專利名稱：一種絲素蛋白多孔三維材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多孔材料及其制備方法，特別涉及一種以絲素蛋白為原料，制備具有特定納米結(jié)構(gòu)和二級(jí)結(jié)構(gòu)組成的三維多孔材料的技術(shù)。
背景技術(shù)：
組織工程是在可降解的多孔支架材料上種植人體活細(xì)胞，使之在生長因子的作用下再生活的組織或器官，用于修復(fù)或替代受損傷組織或器官的能。現(xiàn)已開發(fā)應(yīng)用的作為組織工程支架的生物醫(yī)用材料主要有硅橡膠、聚氨酯、聚乳酸(PLA)、聚羥基乙酸(PGA)和膠原蛋白等。理想的細(xì)胞支架材料應(yīng)具有良好的孔隙率、生物相容性和可降解性，還需具備一定的機(jī)械特性。但硅橡膠、聚氨酯等合成材料的生物相容性、理化性能、降解速率的控制及緩釋性等方面尚有許多問題未得到解決，且價(jià)格昂貴。蠶絲中富含的絲素蛋白以其特殊的生物學(xué)特性和良好的人體親和性越來越受到人們的關(guān)注。絲素蛋白具有良好的生物相容性，對機(jī)體無毒性，無致敏和刺激作用，又可部分生物降解，其降解產(chǎn)物本身不僅對組織無毒副作用，還對如皮膚、牙周組織等有營養(yǎng)與修復(fù)的作用。大量研究證明，絲素蛋白基組織工程支架能夠應(yīng)用于骨、皮膚、血管、神經(jīng)、肝、軟骨、韌帶多種組織的再生。同時(shí)，絲素蛋白開始被應(yīng)用于藥物緩釋領(lǐng)域，絲素蛋白薄膜或凝膠作為藥物釋放的載體，表現(xiàn)出良好的控釋效果。絲素蛋白在這些領(lǐng)域表現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。目前，對于絲蛋白多孔材料的制備與應(yīng)用已是近年來材料學(xué)家研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)有技術(shù)中，采用絲素蛋白制備三維多孔支架的方法有鹽析法、氣體發(fā)泡法、冷凍干燥法、靜電紡絲法以及相分離法等。例如(1)公開號(hào)為CN1262579C的中國發(fā)明專利“絲素蛋白海綿狀三維多孔材料制備方法”中，需要采用甲醇或者乙醇作為變性劑，促使絲素II結(jié)構(gòu)形成，提高絲素蛋白在水中穩(wěn)定性，同樣地，因?yàn)榻到饩徛?，不可調(diào)控，而且有機(jī)溶劑的使用可能會(huì)對生物相容性帶來負(fù)面影響。(2)公開號(hào)為CN101502669A的中國發(fā)明專利“絲素蛋白多孔三維支架及其制備方法”中，采用冷凍干燥法制備三維支架，避免了有機(jī)溶劑使用，但其支架孔隙率不高，仍然存在分離片狀結(jié)構(gòu)，且蛋白的納米結(jié)晶結(jié)構(gòu)無法調(diào)控。(3)公開號(hào)為CN1844509A的中國發(fā)明專利“一種絲素蛋白多孔結(jié)構(gòu)材料的制備方法”中，采用靜電紡絲制備多孔支架，但其孔徑較小，同時(shí)也難以獲得復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多孔支架。目前，鹽析法仍然是制備絲蛋白多孔支架的最主要的方法之一，然而，傳統(tǒng)的鹽析法制備的絲蛋白多孔支架存在硬度高，結(jié)晶度高，多孔支架孔壁表面結(jié)構(gòu)無法調(diào)控的問題， 不適用于軟組織的修復(fù)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的是在傳統(tǒng)鹽析的基礎(chǔ)上，通過對絲蛋白結(jié)構(gòu)的調(diào)控，提供一種絲蛋白微納結(jié)構(gòu)可調(diào)，二級(jí)結(jié)構(gòu)可變的絲素蛋白多孔材料的制備方法，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對絲蛋白細(xì)胞相容性、力學(xué)性能和降解性能的改變和調(diào)整，克服現(xiàn)有技術(shù)所得絲素蛋白多孔支架材料存在的硬度高、降解過于緩慢、微納結(jié)構(gòu)不可控的缺陷，所得產(chǎn)品生物降解性好、孔隙率高、結(jié)晶結(jié)構(gòu)可調(diào)、仿生性優(yōu)異，具有更好的促進(jìn)組織修復(fù)，特別是軟組織修復(fù)的性能。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟(1)制備絲素蛋白溶液，該絲素蛋白溶液具有第一濃度；(2)對所述絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮處理，使該絲素蛋白溶液具有第二濃度，所述第二濃度大于第一濃度；(3)調(diào)整濃縮后的絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，使所述絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 4%至 9% ；(4)利用鹽析法，以氯化鈉為成孔劑將上述絲素溶液制成支架并靜置，然后去除所述支架中的氯化鈉得到海綿組織；(5)將所述海綿組織干燥處理后，獲得干態(tài)的絲素蛋白多孔材料。優(yōu)選的，所述步驟(1)中制備絲素蛋白水溶液包括步驟(1. 1)將蠶絲放在碳酸鈉溶液中進(jìn)行脫膠處理并烘干，去除蠶絲外部的絲膠蛋白；(1. 2)以溴化鋰溶液對所述脫膠之后的蠶絲進(jìn)行溶解處理；(1. 3)對所述溶有蠶絲的溴化鋰溶液進(jìn)行透析處理，去除溶液中的溴化鋰以獲得該具有第一濃度的絲素蛋白溶液。優(yōu)選的，所述透析處理包括將所述溶有蠶絲的溴化鋰溶液用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水。 優(yōu)選的，所述第一濃度的值為6 %，所述第二濃度的值為25 %至40 %。。優(yōu)選的，所述濃縮處理包括將絲素蛋白溶液放置于20°C至80°C環(huán)境下進(jìn)行濃縮，濃縮時(shí)間為8小時(shí)至160小時(shí)。優(yōu)選的，在所述步驟( 中，將絲素蛋白溶液濃縮處理后，還包括在0°C -40°C環(huán)境下放置2-21天，以促進(jìn)絲素蛋白組裝成納米線結(jié)構(gòu)。優(yōu)選的，所述步驟⑷中的靜置時(shí)間至少大于12小時(shí)。優(yōu)選的，所述步驟(5)中的干燥處理為冷凍干燥處理，該冷凍干燥包括將海綿組織在_20°C的低溫條件下經(jīng)過12小時(shí)以上冷凍，獲得冷凍體；將冷凍體放入凍干機(jī)干燥72 小時(shí)，獲得干態(tài)的絲素蛋白多孔材料。優(yōu)選的，所述步驟(5)中的干燥處理為緩慢干燥處理，該緩慢干燥包括將海綿組織在室溫下進(jìn)行自然干燥處理，所述干燥的時(shí)間為1小時(shí)-48小時(shí)。優(yōu)選的，所述步驟(5)中的干燥處理為快速干燥處理，該快速干燥包括將海綿組織在50°C -90°C烘箱中快速干燥。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)第一本發(fā)明通過將絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮處理，然后用處理后的絲素蛋白溶液通過鹽析法制成支架。其本質(zhì)是利用絲蛋白的自組裝行為，改變絲素蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)。因此獲得的多孔支架同其它方法相比，不僅具有良好的成孔性，而且孔的內(nèi)壁具有十分明顯的微細(xì)結(jié)構(gòu)。
第二 由于本發(fā)明在制備過程中是用NaCl作為成孔劑，成型后用水將NaCl去除， 不需添加其它化學(xué)試劑，無毒副作用，不會(huì)引起絲素蛋白支架生物相容性降低。第三本發(fā)明可以在制備過程中，通過調(diào)節(jié)濃縮時(shí)間，靜置時(shí)間、絲素溶液濃度等工藝參數(shù)調(diào)控支架材料中絲素I與絲素II及無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)的含量，從而獲得具有不同的降解性能和力學(xué)性能的絲素蛋白支架材料。滿足不同組織修復(fù)的需要。


為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1是本發(fā)明的一種絲素蛋白多孔三維材料制備方法的流程圖；圖2是實(shí)施例一所述的經(jīng)濃縮處理后的絲素溶液經(jīng)鹽析法所得絲蛋白支架真空干燥后的電鏡圖；圖3是實(shí)施例二所述的經(jīng)濃縮處理后的絲素溶液經(jīng)鹽析法所得絲蛋白支架真空干燥后的電鏡圖；圖4是本發(fā)明的蠶絲蛋白支架與未經(jīng)濃縮處理的普通蠶絲蛋白支架的FIlR測試比較圖；圖5是本發(fā)明的蠶絲蛋白支架與未經(jīng)濃縮處理的普通蠶絲蛋白支架的X射線衍射 (XRD)分析比較圖；圖6是本發(fā)明的蠶絲蛋白支架與未經(jīng)濃縮處理的普通蠶絲蛋白支架的酶降解分析比較圖。
具體實(shí)施例方式請參見圖1，圖1是本發(fā)明的一種絲素蛋白多孔三維材料制備方法的流程圖，如圖所示，該制備方法包括步驟Sll 制備絲素蛋白溶液，該絲素蛋白溶液具有第一濃度；S12:對所述絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮處理，使該絲素蛋白溶液具有第二濃度，所述第二濃度大于第一濃度；S13:調(diào)整濃縮后的絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，使所述絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 4%至 9% ；S14 利用鹽析法，以氯化鈉為成孔劑將上述絲素溶液制成支架并靜置，然后去除所述支架中的氯化鈉得到海綿組織；S15 將所述海綿組織干燥處理后，獲得干態(tài)的絲素蛋白多孔材料。步驟Sll通過常規(guī)手段制備絲素蛋白溶液，所獲得的溶液濃度一般在6%左右。步驟S12將上述絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮，該濃縮過程實(shí)質(zhì)是讓溶液中的絲素蛋白進(jìn)行自組裝行為，目的是為了改變絲素蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而獲得的多孔支架同其它方法相比，不僅具有良好的成孔性，而且孔的內(nèi)壁具有十分明顯的微細(xì)結(jié)構(gòu)。步驟S14中采用氯化鈉(NaCl)作為成孔劑對絲素蛋白溶液進(jìn)行鹽析處理，由于NaCl具有方便去除，無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)，所以不會(huì)引起絲素蛋白支架生物相容性降低等問題。步驟S15中的干燥處理可包括冷凍干燥處理、緩慢干燥處理和快速干燥處理等幾種處理方式。在整個(gè)制備過程中，可以通過控制濃縮時(shí)間、靜置時(shí)間、絲素溶液濃度等工藝參數(shù)調(diào)控支架材料中絲素I與絲素II及無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)的含量，從而獲得具有不同的降解性能和力學(xué)性能的絲素蛋白支架材料。下面將以幾個(gè)具體實(shí)施方式
詳細(xì)說明本發(fā)明的絲素蛋白多孔三維材料制備方法。實(shí)施例一制備絲素蛋白溶液。具體為將50g蠶絲放入0.5%的Na2CO3溶液中進(jìn)行脫膠處理并烘干，脫膠時(shí)以100°c煮沸1小時(shí)，以去除蠶絲外部的絲膠蛋白，使用去離子水沖洗，重復(fù)以上操作3次后將蠶絲60°C下烘干。稱取上述處理后的脫膠蠶絲15g放入于IOOmL濃度為9. 3mol/L的溴化鋰(LiBr)溶液中進(jìn)行溶解處理，溶解處理時(shí)在60°C下溶解4小時(shí)。然后對上述溶解有蠶絲的LiBr溶液進(jìn)行透析處理，透析時(shí)用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，以去除溶液中的LiBr，從而得到純凈的絲素蛋白溶液，其濃度為6%。將上述絲素蛋白溶液在60°C的環(huán)境下進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為120小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為25%。然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為8% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法(NaCl粒徑為350 450微米)制成支架，靜置48小時(shí)后， 在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。再放入-20°C下冷凍M小時(shí)得到冷凍體。放入凍干機(jī)干燥72小時(shí)后得到納米絲蛋白多孔材料。請參見圖2，圖2是實(shí)施例一所述的經(jīng)濃縮處理后的絲素溶液經(jīng)鹽析法所得絲蛋白支架真空干燥后的電鏡圖。從圖2可見，上述支架的孔直徑約為389士 15 μ m,孔壁上含有大量微球。實(shí)施例二 采用與實(shí)施例一相同的方法制備濃度為6%的純凈絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液在80°C的環(huán)境下進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為8小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為20%。然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為4% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法制成支架，靜置48小時(shí)后，在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。采用緩慢干燥處理方式，在室溫下自然干燥后得到納米絲蛋白多孔材料。請參見圖3，圖3是實(shí)施例二的對上述絲素蛋白支架進(jìn)行掃描電鏡測試。發(fā)現(xiàn)支架孔徑約為319 士 15 μ m，硬度比前處理相同的真空干燥支架增加。實(shí)施例三采用與實(shí)施例一相同的方法制備濃度為6%的純凈絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液在20°C的環(huán)境下進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為160小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為觀％。然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為9% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法制成支架，靜置48小時(shí)后，在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。再放入-20°C下冷凍M小時(shí)得到冷凍體。放入凍干機(jī)干燥72小時(shí)后得到納米絲蛋白多孔材料。實(shí)施例四采用與實(shí)施例一相同的方法制備濃度為6%的純凈絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液在60°C的環(huán)境下進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為100小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為35%。然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為8% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法制成支架，放置48小時(shí)后，在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。再放入-20°C下冷凍M小時(shí)得到冷凍體。放入凍干機(jī)干燥72小時(shí)后得到納米絲蛋白多孔材料。實(shí)施例五采用與實(shí)施例一相同的方法制備濃度為6%的純凈絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液在60°C進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為150小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為40%。然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為6% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法制成支架，靜置48小時(shí)后，在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。再放入-20°C下冷凍M小時(shí)得到冷凍體。放入凍干機(jī)干燥72小時(shí)后得到納米絲蛋白多孔材料。實(shí)施例六采用與實(shí)施例一相同的方法制備濃度為6%的純凈絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液在60°C進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為48小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為30%。將濃縮液在4°C放置20天，然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為6% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法制成支架，放置48小時(shí)后，在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。將海綿狀多孔支架在60°C下快速干燥，獲得干態(tài)的絲蛋白多孔支架。實(shí)施例七采用與實(shí)施例一相同的方法制備濃度為6%的純凈絲素蛋白溶液。將絲素蛋白溶液在60°C進(jìn)行濃縮處理，濃縮時(shí)間為48小時(shí)，絲素蛋白濃縮后溶液濃度為30%。將濃縮液在37°C放置3天，然后將絲素蛋白水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)整為6% ；將絲素溶液經(jīng)鹽析法制成支架，放置48小時(shí)后，在水中浸泡72小時(shí)，去除NaCl，得到海綿組織。將海綿狀多孔支架在室溫下自然干燥，獲得干態(tài)的絲蛋白多孔支架。請參見圖4，圖4是本發(fā)明的蠶絲蛋白支架與未經(jīng)濃縮處理的普通蠶絲蛋白支架的FIlR測試比較圖。其中曲線a、b為所述經(jīng)濃縮處理后的絲素溶液經(jīng)鹽析法所得絲蛋白支架的FIlR測試圖，曲線c、d為未經(jīng)濃縮處理絲素溶液經(jīng)鹽析法所得支架的對照圖。通過對比表明經(jīng)過濃縮處理后的絲蛋白溶液進(jìn)行鹽析法制備多孔支架，所獲得支架具有更多的無規(guī)結(jié)構(gòu)存在，有利于提高材料的韌性和親水性?？赡茉蚴墙z素蛋白濃縮有利于形成更強(qiáng)的分子內(nèi)親水作用，使晶體轉(zhuǎn)化實(shí)現(xiàn)困難。請參見圖5，圖5是本發(fā)明的蠶絲蛋白支架與未經(jīng)濃縮處理的普通蠶絲蛋白支架的X射線衍射(XRD)分析比較圖。其中曲線a、b為未處理絲素溶液經(jīng)鹽析法所得支架的 XRD曲線，曲線c、d為所述經(jīng)濃縮處理后的絲素溶液經(jīng)鹽析法所得絲蛋白支架的XRD曲線。 對本發(fā)明的絲素蛋白支架進(jìn)行X-射線衍射分析，經(jīng)過濃縮處理后的溶液制備支架XRD中的結(jié)晶峰強(qiáng)度減弱，峰寬增加，表明經(jīng)濃縮處理后所制備多孔支架含有更多的非晶結(jié)構(gòu)。將本發(fā)明的支架材料切塊，浴比1 100做酶降解處理，如圖6所示，其中曲線a 為未經(jīng)濃縮處理絲素溶液經(jīng)鹽析法所得支架的降解曲線，曲線b為所述經(jīng)濃縮處理后的絲素溶液經(jīng)鹽析法所得絲蛋白支架的降解曲線。同直接使用未處理的絲蛋白作為原料所制備支架相比，經(jīng)過濃縮處理后的溶液制備的多孔支架降解較快。綜上所述，本發(fā)明通過將絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮處理，然后用處理后的絲素蛋白溶液通過鹽析法制成支架。利用絲蛋白的自組裝行為，改變絲素蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)。因此獲得的多孔支架同其它方法相比，不僅具有良好的成孔性，而且孔的內(nèi)壁具有十分明顯的微細(xì)結(jié)構(gòu)。另外，由于本發(fā)明在制備過程中是用NaCl作為成孔劑，成型后用水將NaCl去除，不需添加其它化學(xué)試劑，無毒副作用，不會(huì)引起絲素蛋白支架生物相容性降低。并且本發(fā)明可以在制備過程中，通過調(diào)節(jié)濃縮時(shí)間，靜置時(shí)間、絲素溶液濃度等工藝參數(shù)調(diào)控支架材料中絲素I與絲素II及無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)的含量，從而獲得具有不同的降解性能和力學(xué)性能的絲素蛋白支架材料。滿足不同組織修復(fù)的需要。上述實(shí)施例所得絲素蛋白三維支架材料可應(yīng)用于軟骨、韌帶、神經(jīng)、皮膚等組織修復(fù)以及藥物緩釋的載體等。對所公開的實(shí)施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。 對這些實(shí)施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實(shí)施例中實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會(huì)被限制于本文所示的這些實(shí)施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點(diǎn)相一致的最寬的范圍。
權(quán)利要求
1.一種絲素蛋白多孔三維材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)制備絲素蛋白溶液，該絲素蛋白溶液具有第一濃度；(2)對所述絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮處理，使該絲素蛋白溶液具有第二濃度，所述第二濃度大于第一濃度；(3)調(diào)整濃縮后的絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，使所述絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4% 至9% ；(4)利用鹽析法，以氯化鈉為成孔劑將上述絲素溶液制成支架并靜置，然后去除所述支架中的氯化鈉得到海綿組織；(5)將所述海綿組織干燥處理后，獲得干態(tài)的絲素蛋白多孔材料。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中制備絲素蛋白水溶液包括步驟(1. 1)將蠶絲放在碳酸鈉溶液中進(jìn)行脫膠處理并烘干，去除蠶絲外部的絲膠蛋白；(1. 2)以溴化鋰溶液對所述脫膠之后的蠶絲進(jìn)行溶解處理；(1. 3)對所述溶有蠶絲的溴化鋰溶液進(jìn)行透析處理，去除溶液中的溴化鋰以獲得該具有第一濃度的絲素蛋白溶液。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述透析處理包括將所述溶有蠶絲的溴化鋰溶液用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述第一濃度的值為6%，所述第二濃度的值為25%至40%。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述濃縮處理包括將絲素蛋白溶液放置于20°C至80°C環(huán)境下進(jìn)行濃縮，濃縮時(shí)間為8小時(shí)至160小時(shí)。
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于在所述步驟(2)中，將絲素蛋白溶液濃縮處理后，還包括在0°C-4(TC環(huán)境下放置2天-21天，以促進(jìn)絲素蛋白組裝成納米線結(jié)構(gòu)。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟中的靜置時(shí)間至少12小時(shí)。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(5)中的干燥處理為冷凍干燥，該冷凍干燥包括將海綿組織在-20°C的低溫條件下經(jīng)過至少12小時(shí)冷凍，獲得冷凍體；將冷凍體放入凍干機(jī)干燥72小時(shí)，獲得干態(tài)的絲素蛋白多孔材料。
9.如權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于所述步驟(5)中的干燥處理為緩慢干燥處理，該緩慢干燥處理包括將海綿組織在室溫下進(jìn)行自然干燥處理，所述干燥的時(shí)間為1 小時(shí)-48小時(shí)。
10.如權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于所述步驟( 中的干燥處理為快速干燥處理，該快速干燥處理包括將海綿組織在50°C -90°C烘箱中快速干燥。
全文摘要
一種絲素蛋白多孔三維材料的制備方法，通過將絲素蛋白溶液進(jìn)行濃縮處理，然后用處理后的絲素蛋白溶液通過鹽析法制成支架。利用絲蛋白的自組裝行為，改變絲素蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)。因此獲得的多孔支架同其它方法相比，不僅具有良好的成孔性，而且孔的內(nèi)壁具有十分明顯的微細(xì)結(jié)構(gòu)。
文檔編號(hào)A61L27/22GK102512710SQ20111044796
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月28日
發(fā)明者劉珊珊, 呂強(qiáng), 姚丹語, 趙薈菁 申請人:蘇州大學(xué)