專利名稱：一種治療慢性肝病的中藥有效部位組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，尤其涉及一種治療慢性肝病的中藥有效部位組合物；此外，本發(fā)明還涉及該治療慢性肝病的中藥有效部位組合物的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝硬化是多種慢性肝臟疾病的終末階段，以彌漫性肝纖維化伴異常結(jié)節(jié)形成為其形態(tài)學(xué)特征。肝硬化是常見疾病和主要死亡病因之一。已有明確證據(jù)表明肝纖維化甚至肝硬化是可逆的，阻斷、抑制或逆轉(zhuǎn)肝纖維化是治療慢性肝病的重要目標(biāo)，但目前尚無FDA批準(zhǔn)的抗肝纖維化化學(xué)或生物制劑進(jìn)入臨床應(yīng)用。美國肝纖維化研究權(quán)威Friedman教授曾指出:“肝纖維化機(jī)理的不斷闡明使有效地抗肝纖維化治療成為可能，然而，抗肝纖維化治療仍然是一個富有挑戰(zhàn)的艱巨任務(wù)，迄今為止臨床上尚無有效的抗肝纖維化藥物，其有效作用于肝臟而無明顯毒副作用的治療藥物研制尚需長期努力?！苯嗄陙淼?中醫(yī)藥抗肝纖維化研究，已取得顯著進(jìn)展。自2000年起，已先后有復(fù)方鱉甲軟肝片、扶正化瘀膠囊(片)等抗肝纖維化國家中藥新藥應(yīng)用于臨床，扶正化瘀片已被美國FDA批準(zhǔn)在美國開展抗丙型肝炎肝纖維化II期臨床試驗(yàn)。中藥復(fù)方抗肝纖維化作用是通過多途徑、多層次作用實(shí)現(xiàn)的，呈現(xiàn)出綜合效應(yīng)，與肝纖維化發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜病理機(jī)制相適應(yīng)，這也正是中醫(yī)藥整體觀念的優(yōu)勢所在。近二十多年來，國內(nèi)外也開展了一些抗肝纖維化中藥有效組分或成分的研究，并發(fā)現(xiàn)了一些有抗肝纖維化效應(yīng)的中藥有效組分或成分。然而，無論傳統(tǒng)中藥復(fù)方還是單一的有效成分，皆有其不足之處。傳統(tǒng)中藥復(fù)方由于成分復(fù)雜，質(zhì)量控制困難，穩(wěn)定性較差，這也是中藥走向國際市場的難題之一；而單一組分或成分往往難以取得良好效應(yīng)。因此如何對傳統(tǒng)復(fù)方“去粗取精”而又保持中醫(yī)復(fù)方配伍治療復(fù)雜疾病的優(yōu)勢，是一大難題，也是中醫(yī)藥抗肝纖維化藥物研究的重要發(fā)展方向之一?！耙回灱濉笔乔宕嗅t(yī)學(xué)家魏玉璜所創(chuàng)，首見于《續(xù)名醫(yī)類案.心胃痛門》。清 王孟英將其輯入《柳州醫(yī)話》中。一貫煎由北沙參、麥門冬(又名麥冬)、干生地(又名生地黃)、當(dāng)歸、枸杞子和川楝子等6味中藥組成，原方未著用量用法。目前方劑學(xué)教材中所列一貫煎的組方:北沙參，麥冬，當(dāng)歸(各9g)，生地黃(18-30g)，枸杞子(9-18g)，川楝子(4.5g)，水煎服。均與本發(fā)明的組成與制備方法有所不同。以往的研究工作已經(jīng)證實(shí)，對急、慢性肝損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，一貫煎能有效改善肝功能，減輕肝細(xì)胞壞死，抑制肝臟纖維組織增生。本發(fā)明的前期研究結(jié)果顯示，在CC14誘導(dǎo)大鼠肝纖維化已形成階段給予一貫煎能顯著抑制肝硬化的形成，顯著降低肝組織羥脯氨酸(hydroxyproline, Hyp)含量及肝臟膠原纖維的增生程度
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能提高抗肝纖維化、抗肝損傷作用，治療慢性肝病的中藥復(fù)方的有效提取部位，并提出該復(fù)方的有效提取部位的用途、制備方法。本發(fā)明一方面提供一種治療慢性肝病的中藥有效部位組合物，該組合物包括:毛蕊花糖苷、阿魏酸、皂苷、環(huán)烯醚萜苷、香豆素、木脂素、酚酸以及有機(jī)酸；以組合物的總重量為基礎(chǔ)計，所述毛蕊花糖苷的含量范圍為:0.157% -0.219%，所述阿魏酸的含量范圍為:0.218% -0.306%;該組合物按如下方法制成:取北沙參、麥門冬、干生地、當(dāng)歸、枸杞子和川楝子6味原料藥材加水煎煮制得水煎液，該水煎液經(jīng)大孔吸附樹脂色譜柱，經(jīng)極性溶劑洗脫，經(jīng)低溫濃縮，減壓干燥而制成。所述北沙參、麥門冬、當(dāng)歸、干生地、枸杞子和川楝子的重量比例為1:1:1:(1.8-5): (1-2): (0.45-0.5)。在本發(fā)明的另一方面，還提供上述中藥有效部位組合物的制備方法，該方法包括以下步驟:(I)水煎液的制備:取原料藥材飲片，加水8-10倍量煎煮三次，每次I小時至1.5小時，煎出液經(jīng)適當(dāng)濃縮，過濾得水煎液；(2)有效部位的制備:取上述水煎液上大孔吸附樹脂色譜柱，裝上樣品一段時間后達(dá)吸附平衡，以水洗脫至經(jīng)alfa-萘酚-濃硫酸試劑的顯色反應(yīng)呈陰性；然后以極性溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，減壓干燥而制成。優(yōu)選的，步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂色譜柱中使用的大孔吸附樹脂為苯乙烯型大孔吸附樹脂，選自D-101，HPD-100或DA-201。優(yōu)選的，步驟(2)中，所述極性溶劑為20-40%的乙醇水混合液。優(yōu)選的，步驟(2)中，所述的水煎液加上大孔吸附樹脂色譜柱時的濃度為0.5-1.5克生藥/暈升，上樣量為1.0-3.0克生藥/克干樹脂；吸附時間為1-8小時。此外，本發(fā)明還提供該中藥有效部位組合物在制備治療慢性肝炎藥物中的應(yīng)用，在制備防治肝損傷、肝纖維化藥物中的應(yīng)用，以及在制備防治肝硬化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明對中藥復(fù)方一貫煎治療慢性肝損傷、肝纖維化的有效部位進(jìn)行了篩選研究，明確了一貫煎治療肝損傷、肝纖維化的有效部位，并對有效部位的制備工藝進(jìn)行了研究，確立了有效部位的制備技術(shù)。經(jīng)采用經(jīng)典動物模型試驗(yàn)并驗(yàn)證，本發(fā)明的中藥有效部位組合物具有顯著改善四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的作用，能顯著降低模型大鼠肝組織膠原含量，減輕肝纖維化以及肝損傷程度，有效阻止肝纖維化的發(fā)展，上述作用明顯優(yōu)于一貫煎原復(fù)方(例如水煎劑、水提醇沉、水提+ 二氯甲烷萃取等)的效果，可用于治療和預(yù)防各種慢性肝炎、肝損傷、肝纖維化、肝硬化等慢性肝病病癥。本發(fā)明的中藥有效部位組合物可采用本領(lǐng)域常規(guī)的制劑方法制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸、微丸等口服固體制劑。


圖1是實(shí)施例1的一貫煎及不同提取部位對小鼠急性肝損傷血清ALT活性的影響。圖2是實(shí)施例2的一貫煎及其有效部位(YGJ_D)對CC14肝硬化小鼠肝臟Hyp含量的影響。圖3是實(shí)施例1的小鼠CC14慢性模型中各組小鼠肝組織病理照片(HE染色，X 200)。圖4是實(shí)施例2的小鼠CC14慢性模型中各組小鼠肝組織病理照片(天狼星紅膠原染色，X 100)。圖5是實(shí)施例3中一貫煎有效部位(YGJ_D)的HPLC圖譜，圖中顯示18個共有峰。圖6是實(shí)施例3中一貫煎有效部位(YGJ_D)指紋圖譜共有模式圖。圖7是實(shí)施例3中生地黃和當(dāng)歸中兩個具有主要成分對照品的HPLC圖，SI，S2分別是毛蕊花糖苷和阿魏酸的色譜峰。具體實(shí)施方法下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍。本發(fā)明的藥物組合物的有益效果通過下述實(shí)驗(yàn)證實(shí):實(shí)施例1中藥復(fù)方一貫煎抗肝損傷有效部位的篩選實(shí)驗(yàn)1、一貫煎水煎液不同極性部位的制備1.1 一貫煎水煎液的制備:一貫煎處方為由北沙參，麥冬，當(dāng)歸(各10克)，生地黃(18克)，枸杞子(12克)，川楝子(4.5克)，加水煎三次，加水量分別為10倍、10倍、8倍；煎煮時間為1.5小時，1.5小時和I小時。1.2不同極性部位的分離:取一貫煎水煎液流浸膏，適當(dāng)稀釋，加95 %乙醇至含醇量70 %，醇沉二次，得YGJ_A (70%乙醇二次沉淀部分)取一貫煎水煎液流浸膏，加水適當(dāng)稀釋至澄清溶液，等量二氯甲烷萃取，萃取液回收有機(jī)溶劑，得YGJ_B (CH2Cl2萃取物)取一貫煎水煎液流浸膏，加水適當(dāng)稀釋至澄清溶液，加入預(yù)先處理好的大孔吸附樹脂色譜柱中，經(jīng)100%水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇水混合溶液充分洗脫。100%水洗脫至無甜味或以α -萘酚-濃硫酸試劑檢測至反應(yīng)明顯呈陰性后，再以不同比例乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，至1000毫升流出液經(jīng)蒸餾后基本無殘留物。100%水及不同比例乙醇水混合溶劑洗脫后分別得到下列部分:得水洗脫部分(YGJ_C)，30%乙醇洗脫部分(YGJ_D，即本發(fā)明中藥有效部位組合物)，60%乙醇洗脫部分(YGJ_E)大孔吸附樹脂主要使用非極性大孔吸附樹脂，如D-101，HPD-100，HPD-300，DA-201, X-5或H103，并按說明書處理。2、一貫煎不同極性部位供試液的制備一貫煎處方藥材量按人的臨床劑量換算成小鼠的劑量為9.03g藥材量/kg動物體重。不同極性部分按成人劑量及得率計算小鼠給藥劑量。3、四氯化 碳急性肝損傷模型中一貫煎水煎液不同極性部分的篩選3.1 一貫煎(yiguanjian, YGJ)水煎液不同極性部分提取物對小鼠四氯化碳急性肝損傷模型血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase, ALT)活性的影響。
3.2方法:6-8周齡Bal b/c小鼠，每組10只。實(shí)驗(yàn)開始先灌胃2d，I次/d，對照組灌生理鹽水10ml/kg，給藥組按成人劑量換算成相應(yīng)劑量灌胃給藥。實(shí)驗(yàn)第3天時，實(shí)驗(yàn)對照組分別腹腔注射0.5% CC14-橄欖油10ml/kg—次造模型，灌胃改為2次/d，劑量同上。造模后48h將小鼠全部處死。處死前15h禁食，但不禁水，末次給藥后Ih摘取小鼠眼球，眼眶取血，離心分離血清后，測定ALT活性。結(jié)果以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示。3.3統(tǒng)計學(xué)方法:組間比較采用單因素方差分析。采用SPSS軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。4、結(jié)果:表明YGJ_D組分(即本發(fā)明中藥有效部位組合物)具有顯著改善四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的作用(見表1、圖1和圖3)。表1.一貫煎及不同提取部位對小鼠急性肝損傷血清ALT活性的影響
權(quán)利要求
1.一種治療慢性肝病的中藥有效部位組合物，其特征在于，該組合物包括:毛蕊花糖苷、阿魏酸、皂苷、環(huán)烯醚萜苷、香豆素、木脂素、酚酸以及有機(jī)酸；以組合物的總重量為基礎(chǔ)計，所述毛蕊花糖苷的含量范圍為:0.157% -0.219%，所述阿魏酸的含量范圍為:0.218% -0.306%;該組合物按如下方法制成:取北沙參、麥門冬、干生地、當(dāng)歸、枸杞子和川楝子6味原料藥加水煎煮制得水煎液，該水煎液經(jīng)大孔吸附樹脂色譜柱，經(jīng)極性溶劑洗脫，經(jīng)低溫濃縮，減壓干燥而制成。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥有效部位組合物，其特征在于，所述北沙參、麥門冬、當(dāng)歸、干生地、枸杞子和川楝子的重量比例為1:1:1: (1.8-5): (1-2): (0.45-0.5)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的中藥有效部位組合物的制備方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)水 Η液的制備: 取原料藥，加水8-10倍量煎煮三次，每次I小時至1.5小時，煎出液經(jīng)適當(dāng)濃縮，過濾得水煎液； (2)有效部位的制備: 取上述水煎液上大孔吸附樹脂色 譜柱，裝上樣品一段時間后達(dá)吸附平衡，以水洗脫至經(jīng)alfa-萘酚-濃硫酸試劑的顯色反應(yīng)呈陰性；然后以極性溶劑洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，減壓干燥而制成。
4.如權(quán)利要求3所述的中藥有效部位組合物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂色譜柱中使用的大孔吸附樹脂為苯乙烯型大孔吸附樹脂，選自D-101，HPD-100 或 DA-20I。
5.如權(quán)利要求3所述的中藥有效部位組合物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述極性溶劑為20-40 %的乙醇水混合液。
6.如權(quán)利要求3所述的中藥有效部位組合物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的水煎液加上大孔吸附樹脂色譜柱時的濃度為0.5-1.5克生藥/毫升，上樣量為1.0-3.0克生藥/克干樹脂；吸附時間為1-8小時。
7.如權(quán)利要求1所述的中藥有效部位組合物在制備治療慢性肝炎藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求1所述的中藥有效部位組合物在制備防治肝損傷、肝纖維化藥物中的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求1所述的中藥有效部位組合物在制備防治肝硬化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療慢性肝病的中藥有效部位組合物，該組合物包括毛蕊花糖苷、阿魏酸、皂苷、環(huán)烯醚萜苷、香豆素、木脂素、酚酸以及有機(jī)酸；以組合物的總重量為基礎(chǔ)計，毛蕊花糖苷的含量為0.157％-0.219％，阿魏酸的含量為0.218％-0.306％；該組合物按如下方法制成取北沙參、麥門冬、干生地、當(dāng)歸、枸杞子和川楝子6味原料藥加水煎煮制得水煎液，該水煎液經(jīng)大孔吸附樹脂色譜柱，經(jīng)極性溶劑洗脫，經(jīng)低溫濃縮，減壓干燥而制成。此外，本發(fā)明還公開了該組合物的制備方法和應(yīng)用。經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明中藥有效部位組合物能顯著降低模型大鼠肝組織膠原含量，減輕肝纖維化及肝損傷程度，有效阻止肝纖維化的發(fā)展，可用于防治各種慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化等病癥。
文檔編號A61P1/16GK103156997SQ20111042322
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者劉平, 付文衛(wèi), 孫明瑜, 張文萌, 寧冰冰, 慕永平, 周文君, 陳高峰, 劉佳, 劉成海, 胡義揚(yáng), 徐列明 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院