專利名稱：免疫球蛋白制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脯氨酸(并且特別是L-脯氨酸)用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度的用途，優(yōu)選是免疫球蛋白(Ig)制劑，更優(yōu)選包含至少18%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包含至少18%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑的制備方法,涉及通過所述方法可獲得的Ig制劑和所述Ig制劑用于制備皮下給藥于人的藥物的用途。
背景技術(shù)：
原發(fā)性免疫缺陷(PID)病，如普通易變型免疫缺陷(CVID)和X-連鎖丙種球 蛋白缺乏癥，使病人易于復(fù)發(fā)感染。這些病人需要免疫球蛋白(Ig)替代治療，這可以通過靜脈內(nèi)(IVIg)或皮下(SCIg)來給藥。使用IVIg或SCIg的免疫球蛋白治療在其他病癥的治療中顯示出也是有用的，例如，在炎癥和自體免疫病癥以及特定的神經(jīng)失調(diào)的治療中。如果通過更常見的靜脈內(nèi)途徑給藥，產(chǎn)生了血清免疫球蛋白水平的急劇升高，在接下來的48小時(shí)內(nèi)，這隨著Ig重新分配至血管外空間內(nèi)而降低，并且隨后在重復(fù)靜脈內(nèi)給藥之前的大約三周內(nèi)，以一級(jí)動(dòng)力學(xué)下降。許多病人報(bào)告了感覺在給藥間隔最后一周的過程中“逐漸減弱”，特別是不舒服、疲勞、關(guān)節(jié)痛、肌痛或?qū)Ω腥咎岣叩拿舾行浴ｈb于靜脈內(nèi)Ig給藥的缺陷，通過皮下途徑的Ig給藥在近年來變得日益普遍起來。該方法不需要靜脈入口，僅與很少的全身性副作用相關(guān)，并且已經(jīng)報(bào)道了能提高病人的生活質(zhì)量。Ig制劑(并且特別是用于皮下給藥的Ig制劑)配制中的主要挑戰(zhàn)之一在于如果沒有使用合適的添加劑充分穩(wěn)定，溶解于水溶液中的Ig易于聚集并且形成沉淀的事實(shí)。有時(shí)將碳水化合物用作穩(wěn)定劑；然而，提高碳水化合物的濃度與差的耐受性相關(guān)，特別是在腎功能受損病人(例如，糖尿病病人)的治療中。關(guān)于單體Ig的穩(wěn)定，通過使用堿性或非極性氨基酸作為穩(wěn)定劑已經(jīng)獲得了特別良好的結(jié)果。例如，如W02005/049078中所公開的，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)堿性或非極性氨基酸的添加和最終制劑的PH的調(diào)節(jié)顯著降低了聚集物的形成，并且因此提高了那些制劑的穩(wěn)定性，特別是在室溫下。對(duì)于特定適應(yīng)癥的Ig-治療，使用皮下途徑時(shí)，需要給藥相對(duì)大體積的Ig制劑。使用目前可用的高達(dá)16% (160g/l)的Ig制劑，組織對(duì)于接受大體積灌輸?shù)腎g制劑的無能快速呈現(xiàn)出對(duì)于皮下給藥的限制。因此，通過皮下途徑接受Ig的病人需要在多個(gè)部位相對(duì)頻繁的相對(duì)小體積的給藥。一些病人和醫(yī)師認(rèn)為多個(gè)部位和頻繁的皮下灌輸因?yàn)樘敝?，因此拒絕或不推薦SCIg治療。鑒于此，具有較高Ig濃度的Ig制劑因此是理想的。然而，Ig濃度的提高伴隨著粘度的非線性提高，這快速呈現(xiàn)出對(duì)于使用常規(guī)方法的皮下給藥的限制。特別地，高粘度Ig制劑產(chǎn)生高背壓并且因此損害灌輸泵的正確灌輸。特別地，可以預(yù)期與較低濃度制劑相比給藥持續(xù)時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。這因此可能導(dǎo)致皮下途徑接受性的降低。還是關(guān)于制造方法，高粘度Ig制劑的操作相對(duì)麻煩。

發(fā)明內(nèi)容
因此本發(fā)明的目的是提供一種用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度，特別是降低Ig制劑的粘度，并且更特別是降低具有高Ig濃度的Ig制劑的粘度的簡(jiǎn)單方法。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供高度濃縮的Ig制劑，其適用于皮下給藥并且通過至少維持目前可用的Ig制劑的功效而允許以快速且簡(jiǎn)單的方式進(jìn)行較小劑量的給藥。根據(jù)獨(dú)立權(quán)利要求的主題解決了該問題。從屬權(quán)利要求中限定了優(yōu)選實(shí)施方案。根據(jù)第一個(gè)方面，本發(fā)明因此涉及脯氨酸用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度，優(yōu)選Ig制劑的用途。
本發(fā)明內(nèi)容中所用的術(shù)語(yǔ)“粘度”意思是動(dòng)態(tài)粘度。動(dòng)態(tài)粘度的SI物理單位是毫帕斯卡秒(mPa · S)。例如，根據(jù) -Iilppler，根據(jù)歐洲藥典版本6. O的2. 2. 49和DIN53015的要求，可以通過落球粘度計(jì)(“Kugelfallviskosimeter”)來測(cè)定粘度。由此，測(cè)定球或球體在限定尺寸并具有限定斜率的管子或毛細(xì)管中的滾動(dòng)時(shí)間。基于滾動(dòng)時(shí)間，可以確定管子或毛細(xì)管中的液體的粘度。本申請(qǐng)文中給出的值已經(jīng)使用AMV200型微粘度計(jì)(Anton Paar GmbH,Graz，奧地利)通過以上原則進(jìn)行了測(cè)定。測(cè)量在20. (TC +/-0. 1°C的溫度下進(jìn)行。本發(fā)明的發(fā)明人令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了通過添加脯氨酸，并且特別是L-脯氨酸，可以獲得相對(duì)低粘度的Ig制劑，即使Ig濃度高。對(duì)于其他蛋白質(zhì)制劑，可以獲得相同效果，例如，用于白蛋白制劑。已經(jīng)報(bào)道了脯氨酸對(duì)蛋白質(zhì)制劑具有穩(wěn)定作用，然而，迄今為止沒有考慮過其降低蛋白質(zhì)制劑，并且特別是Ig制劑粘度的作用。因此，脯氨酸的存在具有雙重有益作用，一方面，穩(wěn)定Ig，并且因此使得可以獲得在相對(duì)長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)具有非常高穩(wěn)定性的制劑，而另一方面，提供低粘度，因此使得可以以快速且簡(jiǎn)單的方式來給藥制劑。如所述的，降低粘度的作用對(duì)于具有高Ig濃度的Ig制劑，尤其是具有至少15%質(zhì)量-體積百分比的Ig制劑特別相關(guān)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及的Ig制劑中所含的Ig基本上由IgG組成。在本發(fā)明的其他優(yōu)選實(shí)施方案中，Ig制劑中所含的Ig基本上由IgA或基本上由IgM組成。在本發(fā)明的意思中，15%的質(zhì)量-體積百分比意思是150g/升。根據(jù)第二個(gè)方面，本發(fā)明還涉及用于制備含有至少18%質(zhì)量-體積百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑的方法，其中所述方法包括加入脯氨酸來降低制劑粘度的步驟。因此，可以以非常簡(jiǎn)單且直接的方法來獲得具有高Ig濃度并且同時(shí)具有相對(duì)低粘度的Ig制劑。根據(jù)本發(fā)明方法的特別優(yōu)選的實(shí)施方案，將制劑濃縮至至少18%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白之前，以低于15%，優(yōu)選低于14%，更優(yōu)選低于13%，并且最最優(yōu)選低于12%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白加入脯氨酸。與Ig制劑配制的常規(guī)方法相反，在最終濃縮步驟之前加入穩(wěn)定劑(在這種情況下，為脯氨酸)。因此，濃縮產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)較少地接受應(yīng)激條件(例如，剪切力)，而如果在濃縮步驟后加入穩(wěn)定劑，則會(huì)出現(xiàn)這種情況。因此根據(jù)該實(shí)施方案的方法可以非常溫和地處理產(chǎn)品。如上所示，本發(fā)明方法中所用的脯氨酸優(yōu)選是L-脯氨酸。根據(jù)本發(fā)明方法進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案，添加的脯氨酸的含量使得免疫求蛋白質(zhì)制劑中的脯氨酸濃度范圍為約10至約1000mmol/l,更優(yōu)選約100至約500mmol/l,并且最優(yōu)選約 250mmol/l。根據(jù)該方法特別優(yōu)選的實(shí)施方案，制備了包含18 %至低于20%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，由此以使得粘度低于13mPa · s,優(yōu)選低于IlmPa · s,更優(yōu)選低于IOmPa · s,并且最優(yōu)選低于9mPa · s的含量加入脯氨酸。根據(jù)可替換的特別優(yōu)選的實(shí)施方案，制備了包含至少20%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中以使得粘度低于19mPa · s,優(yōu)選低于17mPa · s,更優(yōu)選低于15mPa · s,并且最優(yōu)選低于13mPa · s的含量加入脯氨酸。從本發(fā)明的教導(dǎo)中已經(jīng)得知，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易認(rèn)識(shí)到怎樣選擇代表性的脯氨酸含量，以獲得目標(biāo)粘度。根據(jù)第三個(gè)方面，本發(fā)明涉及通過以上方法可獲得的Ig制劑。特別地，本發(fā)明因此涉及包含18%至20%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于13mPa · s的脯氨酸，優(yōu)選低于IlmPa · S，更優(yōu)選低于IOmPa · s,并且最優(yōu)選低于9mPa · S。更特別地,本發(fā)明涉及包含18%至19%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制齊LI，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于12mPa · s，優(yōu)選低于IlmPa · s的脯氨酸，并且涉及包含超過19%至低于20%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于15mPa · s,優(yōu)選低于13mPa · s的脯氨酸?；蛘?，本發(fā)明還涉及包含至少20%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于19mPa · s,優(yōu)選低于17mPa · s,更優(yōu)選低于15mPa · s,并且最優(yōu)選低于13mPa · s的脯氨酸。更特別地，本發(fā)明涉及包含超過20%并且至多22%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于19mPa · s，優(yōu)選低于17mPa · s，更優(yōu)選低于14mPa · s,并且最優(yōu)選低于12mPa · s的脯氨酸,并且涉及包含超過22%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于27mPa · s，優(yōu)選低于20mPa · s的脯氨酸。除了以上限定的Ig制劑，根據(jù)本發(fā)明通過使用脯氨酸可以獲得以下Ig制劑包含超過16%并且至多17%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于8mPa · s,優(yōu)選低于7mPa · s,更優(yōu)選低于6mPa · s的脯氨酸,和包含超過17%并且低于18%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑，其中所述制劑包含其含量使得粘度低于IOmPa · s,優(yōu)選低于9mPa · s,更優(yōu)選低于8mPa · s的脯氨酸。對(duì)于以上所述的目的，特別優(yōu)選高度濃縮的Ig制劑，特別是包含約20%質(zhì)量-體積百分比Ig的Ig制劑。這樣高度濃縮的Ig制劑優(yōu)選用于皮下給藥于病人，非限制性實(shí)例為用于PID或CVID的治療。優(yōu)選，如上所述，本發(fā)明的Ig制劑中所含的Ig基本上由IgG組成，但并不限于此。在本發(fā)明制劑的其他優(yōu)選實(shí)施方案中，Ig基本上由IgA或基本上由IgM組成。
已知Ig的高濃度，因此與常規(guī)可獲得的具有較低Ig濃度的制劑相比，本發(fā)明使得可以將較小體積的制劑給藥于病人，同時(shí)保持功效。盡管相對(duì)高的Ig濃度，但由于低粘度，本發(fā)明可以以快速且簡(jiǎn)單的方式來給藥制齊U。特別地，目前用于較低濃度的常規(guī)Ig制劑的常規(guī)方法可以用于皮下給藥。由于其低粘度，因此，例如，本發(fā)明的Ig制劑可以通過從注射器直接手動(dòng)推注來給藥。使用簡(jiǎn)單裝置(如常規(guī)注射器)的可能性提高了皮下給藥的接受性，并且最終降低了治療方案的成本。除了非常低的粘度以外，存儲(chǔ)在室溫下時(shí)，本發(fā)明的Ig制劑具有非常高的至少24個(gè)月的存儲(chǔ)穩(wěn)定性。與必須冷藏保存的其他制劑相比，這種室溫穩(wěn)定性給患有例如PID或 CVID的病人提供了提高的給藥適應(yīng)性和方便性。如上所示，脯氨酸優(yōu)選是L-脯氨酸。L-脯氨酸通常存在于人體中，并且具有非常有利的毒性特征。在重復(fù)劑量的毒性研究、再現(xiàn)毒性研究、誘變研究和安全性藥理研究中研究了 L-脯氨酸的安全性，并且注意到?jīng)]有副作用。如上所示，Ig制劑優(yōu)選包含濃度范圍為約10至約lOOOmmol，優(yōu)選約10至約500mmol/l,更優(yōu)選約100至約500mmol/l,并且最優(yōu)選約250mmol/l的脯氨酸,并且特別是L-脯氨酸。以該濃度范圍使用的L-脯氨酸在制劑給藥后快速清除，沒有任何蓄積。因?yàn)橥ㄟ^脯氨酸，并且特別是L-脯氨酸的存在，獲得了充分的穩(wěn)定，因此可以避免作為穩(wěn)定劑的碳水化合物的加入。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，因此制劑基本上不含碳水化合物，這對(duì)耐受性具有有益作用。根據(jù)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案，Ig制劑具有4. 2至5. 4，優(yōu)選4. 6至5. 0，最優(yōu)選約4. 8的pH，這進(jìn)一步有助于制劑的高穩(wěn)定性。如以上已經(jīng)描述的，本發(fā)明的一個(gè)方面是單試劑用于降低免疫球蛋白制劑的粘度并且提高穩(wěn)定性的用途，其中單試劑是脯氨酸，優(yōu)選L-脯氨酸。優(yōu)選，添加的脯氨酸量使得免疫球蛋白制劑中的脯氨酸濃度范圍為10至lOOOmmol/Ι，更優(yōu)選10至500mmol/l，再更優(yōu)選 100 至 500mmol/l,最優(yōu)選約 250mmol/l。優(yōu)選，免疫球蛋白制劑包含至少18%，更優(yōu)選至少19%，最優(yōu)選至少20%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白。優(yōu)選，免疫球蛋白制劑的免疫球蛋白基本上是純的IgG?；蛘撸庖咔虻鞍字苿┑拿庖咔虻鞍谆旧鲜羌兊腎gA或基本上是純的IgM。如以上所給出的，如果將Ig制劑用于皮下給藥于人，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)特別明顯。因此，本發(fā)明還涉及Ig制劑用于制備皮下給藥于人的藥物的用途。例如，如S. Misbah等，Clinical and Experimental Immunology, 158 (增補(bǔ) I) ;ρρ· 51-59 所報(bào)道的，制劑的皮下給藥存在許多優(yōu)于靜脈內(nèi)給藥的優(yōu)點(diǎn)。特別地，不需要靜脈入口，并且減少了對(duì)皮質(zhì)類固醇和抗-組胺的術(shù)前用藥的需求。此外，使用皮下途徑時(shí)，使用每月一次的IVIg灌輸通常能看到的顯著峰得到抑制，并且獲得持續(xù)升高的Ig水平，導(dǎo)致全身性的副作用降低。由于本發(fā)明的Ig制劑的低粘度，可以以非?？焖偾液?jiǎn)單的方式來進(jìn)行給藥，特別是如上所述的通過從注射器的直接手動(dòng)推注。因此，本發(fā)明使得許多病人可以在家中自己給藥Ig制劑，最終導(dǎo)致更好的方便性，更好的生活質(zhì)量和更少的工作缺席。特別地，本發(fā)明使得制劑可以通過上述S. Misbah等綜述文章中的較低濃度Ig制劑(包含16%質(zhì)量-體積百分比Ig的Vivaglobin )內(nèi)容中所述的“快速推注(rapidpush)”技術(shù)來給藥。根據(jù)所述技術(shù)，使用注射器和23-25規(guī)格的蝶形針，在皮膚下推注SCIg，使用盡可能快的病人舒服的速度(通常I至2cc/min)。因此，通過所述技術(shù)的給藥通常只需要5至20分鐘。以下給出了本發(fā)明IgG制劑制備方法的特定的、非限制性實(shí)例。
具體實(shí)施方案實(shí)施例制備IgG制劑的方法I.血漿集合從獲自大量(>1000)捐獻(xiàn)者的集合的人血漿分離IgG。從該懸浮液開始，進(jìn)行了以下步驟a)使用乙醇沉淀人血漿，以獲得沉淀物和上清液；b)將重懸浮的依據(jù)a)獲得的沉淀物接受辛酸分級(jí)，接著過濾和滲濾；c)將依據(jù)b)獲得的濾液在約4的pH下孵育，接著過濾；d)將依據(jù)c)獲得的濾液接受陰離子交換色譜，以獲得包含Ig的洗脫液，所述Ig包含純度超過96%的IgG ;e)將依據(jù)d)獲得的洗脫液接受納米過濾，以獲得基本上不含病毒的濾液；f )將依據(jù)e)獲得的濾液接受滲濾和超濾，以獲得具有約12%質(zhì)量-體積百分比IgG的濾液；g)將脯氨酸，并且特別是L-脯氨酸，加入依據(jù)f )獲得的濾液中；h)將包含脯氨酸的濾液濃縮，以獲得具有約20%質(zhì)量-體積濃度IgG的IgG制劑；和i)將聚山梨酸酯80加入IgG制劑中。表I中給出了最終制劑中的組分及其代表性含量。還給出了選定的物理化學(xué)參數(shù)的值以及最終Ig制劑的純度。表I :
組合物
組分目標(biāo)值
蛋白質(zhì)200g,_l
L-脯氨酸*250 mmciI/L (28.8 g/L)
聚山梨酸酯8(Γ微量
鈉_<10 mmoi/L_、物理化學(xué)特性_
參數(shù)_爾標(biāo)值_
權(quán)利要求
1.脯氨酸用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，用于降低免疫球蛋白制劑的粘度。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中免疫球蛋白制劑包含至少18%，更優(yōu)選至少19%，最優(yōu)選至少20%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)的用途，其中脯氨酸是L-脯氨酸。
5.一種用于制備包含至少18%質(zhì)量-體積百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑的方法，其中所述方法包括加入脯氨酸來降低制劑粘度的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中在將免疫球蛋白制劑濃縮至至少18%質(zhì)量體積百分比的免疫球蛋白之前，以低于15%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白加入脯氨酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，其中脯氨酸是L-脯氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求5至7任一項(xiàng)的方法，其中免疫球蛋白制劑的免疫球蛋白基本上由IgG組成。
9.根據(jù)權(quán)利要求5至8任一項(xiàng)的方法，其中脯氨酸的加入量使得免疫球蛋白制劑中的脯氨酸濃度范圍為10至1000mmol/l,優(yōu)選10至500mmol/l,更優(yōu)選100至500mmol/l,并且最優(yōu)選約250mmol/l。
10.根據(jù)權(quán)利要求5至9任一項(xiàng)的方法,用于制備包含18%至低于20%質(zhì)量-體積百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑，其中脯氨酸的加入量使得粘度低于13mPa s，優(yōu)選低于IlmPa s,更優(yōu)選低于IOmPa s,并且最優(yōu)選低于9mPa S。
11.根據(jù)權(quán)利要求5至9任一項(xiàng)的方法,用于制備包含至少20%質(zhì)量-體積百分比免疫球蛋白的免疫球蛋白制劑，其中脯氨酸的加入量使得粘度低于19mPa* s，優(yōu)選低于17mPa s,更優(yōu)選低于15mPa s,并且最優(yōu)選低于13mPa S。
12.通過權(quán)利要求5至11任一項(xiàng)的方法可獲得的免疫球蛋白制劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的免疫球蛋白制劑，其包含18%至低于20%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白，其中所述制劑包含的脯氨酸含量使得粘度低于13mPa s,優(yōu)選低于IlmPa s,更優(yōu)選低于IOmPa s,并且最優(yōu)選低于9mPa S。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的免疫球蛋白制劑，其包含至少20%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白，其中所述制劑包含的脯氨酸含量使得粘度低于19mPa s,優(yōu)選低于17mPa s,更優(yōu)選低于15mPa s,并且最優(yōu)選低于13mPa S。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的免疫球蛋白制劑，其包含約20%質(zhì)量-體積百分比的免疫球蛋白。
16.根據(jù)權(quán)利要求12至15任一項(xiàng)的免疫球蛋白制劑，其中該制劑具有4.2至5. 4，優(yōu)選4. 6至5. 0,并且最優(yōu)選約4. 8的pH。
17.根據(jù)權(quán)利要求12至16任一項(xiàng)的免疫球蛋白制劑，其中該制劑基本上不含碳水化合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求12至17任一項(xiàng)的免疫球蛋白制劑，用于皮下給藥于人。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的免疫球蛋白制劑，用于通過從注射器直接手動(dòng)推注來皮下給藥。
20.單試劑用于降低免疫球蛋白制劑的粘度和提高穩(wěn)定性的用途，其中單試劑是脯氨酸，優(yōu)選L-脯氨酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及脯氨酸用于降低蛋白質(zhì)制劑粘度的用途。
文檔編號(hào)A61K47/18GK102753197SQ201180008195
公開日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2011年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月4日
發(fā)明者P·勒希, R·F·玻利, W·梅德 申請(qǐng)人:瑞士杰特貝林生物制品有限公司