專利名稱：Erbb3抑制劑在三陰性乳腺癌和基底樣乳腺癌治療中的用途的制作方法
ERBB3抑制劑在三陰性乳腺癌和基底樣乳腺癌治療中的用途相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2010年3月11日提交的題為“Use of ErbB3 Inhibitors in theTreatment of Triple Negative and Basal-Like Breast Cancers” 的美國臨時專利申請?zhí)?1/312895的優(yōu)先權(quán)，該臨時申請據(jù)此以引用的方式整體并入本文。背景在婦女中，乳腺癌屬于最為常見的癌癥并且是癌癥死亡中列第5位的最常見病因。由于乳腺癌的異質(zhì)性，10年無疾病進展的存活率可隨疾病階段和類型而在98%與10%之間廣泛地變動。不同類型的乳腺癌可具有顯著不同的生物學特性與臨床表現(xiàn)。因此，對患者的乳腺癌進行分類已成為用于確定治療方案的重要組成部分。例如，在根據(jù)組織學類 型和等級進行分類的同時，現(xiàn)今針對激素受體(雌激素受體(ER)和孕酮受體(PR))的表達以及針對ffiR2(ErbB2)的表達對乳腺癌進行常規(guī)評估，這是因為當前可利用許多靶向于激素受體或所述J1ER2受體的治療形式。ER和PR均是核受體(其主要定位于細胞核，盡管其也可見于細胞膜)并且已開發(fā)出靶向ER和/或PR的小分子抑制劑。HER2或2型人表皮生長因子受體是正常情況下定位于所述細胞表面上的受體，并且已開發(fā)出靶向HER2的抗體作為治療劑。HER2是EGFR家族(該EGFR家族還包括HERl (EGFR)、HER3 (ErbB3)以及HER4(ErbB4))中唯一不能獨立地結(jié)合激活配體的成員。因此，僅在與另ー個EGFR家族成員(如HER3) —起合并成異源ニ聚體受體復合體吋，HER2才作為受體發(fā)揮功能。被分類為表達雌激素受體的癌癥(雌激素受體陽性或ER+腫瘤)可使用如他莫昔芬(tamoxifen)的ER拮抗劑進行治療。類似地，被分類為表達高水平HER2受體的乳腺癌可使用如曲妥珠單抗(trastuzumab)的抗HER2抗體進行治療,或使用如拉帕替尼(Iapatinib)的HER2活性受體酪氨酸激酶抑制劑進行治療。三陰性(TN)乳腺癌是用于命名ー種已知的臨床相關(guān)的乳腺癌亞型的術(shù)語，所述乳腺癌亞型約占全部乳腺癌病例的15 %。TN腫瘤對于ER和PR的表達得分為陰性(S卩，使用常規(guī)組織病理學方法和標準)并且不表達擴增水平的HER2(即，它們?yōu)镋R-、PR_、HER2_)。TN乳腺癌主要但非唯一地包括ー種在分子學上和組織病理學上獨特的乳腺癌亞型，其稱為基底樣(BL)亞型。該BL亞型的特征還在于表達細胞角蛋白(例如，CK、CK5/6、CK14、CK17)以及乳腺的正?；?肌上皮細胞中可見的其它蛋白質(zhì)。然而，除所述BL亞型外，某些其它類型的乳腺癌也可表現(xiàn)出三陰性(TN)表型，所述乳腺癌包括ー些“正常乳腺樣”、化生性癌、髓樣癌以及涎腺樣腫瘤。此外，TN乳腺癌在BRCAl突變存在的情況下以及在非洲裔美國或西班牙裔的絕經(jīng)前女性中更頻繁地出現(xiàn)。TN腫瘤一般會表現(xiàn)出極具侵襲性的行為，相對其它乳腺癌類型來說復發(fā)后存活時間更短并且總體存活率較低。并非所有的乳腺癌都是TN?；讟尤橄侔┦钱愘|(zhì)性腫瘤類型，其最多占全部乳腺癌的15%并且表現(xiàn)出侵襲性臨床行為，使得其特別難于被成功治療。大部分的BL乳腺癌都是ER-、PR-以及低HER2 (HER21+或HER2陰性)的。此外，所述乳腺癌一般會表達正常乳腺基底(肌上皮)細胞中常見的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)包括高分子量細胞角蛋白(例如5/6、8、14、17和18)、p-鈣黏著蛋白、窖蛋白I和2、巢蛋白、aB晶體蛋白以及EGFR。此外，BL腫瘤細胞一般缺乏勝任同源重組DNA修復的能力。在組織學上，大多數(shù)BL乳腺癌屬于IDC-NST類型，組織學等級高并且表現(xiàn)出非常高的細胞分裂指數(shù)。所述乳腺癌一般還具有中心壞死區(qū)或纖維化區(qū)、推擠性邊緣、顯著的淋巴細胞浸潤以及典型/非典型髓樣特征，并且通常表現(xiàn)出類似于人乳頭瘤病毒誘發(fā)的頭頸部鱗狀上皮細胞癌的特征。乳腺的髓樣癌與非典型髓樣癌、化生性癌、分泌性癌、肌上皮癌以及腺樣囊性癌中的大部分也表現(xiàn)出BL特征。由于TN乳腺癌細胞中缺乏對激素受體或顯著量HER2的表達，所以治療的選擇非常受限，這是因為腫瘤對靶向ER(例如他莫昔芬、芳化酶抑制劑)或HER2(例如曲妥珠單杭)的治療并無反應(yīng)。不同于此，這些腫瘤是使用常規(guī)的新輔助化療與輔助化療方案進行治療，所述治療方案的療效有限并且具有很多毒副作用。此外，這些化療方案可導致腫瘤的抗藥性，并且在治療的前三年中TN乳腺癌的疾病復發(fā)風險高于其它類型的乳腺癌?！せ讟尤橄侔┮搽y以治療并且與不良預后相關(guān)，盡管BL腺樣囊性癌通常與較好的臨床結(jié)果相關(guān)。其用于制造的用途。鑒于前述內(nèi)容，對用于治療三陰性乳腺癌和BL乳腺癌的其它治療選擇及方法存在需求。概述本文提供了用于治療三陰性乳腺癌(例如，腫瘤)和基底樣乳腺癌(例如，腫瘤)的方法，以及可被用于這些方法中的藥物組合物。所述方法和組合物是至少部分地基于以下發(fā)現(xiàn)ErbB3抑制可遏制TN乳腺癌細胞和BL乳腺癌細胞的生長。具體來說，抗ErbB3抗體的施用被證實在體內(nèi)遏制了 TN乳腺癌細胞的生長。因此，提供了 ErbB3抑制劑用于TN或BL乳腺癌治療的用途(例如，其用于藥劑制備的用途)。另ー方面，提供了遏制TN乳腺癌腫瘤或BL乳腺癌腫瘤生長的方法，所述方法包括將所述腫瘤與有效量的ErbB3抑制劑接觸。另ー方面，提供了遏制患者的TN乳腺癌腫瘤或BL乳腺癌腫瘤生長的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。又一方面，提供了治療患者的TN乳腺癌腫瘤或BL乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。又一方面，提供了治療患者的乳腺癌腫瘤或BL乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括選擇患有三陰性乳腺癌腫瘤或BL乳腺癌腫瘤的患者；以及向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。在一個示例性實施方案中，所述ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。ー種示例性抗ErbB3抗體是MM-121 (Ab#6)，其包含分別如SEQ ID NO :1和2中所示的Vh和Vl序列。另ー種示例性抗ErbB3抗體是包含分別如SEQ ID NO :3_5中所示的Vh⑶Rl、2和3序列(任選為氨基末端至羧基末端的順序)及分別如SEQ ID NO :6-8中所示的\⑶Rl、2和3序列(任選為氨基末端至羧基末端的順序)的抗體。在其它實施方案中，所述抗ErbB3抗體是Ab#3 (其包含分別如SEQ ID NO 9和10中所示的Vh和Vl序列)、Ab#14 (其包含分別如SEQID NO 17和18中所示的Vh和Vl序列)、Ab#17 (其包含分別如SEQ ID NO 25和26中所示的Vh和Vl序列)或Ab#19 (其包含分別如SEQ ID NO 33和34中所示的Vh和Vl序列)。在其它實施方案中，所述抗ErbB3抗體選自由mAblB4C3、mAb 2D1D12、AMG-888以及人源化mAb 8B8組成的組。在另ー實施方案中，所述抗ErbB3抗體的施用抑制了所述腫瘤的生長或侵襲或轉(zhuǎn)移。本文所提供的方法可用于治療多種不同組織病理表型的TN乳腺癌。例如，在ー實施方案中，所述三陰性乳腺癌腫瘤在組織病理學上的特征在于具有基底樣表型。在另ー實施方案中，所述TN乳腺癌腫瘤在組織病理學上的特征在于具有不同于BL的表型。在前述每種方法和組合物中，可將所述ErbB3抑制劑包含于制劑之中，所述制劑包含藥學上可接受的載體。另ー方面，本文提供的治療方法進ー步包括向患者施用至少ー種其它抗癌劑，該 其它抗癌劑不是ErbB3抑制劑。在一實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含至少ー種化療藥物，如選自由以下組成的組的藥物鉬基化療藥物、紫杉烷、酪氨酸激酶抑制劑及其組合?，F(xiàn)今已觀察到，在測試了 HER22+的TN乳腺癌亞組中，使用抗HER2劑(如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗(pertuzumab)或拉帕替尼)進行的治療在與抗ErbB3抗體組合使用時可提供益處。因此，另一方面，本文提供的治療方法進ー步包括向患者施用有效量的至少ー種其它抗癌劑，該其它抗癌劑為抗HER2劑。這些抗HER2劑是眾所周知的并且可包括一種或多種抗ErbB2抗體，如美國專利5，977，322中所描述的C6. 5(及其多種衍生物)、如美國專利6，054，297中所描述的曲妥珠單抗以及如美國專利6，949，245中所描述的帕妥珠單抗；以及小分子抗J1ER2劑，如拉帕替尼(其還抑制EGFR酪氨酸激酶)和AG879。在另ー實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含EGFR抑制劑，如抗EGFR抗體或EGFR信號轉(zhuǎn)導的小分子抑制劑。ー種示例性抗EGFR抗體包含西妥昔單抗(cetuximab)?？笶GFR抗體的其它實例包括馬妥珠單抗(matuzumab)、帕尼單抗(panitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)和mAb806。EGFR信號轉(zhuǎn)導的一種示例性小分子抑制劑包含吉非替尼(gefitinib)。EGFR信號轉(zhuǎn)導的可用小分子抑制劑的其它實例包括拉帕替尼、卡奈替尼(canertinib)、鹽酸埃羅替尼(erlotinib HCL)、培利替尼(pelitinib)、PKI_166、PD158780以及 AG 1478。在又一實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含VEGF抑制劑。一種示例性VEGF抑制劑包含抗VEGF抗體,如貝伐單抗(bevacizumab)抗體。在另ー實施方案中,所述抗ErbB3抗體與所述至少一種其它抗癌劑的施用抑制了所述腫瘤的生長或侵襲或轉(zhuǎn)移。另ー方面，治療患者的TN乳腺癌或BL乳腺癌的方法包括向所述患者施用包含MM-121和紫杉醇的組合。在一實施方案中，所述組合在TN或BL乳腺癌的治療中表現(xiàn)出治療性協(xié)同作用。在一些實施例中，所述組合實現(xiàn)至少2. 8、至少2. 9或至少3. 0的Iogltl細胞殺傷值。在其它方面，所述組合提供了腫瘤生長抑制的改善，所述改善與通過所述組合中的各種單ー藥劑所獲得的改善相比至少是約為藥劑的加和性改善。在另ー實施方案中，提供了包含MM-121和紫杉醇的組合的組合物，其中所述組合在TN或BL乳腺癌的治療中表現(xiàn)出治療性協(xié)同作用。在一些實施例中，所述組合物實現(xiàn)至少2. 8、至少2. 9或至少3. 0的Iogltl細胞殺傷值。還提供了含有所述組合的藥物組合物的試劑盒。附圖
簡述胤！是示出了在使用MM-121或媒介物對照進行治療的NMRI裸小鼠中，相對MAXF449異種移植腫瘤體積(％ ) (Y軸ー根據(jù)初始腫瘤體積進行了歸ー化)對隨機化后的天數(shù)時間(X軸)所繪制的圖。TGI = 200%?；耍∈鞘境隽嗽谑褂肕M-121或媒介物對照進行治療的Balb/c裸小鼠中，MDA-MB-231異種移植腫瘤體積的百分比變化(Y軸ー根據(jù)初始腫瘤體積進行了歸ー化)對MDA-MB-231細胞注射后的天數(shù)時間(X軸)所繪制的圖。帶有空心時間點正方形或圓圈的曲線表示使用MM-121治療的小鼠。帶有實心時間點正方形或圓圈的曲線表示使用媒介物對照治療的小鼠。在插圖中，“mp”表示將所述MDA-MB-231細胞注射入乳腺脂肪墊(mammaryfat pad)中，而“sc”表示將所述MDA-MB-231細胞皮下注射入側(cè)腹中。Ml是示出了以mm3計的MDA-MB-231腫瘤體積(Y軸)對將MDA-MB-231細胞注射入Balb/c裸小鼠的乳腺脂肪墊后28天起開始計算的天數(shù)時間(X軸)所繪制的圖示。使用MM-121 (每只小鼠150 u g)、紫杉醇(5mg/kg)、MM-121 (每只小鼠150 u g)和紫杉醇(5mg/ kg)的組合、或媒介物對照進行治療。在圖中使用時，“mpk” = mg/kg。Mi是示出了以mm3計的MDA-MB-231腫瘤體積(Y軸)對將MDA-MB-231細胞注射進入Balb/c裸小鼠的乳腺脂肪墊后28天起開始的天數(shù)時間(X軸)所繪制的圖示。MiA描繪使用MM-121、西妥昔單抗或紫杉醇和西妥昔單抗；以及MM-121、西妥昔單抗以及紫杉醇的三重組合進行的治療。MiS描繪使用MM-121、埃羅替尼、MM-121與埃羅替尼，或MM-121、埃羅替尼以及紫杉醇的三重組合進行的治療。詳述本文提供了用于治療三陰性乳腺癌和基底樣乳腺癌的方法，以及可用于實施這些方法的藥物組合物。如實施例中進ー步所述，現(xiàn)已證實ErbB3抑制劑,特別是抗ErbB3抗體，能夠在體內(nèi)遏制TN乳腺癌細胞的生長。因此，本文提供了使用ErbB3抑制劑遏制TN乳腺癌和BL乳腺癌生長的方法，以及治療患者的這類乳腺癌的方法。定義本文所使用的術(shù)語“三陰性”或“TN”指的是腫瘤(例如，癌瘤)，一般是乳腺腫瘤，其中所述腫瘤細胞對于雌激素受體(ER)和孕酮受體(PR)的得分為陰性(即，使用常規(guī)組織病理學方法)，雌激素受體與孕酮兩者均為核受體(即，其主要定位于細胞核)，并且所述腫瘤細胞對于2型表皮生長因子受體(HER2或ErbB2)并無擴增，該2型表皮生長因子受體為正常情況下定位于所述細胞表面的受體。如果使用標準的免疫組織化學技術(shù)低于5%的所述腫瘤細胞核受到針對ER和PR表達的染色，則所述腫瘤細胞被認為對于ER和PR表達呈陰性。當使用 HercepTest Kit (Code K5204, Dako North America, Inc. , Carpinteria,CA)進行測試時，如果其產(chǎn)生了 3+得分的測試結(jié)果或者通過熒光原位雜交(FISH)的HER2測試呈陽性，則腫瘤細胞被認為對于HER2 (“HER23+”)是高度擴增的，所述Herc印Test Kit是ー種使用多克隆抗ffiR2 —級抗體進行的半定量免疫組織化學分析。如本文所使用，如果腫瘤細胞產(chǎn)生了 0或I+、或2+得分的測試結(jié)果或者如果其呈HER2 FISH陰性，則腫瘤細胞被認為對于J1ER2過表達呈陰性。此外，術(shù)語“三陰性乳腺癌”或“TN乳腺癌”涵蓋了不同組織病理學表型的癌癥。例如，某些TN乳腺癌被分類為“基底樣”(“BL”)，其中腫瘤細胞表達在乳腺的正?；?肌上皮細胞中通常可見的基因，如高分子量基底細胞角蛋白(CK、CK5/6、CK14、CK17)、波形蛋白、P-鈣黏著蛋白、aB晶體蛋白、fascin蛋白以及窖蛋白I和2。然而，某些其它TN乳腺癌具有不同的組織病理學表型，實例包括無特定類型的高度浸潤性導管癌、乳腺化生性癌、乳腺髓樣癌以及乳腺涎腺樣腫瘤。本文可互換使用的術(shù)語“ErbB3”、“HER3”、“ErbB3受體”和“HER3受體”指的是人ErbB3蛋白，如美國專利號5，480，968中所述。本文所使用的術(shù)語“ErbB3抑制劑”意圖包括抑制、下行調(diào)制、遏制或下行調(diào)控ErbB3活性的治療劑。術(shù)語意圖包括化學化合物，如小分子抑制劑的；及生物劑，如抗體、干擾RNA(shRNA、siRNA)，可溶受體等。一種示例性ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。本文所使用的“抗體”是由ー種或多種多肽所組成的蛋白質(zhì)，所述多肽包含大致上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段所編碼的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中所述蛋白質(zhì)與抗原進行免疫特異性地結(jié)合。已識別的免疫球蛋白基因包括1^、入、(1、￥、6、￡和]1恒定區(qū)基因，以及無數(shù)種免疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈被分類為K或V。重鏈被分類為Y、il、 a、S、或e，其又分別定義了所述免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。典型的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)單元包含四聚體，其由相同的兩對多肽鏈組成，每對多肽鏈都具有一條“輕”鏈(約25kD)和一條“重”鏈(約50-70kD)?！癡ご’和“VH”分別指的是這些輕鏈和重鏈。抗體包括完整的免疫球蛋白以及其抗原結(jié)合片段，該抗原結(jié)合片段通過使用多種肽酶進行的消化而產(chǎn)生或通過化學方法或使用重組DNA表達技術(shù)進行重新合成。這些片段包括例如F(ab)2 ニ聚體和Fab単體。有用的抗體包括單鏈抗體(以單ー多肽鏈形式存在的抗體)，例如單鏈Fv抗體(scFv)，其中Vh和Vlj鏈被連接在一起(直接或通過肽連接子)以形成連續(xù)多肽。“免疫特異性”或“免疫特異性地”指的是通過大致上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段所編碼的結(jié)構(gòu)域結(jié)合于目標蛋白質(zhì)的ー種或多種抗原表位的抗體，但該抗體大致上并不識別并結(jié)合含有抗原性分子的混合群體的樣品中的其它分子。一般來說，抗體以數(shù)值不超過50nM的Kd與關(guān)聯(lián)抗原(cognate antigen)免疫特異性地結(jié)合,所述Kd通過表面等離子體共振分析或細胞結(jié)合分析來測量。這些分析的使用在本領(lǐng)域中是眾所周知的并且描述于下文的實施例3中?！翱笶rbB3抗體”是免疫特異性地結(jié)合于ErbB3的胞外結(jié)構(gòu)域的抗體，并且“抗ErbB2抗體”免疫特異性地結(jié)合于ErbB2的胞外結(jié)構(gòu)域的抗體。所述抗體可以是經(jīng)過分離的抗體。根據(jù)表面等離子體共振分析或細胞結(jié)合分析的測量，與ErbB3或ErbB2的這種結(jié)合表現(xiàn)出數(shù)值不超過50nM的Kd?？笶rbB3抗體可以是經(jīng)過分離的抗體。示例性抗ErbB3抗體抑制了 EGF樣配體介導的ErbB3磷酸化。EGF樣配體包括EGF、TGF a、^細胞素、肝素結(jié)合表皮生長因子、biregulin、epigen、表皮調(diào)節(jié)素以及雙調(diào)蛋白，其一般結(jié)合于ErbBl并且誘導ErbBl與ErbB3的異源ニ聚作用。本文所使用的術(shù)語“EGFR抑制劑”意圖包括抑制、下行調(diào)制、遏制或下行調(diào)控EGFR信號轉(zhuǎn)導活性的治療劑。所述術(shù)語意圖包括化學化合物，如小分子抑制劑(例如，小分子酪氨酸激酶抑制劑);以及生物劑，如抗體、干擾RNA (shRNA、siRNA)、可溶受體等。本文所使用的術(shù)語“VEGF抑制劑”意圖包括抑制、下行調(diào)制、遏制或下行調(diào)控VEGF信號轉(zhuǎn)導活性的治療劑。所述術(shù)語意圖包括化學化合物，如小分子抑制劑(例如，小分子酪氨酸激酶抑制劑);以及生物劑，如抗體、干擾RNA (shRNA、siRNA)、可溶受體等。本文可互換使用的術(shù)語“遏制”和“抑制”指的是在生物活性(例如，腫瘤細胞生長)上的任何統(tǒng)計學顯著的降低，包括所述活性的完全阻斷。例如，“抑制”可以指在生物活性上約 10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%^； 100%的降低。術(shù)語“患者”包括接受預防性或治療性治療的人或其它哺乳動物。本文所使用的術(shù)語“治療”指的是治療性或預防性措施，如本文所描述的那些措施?！爸委煛钡姆椒ㄊ褂玫氖窍蚧颊呤┯帽疚奶峁┑腅rbB3抑制劑，例如，向患有TN或BL乳腺癌腫瘤的患者施用本文提供的ErbB3抑制劑，用以預防、治愈、延緩疾病或病癥或復發(fā)疾病或病癥，降低疾病或病癥或復發(fā)疾病或病癥的嚴重性，或緩解疾病或病癥或復發(fā)疾病或病癥的ー種或多種癥狀，或用以延長患者的存活期使之超出缺乏這一治療的情況下的預期存活期。本文所使用的術(shù)語“有效量”指的是如ErbB3抑制劑(例如抗ErbB3抗體)的藥劑的量，當向患者施用時所述量足以實現(xiàn)對TN或BL乳腺癌的治療、預后或診斷。治療有效量將取決于待治療的患者和疾病病狀、所述患者的體重和年齡、所述疾病病狀的嚴重性、施用方式等而進行變動，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地確定所述治療有效量。用于施用的·劑量可以例如在以下范圍變動約Ing至約10，OOOmg、約5ng至約9，500mg、約IOng至約9, OOOmg、約 20ng 至約 8，500mg、約 30ng 至約 7，500mg、約 40ng 至約 7，OOOmg、約 50ng 至約
6,500mg、約 IOOng 至約 6，OOOmg、約 200ng 至約 5，500mg、約 300ng 至約 5，OOOmg、約 400ng 至約 4，500mg、約 500ng 至約 4，OOOmg、約 I U g 至約 3，500mg、約 5 u g 至約 3，OOOmg、約 10 u g至約 2，600mg> 約 20 ii g 至約 2，575mg、約 30 y g 至約 2，550mg、約 40 y g 至約 2，500mg、約 50 ii g 至約 2，475mg、約 100 u g 至約 2，450mg、約 200 u g 至約 2，425mg、約 300 u g 至約2, 000、約 400 u g 至約 1，175mg、約 500 u g 至約 1，150mg、約 0. 5mg 至約 1，125mg、約 Img 至約I, 100mg、約 I. 25mg 至約 1，075mg、約 I. 5mg 至約 1，050mg、約 2. Omg 至約 1，025mg、約 2. 5mg至約 1，OOOmg、約 3. Omg 至約 975mg、約 3. 5mg 至約 950mg、約 4. Omg 至約 925mg、約 4. 5mg 至約 900mg、約 5mg 至約 875mg、約 IOmg 至約 850mg、約 20mg 至約 825mg、約 30mg 至約 800mg、約 40mg 至約 775mg、約 50mg 至約 750mg、約 IOOmg 至約 725mg、約 200mg 至約 700mg、約 300mg至約675mg、約400mg至約650mg、約500mg或約525mg至約625mg的如本文所提供的抗體或其抗原結(jié)合部分。給藥可以例如每周、每2周、每3周、每4周、每5周或每6周進行?？蓪┝糠桨高M行調(diào)整以提供最佳治療反應(yīng)。有效量還可以是ー種使藥劑的任何毒性或不良作用(副作用)最小化和/或使有益作用占主導的量。對于MM-121，施用可以是精確地或姆周約6mg/kg或12mg/kg靜脈內(nèi)進行，或姆兩周12mg/kg或24mg/kg靜脈內(nèi)進行。下文描述其它給藥方案。所述術(shù)語“抗癌劑”和“抗腫瘤劑”指的是用于治療惡性腫瘤如癌性生長的藥物。藥物療法可単獨使用或與如手術(shù)或放射療法的其它治療組合使用。以下分部中進ー步詳細地描述了多個方面和實施方案。I. ErbB3 抑制劑如本文的進ー步詳述，本文提供的方法和組合物涉及ー種或多種ErbB3抑制劑的使用。在一個實施方案中，所述ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體,例如單克隆抗體。ー種示例性抗ErbB3單克隆抗體是MM-121，其進ー步描述于WO 2008/100624和美國專利號7，846，440中，并且其具有分別如SEQ ID NO : I和2中所示的Vh和^序列。或者，所述抗ErbB3單克隆抗體是與MM-121競爭結(jié)合ErbB3的抗體。在另ー實施方案中，所述抗ErbB3抗體是包含分別如SEQ ID NO 3-5 (VH CDRU2,3)和6-8 (VL CDRU2,3)中所示的MM-121的Vh和んCDR序列的抗體?？笶rbB3抗體的其它實例包括Ab#3、Ab#14、Ab#17和Ab#19，其還進ー步描述于WO 2008/100624中并且具有分別如SEQ ID NO :9和10、17和18、25和26以及33和34中所示的Vh和\序列。在另ー實施方案中，所述抗ErbB3抗體是包含Ab#3的Vh和Vl CDR序列(分別示于SEQ ID NO :11-13和14-18中)的抗體或包含Ab#14的Vh和Vl CDR序列(分別示于SEQ ID NO 19-21和22-24中)的抗體或包含Ab#17的Vh和Vl CDR序列(分別示于SEQ ID NO 27-29和30-32中)的抗體或包含Ab#19的Vh和Vl CDR序列(分別示于SEQ ID NO 35-37和38-40中)的抗體?；蛘撸隹笶rbB3抗體是結(jié)合人ErbB3的抗原表位的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分并且其特征在于抑制表達ErbB3的癌細胞的増殖，所述人ErbB3的抗原表位包含SEQID NO :41的殘基92-104。所述癌細胞可以是MALME-3M細胞、AdrR細胞或ACHN細胞，并且所述增殖相對于對照可降低至少10%。在另ー實施方案中，這種經(jīng)過分離的單克隆抗體或 其抗原結(jié)合部分結(jié)合包含SEQ ID NO 41的殘基92-104和129的抗原表位。可用的抗ErbB3抗體的其它實例包括抗體1B4C3和2D1D12 (U3 Pharma AG)，兩者均描述于Ullrich等的美國專利申請公布號20040197332中；以及單克隆抗體(包括其人源化變型)，如 AMG-888 (U3 Pharma AG 和 Amgen)和 8B8,如 Akita 等的美國專利 5，968，511中所述。在又一實施方案中，所述抗ErbB3抗體可包含兩種或更多種抗ErbB3抗體的混合物或調(diào)和物(cocktail),姆種抗體結(jié)合于ErbB3的不同抗原表位。在一實施方案中，所述混合物或調(diào)和物包含3種抗ErbB3抗體，每種抗體結(jié)合于ErbB3上的不同抗原表位。在另ー實施方案中，所述ErbB3抑制劑包含核酸分子，如RNA分子，所述核酸分子抑制ErbB3的表達或活性。ErbB3的RNA拮抗劑在本領(lǐng)域中已有描述(參見，例如，美國專利申請公布號20080318894)。此外，對ErbB3特異的干擾RNA，如特異性地抑制ErbB3的表達和/或活性的shRNA或siRNA，在本領(lǐng)域中已有描述。在又一實施方案中，所述ErbB3抑制劑包含所述ErbB3受體的可溶形式，其抑制了通過所述ErbB3通路進行的信號轉(zhuǎn)導。這些可溶ErbB3分子在本領(lǐng)域中已有描述(參見，例如，均屬于Maihle等的美國專利號7，390，632、美國專利申請公布號20080274504以及美國專利申請公布號20080261270，以及Zhou的美國專利申請公布號20080057064)。II.方法一方面，提供了 ErbB3抑制劑用于制造治療TN乳腺癌或BL乳腺癌的藥劑的用途。另ー方面，提供了遏制三陰性乳腺癌細胞生長的方法，所述方法包括將所述細胞與有效量的ErbB3抑制劑接觸。另ー方面，提供了遏制患者的TN或BL乳腺癌腫瘤生長的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。又一方面，提供了治療患者的TN或BL乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。又一方面，提供了治療患者的乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括選擇患有TN和BL乳腺癌腫瘤的患者；以及
向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。另ー方面，患有TN或BL乳腺癌腫瘤的所述患者是通過使用待決的國際申請PCT/US2009/054051中公開的選擇方法而進ー步選擇的患者。可通過本領(lǐng)域中眾所周知的標準方法完成對三陰性乳腺癌細胞或患有三陰性乳腺癌腫瘤的患者的鑒別。例如，將免疫組織化學(IHC)染色常規(guī)地用于活組織切片檢查分析并且其實現(xiàn)了在來自甲醛固定石蠟包埋的組織(如，為進行組織學評估而進行常規(guī)處理的乳腺癌組織)的切片中對ER、PR和HER2的檢測、定位和相對定量分析。在鑒別TN腫瘤的情況下，對于ER和PR各自而言，低于5%的腫瘤細胞核染色被認為是陰性的。用于ER的IHC染色的ー級抗體是，例如1D5 (Chemicon, Temecula CA，目錄號IHC2055)。用于PR的IHC染色的一級抗體是，例如PgR636 (Thermo Fisher Scientific,Fremont,CA,目錄號MS-1882-R7)或 PgR 1294 (Dako North America, Inc. , Carpinteria, CA, Code M3568)。所使用的 ErbB2IHC 分析是，例如 HercepTest 試劑盒(Dako North America, Inc. , Carpinteria, CA, CodeK5204)，其為ー種使用多克隆抗HER2—級抗體以在進行組織學評估而進行常規(guī)處理的乳 腺癌組織中測定J1ER2蛋白過表達的半定量IHC分析，所述試劑盒根據(jù)制造商的指導而使用。在鑒別TN腫瘤的情況下，0至1+的測試結(jié)果被認為是Her2陰性。在一實施方案中，所述三陰性乳腺癌腫瘤在組織病理學上的特征在于具有基底樣表型。在另ー實施方案中，所述三陰性乳腺癌腫瘤在組織病理學上的特征在于具有不同于基底樣的表型。不同于BL的TN乳腺癌組織病理學表型的實例包括無特定類型的高度浸潤性導管癌、乳腺化生性癌、乳腺髓樣癌和乳腺涎腺樣腫瘤。一方面，使用ErbB3抑制劑進行治療的TN或BL乳腺癌共表達了 ErbBl (EGFR)、ErbB3 Wlheregulin(HRG)?？墒褂每笶GFR抗體、抗ErbB3抗體或抗HRG抗體，通過RT-PCR或通過標準的免疫分析技木，如ELISA分析或?qū)兹┕潭ㄊ灠竦慕M織(例如，為進行組織學評估而進行常規(guī)處理的乳腺癌組織)的免疫組織化學染色而鑒定EGFR和HRG的表達。用于根據(jù)本文的公開內(nèi)容治療的腫瘤的其它特征被闡述于待決的美國專利公布號20110027291中，該專利要求PCT申請?zhí)朠CT/US2009/054051的優(yōu)先權(quán)。在一實施方案中，向患者施用的ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。ー種示例性抗ErbB3抗體是MM-121，其包含分別如SEQ ID NO :1和2中所示的Vh和\序列，或包含分別如SEQ ID NO :3-5中所示的Vh CDR1、2和3序列以及分別如SEQ ID NO :6_8中所示的八⑶Rl、2和3序列(即，MM-121的Vh和' OTR)的抗體。上文分部I中詳述了其它非限制示例性抗ErbB3抗體和其它形式的ErbB3抑制劑。所述ErbB3抑制劑可通過任何適用于向患者有效遞送抑制劑的途徑施用于所述患者。例如，許多小分子抑制劑都適用于ロ服?？贵w和其它生物劑一般通過腸胃外施用，例如靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)施用。下文進ー步詳細描述了適用于本文提供的方法的多種施用途徑、劑量和藥物制劑。III.藥物組合物另ー方面，提供了可用于本文所公開的方法的藥物組合物，S卩，用于治療TN或BL乳腺癌腫瘤的藥物組合物。在一實施方案中，用于治療TN乳腺癌的所述藥物組合物包含ErbB3抑制劑和藥物載體。可將所述ErbB3抑制劑與所述藥物載體一起配制成藥物組合物。此外，藥物組合物可包括例如將所述組合物用于治療患者的TN和BL乳腺癌腫瘤的指導。在一實施方案中，所述組合物中的ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體，例如MM-121或包含MM-121的Vh和\⑶R的抗體，所述⑶R以與其存在于MM-121中相同相對順序位于所述抗體中從而提供了 ErbB3的免疫特異性結(jié)合。上文分部I中詳述了其它非限制示例性抗ErbB3抗體和其它形式的ErbB3抑制劑。本文所使用的“藥學上可接受的載體”包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、涂料、抗細菌及抗真菌劑、等滲及吸收延緩劑、緩沖劑以及生理上可相容的其它賦形劑。優(yōu)選地，所述載體適用于腸胃外、口腔或局部施用。取決于施用途徑，所述活性化合物例如小分子或生物劑可被涂布于某種材料中以保護所述化合物免受酸類或可能使所述化合物失活的其它自然條件的作用。
藥學上可接受的載體包括無菌水溶液或分散液和用于無菌可注射溶液或分散液的即時制備的無菌粉末，以及用于制備片劑、丸剤、膠囊等的常規(guī)賦形劑。用于配制藥學上活性物質(zhì)的這些介質(zhì)和藥劑的使用在本領(lǐng)域中是已知的。除與所述活性化合物不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑之外，涵蓋其在本文提供的藥物組合物中的用途。還可將補充性活性化合物并入所述組合物中。藥學上可接受的載體可包括藥學上可接受的抗氧化劑。藥學上可接受的抗氧化劑的實例包括(I)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，如抗壞血酸棕櫚酸酷、丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、掊酸丙酷、a-生育酚等；以及(3)金屬螯合劑，如檸檬酸、こニ胺四こ酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。可用于本文提供的藥物組合物的適當水性載體或非水載體的實例包括水、こ醇、多元醇(如甘油、丙ニ醇、聚こニ醇等)及其適當?shù)幕旌衔?，以及可注射的有機酷，如油酸こ酷。當需要時，可通過，例如，通過涂層材料如卵磷脂的使用，通過在分散液的情況下對所需粒徑的維持以及通過表面活性劑的使用來維持適當?shù)牧鲃有?。很多情況下，在所述組合物中包括等滲劑是有用的，例如，包括糖，多元醇如甘露醇、山梨醇，或者氯化鈉?？赏ㄟ^在所述組合物中包含延緩吸收的藥劑如單硬脂酸鹽和明膠而實現(xiàn)所述可注射組合物的延長吸收。這些組合物還可含有功能性賦形劑，如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑。治療組合物一般必須是無菌、無熱原并且在制造和儲存條件下是穩(wěn)定的?？蓪⑺鼋M合物配制成為溶液、微乳劑、脂質(zhì)體或其它適用于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)?？筛鶕?jù)需要通過將所需量的所述活性化合物與上文列舉的ー種成分或成分的組合并入適當?shù)娜軇又鴾缇?例如，通過微過濾進行)來制備無菌的可注射溶液。通常，通過將所述活性化合物并入無菌媒介物來制備分散液，所述媒介物含有基本分散介質(zhì)和來自上文列舉的所需的其它成分。對于用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末來說，制備方法包括真空干燥和冷凍干燥(凍干)，其產(chǎn)生了所述活性成分加上來自此前經(jīng)過無菌過濾的溶液的任何其它所需成分的粉末。可在無菌條件下將所述活性劑與其它藥學上可接受載體以及可能需要的任何防腐剤、緩沖劑或推進劑進行混合?？赏ㄟ^上述滅菌程序以及通過包含多種抗細菌及抗真菌劑來確保防止微生物的存在，所述抗細菌及抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酷、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。也希望在所述組合物中包括等滲劑，如糖類、氯化鈉等。此外，可通過包括延遲吸收的藥劑如單硬脂酸鋁和明膠而實現(xiàn)所述可注射藥物形式的延長吸收。包含ErbB3抑制劑的藥物組合物可單獨施用或以組合療法施用。例如，所述組合療法可包括本文提供的包含ErbB3抑制劑以及至少ー種或多種其它治療劑的組合物，該其它治療劑如本領(lǐng)域中已知的ー種或多種化療劑，其在下文分部IV中進ー步詳細討論。藥物組合物也可結(jié)合放射療法和/或手術(shù)進行施用。對劑量方案進行調(diào)節(jié)以提供最佳的所需反應(yīng)(例如，治療反應(yīng))。例如，可施用單一的大丸藥，可隨時間施用多次分劑量(divided doses)或可根據(jù)治療形勢的急迫性所暗示而按比例降低或提高所述劑量。
用于抗體施用的示例性劑量范圍包括IO-IOOOmg(抗體)/kg(患者體重)、10_800mg/kg、10_600mg/kg、10_400mg/kg、10_200mg/kg、30_1000mg/kg、30_800mg/kg、30_600mg/kg、30_400mg/kg、30_200mg/kg、50_1000mg/kg、50_800mg/kg、50_600mg/kg、50-400mg/kg、50_200mg/kg、100-1000mg/kg、100_900mg/kg、100_800mg/kg、100_700mg/kg、100-600mg/kg、100-500mg/kg、100-400mg/kg、100-300mg/kg 以及 100_200mg/kg。示例性劑量時間表包括每3天一次、每5天一次、每7天一次(即，每周一次)、每10天一次、每14天一次(即，每兩周一次)、每21天一次(即，每三周一次)、每28天一次(即，每四周一次)以及每月一次。為了易于施用和劑量的統(tǒng)一而以單位劑量形式配制腸胃外組合物可能是有利的。本文所使用的單位劑量形式指的是物理上不連續(xù)的単位，其適合作為單位計量以用于待治療的患者；每個單位含有與任何所需藥物載體相結(jié)合的預定量的活性剤，所述預定量的活性劑根據(jù)計算產(chǎn)生所需的治療效果。單位計量形式的規(guī)格決定于并且直接依賴于(a)活性化合物的獨有特征以及要實現(xiàn)的特定治療效果，以及(b)配制這樣的活性化合物以治療個體的敏感性的技術(shù)上的固有限制?？蓪λ龌钚猿煞衷诒疚墓_的藥物組合物中的實際劑量水平加以變動以在對患者無毒性的情況下獲得一定量的活性成分、組合物以及施用模式，所述量可有效實現(xiàn)對特定患者的所需治療反應(yīng)。本文在施用的上下文中所使用的“腸胃外”意思是通常通過注射進行的不用于腸道和局部施用的施用模式，并且其包括但不限于，靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹腔內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下的、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下腔、脊柱內(nèi)、硬膜外和胸骨內(nèi)的注射和輸注。本文所使用的詞組“腸胃外施用”指的是通常通過注射或輸注進行的不同于腸道(即，經(jīng)由消化道)和局部施用的施用模式，并且其包括但不限于，靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹腔內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下腔、脊柱內(nèi)、硬膜外和胸骨內(nèi)的注射和輸注。靜脈內(nèi)注射和輸注通常(但非唯一地)用于抗體施用。當本文提供的藥劑作為藥物施用于人或動物時，其可以單獨提供或作為藥物組合物來給予，所述藥物組合物含有，例如，與藥學上可接受的載體進行組合的0. 001至90%(例如0. 005%至70%、例如0. 01至30% )的活性成分。IV.組合療法在特定的實施方案中，本文提供的用于遏制TN乳腺癌細胞生長或用于治療患有TN乳腺腫瘤或BL乳腺腫瘤的患者的方法和用途可包含ErbB3抑制劑與至少ー種非ErbB3抑制劑的其它抗癌劑的施用。在一實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含至少ー種化療藥物。這些化療藥物的非限制性實例包括鉬基化療藥物(例如，順鉬、卡鉬)、紫杉烷(例如，紫杉醇(Taxol
)、多西他賽(docetaxel) (Taxotere ')、EndoTAG-l (包囊在帶正電脂質(zhì)基復合物中的紫杉醇的制劑；MediGene) >Abraxane (結(jié)合于白蛋白的紫杉醇的制劑))、酪氨酸激酶抑制劑(例如，伊馬替尼(imatinib)/格列衛(wèi)(Gleevec. )、舒尼替尼(sunitinib)/Sutent 、達沙替尼(dasatinib)/Sprycel )及其組合。在另ー實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含EGFR抑制劑，諸如抗EGFR抗體或EGFR信號轉(zhuǎn)導的小分子抑制劑。ー種示例性抗EGFR抗體是西妥昔單抗(Erbitux )。西妥昔單抗可商購自ImClone Systems Incorporated。抗EGFR抗體的其它實例包括馬妥珠單抗(EMD72000)、帕尼單抗(Vectibix ;Amgen)、尼妥珠單抗(TheraCIM )和 mAb 806。 所述EGFR信號轉(zhuǎn)導通路的一種示例性小分子抑制劑為吉非替尼(Iressa )，其可商購自AstraZeneca和Teva。所述EGFR信號轉(zhuǎn)導通路的小分子抑制劑的其它實例包括鹽酸埃羅替尼(OSI-774 ；Tarceva ,OSI Pharma);拉帕替尼(Tykerb ,Glaxo SmithKline);卡奈替尼(雙鹽酸卡奈替尼，Pfizer);培利替尼(Pfizer) ；PKI-166 (Novartis) ；PD158780 ;以及AG 1478 (4- (3-氯苯胺基)-6,7- ニ甲氧基喹唑啉)。在又一實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含VEGF抑制劑。一種示例性VEGF抑制劑包含抗VEGF抗體,如貝伐單抗(Avastatin ；Genentech)。在又一實施方案中，所述至少一種其它抗癌劑包含抗ErbB2抗體。適當?shù)目笶rbB2抗體包括曲妥珠單抗和帕妥珠單杭。一方面，根據(jù)本發(fā)明的組合的改善有效性可通過實現(xiàn)治療性協(xié)同作用而證實。當給定劑量的兩種產(chǎn)品的組合比相同劑量所述兩種產(chǎn)品各自単獨使用時的最佳情況更為有效的時候，就使用術(shù)語“治療性協(xié)同作用”。在一實施例中，可使用獲自雙因素方差分析的估計值將組合與最佳單一藥劑進行比較而評估治療性協(xié)同作用，所述雙因素方差分析通過對參數(shù)腫瘤體積的重復測量(例如，考慮時間因素)而進行。所述術(shù)語“加和”指的是給定劑量的兩種或更多種產(chǎn)品的組合與用所述兩種或更多種產(chǎn)品各自所獲得的效カ的總和同等有效的情況，而術(shù)語“超加和”指的是給定劑量的兩種或更多種產(chǎn)品的組合比用所述兩種或更多種產(chǎn)品各自所獲得的效カ之和更為有效的情況。可對有效性(包括組合有效性)進行定量的另ー種測量方式是通過計算Iogltl細胞殺傷值，該值是根據(jù)以下方程來確定Iogltl 細胞殺傷值=T-C (天數(shù))/3. 32 X Td其中T-C表示所述細胞生長的延遲，其為治療組(T)的腫瘤和對照組(C)的腫瘤達到預定值(例如，Ig或IOmL)所需的平均天數(shù)時間，并且Td表示對照動物的腫瘤體積翻倍所必需的天數(shù)時間。當應(yīng)用這一測量方式時，如果Iogltl細胞殺傷值大于或等于0.7，則產(chǎn)品被認為是具有活性的，并且如果Iogltl細胞殺傷值大于2. 8，則產(chǎn)品被認為是非常具有活性的。通過使用這ー測量方式，以自身最大耐受劑量下使用的組合在Iogltl細胞殺傷值大于最佳組分單獨施用時的Iogltl細胞殺傷值的時候表現(xiàn)出治療性協(xié)同作用，所述組合中每種組分以通常低于或等于其最大耐受劑量的劑量存在。在示例性情況下，在示例性情況下，所述組合的Iogltl細胞殺傷值超出所述組合的最佳組分的Iogltl細胞殺傷值至少ー個log細胞殺傷值。
實施例實施例I MM-121對于三陰性人乳腺癌異種移植物MAXF449的作用在NMRI裸小鼠中，使用三陰性人乳腺癌異種移植物MAXF449 (0NC0TEST GmbH, Frieburg, Germany)進行了對帶腫瘤小鼠的 MM-121 治療的抗腫瘤效力和耐受度的分析。MAXF449是通過在裸小鼠的連續(xù)傳代中進行的皮下注射而建立的人腫瘤外植體(組織學上將外植體描述為實體浸潤性導管瘤，并且未清晰定義)。用于這些實驗的所述MAXF449細胞已經(jīng)傳代22次。NMRI裸小鼠獲自Taconic farms,Charles River Laboratories International 或 Harlan Laboratories。在直于環(huán)境控帝!J 室內(nèi)的Tecniplast獨立通氣聚碳酸酯(Macrolon)籠盒(IVC)中圈養(yǎng)所述小鼠并令其自由獲取食物和酸化水。為研究單ー療法中的抗腫瘤效力，通過每三天進行的IP注射將MM-121或媒介物對照(100 u L)以每只小鼠600 u g(MM-121為6mg/mL的PBS溶液形式)給予攜帶腫瘤的小鼠。對照小鼠僅接受所述PBS媒介物。通過在所述抗體治療小鼠和所述媒介物對照小鼠之間比較腫瘤生長而測定效力，并且所述效カ被表示為中值相對腫瘤體積的實驗組與對照組比率(T/C值)。低于50%的最低T/C值是將治療評為有效的前提。所述對照和實驗組各包含10只小鼠，其各攜帯ー種腫瘤。為獲得攜帯大小相似腫瘤的30只小鼠以進行隨機化，將每種腫瘤單側(cè)植入40只小鼠中。對小鼠進行了隨機化并且當足夠數(shù)量的個體腫瘤已經(jīng)生長至體積約200mm3時開始治療。通過數(shù)字測徑器測量腫瘤(LXW)并且使用公式Pi/6 (W2 XL)計算所述腫瘤體積。在第0天(隨機化當天)或一天后施用第一次劑量。施用最后一次劑量后約24小時，對所有小鼠采血以制備血清；此外，從相同的小鼠體內(nèi)收集腫瘤用于快速冷凍和FFPE(各用1/2腫瘤)。根據(jù)動物實驗的法規(guī)，在所述腫瘤體積超過1800mm3(每只小鼠一種腫瘤)的情況下處死小鼠。對小鼠進行監(jiān)測和給藥直至它們的腫瘤生長至該大小，但不超過60天。此后將其處死以用于樣品收集。在本研究結(jié)束時，最后一次劑量施用后約24小時，對研究中的全部小鼠進行舌下采血以獲得最大量的血液用于制備血清。以約250 u L每管將血清分裝于2個試管內(nèi)。此外，立即將全部小鼠的腫瘤切下以急凍于液氮之中(1/2腫瘤，提供了 C0VARIS袋以用于樣品儲存)并且用于在10%緩沖甲醛溶液中進行<24小時的固定，隨后進行脫水和石蠟包埋(FFPE，1/2腫瘤)。每周測量兩次動物體重和腫瘤直徑(W和L)并且使用公式Pi/6 (W2 XL)計算腫瘤體積。對腫瘤生長曲線進行作圖。計算了對于2和4翻倍時間的腫瘤抑制和絕對生長延遲。圖I中示出了實質(zhì)上根據(jù)描述而進行的實驗結(jié)果。MM-121治療抑制了或終止了腫瘤生長，并且在一些情況下降低了腫瘤大小。在這些人三陰性腫瘤異種移植物中的TGI (腫瘤生長抑制)經(jīng)過計算約為200%。實施例2 MM-121對于三陰性人乳腺癌異種移植物MDA-MB-231的作用在全身麻酔下，使用107MDA-MB-231人三陰性乳腺癌細胞(ATCC)對Balb/c裸小鼠在側(cè)腹或向乳腺脂肪墊中進行皮下注射。具有已形成腫瘤(即，在細胞注射后腫瘤生長7-10天后)的小鼠隨后使用PBS或MM-121進行IP治療,所述治療根據(jù)實施例I中的描述每3天以每小鼠600 u g MM-121而進行。根據(jù)實施例I中的描述每周測量腫瘤體積兩次。圖2中示出了實質(zhì)上根據(jù)描述而進行的實驗結(jié)果。在這些實驗中MM-121治療實質(zhì)上完全終止了人三陰性乳腺癌腫瘤的生長。實施例3 :結(jié)合親和力QQ的測量
對于兩種獨立的技術(shù)，即表面等離子體共振分析和細胞結(jié)合分析，可使用其中一種或兼用兩者而測量抗ErbB抗體的解離常數(shù)。表面等離子體共振分析根據(jù)Wassaf■等(2006) Analytical Biochem. , 351 :241-253 中的描述進行所述表面等離子體共振分析。一種實施方法使用了 BIAC0RE 3000設(shè)備(GE Healthcare)，該設(shè)備使用重組ErbB蛋白作為分析物以及所述抗ErbB抗體作為配體。根據(jù)Kd = Kd/Ka公式計算所述Kd值。細胞結(jié)合分析使用MALME-3M細胞(ATCC)對ErbB3結(jié)合進行細胞結(jié)合分析。所述分析大致根據(jù)以下進行。使用2mL胰蛋白酶_EDTA+2mL RMPI+5mM EDTA在室溫下進行5分鐘的細胞分離。將完全RPMI (IOmL)立即加至所述胰蛋白酶處理的細胞，將其輕柔地重混懸并且在Beckman桌面離心機中以IlOOrpm離心5分鐘。以2 X IO6細胞每ml的濃度將細胞重混懸于BD染色緩沖液中(PBS+2% FBS+0. 1%疊氮化鈉，Becton Dickinson)并且將 50 y I (I X IO5 細胞)的等分試樣接種于96孔滴度平板中。制備了 150 ill處于BD染色緩沖液中的200nM抗ErbB抗體溶液并將其以2倍系列地稀釋于75 BD染色緩沖液中。所述被稀釋的抗體濃度介于200nM與0. 4nM之間。隨后將不同蛋白質(zhì)稀釋液的50 Ul等分試樣直接加入至所述50 Ul細胞混懸液中以提供100nM、50nM、25nM、12nM、6nM、3nM、l. 5nM、0. 8nM、0. 4nM 和 0. 2nM 的抗體終濃度。在室溫下，將所述96孔平板中的等分試樣細胞與所述蛋白質(zhì)稀釋液在平臺振蕩器上孵育30分鐘并且使用300 u I BD染色緩沖液洗滌3次。隨后在冷室中將細胞與100 U Iニ級抗體(如，Alexa 647標記的山羊抗人IgG在BD染色緩沖液中的I : 750稀釋液)在平臺振蕩器上孵育45分鐘。最后，洗滌細胞兩次，將其離心沉淀并且重混懸于250 Ul的BD染色緩沖液+0. 5 u g/ml的碘化丙啶中。在FACSCALIBUR流式細胞儀中使用FL4通道完成了 10，000細胞的分析。分別以y-軸和X-軸對MFI值和對應(yīng)的抗ErbB抗體濃度進行作圖。使用GraphPad PRISM軟件以用于非線性回歸曲線的單位點結(jié)合模型測定所述分子的KD。根據(jù)公式Y(jié) = Bmax*X/KD+X (Bmax =飽和突光,X =抗體濃度,Y =結(jié)合程度)計算所述Kd值。實施例4 :使用MM-121和紫杉醇的組合治療抑制體內(nèi)腫瘤生長方法
使用IOX IO6細胞對Balb/c裸小鼠(年齡4-5周的雌性，來自Charles Riverlab)在乳腺墊中進行原位移植。在隨機化成每組10只小鼠的4個組之前使腫瘤達到平均IOOmm3的大小，所述組包含具有相似的腫瘤大小分布的小鼠。使用l)MM-121(150ii g/小鼠，ip.，Q3D)或2)媒介物對照(PBS, ip.)或3)紫杉醇(5mgkg LC Labs)或4)紫杉醇(5mg/kg)和MM-121 (150 yg/小鼠)治療各組小鼠。治療持續(xù)進行4周。每周對腫瘤測量兩次，并且根據(jù)P/6X長度X寬度2計算腫瘤體積，其中所述寬度是較短的測量值。結(jié)果使用上文所述的方法或?qū)ζ浼毼⒆冃驮贛DA-MB-231三陰性乳腺癌異種移植物模型中對所述MM-121與紫杉醇的組合進行了體內(nèi)研究。使用亞優(yōu)劑量(sub-optimal dose)的MM-121、紫杉醇以及MM-121與紫杉醇的組合或媒介物對照治療了小鼠(圖3)。盡管MM-121和紫杉醇各自均抑制了腫瘤的體內(nèi)生長，但是當與各単獨治療所獲得的結(jié)果相比，接受了 MM-121和紫杉醇的組合療法的小鼠表現(xiàn)出腫瘤生長抑制的改善。腫瘤生長抑制的所述改善表現(xiàn)出治療性協(xié)同作用并且與獲自所述組合的各単一藥劑的改善相比至少是約 為加和的改善。表I示出了用于生成圖3的數(shù)據(jù)。表2使用來自示于圖3中的相同實驗的數(shù)據(jù)示出了腫瘤體積的平均％變化，其根據(jù)初始腫瘤體積進行了歸ー化。表I.用于生成圖3的數(shù)據(jù)ー以mm3計的平均腫瘤體積
權(quán)利要求
1.ErbB3抑制劑用于制造治療三陰性乳腺癌的藥劑的用途。
2.—種遏制三陰性乳腺癌細胞生長的方法，所述方法包括將所述細胞與有效量的ErbB3抑制劑接觸。
3.—種遏制患者的三陰性乳腺癌腫瘤生長的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
4.一種治療患者的三陰性乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
5.一種治療患者的乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括 選擇患有三陰性乳腺癌腫瘤的患者；以及 向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
6.如權(quán)利要求I至5中任一項所述的方法，其中所述ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體是MM-121。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含ー種抗體，所述抗體包含分別如SEQ ID NO :3-5中所示的呈氨基末端至羧基末端的順序的Vh⑶Rl、2和3序列，以及分別如SEQ ID NO :6-8中所示的呈氨基末端至羧基末端的順序的\⑶Rl、2和3序列。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#3，所述Ab#3包含分別如SEQ ID NO 9和10中所示的Vh和Vl序列。
10.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#14，所述Ab#14包含分別如SEQ ID NO 17和18中所示的Vh和Vl序列。
11.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#17，所述Ab#17包含分別如SEQ ID NO 25和26中所示的Vh和Vl序列。
12.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#19，所述Ab#19包含分別如SEQ ID NO 33和34中所示的Vh和Vl序列。
13.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體選自由mAblB4C3、mAb2D1D12以及人源化mAb 8B8組成的組。
14.如權(quán)利要求I至5中任一項所述的方法，其中所述三陰性乳腺癌腫瘤在組織病理學上的特征是具有基底樣表型。
15.如權(quán)利要求I至5中任一項所述的方法，其中所述三陰性乳腺癌腫瘤在組織病理學上的特征是具有不同于基底樣的表型。
16.如權(quán)利要求3至15中任一項所述的方法，其進ー步包括向所述患者施用有效量的至少ー種其它抗癌劑，所述其它抗癌劑不是ErbB3抑制劑。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑包含至少ー種化療藥物。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述至少ー種其它抗癌劑選自由以下組成的組鉬基化療藥物、紫杉烷、酪氨酸激酶抑制劑、抗EGFR抗體、抗ErbB2抗體及其組合。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述至少一種化療藥物是紫杉醇。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體，所述抗ErbB3抗體包含分別如SEQ ID NO :3、4和5中所示的Vh CDR1、2和3序列，以及分別如SEQ ID NO:6、7和8中所示的Vl CDRU2和3序列。
21.如權(quán)利要求19所述的方法，其中所述ErbB3抑制劑是MM-121。
22.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑包含EGFR抑制劑。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述EGFR抑制劑包含抗EGFR抗體。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗EGFR抗體包含西妥昔單抗。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗EGFR抗體選自由馬妥珠單抗、帕尼單抗、尼妥珠單抗和mAb 806組成的組。
26.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述EGFR抑制劑是EGFR信號轉(zhuǎn)導的小分子抑制齊 。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中EGFR信號轉(zhuǎn)導的所述小分子抑制劑選自由吉非替尼、拉帕替尼、卡奈替尼、培利替尼、鹽酸埃羅替尼、PKI-166、PD158780以及AG 1478組成的組。
28.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑包含VEGF抑制劑。
29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述VEGF抑制劑包含抗VEGF抗體。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述抗VEGF抗體是貝伐單抗。
31.如權(quán)利要求I至5中任一項所述的方法，其中所述三陰性乳腺癌腫瘤是ー種如下腫瘤其中使用多克隆抗HER2 —級抗體進行半定量免疫組織化學分析時，所述腫瘤細胞對于雌激素受體(ER)和孕酮受體的得分為陰性，并且產(chǎn)生了 O或1+的測試結(jié)果。
32.如權(quán)利要求I至5中任一項所述的方法，其中所述三陰性乳腺癌腫瘤是ー種如下腫瘤其中使用多克隆抗HER2 —級抗體進行半定量免疫組織化學分析時，所述腫瘤細胞對于雌激素受體(ER)和孕酮受體的得分為陰性，并且產(chǎn)生了 2+的測試結(jié)果。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述腫瘤細胞對于HER2基因擴增為FISH陰性。
34.ErbB3抑制劑用于制造治療基底樣乳腺癌的藥劑的用途。
35.一種遏制基底樣乳腺癌細胞生長的方法，所述方法包括將所述細胞與有效量的ErbB3抑制劑接觸。
36.一種遏制患者的基底樣乳腺癌腫瘤生長的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
37.一種治療患者的基底樣乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
38.一種治療患者的乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括 選擇患有基底樣乳腺癌腫瘤的患者；以及 向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
39.如權(quán)利要求34至38中任一項所述的方法，其中所述ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。
40.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體是MM-121。
41.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含ー種抗體，所述抗體包含分別如SEQ ID NO :3-5中所示的Vh CDRU2和3序列，以及分別如SEQ ID NO :6_8中所示的Vl CDRl、2 和 3 序列。
42.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#3，所述Ab#3包含分別如SEQ ID NO 9和10中所示的Vh和Vl序列。
43.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#14，所述Ab#14包含分別如SEQ ID NO 17和18中所示的Vh和Vl序列。
44.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#17，所述Ab#17包含分別如SEQ ID NO 25和26中所示的Vh和Vl序列。
45.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含Ab#19，所述Ab#19包含分別如SEQ ID NO 33和34中所示的Vh和Vl序列。
46.如權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體選自由mAblB4C3、mAb2D1D12、AMG-888以及人源化mAb 8B8組成的組。
47.如權(quán)利要求35至40中任一項所述的方法，其進ー步包括向所述患者施用有效量的至少ー種其它抗癌劑，所述其它抗癌劑不是ErbB3抑制劑。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其中所述至少ー種其它抗癌劑是紫杉醇。
49.ErbB3抑制劑用于制造治療基底樣乳腺癌或三陰性乳腺癌的藥劑的用途，所述治療是與使用至少ー種不是ErbB3抑制劑的其它抗癌劑對基底樣乳腺癌或三陰性乳腺癌進行的治療相結(jié)合。
50.如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述至少ー種其它抗癌劑是紫杉醇。
51.如權(quán)利要求18或權(quán)利要求44所述的方法，其中所述其它抗癌劑是抗ErbB2抗體，所述抗體是曲妥珠單抗或帕妥株單抗。
52.如權(quán)利要求18或權(quán)利要求47所述的方法，其中所述至少ー種其它抗癌劑是拉帕替尼。
53.如權(quán)利要求31或權(quán)利要求32所述的方法，其中所述半定量免疫組織化學分析是ー種使用Hercep Test 試劑盒的分析。
全文摘要
本發(fā)明提供抑制三陰性乳腺腫瘤和基底樣乳腺腫瘤的生長的方法，所述方法是通過將腫瘤細胞與ErbB3抑制劑，例如抗ErbB3抗體接觸來進行。還提供用于治療患者的三陰性乳腺癌或基底樣乳腺癌的方法，所述方法是通過向所述患者施用ErbB3抑制劑，例如抗ErbB3抗體來進行。所述治療方法可以進一步包括選擇患有三陰性乳腺癌或基底樣乳腺癌的患者，然后向所述患者施用ErbB3抑制劑。所述治療方法還可以進一步包括向所述患者施用至少一種與ErbB3抑制劑組合的其它抗癌劑。
文檔編號A61P35/00GK102858335SQ201180013330
公開日2013年1月2日 申請日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月11日
發(fā)明者V·莫尤, G·加西亞 申請人:梅里麥克制藥股份有限公司