專(zhuān)利名稱(chēng)：2α-羥基原人參二醇的藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域及醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及2 α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
2 α -羥基原人參二醇，結(jié)構(gòu)式如下。19991998年，Cui Jian-Fang等利用堿切除法制備了 2 α -羥基原人參二醇(表 1 中 W it 'π' ^Φ] 6, Alkaline cleavage of gypenosides and characterization of dammarane-type aglycons by gas chromatography-mass spectrometry. Phytochemical
Analysis. 9 (3)，128-133)。1999年，Cui等報(bào)道了從絞股藍(lán)中分離鑒定2 α -羥基原人參
醇白勺方^去({k/x^^ 7, Gynostemma pentaphyllum identification of major sapogenins and differentiation from Panax species. European Jo urnal of Pharmaceutical
Sciences. 8 (3)，187-191)。但是，關(guān)于2 α -羥基原人參二醇的功能，尤其是明確的藥用功能，目前的研究和報(bào)道甚少。2 α -羥基原人參二醇是天然產(chǎn)物，具有一定的臨床使用價(jià)值。隨著人們對(duì)此類(lèi)化合物的化學(xué)和生物學(xué)研究的深入，其分子作用機(jī)制將逐步明確，這將進(jìn)一步推動(dòng)此類(lèi)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究，并有助于提高此類(lèi)化合物的藥用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供2 α -羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了 2 α -羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。所述的抗腫瘤藥物可以是抗胰腺癌藥物或者抗血癌藥物。該抗腫瘤藥物可以是針劑或者片劑。本發(fā)明提供了一種抑制體外腫瘤細(xì)胞增殖的方法，將2α_羥基原人參二醇加入腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中。所述的腫瘤細(xì)胞可以是肝血癌細(xì)胞或者胰腺癌細(xì)胞。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中采用的肝癌細(xì)胞是QGY。一般而言，加入2α-羥基原人參二醇的終濃度為 1-100 μ Mo 例如，1-5 μ Μ，1-10 μ Μ，1-20 μ Μ，1-50 μ Μ，5-10 μ Μ，5-20 μ Μ，5-50 μ Μ， 5-100 μ Μ，等等。
本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是2α-羥基原人參二醇。所述的腫瘤可以是胰腺癌或者白血病。本發(fā)明的小分子化合物2 α -羥基原人參二醇購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院藥物研究所，高效液相色譜法測(cè)純度，HPLC >98%。本發(fā)明的小分子化合物也可以采用各種常規(guī)的制備方法制備。例如，采用人工化學(xué)合成的方法。利用本發(fā)明小分子化合物，通過(guò)各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與2 α-羥基原人參二醇發(fā)生相互作用的物質(zhì)，如受體、抑制劑或拮抗劑等。本發(fā)明及其抑制劑、拮抗劑等，當(dāng)在治療上進(jìn)行施用(給藥)時(shí)，可提供不同的效果。通常，可將這些物質(zhì)配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中ρΗ 通常約為5-8，較佳地ρΗ約為6-8，盡管ρΗ值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于)肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。以本發(fā)明的2 α-羥基原人參二醇為例，可以將其與合適的藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)用。這類(lèi)藥物組合物含有治療有效量的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類(lèi)載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的2 α-羥基原人參二醇可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類(lèi)的藥物組合物， 可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無(wú)菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的2 α -羥基原人參二醇還可與其他治療劑一起使用。當(dāng)本發(fā)明的2 α -羥基原人參二醇被用作藥物時(shí)，可將治療有效劑量的2 α -輕基原人參二醇施用于哺乳動(dòng)物，其中該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過(guò)約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。本發(fā)明提供了 2α_羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。2α_羥基原人參二醇是天然產(chǎn)物，能夠明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。本發(fā)明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者其輔助成分進(jìn)行開(kāi)發(fā)，抑瘤效果明顯，綠色環(huán)保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。
具體實(shí)施例方式實(shí)驗(yàn)方法1.細(xì)胞復(fù)蘇1)從液氮罐中取出凍存管，直接投入37°C溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。2)從37°C水浴中取出凍存管，用吸管吸出細(xì)胞懸液，注入離心管并加入10倍以上培養(yǎng)液，混合后低速離心，棄上清，再重復(fù)用培養(yǎng)液洗一次。3)用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，接種培養(yǎng)瓶，放在37°C培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)至一定濃度時(shí)進(jìn)行傳代。PANC-I細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的DMEM
4高糖培養(yǎng)基中，k562細(xì)胞培養(yǎng)在含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中含100U/ml青霉素和lOOyg/ml鏈霉素。2.細(xì)胞傳代培養(yǎng)每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)的情況，當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)至約90%匯合時(shí)傳代，約每隔 2-4天傳代一次。一瓶傳代成三瓶，或一個(gè)25cm2傳代于一個(gè)75cm2的培養(yǎng)瓶中。方法1)用IX磷酸緩沖液洗滌細(xì)胞一次。2)加入2_3ml胰酶消化液消化，置于37°C培養(yǎng)箱中數(shù)分鐘。用手拍打細(xì)胞培養(yǎng)瓶， 使細(xì)胞分離。3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合適培養(yǎng)基終止胰酶消化。將細(xì)胞分裝于新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。3.細(xì)胞凍存1)取培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞胰蛋白酶消化，收集于離心管中并計(jì)數(shù)，離心。2)棄除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入配置好的凍存培養(yǎng)液(含10% DMS0,40% DMEM和50% Gibico胎牛血清)，凍存液中細(xì)胞的最終濃度為0. 5_lX107ml。用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，然后分裝入無(wú)菌凍存管中，每管加1-1. 5ml。3)將凍存管放入凍存盒置-80°C速凍，5小時(shí)后移入液氮罐中保存。4.藥物準(zhǔn)備2 α -羥基原人參二醇溶于DMSO (二甲基亞砜)，配制成IOOmM或50mM的母液備用。實(shí)施例1 MTS法測(cè)定2 α -羥基原人參二醇對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用PANC-I細(xì)胞(購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù))3000個(gè)/孔接種至96孔板，培養(yǎng)M小時(shí)使之貼壁后加入2 α -羥基原人參二醇(購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所)，設(shè)6個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞在37°C，5% CO2條件下培養(yǎng)72小時(shí)后，倒掉培養(yǎng)液，用MTS 試劑盒(Promega公司)測(cè)定細(xì)胞存活率。測(cè)試方法為將細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基洗一遍，按照100 μ 1/well的量加入預(yù)先配制好的MTS顯色溶液(IOml無(wú)血清培養(yǎng)基中加入2ml溶液1和100 μ 1溶液2，充分混勻)。 將一個(gè)沒(méi)有細(xì)胞的孔設(shè)為本底孔，用以校正溶液的背景光吸收。把細(xì)胞放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 4小時(shí)，然后用酶標(biāo)儀讀取光吸收值(參考波長(zhǎng)630-700nm，測(cè)定波長(zhǎng)490nm)， 計(jì)算細(xì)胞存活率，以測(cè)定孔光吸收值/對(duì)照孔光吸收值作為細(xì)胞存活率的數(shù)值。根據(jù)細(xì)胞存活率，計(jì)算2 α -羥基原人參二醇對(duì)PANC-I細(xì)胞的IC50值。IC50是指被抑制一半時(shí)抑制劑的濃度。這里即為PANC-I細(xì)胞數(shù)量為對(duì)照的一半時(shí)2 α -羥基原人參二醇的濃度。IC50的計(jì)算一般需要測(cè)定5個(gè)以上的劑量效應(yīng)，再通過(guò)曲線擬合得到函數(shù)計(jì)算而得。結(jié)果2 α-羥基原人參二醇對(duì)PANC-I細(xì)胞的IC50值為664 μ Μ。實(shí)施例2 2α-羥基原人參二醇對(duì)人白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用利用cck-8試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所)檢測(cè)。步驟1)將k562細(xì)胞(購(gòu)自ATCC)均勻的種在96孔板里，每孔細(xì)胞數(shù)為10000個(gè)。2)待貼壁，過(guò)夜后加藥，加藥Qa -羥基原人參二醇濃度分別為50、16. 67,5. 56、1. 85,0. 62 μ Μ,每個(gè)濃度有3個(gè)復(fù)孔。3)培養(yǎng)48小時(shí)，將完全培養(yǎng)基替換成無(wú)血清培養(yǎng)基與CCK8的混合物(10 1)， 于37°C培養(yǎng)箱孵育2小時(shí)。4)以450nm為測(cè)量波長(zhǎng)，以650nm為對(duì)照波長(zhǎng)，于酶標(biāo)儀上測(cè)出讀數(shù)。結(jié)果2 α -羥基原人參二醇對(duì)k562細(xì)胞的IC50值為4. 77 μ Μ。
權(quán)利要求
1.2α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用.
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤包括胰腺癌或者白血病。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是抗胰腺癌藥物。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是抗白血病藥物。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，該抗腫瘤藥物為針劑或者片劑。
6.一種抑制體外腫瘤細(xì)胞增殖的方法，其特征在于，將2 α -羥基原人參二醇加入腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的腫瘤細(xì)胞是胰腺癌細(xì)胞或者白血病細(xì)胞。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，加入2α_羥基原人參二醇的終濃度為 1-100 μ Mo
9.一種抗腫瘤藥物，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物的活性成分是2 α -羥基原人參二
10.如權(quán)利要求9所述的抗腫瘤藥物，其特征在于，所述的腫瘤是胰腺癌或者白血病。
全文摘要
本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域及醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及2α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了2α-羥基原人參二醇在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的腫瘤細(xì)胞包括白血病或者胰腺癌。2α-羥基原人參二醇在屬于天然產(chǎn)物，具有一定的臨床使用價(jià)值。本發(fā)明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者其輔助成分進(jìn)行開(kāi)發(fā)，抑瘤效果明顯，綠色環(huán)保，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。
文檔編號(hào)A61P35/02GK102397280SQ20111036215
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者余龍, 劉祖龍, 唐麗莎, 胡立宏 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)