專利名稱：菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖及其提取方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大分子化合物--菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖及其提取方法和用途，屬于天然高分子領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
研究發(fā)現(xiàn)存在于海參體壁的多糖主要分兩類一類為巖藻糖基化的海參硫酸軟骨素(sea cucumber fucolysated chondroitin sulfate) (38，39)，是由 D-N-乙酰氨基半乳糖、D-葡萄糖醛酸和L-巖藻糖組成的分支雜多糖，相對(duì)分子質(zhì)量為4萬-5萬；另一類為海參巖藻多糖(Holothurian fucan) 00，41)，是由L-巖藻糖所構(gòu)成的直鏈多糖，相對(duì)分子質(zhì)量為8萬-10萬。兩者的組成糖基雖不同，但糖鏈上都有部分羥基發(fā)生硫酸酯化，并且硫酸酯基類多糖含量均在32%左右，兩種海參多糖的特殊結(jié)構(gòu)，均為海參所特有。海參硫酸軟骨素是海參兩種主要多糖之一，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且因海參種類和生長(zhǎng)環(huán)境的不同而有差別。近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)海參硫酸軟骨及其異構(gòu)物的藥理作用進(jìn)行了研究，證明其具有抗腫瘤，提高機(jī)體免疫力，抗血栓，抗凝血，降低血粘度，保護(hù)神經(jīng)組織及抑菌等多種生理活性，對(duì)人體的生理功能調(diào)控、維系生命最佳狀態(tài)具有極其重要的意義。目前，文獻(xiàn)研究報(bào)道的海參硫酸軟骨素主要有以下兩種其一為Paulo A. S.等從L. grisea海參中提取出一種海參多糖，類似硫酸軟骨素的結(jié)構(gòu)，糖組成分析表明其含有Fuc GalNAc GlcA S04約為1 1 1 2. 7，采用稀酸酸水解并結(jié)合NMR技術(shù)觀察水解過程中核磁共振屯NMR譜圖變化表明，巖藻糖支鏈主要連接在葡萄糖醛酸的3位上。采用硫酸軟骨素ABC酶并對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行二糖組成分析，表明主鏈含有硫酸軟骨素，硫酸軟骨素4-S和的硫酸軟骨素4，6-S。而核磁分析表明其支鏈巖藻糖以4-0-S04取代為主，并含有3，4和2，4-0-S04取代。其二為Kariya等從日本刺參(S. japonicus)體壁中分離純化出海參糖胺聚糖，經(jīng)酸解后測(cè)定其單糖和硫酸基組成，發(fā)現(xiàn)其為硫酸軟骨素E型結(jié)構(gòu)，硫酸基(SO/—)、氨基半乳糖(GalN)、葡萄糖醛酸(GlcUA)和巖藻糖(Fuc)的摩爾比為3 2 2 1。進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)分析表明這種硫酸軟骨素的巖藻糖支鏈以2，4-0-S04為主，并且含有3，4和4-0-S04取代。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖及其提取方法和用途；該菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖具有抗凝血、抗血栓活性等活性。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖，其結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖，其特征是其結(jié)構(gòu)式如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖，其特征是主鏈為硫酸軟骨素 E結(jié)構(gòu)，同時(shí)帶有硫酸巖藻糖構(gòu)成的支鏈，該支鏈通過糖苷鍵連接在主鏈的β -D-葡萄糖醛酸上，且硫酸基的取代方式為75% 3,4-0-S04,20% 2，4_0_S04以及5% 4_0_S04。
3.如權(quán)利要求1或2所述的菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的提取方法，其特征是包括以下步驟1)、將固體海參粉碎或切成小塊，加入木瓜蛋白酶于50 70°C酶解12 48小時(shí)；所述木瓜蛋白酶與固體海參的質(zhì)量比為1 8 12;2)、將步驟1)所得的酶解后產(chǎn)物離心，取上清；向上清中加入質(zhì)量濃度為8% 12%的氯化十六烷基吡啶溶液放置20 觀小時(shí)后，離心，棄去上清液；得沉淀；所述氯化十六烷基吡啶溶液與步驟1)中的固體海參的液料比為1. 4 1. 8ml氯化十六烷基吡啶溶液/Ig固體海參；3)、將步驟2)所得的沉淀溶解于NaCl的乙醇水溶液中，再加入體積濃度彡95%的乙醇，3 5°C放置22 沈小時(shí)，離心，沉淀用體積濃度> 80%的乙醇洗滌后干燥；將干燥后沉淀先用蒸餾水溶解，然后用截流分子量為6000Da的中空纖維膜超濾并脫鹽，濃縮，凍干， 得菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的粗產(chǎn)物；所述NaCl的乙醇水溶液中=NaCl的濃度為2. 5 3. 53mol/L，所述乙醇水溶液為乙醇與水按照100 10 20的體積比混合而得；所述體積濃度彡95%的乙醇與于NaCl的乙醇水溶液的體積比為1 2 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的提取方法，其特征是將菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的粗產(chǎn)物經(jīng)離子交換樹膠純化，得菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的提取方法，其特征是所述純化方法為將菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的粗產(chǎn)物采用DEAE陰離子交換樹脂(2. 6*20cm)分離純化，采用0-1. 4mol/LNaCl緩沖鹽溶液進(jìn)行梯度洗脫，通過液相TSK4000柱子檢測(cè)所收集的洗脫液，將組分單一的洗脫液經(jīng)截留分子量為HOOODa的透析袋透析，真空冷凍干燥，得菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖。
6.如權(quán)利要求1或2所述的菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的用途，其特征是用于抗凝血或者抗血栓。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖，其結(jié)構(gòu)式如下主鏈為硫酸軟骨素E結(jié)構(gòu)，同時(shí)帶有硫酸巖藻糖構(gòu)成的支鏈，該支鏈通過糖苷鍵連接在主鏈的β-D-葡萄糖醛酸上，且硫酸基的取代方式為75％3，4-O-SO4，20％2，4-O-SO4以及5％4-O-SO4。本發(fā)明還同時(shí)公開了上述菲律賓刺參硫酸軟骨素多糖的提取方法。該多糖具有抗凝血或者抗血栓的作用。
文檔編號(hào)A61K31/737GK102367285SQ20111034731
公開日2012年3月7日 申請(qǐng)日期2011年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月6日
發(fā)明者葉興乾, 廖寧波, 李國(guó)云, 薛長(zhǎng)湖, 陳士國(guó) 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)