專利名稱：一種中藥提取的g6凝集素及其在排毒穩(wěn)壓、軟化血管、防并發(fā)中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，特別涉及一種中藥提取的G6凝集素及其在排毒穩(wěn)壓、軟化血管、防并發(fā)中的用途。
背景技術(shù)：
凝集素(lectin)是動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞都能夠合成和分泌的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，因其能凝集紅血球(含血型物質(zhì))，故名凝集素。常用的為植物凝集素(Phytoagglutin, PNA),通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina, ConA)、麥胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等,凝集素是它們的總稱。凝集素在細(xì)胞識(shí)別和粘著反應(yīng)中起重要作用，主要是促進(jìn)細(xì)胞間的粘著。凝集素最大的特點(diǎn)在于它們能識(shí)別糖蛋白和糖肽中，特別是細(xì)胞膜中復(fù)雜的碳水化合物結(jié)構(gòu)，即細(xì)胞膜表面的碳脂化合物決定簇。一種凝集素具有對(duì)某一種特異性糖基專一性結(jié)合的能力，因此，凝集素可以作為一種探針來(lái)研究細(xì)胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多價(jià)結(jié)合能力，能與熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結(jié)合，從而在光鏡與/或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。凝集素不僅具有凝集諸如血細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、精子細(xì)胞等作用，而且參與了生物體內(nèi)一些重要的生理和藥理過(guò)程，因此是研究生物體內(nèi)細(xì)胞癌變、受精、分化及分子識(shí)別等生命過(guò)程極其有用的工具，同時(shí)在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)上有著重要地位，而且是抗腫瘤藥物生產(chǎn)所需的促有絲分裂原。近年來(lái)還報(bào)道某些凝集素對(duì)艾滋病毒等也有抑制作用，并應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)性治療。但是到目前為止，還未見(jiàn)凝集素在高血壓以及其他心腦血管疾病治療中作用的研究報(bào)道。盡管國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的 高血壓治療方式多種多樣包括中藥，西藥，理療儀器，但令人遺憾的是每種方式都有其弊端，西藥降壓快速但穩(wěn)壓效果不好，毒副作用巨大，不能阻止高血壓并發(fā)癥的發(fā)生，我國(guó)目前有接近2億高血壓人群，而服用西藥的人群占所有高血壓人群的四分之三，大多數(shù)患者知道西藥的副作用及弊端，可在無(wú)藥可選的情況下，只有選擇西藥；而中藥服用不便，藥效流失嚴(yán)重；理療儀只能緩解一時(shí)的癥狀。因此，找到一種既能夠平穩(wěn)降壓，又能夠降低降壓西藥帶來(lái)的毒副作用的生物分子已成當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題為針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中高血壓患者服用降壓西藥毒副作用無(wú)法排除，且易有并發(fā)癥發(fā)生的問(wèn)題，提供一種具有排毒穩(wěn)壓、通血管、防止并發(fā)癥作用的中藥提取G6凝集素。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的G6凝集素為從中藥三七、杜仲、葛根、地黃、
丹參、昆布中通過(guò)提取得到，且含有丹參酸、丹參黃酮、三七皂苷、地黃皂苷、地黃素、昆布素、葛根黃酮、杜仲萜烯成分。
該凝集素的制備方案為步驟I)按相同質(zhì)量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50 100目藥物混合粉末；步驟2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4°C下浸泡12小時(shí)，離心，取上清；步驟3)將上述得到的上清利用高滲凝集的方法過(guò)濾，去除雜質(zhì)，得到含有植物凝集素的濾液；步驟4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。本發(fā)明提供的G6凝集素是以祖 國(guó)中醫(yī)傳統(tǒng)組方為基礎(chǔ)，選用對(duì)高血壓，心腦血管有很好治療作用的三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布六種中藥原料提取獨(dú)有的G6凝集素，不但具有植物凝集素的特性，同時(shí)具有恢復(fù)人體交感神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能，在穩(wěn)定高血壓及其并發(fā)癥的改善上有著全新的突破。其中三七又名田七，是我國(guó)特有的名貴中藥材。清朝藥學(xué)著作《本草綱目拾遺》中記載“人參補(bǔ)氣第一，三七補(bǔ)血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥中之最珍貴者?！比呔哂袛U(kuò)張血管、降低血壓，改善微循環(huán)，增加血流量，預(yù)防和治療心腦組織缺血、缺氧癥的功能與作用。杜仲為杜仲科植物杜仲的干燥樹(shù)皮，是中國(guó)名貴滋補(bǔ)藥材。具補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、降血壓、安胎等諸多功效?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》列為上品。謂其“主治腰膝痛，補(bǔ)中，益精氣，堅(jiān)筋骨，除陰下癢濕，小便余浙。久服，輕身耐老。”杜仲是中國(guó)特有藥材，其藥用歷史悠久，在臨床有著廣泛的應(yīng)用。葛根，為豆科植物野葛，含多種黃酮成分如異黃酮成分葛根素、葛根素木糖甙、大豆黃酮、大豆黃酮甙及谷留醇、花生酸，又含多量淀粉。明朝著名的醫(yī)學(xué)家李時(shí)珍對(duì)葛根進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，認(rèn)為葛根的莖、葉、花、果、根均可入藥?！侗静菥V目》載葛根，性涼、氣平、味甘，具清熱、降火、排毒諸功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明葛根中的異黃酮類化合物葛根素對(duì)聞血壓、聞血脂、聞血糖和心腦血管疾病有一定療效。地黃為玄參科多年生草本植物,味甘、苦,性寒?；瘜W(xué)成分以式類為主，其中又以環(huán)烯醚萜甙類為主?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，地黃70%甲醇提取物抑制ADP引起的大鼠血小板聚集，并有抗凝血酶作用，對(duì)內(nèi)毒素引起的大鼠彌漫性血管內(nèi)凝血有對(duì)抗作用，因此對(duì)各類心腦血管疾病有輔助治療作用。丹參又名赤參，紫丹參，紅根等。其主要含有脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸成分，還含黃酮類，三萜類，留醇等其他成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，丹參具有加強(qiáng)心肌收縮力、改善心臟功能，不增加心肌耗氧量，擴(kuò)張冠脈，增加心肌血流量；擴(kuò)張外周血管，使血流增加的功效，并且，丹參能夠改善微循環(huán)，提高纖溶酶活性；延長(zhǎng)出、凝血時(shí)間；抑制血小板聚集。丹參能使主動(dòng)脈粥樣斑塊形成面積明顯減少，血清總膽固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低。丹參可抑制高脂膳食家兔的血脂上升。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)丹參素還能抑制細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇的合成，降低血脂。昆布為海帶科植物海帶的葉狀體或者翅藻科植物，其化學(xué)成分含有藻膠素、甘露醇、半乳聚糖、海帶氨酸、海帶聚糖、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、維生素B1、C、P和磺、鉀等。昆布具有降血脂和抗凝作用，昆布中的海帶多糖經(jīng)多次灌胃，能明顯地抑制高血脂雞血清總膽固醇、甘油三酯的含量上升，并能減少雞主動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊的形成及發(fā)展。本發(fā)明提供的G6凝集素是從上述六味中藥中，利用現(xiàn)代高滲凝集技術(shù)提取出來(lái)的生物活性物分子。目前國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的中藥提純技術(shù)不外乎水煎醇沉、過(guò)濾、濃縮，酶解等幾種方式，這些傳統(tǒng)提純工藝已經(jīng)越來(lái)越多的暴露出問(wèn)題，如耗費(fèi)原料巨大，藥效流失，純度不能保證等
坐寸ο而G6凝集素的提純工藝采用的是國(guó)際上先進(jìn)的高滲凝集技術(shù)，徹底避免了這些問(wèn)題的出現(xiàn)，高滲凝集技術(shù)能夠準(zhǔn)確的選擇出中藥中對(duì)疾病有益的成分，將其準(zhǔn)確識(shí)別，提純，凝集出來(lái)，且采用該技術(shù)提取的G6凝集素，具有極高的滲透性，便于人體吸收，利用，能大大提高其對(duì)疾病的輔助治療效果。高滲凝集技術(shù)以其高效、節(jié)能、環(huán)保和分子級(jí)分離等特性，已廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、食品加工等領(lǐng)域，成為現(xiàn)代提純技術(shù)領(lǐng)域最先進(jìn)的技術(shù)之一。被公認(rèn)為21世紀(jì)最重大產(chǎn)業(yè)技術(shù)之一的高滲凝集技術(shù)，是一種新興的綠色工業(yè)科技。與常規(guī)的離心分離、沉降、過(guò)濾、萃取等方法相比，高滲凝集技術(shù)具有的明顯潛在優(yōu)勢(shì)。隨著近幾年來(lái)人們對(duì)高滲凝集技術(shù)的大力開(kāi)發(fā)以來(lái)，已開(kāi)發(fā)出適合高血壓，心腦血管，腫瘤等各種疾病的治療產(chǎn)品。尤其是針對(duì)高血壓開(kāi)發(fā)出了極具代表性的G6凝集素，克服了傳統(tǒng)中藥，西藥作用不全面，藥效單一等弊端。中藥所含化學(xué)成分很復(fù)雜，通常有糖類、氨基酸、蛋白質(zhì)、油脂、蠟、酶、色素、維生素、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、揮發(fā)油、生物堿、甙類等。這些成分中即有有效成分，又有無(wú)效雜質(zhì)，如不盡量去除雜質(zhì)，會(huì)影響制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，而高滲凝集技術(shù)則具有極高的識(shí)別性和選擇性可以將其中對(duì)疾病有益的成分完整的分離出來(lái)。高滲凝集技術(shù)采 用階梯式過(guò)濾分離藥液，合理地運(yùn)用多次分離方法去除藥液中的非藥用等雜質(zhì)。并對(duì)分離出的藥液進(jìn)行有效的純化，濾除蛋白質(zhì)、淀粉、果膠、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)以及微生物，減少水溶性有效成分的損失，使中藥有效成分基本無(wú)截留。采用高滲凝集技術(shù)對(duì)藥液進(jìn)行精密過(guò)濾以去除鞣質(zhì)、淀粉等雜質(zhì)，取代一次醇沉，減少醇沉次數(shù)，直至無(wú)醇化生產(chǎn)。從而替代了傳統(tǒng)的水提醇沉法工藝，縮短生產(chǎn)周期，達(dá)到藥液澄明及無(wú)醇化，純度高，利于人體吸收的目的。本發(fā)明提供的G6凝集素包含有多種有效成分，其中包括丹參酸、丹參黃酮、三七皂苷、地黃皂苷、地黃素、昆布素、葛根黃酮和杜仲萜烯。本發(fā)明實(shí)施例中，發(fā)明人對(duì)制備的G6凝集素進(jìn)行了活性測(cè)定，結(jié)果表明，用本發(fā)明方法制備的G6凝集素具有使紅細(xì)胞凝集的活力，并且在效果上要優(yōu)于大豆凝集素標(biāo)準(zhǔn)品O在本發(fā)明的實(shí)施例中，發(fā)明人還對(duì)G6凝集素的降壓作用和對(duì)降壓藥所帶來(lái)毒副作用的抑制效果進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，本發(fā)明制備的G6凝集素單獨(dú)使用具有很好的降壓作用；當(dāng)與降壓藥聯(lián)合使用時(shí)，其降壓效果更好，并與空白對(duì)照組有顯著差異，且優(yōu)于單獨(dú)使用降壓藥的情況；當(dāng)與降壓藥聯(lián)合使用時(shí)，能夠消除降壓藥所帶來(lái)的毒副作用。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)如下I)本發(fā)明從六味具有降壓排毒、通血管、防治高血壓并發(fā)癥的中藥中提取了 G6凝集素，其不但有植物凝集素的特性，與西藥一起服用還能解除西藥給人體帶來(lái)的肝腎損傷，同時(shí)具有恢復(fù)人體交感神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能，在穩(wěn)定血壓、控制并發(fā)癥上有良好的功效；2)本發(fā)明所采用的高滲凝集技術(shù)能夠準(zhǔn)確的選擇出中藥中對(duì)疾病有益的成分，將其準(zhǔn)確識(shí)別，提純，凝集出來(lái)，且采用該技術(shù)提取的G6凝集素，具有極高的滲透性，便于人體吸收，利用，能大大提高其對(duì)疾病的輔助治療效果；3)本發(fā)明提供的G6凝集素因其是純天然的植物制劑，是通過(guò)對(duì)患者身體狀況的整體調(diào)理來(lái)達(dá)到最終穩(wěn)定血壓，防止心腦血管疾病發(fā)生的目的，因此對(duì)高血壓及心腦血管并發(fā)癥的改善效果平穩(wěn)、循序漸進(jìn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥提取的G6凝集素，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。本發(fā)明提供的技術(shù)方案為步驟I)按相同質(zhì)量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50 100目藥物混合粉末； 步驟2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4°C下浸泡12小時(shí)，離心，取上清；步驟3)將上述得到的上清利用高滲凝集的方法過(guò)濾，去除雜質(zhì)，得到含有植物凝集素的濾液；

步驟4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1 :G6凝集素的制備稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥各50克，研成50目細(xì)粉，加入5倍體積的 Tris 緩沖液(50mmoI /T, Tris-HCl, Immol /T, MgCl2, Immol /T, CaCl2, ρΗ8· O),勻衆(zhòng),4°C下浸泡12小時(shí)。4°C, 3000rpm離心15min,取上清。用高滲凝集的方法將所得上清進(jìn)行過(guò)濾，濾除蛋白質(zhì)、淀粉、果膠、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)以及微生物，取濾液，用50倍體積的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小時(shí)，濃縮，干燥，得到G6凝集素。對(duì)所得蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析，結(jié)果為300g中成藥粉末得到G6凝集素蛋白250mg。實(shí)施例2 G6凝集素的制備稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥各100克,研成100目細(xì)粉,加入5倍體積的 Tris 緩沖液(50mmoI /T, Tris-HCl, Immol/!,MgCI2,1 mmol /T, CaCl2,ρΗ8· O),勻衆(zhòng),4°C下浸泡12小時(shí)。4°C, 3000rpm離心15min,取上清。用高滲凝集的方法將所得上清進(jìn)行過(guò)濾，濾除蛋白質(zhì)、淀粉、果膠、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)以及微生物，取濾液，用50倍體積的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小時(shí)，濃縮，干燥，得到G6凝集素。對(duì)所得蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析，結(jié)果為600g中成藥粉末得到G6凝集素蛋白550mg。實(shí)施例3 G6凝集素的制備稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥各70克，研成80目細(xì)粉，加入5倍體積的 Tris 緩沖液(50mmoI /T, Tris-HCl, lmmol/LMgCl2, lmmol/L CaCl2,ρΗ8· O),勻衆(zhòng),4°C下浸泡12小時(shí)。4°C, 3000rpm離心15min,取上清。用高滲凝集的方法將所得上清進(jìn)行過(guò)濾，濾除蛋白質(zhì)、淀粉、果膠、鞣質(zhì)等大分子物質(zhì)以及微生物，取濾液，用50倍體積的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小時(shí)，濃縮，干燥，得到G6凝集素。對(duì)所得蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析，結(jié)果為420g中成藥粉末得到G6凝集素蛋白370mg。實(shí)施例4 G6凝集素活力測(cè)定本發(fā)明采用兔紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)檢測(cè)凝集素的凝集活力。 陽(yáng)性對(duì)照Sigma大豆凝集素標(biāo)準(zhǔn)品(溶液A)樣品實(shí)施例1制備的G6凝集素(溶液B)，實(shí)施例2制備的G6凝集素(溶液C)，實(shí)施例3制備的G6凝集素(溶液D)陰性對(duì)照0·5mol/L PBS (溶液 E)抽取家兔耳源靜脈血，采集紅細(xì)胞，用生理鹽水配成2%的紅細(xì)胞懸液。在V型凝血板上，將陽(yáng)性對(duì)照和樣品分別按不同比例稀釋，每孔加25ul，在加入2%新鮮紅細(xì)胞懸液25ul，震蕩搖勻后，25°C放置2小時(shí)，肉眼觀察，無(wú)凝集現(xiàn)象時(shí)紅細(xì)胞沉積在V型孔底部呈大紅點(diǎn)狀，有凝集現(xiàn)象時(shí)呈網(wǎng) 狀不下沉。收集不同稀釋倍數(shù)時(shí)凝集情況，結(jié)果見(jiàn)表I所示。結(jié)果表明，實(shí)施例1-3所制備的G6凝集素活力與陽(yáng)性對(duì)照無(wú)顯著差異(P > O. 05)，說(shuō)明利用本發(fā)明所述方法得到的G6凝集素具有使紅細(xì)胞凝集的活力，而陰性對(duì)照組無(wú)凝集。特別值得注意的是，本發(fā)明實(shí)施例中制備的G6凝集素在稀釋倍數(shù)較低的情況下仍具有很好的凝集活力，說(shuō)明本發(fā)明所得G6凝集素在效果上要優(yōu)于大豆凝集素標(biāo)準(zhǔn)品。表I不同樣品兔紅細(xì)胞凝集效價(jià)比較
權(quán)利要求
1.一種G6凝集素，其特征在于，從中藥三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布中通過(guò)提取得到，且含有丹參酸、丹參黃酮、三七皂苷、地黃皂苷、地黃素、昆布素、葛根黃酮、杜仲萜烯成分。
2.一種制備如權(quán)利要求1所述G6凝集素的方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟I)按相同質(zhì)量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50 100目藥物混合粉末； 步驟2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4°C下浸泡12小時(shí)，離心，取上清； 步驟3)將所得上清利用高滲凝集的方法過(guò)濾，去除雜質(zhì)，得到含有植物凝集素的濾液； 步驟4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)所述離心的轉(zhuǎn)速為3000rpm，時(shí)間為15min，溫度為40C ο
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟4)所述透析使用的透析液為磷酸鹽緩沖液。
5.如權(quán)利要求1所述G6凝集素在制備防治心腦血管疾病藥物中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述心腦血管疾病為高血壓。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從中藥三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布中提取的G6凝集素，該凝集素的制備方法為1)按相同質(zhì)量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50～100目藥物混合粉末；2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4℃下浸泡12小時(shí)，離心，取上清；3)將所得上清利用高滲凝集的方法過(guò)濾，去除雜質(zhì)，得到含有植物凝集素的濾液；4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。本發(fā)明提供的G6凝集素不但具有植物凝集素的特性，同時(shí)具有恢復(fù)人體交感神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能，在穩(wěn)定高血壓及其并發(fā)癥的改善上有著全新的突破。
文檔編號(hào)A61K36/804GK103055011SQ201110321989
公開(kāi)日2013年4月24日 申請(qǐng)日期2011年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月20日
發(fā)明者王學(xué)英 申請(qǐng)人:王學(xué)英