專利名稱：一種肉蓯蓉苯乙醇總苷的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種肉蓯蓉苯乙醇總苷的制備方法，屬于醫(yī)藥、食品、保健食品加工應用技術領域。
背景技術：
肉蓯蓉系傳統(tǒng)補益中藥，用于治療陰虛陽痿、女子不孕、腰膝酸軟、腸燥便秘等病癥。隨著世界人口老齡化進程加快，與衰老有關的疾病如老年癡呆癥等嚴重影響老年人的生活質(zhì)量，作為補腎、益精血傳統(tǒng)中藥肉蓯蓉，早在20世紀70年代就引起對漢方藥有深入研究的日本學者關注，并系統(tǒng)研究了肉蓯蓉植物的化學成分和藥理活性，發(fā)現(xiàn)苯乙醇苷類化合物是肉蓯蓉植物主要活性成分，具有抗氧化、促進物質(zhì)代謝、改善學習記憶、增強性功能等作用，隨后以北京大學屠鵬飛教授為代表的國內(nèi)學者也開始對肉蓯蓉的化學成分和藥理作用進行研究，發(fā)現(xiàn)肉蓯蓉所含的苯乙醇苷類化合物在治療血管性癡呆方面具有獨特的作用，標志著肉蓯蓉從傳統(tǒng)入藥上升到技術附加值較高的現(xiàn)代中藥層次，研究比較發(fā)現(xiàn)資源量大的管花肉蓯蓉與荒漠肉蓯蓉主要作用成分相似，并收載于2005版《中華人民共和國藥典》。目前已從肉蓯蓉屬分離鑒定了 70余個化合物，主要有苯乙醇苷類、苯甲醇苷類、環(huán)烯醚萜苷類、木脂素及其苷類、生物堿、半乳糖醇、寡糖酯、多糖。肉蓯蓉除作藥用，也作為功能食品用于抗疲勞、藥膳和化妝品中
肉蓯蓉傳統(tǒng)初加工有鹽(腌)制與直接曬干，藥材飲片的炮制有醋制、酒制與蒸制，用于中成藥、保健酒或食品中，國內(nèi)相關專利申請量多達1000余項
肉蓯蓉現(xiàn)代加工技術基于肉蓯蓉物質(zhì)基礎與藥理研究成果，日本學者在上世紀80年代發(fā)現(xiàn)肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物具有改善性功能、改善學習記憶、抗氧化與抗疲勞，并對吸附樹脂提取工藝與功效就行了專利保護；隨后北京大學藥學院屠鵬飛等在“一組中藥肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物”專利(02117641.8)中，保護了 27個苯乙醇苷類化合物在抗神經(jīng)細胞凋亡功效，接著韓國慶熙大學在“顯示提高軸突生長活性和神經(jīng)營養(yǎng)作用的含有荒漠肉蓯蓉Y. C. MA提取物的組合物”專利(03809500. 9)中，提出荒漠肉蓯蓉提取物具有有效的神經(jīng)元細胞保護活性，可以作為用于治療和預防神經(jīng)退化性大腦疾病的治療或保健食品；杭州天力藥業(yè)有限公司屠鵬飛等人在“來源于管花肉蓯蓉的含有苯乙醇苷的制劑及其制備方法和用途”(03119204. 1)保護了一種從管花肉蓯蓉獲得的含有苯乙醇苷的制劑， 包含10-70%松果菊苷(echinacoside)及1_40%類葉升麻苷(acteoside)，該制劑可作為活性成分在制備預防和治療老年癡呆癥藥物中的應用及在制備抑制血小板聚集藥物中的應用；新疆醫(yī)科大學堵年生等人在“肉蓯蓉總苷的抑制皮膚色素沉著和增白美容作用” (200510U6563.6)中提出了肉蓯蓉苯乙醇總苷具有抑制酪氨酸酶活性，用于色素增加性皮膚病的預防和治療或外用化妝品的增白祛斑功能。在加工方面，新疆醫(yī)科大學堵年生等在“肉蓯蓉飲片加工技術”(200510006594. 8) 中提出一種肉蓯蓉質(zhì)莖飲片制作工藝，用多種方式抑制植物酶活性保護有效成分苯乙醇苷類成分，提高肉蓯蓉飲片的內(nèi)在質(zhì)量；杏輝天力(杭州)藥業(yè)有限公司雷麗等在“一種提高新鮮中藥肉蓯蓉中苯乙醇苷類成分含量的加工方法”(20081005^82. 7)提出利用蒸汽或微波持續(xù)加熱，以破壞植物體內(nèi)的苷類水解酶方法穩(wěn)定苯乙醇苷。和田帝辰醫(yī)藥生物科技有限公司黃利興等在“應用膜分離技術從肉蓯蓉中生產(chǎn)含有苯乙醇苷的原料及其制備方法”(200710102756.7)中采用選料、提取、微濾、超濾、納濾、干燥等工藝過程，提取的苯乙醇總苷毛蕊花糖苷含量> 40%，使肉蓯蓉活性成分毛蕊花糖苷得到有效富集；另外中山大學劉昕等在“一種利用新鮮肉蓯蓉生產(chǎn)毛蕊花糖苷的方法”(200910041646. 3)中以β-葡萄糖苷酶工業(yè)酶制劑固定化酶作為催化劑，催化水解苯乙醇總苷中松果菊苷使葡萄糖基配體末端斷裂、定向轉(zhuǎn)化為高活性的毛蕊花糖苷單體化合物，獲得毛蕊花糖苷成分含量達 38. 6% 89. 2%粉狀物或干燥物，隨后又提出多項專利“一種提升苯乙醇苷類化合物含量的肉蓯蓉加工方法”(200710032802. 0)、“一種萃取富含松果菊苷及毛蕊花糖苷活性物質(zhì)的方法”(200710032803. 5)、“一種肉蓯蓉提取物的生產(chǎn)方法”(20071003^06.9)，采用細胞破碎、漿液萃取、膜分離或大孔樹脂吸附或?qū)游龇蛛x提純、高溫滅酶、噴霧干燥等工藝的集成技術，實現(xiàn)在30 80分鐘內(nèi)將新鮮肉蓯蓉原料自投料至獲取富含松果菊苷及毛蕊花糖苷等活性物質(zhì)的工藝過程，克服不良處理方法引發(fā)酶解造成苯乙醇苷類化合物等活性成分降解損失，得到的苯乙醇總苷中松果菊苷含量15% -49. 6 %，毛蕊花糖苷含量5% -26. 7%. 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院玄國東等在專利“肉蓯蓉藥材有效成份的提取工藝”(200810025392. 1) 提出了一種肉蓯蓉藥材有效成份的提取工藝，利用提取、濃縮、結(jié)晶、得甘露醇，殘液利用大孔樹脂吸附、洗脫、濃縮、干燥得肉蓯蓉苯乙醇苷類，殘渣繼續(xù)加入蒸餾水加熱提取，經(jīng)醇沉、干燥得肉蓯蓉多糖，完成三種肉蓯蓉功效成分的提取。目前苯乙醇苷類化合物被認為是肉蓯蓉屬最重要的活性成分，然而苯乙醇苷成分化學結(jié)構(gòu)含有咖啡酸與糖形成的咖啡酸酯鍵，該酯鍵穩(wěn)定性差，易發(fā)生酶解和化學水解，以及苯乙醇苷的咖啡?；c苯乙醇基團中含有的鄰二酚基團也易被氧化，在加工和應用時苯乙醇苷損失嚴重，
肉蓯蓉苯乙醇苷成分化學結(jié)構(gòu)含有咖啡酸與糖羥基形成咖啡酸酯鍵，該酯鍵穩(wěn)定性低，在PH大于5的條件下易發(fā)生水解，導致活性成分損失，以及肉蓯蓉苯乙醇苷成分化學結(jié)構(gòu)含有的咖啡?；c苯乙醇基團中含有鄰二酚羥基，在PH大于5的條件下易于發(fā)生氧化， 導致產(chǎn)品色澤加深；采用加熱滅活酶方法只能抑制酶解和褐變，無法解決加工過程中的化學條件變化導致的肉蓯蓉苯乙醇苷分解與氧化，目前公開的技術只進行局部解決，例如對鮮肉蓯蓉只采用加熱滅活酶方法避免了飲片或粗提加工時酶分解苯乙醇苷，而沒有涉及加工過程或制劑應用時因化學環(huán)境變化導致的苯乙醇苷分解的問題，從而引起肉蓯蓉產(chǎn)品功效變化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種肉蓯蓉苯乙醇總苷的制備方法，該方法是由肉蓯蓉粉碎、浸提、吸附樹脂吸附、洗脫、濃縮等步驟完成；在肉蓯蓉苯乙醇苷提取與穩(wěn)定性研究中， 利用肉蓯蓉苯乙醇苷在PH為2-4弱酸性的條件下穩(wěn)定性明顯提高，在該條件下從肉蓯蓉中提取的肉蓯蓉苯乙醇苷組成主要以松果菊苷與毛蕊花糖苷為主，其中在肉蓯蓉苯乙醇總苷中松果菊苷與毛蕊花糖苷含量比例合計大于90%，通過該方法提取的肉蓯蓉苯乙醇總苷的含量要明顯高于其它提取方法，所獲得的肉蓯蓉提取物有效成分含量穩(wěn)定，色澤相對淺，避免了肉蓯蓉苯乙醇苷的分解與氧化，有利于產(chǎn)品的穩(wěn)定。本發(fā)明所述的一種肉蓯蓉苯乙醇總苷穩(wěn)定性的制備方法，按下列步驟進行
a、將肉蓯蓉用微波或水蒸汽或熱水加熱滅活肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入弱酸，再加入濃度為95%乙醇或水，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液pH2-4，其中弱酸的用量為肉蓯蓉的重量比1-10%;
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓濃縮或膜過濾濃縮后得濃縮液，回收乙醇，再將濃縮液用水稀釋，稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用弱酸調(diào)節(jié)pH為3-4的水洗滌，再用弱酸調(diào)節(jié)PH為3-4的20-50%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，烘干、噴霧干燥或冷凍干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑弱酸的肉蓯蓉苯乙醇總苷。步驟a所述的肉蓯蓉品種為鹽生肉蓯蓉或荒漠肉蓯蓉或管花肉蓯蓉。步驟a所述的弱酸為甲酸、乙酸、羥基乙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、富馬酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、肉桂酸、苯甲酸、對羥基苯甲酸、阿魏酸、咖啡酸、沒食子酸或磷酸。
具體實施例方式
實施例1
a、將新鮮鹽生肉蓯蓉2公斤，用微波加熱20分鐘滅活鮮肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比乙酸30克，隨后加入濃度為95%的乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH為3;
b、將步驟a細漿液在溫度80°C下浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓濃縮，回收乙醇，得1公斤濃縮液，濃縮液用水稀釋至2 升，稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上裝有1升HPD300的吸附樹脂柱進行吸附，用檸檬酸調(diào)節(jié)的pH為 3的水2升洗滌，再用檸檬酸調(diào)節(jié)的pH為3的濃度為40%乙醇液洗脫，洗脫液減壓濃縮后， 減壓烘干，即可得到含有穩(wěn)定劑檸檬酸的鹽生肉蓯蓉苯乙醇總苷77. 3克。實施例2
a、將新鮮荒漠肉蓯蓉2公斤，用100°C水加熱15分鐘滅活鮮肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比磷酸40克，再加入6升水，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液pH為 2 ；
b、將步驟a細漿液在溫度80°C下浸提，時間1小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液用截留200-300工業(yè)膜濃縮至2升；
d、將步驟c濃縮液上裝有1升HPD300吸附樹脂柱吸附，用蘋果酸調(diào)節(jié)pH為4的水3 升洗滌，再用蘋果酸調(diào)節(jié)PH為4的濃度為20%乙醇液洗脫，洗脫液減壓濃縮后，噴霧干燥， 即可得到含有穩(wěn)定劑蘋果酸的荒漠肉蓯蓉苯乙醇總苷53. 2克。實施例3
a、將新鮮鹽生肉蓯蓉2公斤，用110°C蒸汽加熱10分鐘滅活鮮肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比甲酸20克，再加入濃度為95%的乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH為2;b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液膜過濾濃縮，回收乙醇，得1公斤濃縮液，再將濃縮液用水稀釋至2 升，稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上裝有1升HPD300吸附樹脂柱吸附，用咖啡酸調(diào)節(jié)的pH為4的水 2升洗滌，再用咖啡酸調(diào)節(jié)的pH為4的濃度為30%乙醇液洗脫，洗脫液減壓濃縮后，冷凍干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑咖啡酸的鹽生肉蓯蓉苯乙醇總苷74. 8克。實施例4
a、將新鮮管花肉蓯蓉2公斤，用110°C蒸汽加熱10分鐘滅活鮮肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比40克乳酸，再加入濃度為95%的乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH為3;
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓，回收乙醇，得1公斤濃縮液，再將濃縮液用水稀釋至2 升，稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上裝有1升HPD300吸附樹脂柱吸附，用阿魏酸調(diào)節(jié)的pH為4的水 2升洗滌，再用阿魏酸調(diào)節(jié)的pH為4的濃度為50%乙醇液洗脫，洗脫液減壓濃縮后，烘干，即可得到含有穩(wěn)定劑阿魏酸的管花肉蓯蓉苯乙醇總苷68. 1克。實施例5
a、將新鮮管花肉蓯蓉2公斤，用110°C蒸汽加熱10分鐘滅活鮮肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比30克酒石酸，再加入濃度為95%的乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH為2 ；
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液膜過濾濃縮，回收乙醇，得1公斤濃縮液，再將濃縮液用水稀釋至2 升，稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上裝有1升HPD300吸附樹脂柱吸附，用沒食子酸調(diào)節(jié)的pH為4的水2升洗滌，再用沒食子酸調(diào)節(jié)的pH為4的濃度為30%乙醇液洗脫，洗脫液減壓濃縮后，冷凍干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑沒食子酸的管花肉蓯蓉苯乙醇總苷63. 7克。實施例6
a、將新鮮鹽生肉蓯蓉2公斤，用微波加熱20分鐘滅活鮮肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比10克羥基乙酸，再加入濃度為95%的乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH為4;
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓濃縮，回收乙醇，得0.6公斤濃縮物，再將濃縮液用水稀釋至2升，稀釋液pH為3;
d、將步驟c稀釋液上HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用葡萄糖醛酸調(diào)節(jié)pH為4的水2 升洗滌，，再用葡萄糖醛酸調(diào)節(jié)PH為4的濃度為20%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，烘干， 即可得到含有穩(wěn)定劑葡萄糖醛酸的鹽生肉蓯蓉苯乙醇總苷78. 4克。實施例7
a、將新鮮管花肉蓯蓉2公斤，用100°C熱水加熱10分鐘滅活鮮管花肉蓯蓉中植物酶，置涼破碎成塊，破碎時加入重量比10克檸檬酸，再加入2升水，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH約為4 ；
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)膜過濾濃縮后得1公斤濃縮液，回收乙醇，再將濃縮液用水稀釋， 稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用抗壞血酸調(diào)節(jié)pH為3的水2升洗滌，再用抗壞血酸調(diào)節(jié)PH為3的濃度為30%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，噴霧干燥， 即可得到含有穩(wěn)定劑抗壞血酸的管花肉蓯蓉苯乙醇總苷66. 2克。實施例8
a、將荒漠肉蓯蓉2公斤用微波加熱20分鐘滅活肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比磷酸40克，再加入濃度為95%乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液pH3 ；
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓濃縮得1公斤濃縮液，回收乙醇，再將濃縮液用水稀釋， 稀釋液PH為4 ；
d、將步驟c稀釋液上HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用對羥基苯甲酸調(diào)節(jié)pH為3的水 2升洗滌，再用對羥基苯甲酸調(diào)節(jié)pH為3的濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，噴霧干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑對羥基苯甲酸的肉蓯蓉苯乙醇總苷58. 8克。實施例9
a、將管花肉蓯蓉用110°C水蒸汽加熱10分鐘滅活肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊， 破碎時加入重量比10克羥基乙酸，再加入6升水，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液pH為2 ；
b、將步驟a細漿液在溫度80°C下浸提，時間1小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液用截留200-300工業(yè)膜濃縮至2升；
d、將步驟c稀釋液上HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用苯甲酸調(diào)節(jié)pH為3的水3升洗滌，再用苯甲酸調(diào)節(jié)PH為3的濃度為40%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，噴霧干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑苯甲酸的肉蓯蓉苯乙醇總苷62. 9克。實施例10
a、將管花肉蓯蓉用100°C熱水加15分鐘熱滅活肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入重量比阿魏酸30克，再加入濃度為95%乙醇8升，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液 PH4 ；
b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；
c、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓濃縮后得1公斤濃縮液，回收乙醇，再將濃縮液用水稀釋，稀釋液PH為3;
d、將步驟c稀釋液上HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用富馬酸調(diào)節(jié)pH為4的水3升洗滌，再用富馬酸調(diào)節(jié)PH為4的濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，噴霧干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑富馬酸的肉蓯蓉苯乙醇總苷65. 4克。
權利要求
1.一種肉蓯蓉苯乙醇總苷的制備方法，其特征在于按下列步驟進行a、將肉蓯蓉用微波或水蒸汽或熱水加熱滅活肉蓯蓉中植物酶，置涼后破碎成塊，破碎時加入弱酸，再加入濃度95%乙醇或水，用磨漿機粉碎成細漿，細漿液PH2-4，其中弱酸的用量為肉蓯蓉的重量比0. 5%-2% ；b、將步驟a細漿液在溫度80°C進行浸提，時間2小時，冷卻，過濾分離出提取液；C、將步驟b提取液經(jīng)薄膜減壓濃縮或膜過濾濃縮后得濃縮液，回收乙醇，再將濃縮液用水稀釋，稀釋液PH為3;d、將步驟c稀釋液上裝HPD300吸附樹脂柱進行吸附，用弱酸調(diào)節(jié)pH為3-4的水洗滌， 再用弱酸調(diào)節(jié)PH為3-4的20-50%的乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后，烘干、噴霧干燥或冷凍干燥，即可得到含有穩(wěn)定劑弱酸的肉蓯蓉苯乙醇總苷。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟a所述的肉蓯蓉品種為鹽生肉蓯蓉或荒漠肉蓯蓉或管花肉蓯蓉。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于步驟a所述的弱酸為甲酸、乙酸、羥基乙酸、 乳酸、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、富馬酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、肉桂酸、苯甲酸、對羥基苯甲酸、阿魏酸、咖啡酸、沒食子酸或磷酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種肉蓯蓉苯乙醇總苷的制備方法，該方法是由肉蓯蓉粉碎、浸提、吸附樹脂吸附、洗脫、濃縮等步驟完成；在肉蓯蓉苯乙醇苷提取與穩(wěn)定性研究中，利用肉蓯蓉苯乙醇苷在pH為2-4弱酸性的條件下穩(wěn)定性明顯提高，在該條件下從肉蓯蓉中提取的肉蓯蓉苯乙醇苷組成主要以松果菊苷與毛蕊花糖苷為主，其中在肉蓯蓉苯乙醇總苷中松果菊苷與毛蕊花糖苷含量比例合計大于90%，通過該方法提取的肉蓯蓉苯乙醇總苷的含量要明顯高于其它提取方法，所獲得的肉蓯蓉提取物有效成分含量穩(wěn)定，色澤相對淺，避免了肉蓯蓉苯乙醇苷的分解與氧化，有利于產(chǎn)品的穩(wěn)定。
文檔編號A61P39/06GK102441040SQ201110402048
公開日2012年5月9日 申請日期2011年12月7日 優(yōu)先權日2011年12月7日
發(fā)明者吳成, 趙麗君, 趙文軍, 阿吉艾克拜爾·艾薩 申請人:中國科學院新疆理化技術研究所