分括；(f)通過(guò)病史、體檢和臨床化學(xué)、尿和血液學(xué)檢驗(yàn)證實(shí)除MS相關(guān)癥狀外是健康的。
患者由藥學(xué)部門(mén)隨機(jī)分配至三組中的一組，每組有12個(gè)患者。
第一臨床組(n = 12)服用安慰劑(5g的聚乙二醇400)
第二臨床組(n = 12)服用低劑量(5g)精制琉璃苣
第三臨床組(n = 12)服用高劑量(15g)精制琉璃苣
在18個(gè)月期間中，以每天1克油膠囊(5/天為低劑量，15/天為高劑量)的形式給藥。琉璃苣油和ω-6多不飽和脂肪酸為一般公認(rèn)安全(GRAS)的用于人類(lèi)消費(fèi)的食品成分。EC條例沒(méi)有分類(lèi)和標(biāo)記要求。臨床評(píng)估包括擴(kuò)大殘疾等級(jí)評(píng)分(EDSQ和臨床復(fù)發(fā)記錄。在給藥第1、3、6、12、15和18月取靜脈血(50mls)用于實(shí)驗(yàn)室研究。
在每次就診時(shí)研究下列生化和免疫參數(shù)，并與治療前數(shù)據(jù)和組間比較。
受激的和不受激的體外外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞細(xì)胞細(xì)胞因子產(chǎn)量TGF_i3 1、 IFN-Y、TNF-α、IL-I β , IL_6和IFN-β，它們涉及MS的發(fā)病機(jī)制。細(xì)胞因子和相關(guān)基因表達(dá)。
血清中可溶性黏附分子，尤其是ICAM-I和VCAM-I
外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞膜脂肪酸和血漿磷脂脂肪酸組合物。
結(jié)果列于表1、2和圖1-5。
初級(jí)產(chǎn)出準(zhǔn)則參數(shù)是基線(第0月)與治療結(jié)束(第18月)之間的臨床復(fù)發(fā)次數(shù)。次級(jí)產(chǎn)出準(zhǔn)則參數(shù)包括第一次臨床復(fù)發(fā)的時(shí)間；用EDSS得分和使用類(lèi)固醇治療來(lái)評(píng)估的復(fù)發(fā)嚴(yán)重度；與基線水平相比，第3、6、9、12和18個(gè)月的EDSS改變了，并以持續(xù)3個(gè)月 EDSS增加至少1. 0個(gè)點(diǎn)或者持續(xù)3個(gè)月比基線EDSS增加至少1. 5個(gè)點(diǎn)來(lái)的定義。由于本試驗(yàn)沒(méi)有接受外部資助，出于財(cái)政原因，不可能用磁共振成像來(lái)評(píng)估MS疾病的活性。
安慰劑組有11個(gè)患者，7名患者服用低劑量琉璃苣油，10名患者服用高劑量琉璃苣油。該研究藥物是耐受性良好的，在18個(gè)月試驗(yàn)期沒(méi)有發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)事件。
結(jié)果
兩名患者患有發(fā)展性腹瀉(developed diarrhoea)，后來(lái)它們兩人均確認(rèn)服用高劑量琉璃苣油。一個(gè)患者的腹瀉較輕，但是另一個(gè)患者是中度嚴(yán)重，后來(lái)他中止了服用研究藥物。代碼沒(méi)有公開(kāi)，中止藥物后腹瀉停止，再次給藥后再發(fā)。因此，該患者退出試驗(yàn)。用高劑量琉璃苣油處理的剩余患者在所有初級(jí)和次級(jí)產(chǎn)出準(zhǔn)則上顯示出良好的臨床改善。例如，6個(gè)月治療后，他們的平均EDSS得分比基線EDSS (圖1)提高了。更重要的是，6個(gè)月的治療后，與安慰劑組復(fù)發(fā)次數(shù)(圖2)相比，臨床復(fù)發(fā)的平均次數(shù)顯著下降。相反，與安慰劑組相比，服用低劑量琉璃苣油的患者沒(méi)有顯示任何臨床改善。除了對(duì)MS疾病活性的有益作用，高劑量琉璃苣油可提供某些肌肉痙攣(僵硬)和痛感癥狀的癥狀緩解，并改善了認(rèn)知功能。
從下面圖中可看出，在高劑量組9、12和18個(gè)月后的復(fù)發(fā)率下降至0。在第15個(gè)月可見(jiàn)的增加是由于一名患者退出該組。下述為三個(gè)簡(jiǎn)要的病史，用以闡述高劑量的高sn-2 GLA琉璃苣油的治療益處。前兩位來(lái)自于本試驗(yàn)，第三位是一名試驗(yàn)后的患者，因?yàn)榭梢缘玫剿腗RI研究?；颊? (治療)第一個(gè)患者是一位患有臨床活躍性復(fù)發(fā)緩解型MS 9年的48歲婦女。本來(lái)她有份當(dāng)?shù)匦l(wèi)生部門(mén)一名全職管理人員的工作，但由于她的嚴(yán)重的MS，她不能履行她的職責(zé)。因此，后來(lái)她成為兼職秘書(shū)，但由于肌肉僵直和感覺(jué)障礙她仍然活動(dòng)困難。她也經(jīng)歷了平均9 個(gè)月復(fù)發(fā)一次的嚴(yán)重臨床復(fù)發(fā)。大多數(shù)這些復(fù)發(fā)導(dǎo)致其住院接受類(lèi)固醇治療。考慮到她的活躍性MS，她被招募參加琉璃苣油試驗(yàn)。沒(méi)有與研究相關(guān)的不良反應(yīng)，服用藥物四個(gè)月后， 她體驗(yàn)到在行走和感覺(jué)癥狀上的相良好改善。治療大約九個(gè)月后，她恢復(fù)健康至能夠開(kāi)始全職工作。此外，在18個(gè)月的臨床試驗(yàn)期間沒(méi)有復(fù)發(fā)。在得出試驗(yàn)結(jié)論之后，治療代代碼顯示她服用高劑量琉璃苣油?；颊? (對(duì)照)第二個(gè)患者是一位也患有臨床活躍性復(fù)發(fā)緩解型MS 8年的46歲的婦女。本來(lái)她有份店員的工作，但診斷患MS就失業(yè)了。她的癥狀包括雙腿的活動(dòng)困難和痛感癥狀。在本臨床試驗(yàn)之前的兩年里，她經(jīng)歷了三次臨床復(fù)發(fā)，兩次住院進(jìn)行類(lèi)固醇治療。因此，她被招募進(jìn)琉璃苣油試驗(yàn)，但她的行走持續(xù)惡化。在試驗(yàn)的六個(gè)月中，她需要使用拐杖，也使用巴氯酚來(lái)治療以減輕下肢痙攣狀態(tài)。大約開(kāi)始琉璃苣油試驗(yàn)十個(gè)月后，由于嚴(yán)重的臨床復(fù)發(fā)，她住院接受類(lèi)固醇治療。后來(lái)她發(fā)展為膀胱紊亂癥，并開(kāi)始使用輪椅用于長(zhǎng)途旅程。當(dāng)18個(gè)月的試驗(yàn)得出結(jié)論之后，公開(kāi)了治療代碼，發(fā)現(xiàn)她服用的是安慰劑。從那時(shí)起，她開(kāi)始使用行走支架用于超過(guò)50碼的路程?；颊?:治療(附加試驗(yàn))第三個(gè)病例是一位在2001年四月確診患有MS的沈歲男性，。他的癥狀始于1999 年，當(dāng)時(shí)他訴說(shuō)影響身體多個(gè)部位的彌漫性、頑固性疼痛，尤其是左側(cè)胸腹部。接著手和腳出現(xiàn)周期性麻木，同時(shí)伴有波動(dòng)性虛弱。他也有以尿頻和尿急形式出現(xiàn)的令人苦惱的膀胱癥狀。2001年對(duì)MS的診斷是基于他的復(fù)發(fā)緩解癥狀，并通過(guò)陽(yáng)性腦脊液分析和腦部磁共振成像(MRI)顯示兩側(cè)大腦半球有多重白質(zhì)異常來(lái)確診。該癥狀多種藥物治療沒(méi)有反應(yīng)。2003年4月，開(kāi)始口服給藥本發(fā)明的高劑量琉璃苣油。患者報(bào)道在開(kāi)始這種口服給藥的三個(gè)月內(nèi)他的癥狀有了引人注目的改善。他的痛感癥狀完全消失。他報(bào)道從2003 年5月沒(méi)有出現(xiàn)麻木和虛弱，并注意到他的排尿控制有顯著改善?？诜o藥沒(méi)有產(chǎn)生任何不良反應(yīng)。復(fù)查腦部MRI以證實(shí)N先生所報(bào)道的癥狀改善。復(fù)查MRI顯示異常白質(zhì)的大小
和分布減少。
權(quán)利要求
1.用于治療變性疾病的藥物組合物，包含含有Y-亞麻酸和亞油酸殘基的甘油三酯油作為甘油三酯； 在甘油三酯sn-2位的γ -亞麻酸和亞油酸殘基比率為至少0. 8 ； 在sn-2位的Y-亞麻酸殘基的量為至少18%， 其特征在于組合物含有0至0. lmg/g的維生素E。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于油來(lái)自琉璃苣菌屬或毛霉菌屬。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于油為琉璃苣油，其中在sn-2位的酯化 Y-亞麻酸占在該位的脂肪酸殘基的百分比為至少39%。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于在sn-2位的酯化Y-亞麻酸占在該位的脂肪酸殘基的百分比為至少45%。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，進(jìn)一步包含單獨(dú)的或混合的選自LGL、0G0、0GL、 LGO和GGG的甘油三酯混合物。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其含有總共占總脂肪酸殘基的百分比不超過(guò)5 %的芥酸(22 ln-9)、24 ln_9 (神經(jīng)酸)和20 ln_9 (鱈魚(yú)酸)。
全文摘要
提供用于治療需要治療的患者中神經(jīng)變性疾病的方法，包括施予患者治療有效量的包含γ-亞麻酸和亞油酸殘基的甘油三酯油如甘油三酯，在甘油三酯sn-2位上γ-亞麻油和亞油酸殘基比率為至少0.8；在sn-2位上γ-亞麻酸殘基的量為至少18％，其中油以足夠維持或者提高患者中TGF-β1水平在治療水平的劑量施予。優(yōu)選地，所述方法是在18個(gè)月每日給藥后，其治療水平是例如在患者血液中生成TGF-β1/INF-α的比率為至少0.5。優(yōu)選的油脂是在sn-2位脂肪酸殘基如γ-亞麻酸至少為35％的琉璃苣油或者毛霉菌油。
文檔編號(hào)A61K31/202GK102512411SQ20111032081
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2004年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月14日
發(fā)明者L·S·哈比格, M·J·利奇, M·夏里 申請(qǐng)人:英國(guó)技術(shù)集團(tuán)國(guó)際有限公司