專利名稱：：甘草總皂苷的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及甘草總皂苷的新用途。屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：腸易激綜合征(IrritableBowelSyndrome,IBS)最早于1820年由Powell報(bào)道，屬于胃腸功能紊亂性疾病，指一組包括腹痛、腹脹、排便習(xí)慣和大便性狀異常，持續(xù)存在或間歇發(fā)作，而無形態(tài)學(xué)和生化異常改變的癥候群，是臨床上最為常見的功能性胃腸病之一。目前IBS診斷主要以癥狀學(xué)為依據(jù)并建立在排除器質(zhì)性疾病的基礎(chǔ)上。近年來許多研究顯示胃腸動(dòng)力障礙和內(nèi)臟感覺異常是本病癥狀的主要病理生理基礎(chǔ)，而其發(fā)病明顯受到心理社會(huì)因素的影響。各地研究報(bào)道顯示IBS是一種世界范圍內(nèi)的常見病、多發(fā)病，其發(fā)病率相當(dāng)高。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，西方國(guó)家的人群患病率約9%_22%，以女性較男性多見，比例約21-31。在我國(guó)所進(jìn)行的調(diào)查顯示，北京地區(qū)IBS的人群患病率是(羅馬標(biāo)準(zhǔn))-7%(Manning標(biāo)準(zhǔn))，廣東地區(qū)用羅馬Π標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查的IBS人群患病率為5.67%，中國(guó)人群患病率估計(jì)在20%。IBS的病因與發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，盡管人們不斷提出各種假說試圖闡明其發(fā)病機(jī)制及病理生理，但都不能以一種單一的發(fā)病機(jī)制來完全解釋所有IBS的臨床表現(xiàn)，而且各種可能的發(fā)病機(jī)制間又有著相互的聯(lián)系。其發(fā)病機(jī)制包括動(dòng)力異常、內(nèi)臟感覺異常、腦-腸軸異常、炎癥、內(nèi)分泌異常、神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)控異常及心理社會(huì)因素等。由于臨床上IBS的病因病機(jī)以肝郁脾虛型最為常見，因此多數(shù)醫(yī)家在治療腹瀉型IBS時(shí)均采用疏肝健脾法為基礎(chǔ)隨證加減。常用的基礎(chǔ)方主要有四逆散、痛瀉要方、柴胡疏肝散、參苓白術(shù)散、逍遙散、芍藥甘草湯等。目前對(duì)芍藥甘草湯的某些有效部位進(jìn)行了研究，例如，專利號(hào)02156681.x，該專利中公開了芍藥甘草提取物可用于神經(jīng)、肌肉和內(nèi)臟的急慢性攣急疼痛的解痙止痛和養(yǎng)血護(hù)肝、解毒止痛，降酶退黃，治療急慢性病毒肝炎。芍藥甘草提取物中，白芍總苷、甘草三萜酸和甘草總黃酮的總含量大于50%；通過其實(shí)施例2可知，該提取物中含有甘草皂苷類提取物約為42%，該甘草皂苷類提取物中含有甘草三萜酸50%以上。其中，該專利還公開了白芍總苷、甘草三萜酸的制備方法，其中，甘草三萜酸的制備方法為將甘草用40-80%乙醇回流提取，提取液回收乙醇，加蒸餾水，去除沉淀，濾液上打孔樹脂，先用水洗，再用20-95%乙醇洗脫，所得提取物中，甘草三萜酸和甘草總黃酮的總含量高于50%。專利申請(qǐng)?zhí)?00610144333.7，該申請(qǐng)使用了前述專利(02156681.x)中的芍藥甘草提取物，通過藥理學(xué)試驗(yàn)證明，芍藥甘草提取物可用于制備治療腸易激綜合征的藥物。該專利中還指出，芍藥甘草提取物給藥200mg/Kg時(shí)才具有顯著的藥效，結(jié)合專利號(hào)02156681.χ中的相關(guān)內(nèi)容可以推知，200mg的芍藥甘草提取物中含有甘草總皂苷約8%ig，換算成人用劑量為9.32mg/kg,即每日0.56g/人。甘草為芍藥甘草湯的組成藥物之一，為豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根及根莖。主要含有三萜皂苷類、黃酮類、糖類、有機(jī)酸類以及多種萜類化合物。目前，還未見僅用甘草總皂苷治療腸易激綜合征的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供甘草總皂苷的新用途。本發(fā)明的另一目的在于提供一種治療腸易激綜合征的藥物組合物。本發(fā)明提供了甘草總皂苷在制備治療腸易激綜合征的藥物中的用途。進(jìn)一步地，所述藥物是治療內(nèi)臟高敏感性腸易激綜合征的藥物。其中，所述藥物是治療腹痛、結(jié)腸功能紊亂的藥物。其中，所述甘草總皂苷中，含有皂苷的含量以甘草酸單銨鹽計(jì)不得低于50%W/W。進(jìn)一步地，所述甘草總皂苷是由如下方法制備得到的(1)取甘草粗粉，先用80-95%V/V乙醇提取，提取液回收乙醇后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇萃取液備用；(2)步驟(1)的藥渣再用10-30%V/V乙醇提取，所得的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，所得萃取液與步驟(1)所得正丁醇萃取液合并，回收正丁醇后，加水溶解，將上清液過大孔吸附樹脂柱，先用水洗至無molish反應(yīng)后，再用30-50%V/V乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甘草總皂苷。更進(jìn)一步地，步驟(1)中，選用95%V/V乙醇進(jìn)行提??；步驟⑵中，用20%V/V乙醇提取，再選用非極性或中極性大孔吸附樹脂，以40%V/V乙醇洗脫。其中，步驟O)中，選用DlOl型大孔吸附樹脂。其中，所述藥物是以甘草總皂苷為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑；其中，每日用制劑中有效成分的含量以甘草總皂苷計(jì)為0.25g/人。本發(fā)明還提供了一種治療腸易激綜合征的藥物組合物，它是由甘草總皂苷為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。甘草總皂苷可通過改善腸敏感性，降低結(jié)腸頻率、峰電位、峰峰值及峰面積，降低血漿中升高的CCK含量，升高血清中降低的GAS含量，顯著升高患者低水平的血清DA含量及降低結(jié)腸中增多的肥大細(xì)胞數(shù)，從而在對(duì)腸易激綜合征的治療過程中發(fā)揮顯著療效，能夠抑制腸易激綜合征所致的腹痛，改善結(jié)腸功能紊亂的現(xiàn)象，為臨床用藥提供了一種新的選擇。以下通過具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1甘草總皂苷的制備方法(1)取甘草粗粉，用20倍量95%乙醇滲漉，滲漉液過濾后，70°C減壓濃縮成稠膏狀，加熱水?dāng)嚢枞芙夂螅来斡檬兔?、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，乙酸乙酯所得部分為總黃酮，正丁醇萃取液部分備用。(2)取步驟(1)所得濾渣，用20倍量20%V/V乙醇滲漉，滲漉液過濾后，提取液在60-70°C減壓濃縮至無醇味，再用水飽和正丁醇萃取，所得萃取液與步驟(1)所得正丁醇萃取液合并，減壓回收正丁醇后，殘?jiān)铀芙?，離心，取上清液，調(diào)節(jié)至一定濃度后，通過徑高比為120的DlOl大孔吸附樹脂柱，吸附流速1.5ml/min,以3BV蒸餾水洗去雜質(zhì)，收集5BV40%V/V乙醇洗脫液，流速為1.5ml/min，減壓回收乙醇，濃縮液干燥后即得甘草總皂苷。甘草總皂苷中有效成分的含量測(cè)定以甘草酸單銨鹽作為對(duì)照品，以5%香草醛-冰醋酸溶液及高氯酸作為顯色劑，采用分光光度法，在589nm波長(zhǎng)處制定了標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)甘草總皂苷提取物進(jìn)行了含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果甘草總皂苷中皂苷的含量以甘草酸單銨鹽計(jì)為50.2%W/W。以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)進(jìn)一步證明本發(fā)明的有益效果。本發(fā)明的藥效實(shí)驗(yàn)中，均采用冰醋酸、芥末油制作腸易激綜合征(IBS)模型，對(duì)目標(biāo)藥物進(jìn)行藥效研究。本發(fā)明所用具體造模方法，是采用朱力陽等報(bào)道的內(nèi)臟高敏感性模型建立的(朱力陽，等，《中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)》，2010年沈卷2期，267-269頁)。使用該造模方法，在一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)給予化學(xué)刺激后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)了明顯的IBS臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)表明，該方法重復(fù)性良好。實(shí)驗(yàn)例1甘草總皂苷治療冰醋酸內(nèi)臟高敏感性IBS疾病模型的實(shí)驗(yàn)研究1.1材料和方法L1.1藥物1.1.1.1受試藥物甘草總皂苷(由實(shí)施例1制備得到)。1.1.1.2陽性藥物曲美布丁片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)0905005，規(guī)格0.Ig/片X20片/盒。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成濃度為2%(每毫升含曲美布丁0.02g)的藥液，備用。1.1.1.3主要試劑0.5%冰醋酸(體積分?jǐn)?shù))，1.5%戊巴比妥鈉，生理鹽水，液體石蠟。1.1.2動(dòng)物SD大鼠，雌雄兼有，體重200士20g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，許可證號(hào)SCXK(川)2008-11，檢疫后備用。1.1.3器材電子天平PA2003(上海天平儀器廠生產(chǎn))8F導(dǎo)尿管(湛江市事達(dá)實(shí)業(yè)有限公司)BL-420E生理機(jī)能儀(成都泰盟科技有限公司生產(chǎn))秒表、溫度計(jì)、卷尺、注射器1.1.4實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠雌雄兼有，隨機(jī)分為空白組，模型組，自然恢復(fù)組，陽性藥組，甘草總皂苷高、中、低劑量組。所有需造模大鼠禁食24h后，在清醒狀態(tài)下用鈍針頭經(jīng)肛門插入直腸灌注0.5%冰醋酸(體積分?jǐn)?shù))，5ml/kg，首劑劑量濃度加倍，連續(xù)6天，灌注后使大鼠頭部朝下，肛門朝上托10秒。從第7天開始，除空白組、模型組外，各組分別灌胃生理鹽水，2%曲美布丁，各組分高、中、低劑量藥液，IOmlAg01次/天，連續(xù)3天。末次給藥/造模前禁食Mh，末次給藥/造模后Ih經(jīng)肛門直腸擴(kuò)張(CRD)后，觀察動(dòng)物腹部撤離反射(AWR)，評(píng)價(jià)動(dòng)物的內(nèi)臟敏感性。腸敏感性測(cè)定結(jié)束后，立即用1.5%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉動(dòng)物，按外科常規(guī)手術(shù)行下腹正中切口，將自制針灸針銀電極埋置于結(jié)腸漿膜面，距回盲部約2cm，雙極的間距5mm，用BL-420E生理記錄儀同步描記胃腸電，時(shí)間常數(shù)^，高頻濾波0.3Hz0待波形穩(wěn)定后，記錄5分鐘內(nèi)的電生理活動(dòng)，計(jì)算頻率、峰電位、峰峰值、峰面積。1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1、2。表1甘草總皂苷對(duì)冰醋酸所致IBS模型大鼠腸敏感性的影響(χ士SD)組別動(dòng)物(只)生藥給藥量(g/kg)提取物給藥量(mg/kg)有效成分給藥S(mg/kg)抬腹閾值(ml)拱背閾值(ml)空白對(duì)照組80.72±0.09'0.78±0.08λλIBS模型組9-----·56±0·040.62±0.04自然恢復(fù)組10-----0.62±0.110.68±0.12曲美布丁組100.2---0.69±0.1(Γ0·74±0·11甘草總皂苷高劑量10310050.200.62±0.170·68±0·17組甘草總皂苷中劑量101.55025.1.67±0.100.71±0.09組甘草總皂苷低劑量100.752512.550.66±0.05*0.71±0.06ft組注與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。表2甘草總皂苷對(duì)冰醋酸所致IBS模型大鼠結(jié)腸肌電的影響(I±SD)組別動(dòng)物■(只)生藥給藥量(g/kg)提取物給藥量(mg/kg)有效成分給藥量(mg/kg)頻率(次/min)峰電位(mV)峰峰值(mV)峰面積(mV、)空白對(duì)照組8---5.75±1.490.62±0.181.23±0.4222.98±7.54IBS模型組9---7.78±1.920.64±0.321.27±0.6324.15±14·81向然恢復(fù)組10---8·50±2·760.58±0.141·10±0·3320.38±8.94曲美布丁組100.2————8.50士1.960.75士0.281.56士0.5427.80士11.59甘草總皂昔高劑量10050.20組甘草總皂廿中劑量ο1.55025.1組甘草總皂苷低劑量100.752512.558.40±2.590.61±0.251.31±0.4722.13±9.23組8·40±2·590.73±0.241.44±0.5424.00±9.557.40±2.40.50±0.131.06±0.2619.90±5.541.3結(jié)論由以上結(jié)果知，甘草總皂苷低劑量組能對(duì)抗冰醋酸所致大鼠腸敏感性，使抬腹、拱背閾值增高，甘草總皂苷中、低劑量組能有效改善冰醋酸所致大鼠結(jié)腸肌電頻率。6實(shí)驗(yàn)例2甘草總皂苷治療芥末油內(nèi)臟高敏感性IBS疾病模型的實(shí)驗(yàn)研究1.1材料及方法1.1.1藥物1.1.1.1受試藥物甘草總皂苷(實(shí)施例1制備)。1.1.1.2陽性藥物曲美布丁片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)0905005，規(guī)格0.Ig/片X20片/盒。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成濃度為2%(每毫升含曲美布丁0.02g)的藥液，備用。1.1.1.3主要試劑5%芥末油(體積分?jǐn)?shù))，1.5%戊巴比妥鈉，生理鹽水，液體石蠟。1.1.1.4動(dòng)物SD大鼠，雌雄兼有，體重200士20g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，許可證號(hào)04-11號(hào)，檢疫后備用。1.1.1.5器材電子天平PA2003(上海天平儀器廠生產(chǎn))8F導(dǎo)尿管(湛江市事達(dá)實(shí)業(yè)有限公司)BL-420E生理機(jī)能儀(成都泰盟科技有限公司生產(chǎn))秒表、溫度計(jì)、卷尺、注射器1.1.2實(shí)驗(yàn)方法SD大鼠雌雄兼有，隨機(jī)分為空白組，模型組，自然恢復(fù)組，陽性藥組，甘草總皂苷高、中、低劑量組。所有需造模大鼠禁食24h后，在清醒狀態(tài)下用鈍針頭經(jīng)肛門插入直腸灌注5%芥末油(體積分?jǐn)?shù))，細(xì)Ι/kg，首劑劑量濃度加倍，連續(xù)6天，灌注后使大鼠頭部朝下，肛門朝上托10秒。從第7天開始，除空白組、模型組外，各組分別灌胃生理鹽水，2%曲美布丁，各組分高、中、低劑量藥液，IOmlAg01次/天，連續(xù)3天。末次給藥/造模前禁食M小時(shí)，末次給藥/造模后1小時(shí)經(jīng)肛門直腸擴(kuò)張(CRD)后，觀察動(dòng)物腹部撤離反射(AWR)，評(píng)價(jià)動(dòng)物的內(nèi)臟敏感性。腸敏感性測(cè)定結(jié)束后，立即用1.5%戊巴比妥鈉35mg/kg腹腔注射麻醉動(dòng)物，按外科常規(guī)手術(shù)行下腹正中切口，將一對(duì)針灸針自制銀電極埋置于結(jié)腸漿膜面，距回盲部約2cm，雙極的間距5mm，用BL-420E生理記錄儀同步描記胃腸電，時(shí)間常數(shù)^，高頻濾波0.:3Hz。待波形穩(wěn)定后，記錄五分鐘內(nèi)的電生理活動(dòng)，計(jì)算頻率、峰電位、峰峰值、峰面積。1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.2.1甘草總皂苷對(duì)芥末油所致IBS模型大鼠腸敏感性和結(jié)腸肌電的影響表3甘草總皂苷對(duì)芥末油所致IBS模型大鼠腸敏感性的影響(I±SD)權(quán)利要求1.甘草總皂苷在制備治療腸易激綜合征的藥物中的用途。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述藥物是治療內(nèi)臟高敏感性腸易激綜合征的藥物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述藥物是治療腹痛、結(jié)腸功能紊亂的藥物。4.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述甘草總皂苷中，皂苷的含量以甘草酸單銨鹽計(jì)不得低于50%W/W。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于所述甘草總皂苷是由如下方法制備得到的(1)取甘草粗粉，先用80-95%V/V乙醇提取，提取液回收乙醇后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇萃取液備用；(2)步驟(1)的藥渣再用10-30%V/V乙醇提取，所得的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，所得萃取液與步驟(1)所得正丁醇萃取液合并，回收正丁醇后，加水溶解，將上清液過大孔吸附樹脂柱，先用水洗至無molish反應(yīng)后，再用30-50%V/V乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，干燥，即得甘草總皂苷。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于步驟(1)中，選用95%V/V乙醇進(jìn)行提?。徊襟EO)中，用20%V/V乙醇提取，再選用非極性或中極性大孔吸附樹脂，以40%V/V乙醇洗脫。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于步驟O)中，選用DlOl型大孔吸附樹脂。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的用途，其特征在于所述藥物是以甘草總皂苷為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑；其中，每日用制劑中有效成分的含量以甘草總皂苷計(jì)為0.25g/人。9.一種治療腸易激綜合征的藥物組合物，其特征在于它是由甘草總皂苷為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。全文摘要本發(fā)明提供了甘草總皂苷在制備治療腸易激綜合征的藥物中的用途。甘草總皂苷可通過改善腸敏感性，降低結(jié)腸頻率、峰電位、峰峰值及峰面積，降低血漿中升高的CCK含量，升高血清中降低的GAS含量，顯著升高患者低水平的血清DA含量及降低結(jié)腸中增多的肥大細(xì)胞數(shù)，從而在對(duì)腸易激綜合征的治療過程中發(fā)揮顯著療效，能夠抑制腸易激綜合征所致的腹痛，改善結(jié)腸功能紊亂的現(xiàn)象，為臨床用藥提供了一種新的選擇。文檔編號(hào)A61P1/00GK102416037SQ20111040192公開日2012年4月18日申請(qǐng)日期2011年12月6日優(yōu)先權(quán)日2010年12月6日發(fā)明者彭成,朱力陽,李瑜,郭力申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)