專利名稱:大承氣湯在制備神經(jīng)修復劑中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及藥物組合物的新用途。
背景技術(shù):
現(xiàn)代研究證實,腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system,ENS)是一個不依賴于中樞神經(jīng)系統(tǒng)而具有高度自主性的完整外周神經(jīng)環(huán)路。由胃腸道壁內(nèi)大量的神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)元細胞,以及節(jié)間神經(jīng)纖維和神經(jīng)遞質(zhì)所組成。完整連續(xù)地分布在食管下端至肛管內(nèi)括約肌。 解剖學研究發(fā)現(xiàn),ENS主要由肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢兩部分構(gòu)成。肌間神經(jīng)叢解剖形態(tài)較黏膜下神經(jīng)叢體積大,分布在環(huán)縱層肌之間,含有大量可以調(diào)節(jié)胃腸平滑肌運動和臨近器官分泌的神經(jīng)元;黏膜下神經(jīng)叢較肌間神經(jīng)叢體積小很多,神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)叢內(nèi)包含的神經(jīng)元也較少,并且神經(jīng)節(jié)之間的連接也很細微。黏膜下神經(jīng)叢含有感覺神經(jīng)元,可以接收肌間神經(jīng)叢神經(jīng)元的傳入信號,同時還可以刺激胃腸上皮中的隱窩細胞的分泌功能。ENS不同于其它的外周神經(jīng)系統(tǒng),它具有相對的獨立性,可以在一定程度上不依賴于大腦和脊髓而調(diào)控消化系統(tǒng)平滑肌(包括胃腸平滑肌和血管平滑肌)和腺體的活動,從而控制胃腸道的運動,分泌和血流。ENS的相對獨立性主要是由于在消化系統(tǒng)的壁內(nèi)存在著一個由大量功能特性不相同的神經(jīng)元亞型細胞所成的局部環(huán)路,它可以感知胃腸道腔內(nèi)和壁內(nèi)的生理狀態(tài),并可以對傳入的神經(jīng)信號加之處理,即具有類似于大腦和脊髓的處理信息的功能,從而自主地調(diào)節(jié)胃腸道的生理功能。因此,ENS又被稱為“腹腦”或“第二腦”。多器官功能障礙綜合征(MODS)是在嚴重感染、創(chuàng)傷和大手術(shù)等原發(fā)病的基礎(chǔ)上, 同時或序慣發(fā)生地兩個或兩個以上的器官或系統(tǒng)的功能障礙,其發(fā)病急,進展快,是腹部外科患者死亡的重要原因。目前已有研究表明,胃腸道是MODS的始發(fā)部位和重要的靶器官。 胃腸道是人體最大的儲菌庫。在機體受到嚴重打擊的情況下,胃腸運動功能和粘膜屏障受損,胃腸道內(nèi)的細菌移位,發(fā)生菌血癥或敗血癥,從而導致多個器官功能障礙甚至衰竭。胃腸運動的恢復可以有效的減輕粘膜屏障的損傷,抑制全身的炎癥反應,從而降低MODS患者的病死率。因此,胃腸動力的恢復已經(jīng)成為判斷MODS患者預后的重要指標。ENS主要是通過位于黏膜下和肌間的興奮性和抑制性神經(jīng)元來調(diào)節(jié)胃腸的運動。 其中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)主要包括乙酰膽堿(Ach),P物質(zhì)(SP),對胃腸運動功能尤為重要。膽堿能神經(jīng)元被認為是ENS中數(shù)量最多的,大量分布于腸肌層間,屬于興奮性神經(jīng),可以刺激胃腸道的蠕動和吸收功能。SP神經(jīng)元主要存在于肌層神經(jīng)叢內(nèi),通過發(fā)出的突起延伸到胃腸壁的各層。SP可以抑制胃腸道消化液的分泌,促進胃腸蠕動。研究發(fā)現(xiàn),很多胃腸運動障礙性疾病與乙酰膽堿和P物質(zhì)等興奮性神經(jīng)的受損密切相關(guān),修復乙酰膽堿和P物質(zhì)興奮性神經(jīng)損傷可有效治療胃腸運動障礙性疾病。開發(fā)乙酰膽堿和P物質(zhì)興奮性神經(jīng)的修復剖是當前胃腸病學領(lǐng)域的重要課題。通里攻下法為中醫(yī)學八大治則之一,常用于疏通臟腑,增強腸蠕動,恢復腸功能。 大承氣湯始見于漢代張仲景《傷寒論》及《金匱要略》,為通里攻下法中寒下法的代表方劑, 其蕩滌臟腑,瀉熱除滿等作用早已為古今醫(yī)學臨床實踐所證實。大承氣湯由大黃、芒硝、枳實、厚樸組成。大黃苦寒瀉熱,通便去實,蕩滌腸胃實熱,為君藥;芒硝咸寒,軟堅潤燥,助大黃瀉熱通便,為臣藥,二藥相須為用。大黃推蕩下行,芒硝軟化燥屎,可將胃腸實熱積滯一鼓蕩滌而下。厚樸寬腸行氣、化滯除滿,枳實下氣消痞,二藥調(diào)協(xié)氣機,共為佐使。臨床上用于梗阻性疾病、腹膜炎和血運障礙性腹部疾病,已經(jīng)取得一定的效果。但尚無大承氣湯修復腸運動膽堿能神經(jīng)和SP神經(jīng)損傷的報告。
發(fā)明內(nèi)容
本申請的目的在于提供大承氣湯的一種新用途,即大承氣湯在制備神經(jīng)修復劑中的應用。其中所述的神經(jīng)是腸運動膽堿能神經(jīng)和/或SP神經(jīng)。其中所述的修復劑優(yōu)選口服制劑。以方便使用。現(xiàn)有技術(shù)中已有制備成顆粒沖劑的大承氣湯,如本發(fā)明所使用的大承氣湯沖劑(揚子江藥業(yè)公司,按重量份由大黃12、芒硝 9、枳實9、厚樸9組成)??煞奖愕赜糜诒景l(fā)明所述及的目的。經(jīng)證明,大承氣湯可以有效地抑制MODS狀態(tài)下Ach和SP神經(jīng)的損傷。是胃腸運動Ach和SP神經(jīng)很好的修復劑。
本發(fā)明附圖2幅,其中圖1是大鼠小腸肌間神經(jīng)叢Ach陽性神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)(紅色),A為對照組;B為MODS 組;C為DCQT組。圖2是大鼠小腸肌間神經(jīng)叢SP陽性神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)(紅色),A為對照組;B為MODS 組;C為DCQT組。
具體實施例方式下述非限制性實施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明,但不以任何方式限制本發(fā)明。本實施例所使用的大承氣湯購自揚子江藥業(yè)公司。實施例(1)分組與造模健康成年清潔級Wistar大鼠50只,雌雄各半,體重200g 250g。 將大鼠按照隨機數(shù)字表法分為對照組10只,MODS組20只,大承氣湯(DCQT)治療組20只。 無菌條件下,對照組每只大鼠腹腔注射Iml生理鹽水;MODS組和DCQT組每只大鼠腹腔注射 Iml含有10% BaSO4佐劑的E. coloi X 108cfu/ml混懸液,建立細菌性腹膜炎致MODS模型。 DCQT組于造模前2日給予大承氣湯灌胃,2次/日,每次lml/100g。(2)制備小腸肌層全厚標本模型建立M小時后,取各組存活大鼠脫頸處死,迅速取出距幽門2cm的上段小腸。沿小腸系膜剖開并去除內(nèi)容物,將小腸組織切成Icm2大小片段放于4%多聚甲醛液中固定,4°C冰箱內(nèi)存放過夜。解剖顯微鏡下,用顯微解剖鑷剝離黏膜和黏膜下層,再撕除環(huán)肌層,得到縱肌層及附于其上的肌間神經(jīng)叢。(3)免疫熒光染色①PBS漂洗標本后,置于含0.5% TritonX-100的0.05mol/ ITris-HCl緩沖液中孵育4小時;②BSA室溫下封閉非特異性抗體1小時;③分別滴加羊抗大鼠VAChT、VIP和SP多克隆抗體,或兔抗大鼠nNOS多克隆抗體,4°C孵育過夜;④PBSCN 102406738 A說明書3/4 頁
漂洗后,滴加iTexas Red小鼠抗山羊IgG抗體或FITC驢抗兔IgG抗體,避光室溫孵育2小時;⑤PBS中4°C避光過夜;⑥PBS漂洗后,熒光封片劑封片;⑦陰性對照在步驟③中不加一抗,只加抗體稀釋液,其余操作步驟同上。(4)圖像采集與分析用TCS-SP2激光掃描共聚焦顯微鏡觀測并采集圖像。分別以484nm和595nm激發(fā)FITC和Texas Red。VAChT、VIP、SP陽性熒光為紅色,nNOS陽性熒光為綠色。每組取5個標本檢測,每個標本隨機選取2個視野,用Leica圖像分析軟件進行圖像的三維重建,用Image-Pro Plus 6. 0進行熒光半定量分析。小腸肌層神經(jīng)叢ACh陽性神經(jīng)纖維樣品和小腸肌間神經(jīng)叢SP陽性神經(jīng)纖維樣品的顯微鏡照片分別如圖1和圖2所示。(5)統(tǒng)計學處理實驗數(shù)據(jù)應用統(tǒng)計學軟件SPSS 13. 0進行分析。計數(shù)數(shù)據(jù)比較采用均數(shù)士標準差士S)表示,采用兩組獨立樣本的t檢驗,計量數(shù)據(jù)采用卡方(X2)檢驗,P < 0. 01表示差異有統(tǒng)計學意義。小腸肌層神經(jīng)叢ACh陽性神經(jīng)纖維樣品和小腸肌間神經(jīng)叢SP陽性神經(jīng)纖維樣品的檢測統(tǒng)計結(jié)果分別如表1和表2所示表權(quán)利要求
1.大承氣湯在制備神經(jīng)修復劑中的應用。
2.權(quán)利要求1所述的大承氣湯在制備神經(jīng)修復劑中的應用,其特征在于所述的神經(jīng)是腸運動膽堿能神經(jīng)和/或SP神經(jīng)。
3.權(quán)利要求1或2所述的大承氣湯在制備神經(jīng)修復劑中的應用,其特征在于所述的修復劑是口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開大承氣湯在制備神經(jīng)修復劑中的應用。尤其是作為腸運動膽堿能神經(jīng)和/或SP神經(jīng)修復劑中的應用。經(jīng)證明,大承氣湯可以有效地抑制MODS狀態(tài)下Ach和SP神經(jīng)的損傷。是胃腸運動Ach和SP神經(jīng)很好的修復劑。
文檔編號A61K36/75GK102406738SQ20111039628
公開日2012年4月11日 申請日期2011年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月2日
發(fā)明者謝明征, 齊清會 申請人:大連醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院