專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物、制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療耳聾耳鳴的中藥提取物，更具體的說(shuō)涉及一種用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物、制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
響鈴草是四川省廣安地區(qū)民間草藥，藥用歷史悠久，性味微酸、寒，歸肺、肝、腎經(jīng)，主要用于治療耳聾耳鳴，腎虛及療毒惡瘡等，療效確切；經(jīng)我們鑒定響鈴草為豆科豬屎豆屬植物假地藍(lán)的全草或帶根全草。主產(chǎn)于云南、四川、貴州等地。響鈴草始載于《滇南本草》“斂肺氣，止咳，消痰，定喘?！薄兜崮媳静輬D說(shuō)》“治石淋內(nèi)結(jié)，搗爛敷瘡。”《本草便方》“補(bǔ)中益氣，療耳鳴，頭目眩暈，崩淋。又瀉火清熱，平肝風(fēng)，消腫痛。”《分類(lèi)草藥性》“(治)耳聾腎虛，補(bǔ)脾腎?！薄端拇ㄖ兴幹尽贰把a(bǔ)中益氣，治耳聾耳鳴，頭目眩暈，腎虧遺精及婦女干血疥?！敝兴庌o海第二卷中記載其功效主要為養(yǎng)肝滋腎，止咳平喘，利水通淋， 調(diào)經(jīng)；主治頭暈?zāi)垦＃@耳鳴，腎炎，肝炎，支氣管炎，哮喘，膀耽炎，扁桃體炎，腮腺炎，淋巴結(jié)炎，月經(jīng)不調(diào)，白帶，療毒，惡瘡。民間臨床大量應(yīng)用治療耳聾耳鳴，腎虛及療毒惡瘡等?，F(xiàn)代對(duì)響鈴草末見(jiàn)研究報(bào)道，有關(guān)于同屬植物豬屎豆的研究資料顯示該屬植物主要含有生物堿和黃酮類(lèi)成分，有-定的抗腫瘤活性。耳聾耳鳴是常見(jiàn)病和多發(fā)病，患者中57. 7% 分布于老年人群，近年來(lái)，兒童及青少年耳聾，尤其兒童因病毒感染及氨基糖普類(lèi)抗生素的應(yīng)用，使發(fā)病率更有增加的趨勢(shì)，自身免疫性耳聾亦受到國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的重視。耳聾耳鳴為-類(lèi)多發(fā)的疑難病，耳聾耳鳴藥物治療歷來(lái)是世界醫(yī)學(xué)界的難題。中醫(yī)有“腎主耳”，“腎虛則耳聾”的理論，以補(bǔ)腎填精，活血通竅，延緩衰老為治則進(jìn)行藥物預(yù)防和治療是-條可行的途徑。因此，治療耳聾耳鳴的中藥新藥具有標(biāo)本兼治的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)。但是，治療耳聾的中西藥物極少，幾無(wú)新藥上市，滿(mǎn)足不了臨床患者的需求，因此耳聾耳鳴藥物的開(kāi)發(fā)具有現(xiàn)實(shí)性和前瞻性產(chǎn)品投放市場(chǎng)后，可獲得重大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。響鈴草養(yǎng)肝滋腎等作用， 在民間廣泛應(yīng)用治療各種原因引起的耳聾耳鳴以及療毒惡瘡等己有上百年歷史，有極其顯著的療效141，起到標(biāo)本兼治之功，據(jù)筆者初步統(tǒng)計(jì)，在報(bào)道的治療耳聾耳鳴的單方驗(yàn)方中含有響鈴草的達(dá)50%之多，且有多是以單味藥響鈴草來(lái)治療，但大多是煎湯服用，未形成有服用方便、療效確切、有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述問(wèn)題本發(fā)明提供了一種用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物的制備方法，包括以下步驟
1)將響鈴草藥材粉碎，用藥材3倍體積石油醚或汽油回流3次，過(guò)濾得到響鈴草的固體殘?jiān)瑩]去有固體殘?jiān)挠袡C(jī)溶劑，得到脫脂響鈴草；
2)將脫脂響鈴草加入乙醇提取溶劑浸泡超聲預(yù)處理，乙醇提取溶劑溫浸提取3次；
3)過(guò)濾合并步驟2)中溫浸提取液，回收至無(wú)乙醇，靜置冷卻，離心除去固體雜質(zhì)，得到響鈴草提取液；4)將響鈴草提取液上聚酰胺柱進(jìn)行分離純化，得到用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物。步驟2)所述超聲提取的條件為頻率20KHz 25HKz，每次10秒，間隔10秒，超聲總時(shí)長(zhǎng)20分鐘。步驟2)所述的溫浸條件為提取溫度55 65°C，固液比為1 2，乙醇濃度為40 60%。步驟4)所述的聚酰胺柱分離條件為聚酰胺柱黃酮最大吸附量為20. 15mg/g,上樣流速3BV/h，乙醇洗脫的濃度依次為30%、40%、50%。上述方法制備得到用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物，其中，響鈴草提取物含有黃酮類(lèi)、黃酮醇類(lèi)、二氫黃酮類(lèi)、二氫黃酮醇類(lèi)、異黃酮類(lèi)、花色素類(lèi)等黃酮化合物及其與糖類(lèi)形成的苷。所述的用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物在制備治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益技術(shù)效果是藥理實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明提供的治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物能抑制硫酸慶大霉素進(jìn)一步造成的聽(tīng)力下降，能預(yù)防慶大霉素注射后引起的動(dòng)物聽(tīng)力下降作用；在臨床運(yùn)用中，對(duì)于輕度耳聾的有效率為100%，對(duì)于中、重度耳聾的有效率也高于 50%O
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1響鈴草提取物的制備
將響鈴草干燥粉碎過(guò)10目篩，每份稱(chēng)取干燥的響鈴草10 g，加入-定量的提取溶劑，進(jìn)行超聲波預(yù)處理。超聲波處理?xiàng)l件為頻率20KHZ 25KHZ，功率100W，每次10s，間隔10s， 超聲波輸出總時(shí)間20 min。超聲波處理后，以-定體積濃度的乙醇為溶劑進(jìn)行溫浸提取。以乙醇濃度、固液比、提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，做單因素試驗(yàn)。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選擇乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度3個(gè)因素，進(jìn)行L9(34)的正交試驗(yàn)，對(duì)響鈴草總黃酮提取條件進(jìn)行優(yōu)化。選取乙醇濃度30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，固液比 1:30，提取時(shí)間 2 h，提取溫度60°C，提取次數(shù)1次進(jìn)行提取。隨著乙醇濃度的升高，總黃酮提取率也逐漸增大，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到50%時(shí)，提取率達(dá)到最大，為1.78%，隨著乙醇濃度的繼續(xù)增加，提取率開(kāi)始下降，如表1所示。表1乙醇濃度對(duì)總黃酮轉(zhuǎn)移率的影響
Δ ΙΙIlitfI · \ J U20 JC |0 5(|ββTCJΛ)9β
>" ;|；·； r ^ (ι <] ι ；■· :.: L0 f:., I ；； ^ri L 1^ λ :
所以，選擇正交試驗(yàn)中乙醇濃度的3個(gè)水平為40%，50%，60%。選取固液比1:2，1:3，1:4，1:5，1:6 (g/mL)，乙醇濃度50%，提取時(shí)間2 h，提取溫度60°C，提取次數(shù)1次進(jìn)行提取。隨著固液比的增加，提取率變化不大。如果固液比過(guò)大，會(huì)給后續(xù)的過(guò)濾、濃縮等工作帶來(lái)不便，從節(jié)約溶劑的角度考慮，確定固液比為l:2(g/ mL) ο選取提取時(shí)間0. 5、1、1.5、2、2. 5、3 h，乙醇濃度50%，固液比1 2 (g/mL)，提取溫度60°C，提取次數(shù)1次進(jìn)行提取，如表2所示。表2提取固液比對(duì)總黃酮轉(zhuǎn)移率的影響
權(quán)利要求
1.一種用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將響鈴草藥材粉碎，用藥材3倍體積石油醚或汽油回流3次，過(guò)濾得到響鈴草的固體殘?jiān)?，揮去有固體殘?jiān)挠袡C(jī)溶劑，得到脫脂響鈴草；2)將脫脂響鈴草加入乙醇提取溶劑浸泡超聲預(yù)處理，乙醇提取溶劑溫浸提取3次；3)過(guò)濾合并步驟2)中溫浸提取液，回收至無(wú)乙醇，靜置冷卻，離心除去固體雜質(zhì)，得到響鈴草提取液；4)將響鈴草提取液上聚酰胺柱進(jìn)行分離純化，得到用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物的制備方法，其特征在于步驟2)所述超聲提取的條件為頻率20KHz 25HKz，每次10秒，間隔10秒，超聲總時(shí)長(zhǎng)20分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物的制備方法，其特征在于步驟2)所述的溫浸條件為提取溫度55 65°C，固液比為1:2，乙醇濃度為40 60%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物的制備方法，其特征在于步驟4)所述的聚酰胺柱分離條件為聚酰胺柱黃酮最大吸附量為20. 15mg/g,上樣流速!3BV/h，乙醇洗脫的濃度依次為30%、40%、50%。
5.一種用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物，其特征在于采用權(quán)利要求1、2、3、4所述方法制備得到用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物，其中，響鈴草提取物含有黃酮類(lèi)、黃酮醇類(lèi)、二氫黃酮類(lèi)、二氫黃酮醇類(lèi)、異黃酮類(lèi)、花色素類(lèi)等黃酮化合物及其與糖類(lèi)形成的苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一所述的用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物在制備治療耳聾耳鳴藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物、制備方法及應(yīng)用；藥理實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明提供的治療耳聾耳鳴的響鈴草提取物能抑制硫酸慶大霉素進(jìn)一步造成的聽(tīng)力下降，能預(yù)防慶大霉素注射后引起的動(dòng)物聽(tīng)力下降作用；在臨床運(yùn)用中，對(duì)于輕度耳聾的有效率為100%，對(duì)于中、重度耳聾的有效率也高于50%。
文檔編號(hào)A61K36/48GK102335226SQ201110328268
公開(kāi)日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月26日
發(fā)明者劉筱琴, 唐倩, 張雪, 曾雪, 楊元娟, 楊宗發(fā), 楊憲, 楊水平, 陳竹 申請(qǐng)人:重慶醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校