專利名稱：用于治療乳糖不耐癥或因乳糖酶缺乏引發(fā)的疾病的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明的主題是一種用于給予乳糖不耐癥患者的制劑，所述制劑包含乳糖酶(合成半乳糖苷酶(syn. tilactase)、半乳糖苷酶(tilactasum)、β -半乳糖苷酶)和微生物。在本專利申請中，術語乳糖不耐癥不僅指醫(yī)學上定義的乳糖不耐癥和乳糖代謝障礙(乳糖吸收不良、乳糖消化不良)，而且還指因攝入乳糖或含乳糖食品，或因人體或動物消化道中其它物質(zhì)(如藥物組合物)釋放的乳糖而引發(fā)的任何形式的健康問題或癥狀。
背景技術：
乳糖是二糖，并且是重要的供能營養(yǎng)成分。它是主要存在于牛奶和乳制品中的一種成分，但是，它也被食品工業(yè)用作甜味劑、膨脹劑和稠度改進劑，例如在糖果、加工肉類、
焙烤食品和即食食品中使用。藥物組合物也常包含乳糖。在體內(nèi)，乳糖在小腸內(nèi)被內(nèi)源性乳糖酶分解成可以利用的營養(yǎng)素葡萄糖和半乳糖。對于嬰兒來說，母乳中含有的乳糖是一種非常重要的營養(yǎng)素。乳糖不耐癥通常是因乳糖酶缺乏引起的。如果體內(nèi)沒有足量的乳糖酶(乳糖酶缺乏)，乳糖以未分解的形式進入腸(大腸)的下部，乳糖在其中被腸道細菌發(fā)酵，導致例如氣體產(chǎn)生和/或使流入大腸內(nèi)的水增多。這會導致在食用乳制品后出現(xiàn)各種不適，如胃痛、胃腸脹氣、腹脹或腹瀉。這被稱為乳糖不耐癥。由于癥狀類似，乳糖不耐癥常與腸易激綜合癥相混淆(過敏性結腸、痙攣性結腸)。通常認為存在三種不同形式的乳糖酶缺乏I.原發(fā)性乳糖酶缺乏2.繼發(fā)性乳糖酶缺乏3.先天性乳糖酶缺乏小腸中乳糖酶的量在母乳喂養(yǎng)期的嬰兒體內(nèi)最高，然后由于遺傳原因，大多數(shù)人體內(nèi)的乳糖酶不斷下降。因此，所導致的所謂原發(fā)性乳糖酶缺乏是正常的老化過程，在世界上大多數(shù)成人中(70%-90%)可以觀察到這種現(xiàn)象。因此，幾乎所有非洲人和亞洲人都不耐受乳糖。但同樣在德國，大約15%的成年人存在原發(fā)性乳糖酶缺乏。因此，由原發(fā)性乳糖酶缺乏引起的乳糖不耐癥常被稱為原發(fā)性乳糖不耐癥。各種腸道疾病會引發(fā)所謂的繼發(fā)性乳糖酶缺乏(合成獲得性乳糖酶缺乏)，如克羅恩病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、麩質(zhì)過敏癥(地方性口炎性腹灣)和其它腸道炎癥(如由于病毒感染或細菌感染引起的腸道炎癥)。此外，在胃腸道手術后，尤其是在切除部分小腸后，普遍存在繼發(fā)性乳糖酶缺乏。這被稱為繼發(fā)性或暫時性乳糖不耐癥。在引發(fā)繼發(fā)性乳糖酶缺乏的腸道疾病痊愈后，繼發(fā)性乳糖缺乏通常是可以逆轉(zhuǎn)的。在非常罕見的先天性乳糖酶缺乏中，新生兒缺乏產(chǎn)生乳糖酶的基因。這會導致體內(nèi)根本無法產(chǎn)生乳糖酶。此類嬰兒應該嚴格食用不含乳糖的營養(yǎng)物質(zhì)。在本專利申請意義上，術語乳糖酶缺乏指的不僅是醫(yī)學上定義的乳糖酶缺乏，而且也指任何形式的乳糖酶缺乏。
并非所有的乳糖代謝障礙都一定會導致嚴重的乳糖不耐癥。然而，輕度乳糖代謝障礙也可以觀察到各種不適。目前，只能夠通過保持低乳糖或無乳糖飲食，或在食用含乳糖的食品時服用含有乳糖酶的制劑，才可能避免出現(xiàn)上述不適。保持低乳糖或無乳糖飲食無法令人滿意，而且，由于乳制品中包含寶貴的營養(yǎng)物質(zhì)和重要的物質(zhì)，從營養(yǎng)生理學的角度來看，也是不利的。無乳糖乳制品的選擇是有限的，并且，除此之外，由于乳糖已經(jīng)被生產(chǎn)期間加入的乳糖酶分解，因此，無乳糖乳制品比含乳糖制品更甜。許多消費者不喜歡這些制品的味道。此外，人們預料不到但含有乳糖的食品非常多。這意味著要購買無乳糖食品通常存在很多問題。即時使用乳糖酶制劑是一個良好的替代方法，并常在很大程度上改善了那些受影響的人的生活質(zhì)量。一方面，一個人所需的乳糖酶的量取決于使用者對乳糖的敏感程度。這主要由內(nèi)源性乳糖酶的殘留活性決定,除此之外,所需乳糖酶的量取決于食物類型、消耗的食物總量以及食物中所含的乳糖量。眾所周知，乳糖酶制劑對于所有患者來說并不總是有效或同等有效。人們已經(jīng)提出了多種治療或減輕乳糖不耐癥或乳糖酶缺乏癥的癥狀的產(chǎn)品。RU 292125公開了土蘋果(earth apple)(洋姜)提取物、乳糖酶及含嗜熱鏈球菌 (S. thermophilus)和保加利亞乳桿菌(L. bulgaricus)的發(fā)酵奶基質(zhì)的組合。這種產(chǎn)品旨在供患有乳糖不耐癥或乳糖酶缺乏癥的人群使用，使用乳糖酶的目的將顯示為降低奶基中的乳糖含量。沒有任何跡象表明這兩種微生物對乳糖不耐癥有任何有益效果。此外，據(jù)該專利聲稱，為了提供最佳口感和稠度，嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的比率必須是1:4。DE2725731 (相當于US4034115)公開了一種制備乳糖含量低并因而適合乳糖不耐癥患者食用的發(fā)酵奶制品的四步法。其目的并不是提供一種預防或治療乳糖不耐癥或因乳糖酶缺乏時食用其它類型食品中的乳糖而引起的癥狀的通用方法。這種方法包括采用乳酸菌(不是嗜熱鏈球菌或保加利亞乳桿菌)的第一發(fā)酵步驟，以得到酪乳；第二發(fā)酵步驟，其采用酸奶菌，如嗜熱鏈球菌或保加利亞乳桿菌；第三步，包括加入少量初乳；以及第四步，包括用嗜酸乳桿菌(L. acidophilus)或雙歧桿菌(L. bifidus)進行發(fā)酵。W02009/056979 (Danisco)公開了特別是(inter alia)包含嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌和外源性乳糖酶的乳制品(酸奶)。雖然在第11頁第4行提到了乳糖酶在治療乳糖不耐癥方面的已知用途，但是，該產(chǎn)品并不意圖用于治療或預防乳糖不耐癥或乳糖酶缺乏癥。W02004/089290 (Pharmachem)公開了乳糖不耐癥患者服用包含益生菌微生物和乳糖酶的組合的可咀嚼糖果(confections)。優(yōu)選的微生物包括嗜熱鏈球菌,但不包括保加利亞乳桿菌。使用乳糖酶的目的(參見第16頁)將顯示為脫除糖果中存在的任何乳糖。W02004/089290不包含任何含乳糖酶和/或微生物(如嗜熱鏈球菌或保加利亞乳桿菌)的實例，也并未公開微生物的存在形式。在W02004/089290的第2頁和第3頁，其認為使用凍干微生物存在一些問題，并在其它多處聲明，糖果的制備未經(jīng)加熱和脫水，從而建議不以干燥形式使用微生物。US2008/0187525 (Porubcan)公開了益生菌微生物和催乳酶的組合。催乳酶(包含乳糖酶)旨在用于促進益生菌微生物的生長。這種組合(或其組分)可以盛放在膠囊中。微生物可以采用凍干形式。該專利未公開也未舉例說明乳糖酶與嗜熱鏈球菌或保加利亞乳桿菌的特定組合。該文件并不關注預防或治療乳糖不耐癥或乳糖酶缺乏癥。
DE69505374 (=W095/34292)公開了包含各種生物活性物質(zhì)如乳糖酶和微生物的微粒，其中所述微粒帶腸溶包衣。意圖將經(jīng)包衣的微?；烊胧称啡缒讨破分?。作為微生物的實例，該專利提到了嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌。第3頁討論了乳糖不耐癥，并提到了乳糖酶。該專利中有含乳糖酶的包衣顆粒的實例，也有含嗜酸乳桿菌的包衣顆粒實例。然而，該專利并未公開乳糖酶與嗜熱鏈球菌或保加利亞乳桿菌組合使用，也并沒有提供包含嗜熱鏈球菌或保加利亞乳桿菌的包衣顆粒的實例。EP1112002公開了給予動物的奶粉。這種奶粉包含了乳糖酶，加入乳糖酶是為了預防動物出現(xiàn)乳糖不耐癥的癥狀。該奶粉還可包含益生菌微生物(參見第3頁)。嗜熱鏈球菌在列舉的微生物中，而保加利亞乳桿菌則不在列舉的微生物中。然而，該專利并沒有提供包含益生菌微生物以及乳糖酶的奶粉的實例。W096/06924 (=DE 69535290)公開了一種通過將含嗜熱鏈球菌的培養(yǎng)基發(fā)酵，生產(chǎn)富含低聚半乳糖和β_半乳糖苷酶(乳糖酶)的發(fā)酵制品的方法。第12頁聲稱，患有乳糖缺乏癥的患者可以耐受這種產(chǎn)品。該專利似乎并未公開添加外源性乳糖酶，也似乎并未表明這種制品能夠用以預防或治療乳糖不耐癥或乳糖酶缺乏癥。US2008/0213320 (Eisenstein Mayer)公開了用于治療胃食管反流病的組合物(特別是，其可為片劑或膠囊)，所述組合物包含至少以下三種成分中的兩種(I)消化酶；(2)益生菌；(3)甜菊。乳糖酶在列舉的消化酶中。嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌均列在益生菌中，但是并未聲明是優(yōu)選的。該專利提供了一個實例，并且其包含了乳糖酶以及7種其它消化酶，但是，它還包含6種益生菌種，其中未包含嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌。該專利未提到治療或預防乳糖不耐癥或乳糖缺乏癥。US2009/110674 (Loizou Nicos)公開了健康食品增補劑(supplement),所述增補劑包含選自尤其是礦物質(zhì)、酶、維生素、植物提取物、選定益生菌和氨基酸等的50多種不同的活性成分。第3頁描述了一種包含50多種成分的組合物，包含乳糖酶(5mg)和保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus) (2. 5mg,包括雙歧桿菌)。在第12頁,乳糖酶被描述為用于水解奶中乳糖的必要成分，并且提出，缺乏乳糖酶會引發(fā)乳糖不耐癥。這些組合物被描述為覆蓋一般健康問題的萬用藥，而并不是針對任何一種疾病或癥狀。US2008/0260708關注用于“使人體化學正?；钡慕M合物，并且意圖作為促進良好健康的萬用藥。這些組合物必須包含特別是(inter alia)消化酶、可溶和不溶性纖維、瀉藥、一種或以上益生菌、蛋白酶、脂肪酶、各種礦物質(zhì)及各種中藥和植物提取物。這些組合物并非專門針對預防或治療乳糖不耐癥或乳糖酶缺乏癥的癥狀。消化酶可包括乳糖酶，而益生菌酶可包括保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌。US6008027 (Langner)公開了用于治療乳糖酶缺乏癥的含產(chǎn)乳糖酶的微生物的膠囊。雖然提到了保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌，但是，示例的組合物僅包含嗜酸乳桿菌。US6008027未公開包含外源性乳糖酶。Langner膠囊的基本特點是其包覆在腸溶性聚合物中，該聚合物能夠避免其在胃中的酸性條件下釋放，而在腸內(nèi)降解以釋放出微生物。US6410018、US6428786、US6562338 和 US6562339 (全部為 Eisenhardt 等人)每個都公開了用于治療乳糖不耐癥的組合物，包括最佳工作pH范圍為3 - 6的第一乳糖酶及最佳PH范圍為6-8的第二乳糖酶。第二乳糖酶有一腸溶包衣，以防止在胃內(nèi)過早降解。這些文件中均未提到在所述的組合物、方法和工藝中使用乳酸菌。
Guarner 等人在 Brit. J. Nutrition (《英國營養(yǎng)學雜志》)，93 (2005)，783-786 頁中公開了酸奶細菌嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌均具有高的乳糖酶活性，以及酸奶改善了乳糖的消化并消除了乳糖不耐癥的癥狀。然而，Guarner等的文章中并未提到可添加外源性乳糖酶或提到這樣做有任何益處。此外，Guarner等的文章中沒有提供任何證據(jù)證明，食用含嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌的酸奶將對食用了其它乳制品(如未發(fā)酵奶和冰淇淋)的乳糖吸收不良者的乳糖消化有任何效果。雖然食用酸奶可以為某些喜歡喝酸奶的乳糖吸收不良者提供一般的好處，但是，許多人不喜歡酸奶的口感和質(zhì)地。因此，含活細菌培養(yǎng)物(如嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌)的酸奶并不能為乳糖吸收不良和乳糖不耐癥的問題提供一種通用的解決方案。Guarner等(參見上文)強調(diào)了要獲得任何有益效果時采用活培養(yǎng)物的重要性。如果酸奶經(jīng)過加熱處理，則這些益處將會消失。Guarner等未提供證據(jù)表明在非乳制品培養(yǎng)基中給予休眠細菌(如凍干細菌)能夠為乳糖不耐癥患者提供任何益處。根據(jù)解決乳糖不 耐癥問題的W02004/089290 (Pharmachem)的公開內(nèi)容，使用脫水細菌并不可取。例如，在W02004/089290的第2頁，它聲明“也可以獲得凍干的，即冷凍干燥的益生菌微生物。凍干細菌處于逆境(abiotic)狀態(tài)。為了使其恢復活力，需要在服用前濕潤微生物，由于許多細菌在重新水化后無法存活，因此，這是不利的。此外，存活的微生物(如果有的話)也不是立即具有代謝活性，并且無法在胃內(nèi)極端的酸性條件下存活”。因此，根據(jù)W02004/089290，使用干燥細菌并不能提供一種進一步的方法。Hove等在Amer. J. Clin. Nutr.(《美國營養(yǎng)學雜志》)1994，59:74-79頁上描述了在乳糖吸收不良患者身上開展的實驗，其中患者服用含有凍干混合乳酸菌(含雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌)的膠囊。Hove等得出結論含有凍干乳酸菌的膠囊并不能緩解乳糖吸收不良的癥狀(即腹部絞痛、腹瀉和“腹中積氣(meteorism)”)，也沒有增強乳糖在乳糖吸收不良患者小腸中的水解。因此，從上文討論的公開內(nèi)容來看，仍然需要一種有效產(chǎn)品，其使乳糖不耐癥患者能夠食用含乳糖食品一而不是被某些患者較好地耐受的含活細菌的酸奶一且不出現(xiàn)通常與乳糖不耐癥有關的癥狀。因此，比僅含乳糖酶的制劑更可靠和/或效果更好的制劑將能滿足目前許多乳糖不耐癥患者的急切需求，也意味著乳糖不耐癥營養(yǎng)選擇方面相當大的改善和巨大的進步。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種更有效的的制劑，用于治療或預防乳糖不耐癥和乳糖酶缺乏癥的癥狀，以及即使患者患有乳糖不耐癥，也能使他們能夠食用含乳糖的食品。此夕卜，本發(fā)明的一個目的是使乳糖不耐癥患者能夠食用目前因乳糖含量而不能食用的食品。此外，本發(fā)明的一個目的是提供一種能夠預防、減輕或消除攝入含乳糖食品或含乳糖物質(zhì)后出現(xiàn)的乳糖不耐癥癥狀。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，乳糖吸收不良患者服用干燥形式的德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus)和嗜熱鏈球菌(Steptococcusthermophilus)對于乳糖消化并不產(chǎn)生統(tǒng)計學上顯著的改善。這一發(fā)現(xiàn)與上文討論的W02004/089290 及 Hove 等的教導一致。但是，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，當乳糖吸收不良患者服用含乳糖酶和德氏乳桿菌保加利亞亞種和/或嗜熱鏈球菌的組合的非包衣干燥形式的組合物時，這種組合物與僅含乳糖酶的組合物相比，在改善乳糖消化方面更有效和更可靠得多，并且這種組合物能夠在更廣泛的患者中發(fā)揮其有益的性質(zhì)。因此，與前面討論的先有技術，尤其是US6008027 (Langner)和W02004/089290(Pharmachem)中所表明的相反,含乳糖酶和細菌德氏乳桿菌保加利亞亞種和/或嗜熱鏈球菌的組合的非包衣干燥形式的非乳制品組合物可以提供一種有效改善乳糖吸收不良患者的乳糖消化的方法。因此，本發(fā)明提供了一種有效制劑，其使乳糖不耐癥患者能夠食用含乳糖食品而不出現(xiàn)乳糖不耐癥癥狀。因此，在第一實施例(實施例I. I)中，本發(fā)明提供了一種用于治療乳糖不耐癥或因·乳糖酶缺乏而引發(fā)的疾病的組合物，其中所述組合物是非乳制品固體劑型，包含(a)在pH值3-6的范圍內(nèi)具有活性的乳糖酶；以及(b) 一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物選自德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌；其中乳糖酶(a)并非獲自所述的一種或以上微生物(b);以及其中所述的一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式。在進一步的實施例中，本發(fā)明提供I. 2根據(jù)實施例I. I使用的組合物，其中所述劑型不是腸溶包衣膠囊。I. 3根據(jù)實施例I. I使用的組合物，其中所述產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物并不帶腸溶包衣。I. 4根據(jù)實施例I. I至I. 3任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值2-6范圍、溫度37°C、1小時后仍然具有至少30%的活性。I. 5根據(jù)實施例I. I至I. 3任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值3-6范圍、溫度37°C、1小時后仍然具有至少30%的活性。I. 6根據(jù)實施例I. I至I. 3任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值4-6范圍、溫度37°C、1小時后仍然具有至少30%的活性。I. 7根據(jù)實施例I. I至I. 3任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值3-6范圍具有峰活性(peak activity)。I. 8根據(jù)實施例I. I至I. 3任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值4-6范圍具有峰活性。I. 9根據(jù)實施例I. I至I. 8任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)來自微生物，并且所述組合物基本上不含獲取該乳糖酶的微生物。I. 10根據(jù)實施例I. I至I. 9任一實施例使用的組合物，所述組合物包含德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌這兩種菌。I. 11根據(jù)實施例I. I至I. IO任一實施例使用的組合物，其中所述固體劑型選自膠囊、片劑、糖衣藥丸(dragees )、粉劑、丸劑和顆粒劑。I. 12根據(jù)實施例I. I至I. 11任一實施例使用的組合物，其中所述組合物是單位劑型(unit dosage form)。I. 13根據(jù)實施例I. 12使用的組合物，其中單位劑型選自膠囊、片劑、糖衣藥丸和含粉劑、丸劑或顆粒劑的小袋。I. 14根據(jù)實施例I. 13使用的組合物，其中所述單位劑型是膠囊。I. 15根據(jù)實施例I. I至I. 14任一實施例使用的組合物，其中所述組合物包含2000-12000FCC單位的乳糖酶(a)。I. 16根據(jù)實施例I. 15使用的組合物，其中所述組合物包含2000-6000FCC單位的
乳糖酶(a)。I. 17根據(jù)實施例I. I至I. 16任一實施例使用的組合物，其中所述組合物包含5000萬至100億菌落形成單位的保加利亞乳桿菌和5000萬至100億菌落形成單位的嗜熱 鏈球菌。I. 18根據(jù)實施例1.17使用的組合物，其中所述組合物包含I億至20億菌落形成單位的保加利亞乳桿菌和I億至20億菌落形成單位的嗜熱鏈球菌。I. 19根據(jù)實施例I. I至I. 18任一實施例使用的組合物，其中所述組合物基本上不含乳糖。I. 20根據(jù)實施例I. I至I. 19任一實施例使用的組合物，其中所述保加利亞乳桿菌是德氏乳桿菌 LB-VC18 (Lactobacillus delbrueckii LB-VC18)(保藏號DSM23320)。I. 21根據(jù)實施例I. I至I. 20任一實施例使用的組合物，其中所述嗜熱鏈球菌是嗜熱鏈球菌 ST-VC18 (Streptococcus thermophilus ST-VC18)(保藏號DSM23319)。I. 22根據(jù)實施例I. I至I. 21任一實施例使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)獲自曲霉屬(Aspergillus)菌種。I. 23根據(jù)實施例I. 22使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)獲自米曲霉(Aspergillus oryzae)或黑曲霉(Aspergillus niger)。I. 24根據(jù)實施例I. 23所述的組合物，其中所述乳糖酶(a)獲自米曲霉。I. 25根據(jù)實施例I. I至I. 24任一實施例使用的組合物，其中所述組合物不是含兩種或多種添加中藥提取物與外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的組合的組合物。I. 26根據(jù)實施例I. I至I. 25任一實施例使用的組合物，其中所述組合物包含(C)藥學上或飲食上可接受的載體或賦形劑。I. 27以下組合的用途(a)在pH值3-6時具有活性的乳糖酶；(b) 一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物選自德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌；其中乳糖酶(a)并非獲自所述一種或以上微生物(b);以及其中所述一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式；以及其中所述乳糖酶(a)和產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)如實施例I. I至
I.26中任一實施例所定義；用于制造治療乳糖不耐癥或因乳糖酶缺乏引發(fā)的疾病的非乳制品固體劑型組合物。I. 28用于治療乳糖不耐癥或因乳糖酶缺乏引發(fā)的疾病的方法，其中所述方法包括給需要這種治療的患者服用有效量的實施例I. I至I. 26任一實施例中所定義的組合物。I. 29選自膠囊、片劑、糖衣藥丸、粉劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型，其沒有包覆腸溶包衣，并且其包含實施例I. I至I. 26任一實施例中所定義的乳糖酶和一種或以上選自德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌的產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物；前提是所述組合物并非是含有兩種或多種添加中草藥提取物與外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的組合的組合物。I. 30根據(jù)實施例I. 29所述的固體劑型，其中所述固體劑型選自膠囊、片劑和糖衣藥丸。I. 31根據(jù)實施例I. 29所述的固體劑型，其中所述固體劑型選自粉劑、丸劑和顆粒齊U，以及其中所述粉劑、丸劑和顆粒劑包含在小袋中。I. 32根據(jù)實施例I. 30所述的固體劑型，其中所述劑型是膠囊。
I. 33根據(jù)實施例I. 30所述的固體劑型，其中所述劑型是片劑。I. 34根據(jù)實施例I. 30所述的固體劑型，其中所述劑型是糖衣藥丸。
具體實施例方式根據(jù)下述說明和實例，本發(fā)明的其它實施例和方面將變得明顯。本發(fā)明的主題是一種能夠解決上文本申請介紹部分所述問題的制劑。所述制劑包含乳糖酶和微生物。所述微生物是乳酸菌，尤其優(yōu)選是德氏乳桿菌保加利亞亞種和/或嗜熱鏈球菌。本發(fā)明的乳糖酶指的是能夠?qū)⑷樘寝D(zhuǎn)化(分解)為葡萄糖和半乳糖的酶。本發(fā)明的乳酸菌尤其是那些通過其自身的微生物乳糖酶，能夠在人體或動物消化道內(nèi)代謝乳糖和/或釋放乳糖酶的微生物。本發(fā)明采用的微生物可優(yōu)選為凍干或噴霧干燥(優(yōu)選凍干)形式，以提供更長的保質(zhì)期和良好的加工性。以下任何時候提到保加利亞乳桿菌時，均指的是德氏乳桿菌保加利亞亞種。本發(fā)明的制劑可以在食用后將食品或食品漿(food pulp)中的乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。這意味著不再有乳糖提供給細菌代謝，所述細菌代謝以腸內(nèi)發(fā)酵為特征。因此，本發(fā)明的主題是一種制劑，所述制劑借助乳糖酶和微生物，降低人體內(nèi)或動物體內(nèi)乳糖的生物利用率，所述微生物優(yōu)選乳酸菌，尤其優(yōu)選保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌。因此，本發(fā)明的主題也是一種制劑，其借助乳糖酶和微生物，減少人體內(nèi)或動物體內(nèi)或腸道內(nèi)細菌可以利用的乳糖量，所述微生物優(yōu)選乳酸菌，尤其優(yōu)選保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌。本發(fā)明的主題進一步是一種用于乳糖不耐癥的制劑，所述制劑包含乳糖酶以及微生物，所述微生物優(yōu)選乳酸菌，尤其優(yōu)選保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌。本發(fā)明進一步的主題是乳糖酶以及微生物在乳糖不耐癥的情況中的用途，所述微生物優(yōu)選乳酸菌，尤其優(yōu)選保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌。乳糖酶是一種能夠?qū)⑷樘寝D(zhuǎn)化為葡萄糖和半乳糖的酶。雖然乳糖酶并不從小腸吸收，但是，葡萄糖和半乳糖是單糖，它們?nèi)菀紫涂焖傥铡Ｄ壳坝糜诳诜猛镜娜樘敲钢苿┲惺褂玫娜樘敲甘撬^的酸性乳糖酶(有時稱為酸乳糖酶)，大多數(shù)是采用米曲霉生產(chǎn)的。在食品食用后，酸性乳糖酶在胃內(nèi)的酸性環(huán)境中非常有效。在PH大約3-6時，酸性乳糖酶穩(wěn)定且具有活性。在本申請意義上，術語“穩(wěn)定”指的是在37°C和pH3-6下經(jīng)歷I小時后，酸性乳糖酶的活性仍然保留了至少30%。本申請中提到活性的30%指的是在規(guī)定的一小時期限后，按照Food Chemical Codex (《食品化學法典》)(FCC)第六版所述酸性乳糖酶的測定方法測試的該酶的殘余活性。在pH值超過6.5 (小腸內(nèi)即是如此)時，酸性乳糖酶穩(wěn)定但不再非常有活性。因此，酸性乳糖酶在小腸內(nèi)不再發(fā)揮出令人滿意的效果。因此，目前，乳糖酶制劑必須包含在胃內(nèi)將食用的食品中含有的乳糖量盡可能分解所必須的盡可能多的乳糖酶。人們還沒有發(fā)現(xiàn)在低PH值時穩(wěn)定且具有活性，并且在胃的酸性環(huán)境中和小腸內(nèi)均有效的乳糖酶，商業(yè)上也無法提供這種乳糖酶。由于胃內(nèi)滯留時間在很大程度上根據(jù)消耗的食品及消耗的食品的量而變化，因此，對于使用者來說，乳糖酶制劑的正確劑量常常是一個問題，因此，如上文所述，使用者對這些產(chǎn)品的效果通常并不滿意。增加每劑量單位乳糖酶的活性有所幫助，但是，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，效果及效果可靠性的增加并不與每劑量單位乳糖酶活性的增加成比例。由于酸性乳糖酶在空的胃中普遍存在的非常低的PH值(1-2. 5)條件下快速失活，因此，攝入時間也非常關鍵。因此，如果使用者在進餐前過早(如10分鐘前)空腹食用乳糖酶制劑，則該酶可能在食品攝入時已經(jīng)不可逆地失去了活性，從而不再能夠用于要求的乳糖分解， 這樣，在這種情況下，每劑量單位乳糖酶的活性沒有起到作用。某些乳酸菌包含一種在小腸內(nèi)普遍存在的pH值條件下具有活性且穩(wěn)定的乳糖酶。所述乳酸菌-乳糖酶被細菌外殼保護，至少部分(或在某種程度上)可以通過胃進入到小腸內(nèi)，在小腸內(nèi)可以產(chǎn)生兩種有利效果。一方面，當細菌外殼被小腸內(nèi)的消化液破壞時，微生物乳糖酶可以被釋放出來，這樣，在胃內(nèi)未被酸性乳糖酶分解的乳糖可以被乳酸菌釋放的這種乳糖酶分解。另一方面，保持完好的細菌可以代謝乳糖，并從而也進一步減少小腸內(nèi)的乳糖量。某些乳糖不耐癥患者對于發(fā)酵乳制品的耐受能力比未發(fā)酵乳制品更強，這一點部分可以歸因于乳酸菌的乳糖酶含量。然而，大部分乳糖不耐癥患者也無法毫無問題地食用發(fā)酵乳制品。在給不耐受乳糖的人服用乳酸菌的研究中，結果表明，他們在與乳糖消化有關的方面并不具有良好而可靠的效果。大量不同的菌株均顯示出這種結果，以范圍廣泛的不同組合使用時也顯示出這樣的結果。因此，在乳糖不耐癥的情況中使用只包含乳酸菌的制劑并沒有什么意義(參見前文提到的Hove等的文章)。而為了對身體健康帶來有利影響，目前人們常嘗試向乳制品和其它食品中添加到達大腸時仍保持完好的乳酸菌，在本發(fā)明中，優(yōu)選食用的乳酸菌盡可能多的在小腸中被破壞，這樣，它們的微生物乳糖酶在小腸內(nèi)被釋放出來，從而可以用于乳糖分解。通過添加此類乳酸菌，可以增加乳糖酶制劑的有效性和/或可靠性。一方面，此類制劑能夠在胃里分解乳糖(通過酸性乳糖酶)，另一方面，能夠在小腸內(nèi)分解胃內(nèi)未分解的乳糖(通過乳酸菌-乳糖酶)。因此，通過添加乳酸菌，延長了制劑的效果，達到更大的有效性和/或效果可靠性，這是單純增加每劑量單位乳糖酶活性無法達到的，或者至少是無法如此符合成本效益地達到。因此，除乳糖酶之外，向本發(fā)明制劑中添加在小腸內(nèi)釋放其自身活性足夠的且穩(wěn)定的乳糖酶和/或在小腸內(nèi)代謝乳糖酶的此類微生物是非常有利的。人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，乳酸菌保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌尤其很好地適合這種應用，因為憑借保護微生物乳糖酶的完好無損的細菌殼，這些微生物絕大多數(shù)，至少部分，在胃內(nèi)存活，但是，絕大多數(shù)，至少部分，無法完好無損地在小腸內(nèi)存活，從而在相關程度上在小腸內(nèi)釋放出它們的微生物乳糖酶。以下乳酸菌也值得探討，例如德氏乳桿菌(Lactobacillus delbrueckii)(非保加利亞乳桿菌的亞種)、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)、干釀乳桿菌(Lactobacilluscasei)、副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)、短乳桿菌(lactobacillus brevis)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、羅伊氏乳桿菌(Lactobacillus rheuteri)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、乳酸片球菌(Pediococcos acidilacti)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)、長雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)、嬰兒雙岐桿菌(Bifidobacterium infantis)。這類組合制劑可以以兩種獨立的劑量單位形式使用，如以兩種獨立的片劑或膠囊形式，其中一種包含乳糖酶，另一種包含乳酸菌。本發(fā)明意義上的食品指的是2002年I月28日歐洲議會和理事會(EuropeanParliament and of the Council)第178/2002號條例(EC)意義上的食品。本發(fā)明意義上的食品包括，尤其是用于特定營養(yǎng)用途的食品、用于特殊醫(yī)療目的的食品、食品增補劑、膳食增補劑和食品添加劑?！け景l(fā)明意義上的食品增補劑指的是2002年6月10日歐洲議會和理事會2002/46/EC指令意義上的食品增補劑。本發(fā)明意義上用于特定營養(yǎng)用途的食品指的是2009年5月6日歐洲議會和理事會關于旨在用于特定營養(yǎng)用途的食品的2009/39/EC指令意義上的用于特定營養(yǎng)用途的食品O本發(fā)明意義上的特殊醫(yī)療用途的食品指的是1999年3月25日委員會關于用于特殊醫(yī)療目的的食品的1999/21/EC指令意義上的用于特殊醫(yī)療目的的營養(yǎng)食品。本發(fā)明提供用于醫(yī)藥，例如，作為藥物組合物的乳糖酶和乳酸菌的組合，尤其是與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合。因此，本發(fā)明的主題還是一種用于醫(yī)療程序(尤其是用于治療處理人體或動物體的程序)，由乳糖酶與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌組合的產(chǎn)品，或者包含這些物質(zhì)以及一種或以上其它活性成分的產(chǎn)品。本發(fā)明的主題還是一種用于醫(yī)藥的組合物，其包含乳糖酶及一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物選自保加利亞乳桿菌、德氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、短乳桿菌、植物乳桿菌、唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、乳酸乳桿菌(Lactobacillus lactis)、乳酸片球菌、乳雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嬰兒雙岐桿菌和嗜熱鏈球菌，據(jù)此，乳糖酶優(yōu)選不源自前面提到的微生物。在本發(fā)明意義上，藥物組合物是2004/27EC指令版本的2001/83EC指令意義上的產(chǎn)品。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種包含乳糖酶和乳酸菌的組合，尤其是乳糖酶和保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合的食品。此外，根據(jù)本發(fā)明，提供了一種包含其量能夠有效地將乳糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖和半乳糖的乳糖酶及乳酸菌組合的食品，尤其是乳糖酶與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌組合的食品。還可以采用一種方法來生產(chǎn)食品，在所述方法中，將乳糖酶與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合添加到食品中，使乳糖酶和乳酸菌在食品食用后主要地(predominantly)開始發(fā)揮作用。此類食品的味道實際上與未處理的食品一樣，并且，由于減少了食用后存在的乳糖的含量，因此，其適合乳糖不耐癥患者使用。在本申請意義上，“主要地”指的是食品食用后酶和乳酸菌分解乳糖效果的至少50%被發(fā)揮出來?；蛘?，在食品食用后，可以發(fā)揮(a)至少90%，(b)至少80%，(c)至少70%或(d)至少60%的效果。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種包含乳糖酶和乳酸菌的組合的醫(yī)療器械，尤其是包含乳糖酶與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合的醫(yī)療器械。因此，本發(fā)明的主題還是一種醫(yī)療器械，所述醫(yī)療器械包含乳糖酶與乳酸菌，尤其是與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合，或者還包含一種或以上其它活性成分。本專利申請意義上的醫(yī)療器械指的是2007/47/EC指令修訂的93/42/EEC指令版本意義上的醫(yī)療器械。本發(fā)明的各個方面將在下面進一步描述。只要下文提到制劑，其總是指的是食品、醫(yī)療器械或藥物組合物。在醫(yī)療-制藥領域，尤其是在人體或動物乳糖不耐癥方面，目前未見有人將乳糖酶，特別是酸性乳糖酶，更特別是獲自曲霉菌屬亞種(Aspergillus spp)的酸性乳糖酶,甚 至更特別是獲自米曲霉的酸性乳糖酶，與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌組合使用。因此，本發(fā)明在此處的描述是這些物質(zhì)的組合的首次醫(yī)療說明。本發(fā)明的制劑可以在餐前、餐中或餐后口服，從而它們可以對食品漿中的乳糖發(fā)揮其分解作用。優(yōu)選地，本發(fā)明的制劑在餐前、就餐期間或餐后即時服用。本發(fā)明的制劑可包含酶和乳酸菌，而不包含其它添加劑。不過，本發(fā)明的制劑優(yōu)選進一步包含藥學上可接受和/或食品上可接受的添加劑，如增量劑(extender)、粘結劑、穩(wěn)定劑、防腐劑和調(diào)味劑等。此類添加劑是生產(chǎn)藥物組合物、醫(yī)療器械、食品，用于特定營養(yǎng)用途食品、用于特殊醫(yī)療目的的食品、食品增補劑、膳食增補劑和食品添加劑中經(jīng)常使用和眾所周知的，本領域的專家知道多少用量的哪些添加劑適用于特定的表現(xiàn)形式。本發(fā)明制劑尤其優(yōu)選包含添加劑磷酸氫鈣、改性淀粉、微晶纖維素、麥芽糊精和/或膳食纖維(fibersol)。本發(fā)明的制劑還可在食用前添加到食品中。它們甚至可在生產(chǎn)階段添加到食品中，其目的是在食品食用后至少部分(但優(yōu)選絕大多數(shù))發(fā)揮其作用。例如，這可以通過微膠囊實現(xiàn)。采用這種方式，以尤其有利的方式降低了食品中可利用的乳糖含量。因此，含乳糖酶與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合的制劑優(yōu)選在其進入人體或動物消化道之前，特別是進入胃或小腸之前，主要地不釋放這些物質(zhì)。因此，例如，本發(fā)明可用在奶和乳制品的生產(chǎn)中，所述奶制品如凝乳、酸奶、奶油、奶酪、布丁、乳飲料、混有奶的飲料和冰淇淋，以及用于生產(chǎn)，例如，巧克力和巧克力制品、焙烤制品(如餅干和蛋糕)、面包、糖果、含乳糖的飲料、含乳糖的醬(如奶油醬)和含乳糖的甜味劑。對于煮、烘烤或煎炸的菜肴，本發(fā)明的制劑可以，例如，在其冷卻后混入其中或撒在這些菜肴上面。就奶和乳制品而言，根據(jù)本發(fā)明，它們可包含酸性乳糖酶及至少一種本申請列出的微生物，優(yōu)選保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌，但并非嗜酸乳桿菌。本發(fā)明的制劑還可添加到食品中，以在食用后對來源于其它食品的乳糖發(fā)揮其作用。這種情況的實例是在麥片中加入本發(fā)明的制劑，從而在食用與牛奶一起制備的麥片后，能夠降低牛奶中的乳糖含量，而不會有損牛奶的味道。本發(fā)明的主題還是除其它活性成分之外還包含乳糖酶與保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌的組合的制劑。本發(fā)明可以配制為適合指定給藥途徑的任何形式。對于口服，本發(fā)明制劑優(yōu)選配制成膠囊(有包衣或無包衣)、片劑(有包衣或無包衣)、糖衣藥丸(有包衣或無包衣)、含有包衣或無包衣藥丸、顆粒劑或微-或迷你片劑的膠囊；由有包衣或無包衣粉劑、丸劑、微-或迷你片劑壓成的片劑。可以用于口服的還有包衣或非包衣膠囊(gel cap)(軟明膠膠囊)，或液體形式，如溶液、滴劑、懸液或凝膠。本發(fā)明還可以采用干或濕口服補充劑的形式。本發(fā)明制劑配制為粉末尤其適合混合到食品中。粉末可撒到食物上或可以混到醬中或飲料中。如果作為散裝粉末提供的制劑以單一劑量包裝，如包裝在單個袋中，或者以藥劑計量器(dosingapparatus)的形式提供,貝U尤其適合。本發(fā)明制劑尤其優(yōu)選配制為口服的粉末或膠囊中的顆粒劑或丸劑，或片劑。本發(fā)明制劑或組合物通常包含至少一種藥學上可接受的或飲食上可接受的載體或賦形劑。對于口服，活性成分可包含在可以接受的賦形劑和/或載體中。術語“可接受的載體”涉及將活性成分輸送到其目標位置，并且不會對接受者、人或動物造成明顯傷害的載·體。然而，載體的準確形式并不重要。例如，載體可以是裝有活性成分的膠囊殼、小袋或基質(zhì)。相對于本發(fā)明制劑，載體和/或賦形劑的總量優(yōu)選是組合物的5-99. 9%重量，更優(yōu)選是10-95%重量，甚至更優(yōu)選是25-90%重量。合適的賦形劑和/或載體包括麥芽糊精、碳酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸三鈣、微晶纖維素、右旋糖、米粉、硬脂酸鎂、硬脂酸、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧基乙酸淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮(crospovidone)、鹿糖、植物膠、乳糖、甲基纖維素、聚維酮(povidone)、羧甲基纖維素、玉米淀粉、改性淀粉、膳食纖維素、明膠、羥丙基甲基纖維素等(包括它們的混合物)。優(yōu)選的載體包括碳酸鈣、硬脂酸鎂、麥芽糊精、磷酸氫鈣、改性淀粉、微晶纖維素、膳食纖維素、明膠、羥丙基甲基纖維素及它們的混合物。采用常用方法，將各種成分與賦形劑和/或載體混合，形成要求的形式。根據(jù)本發(fā)明，用于口服的表現(xiàn)形式，如片劑或膠囊，可包覆耐低PH值的包衣或耐胃液的包衣。也可以使用不耐低pH值,但是在低pH值時會延緩釋放出各種酶或各種乳酸菌的包衣。還可以將本發(fā)明的制劑制成包衣(參見上文)丸劑、顆粒劑或微-或迷你片劑，其可裝到非包衣膠囊內(nèi)或可壓制成非包衣片劑。合適的包衣有，例如，醋酸鄰苯二甲酸纖維素(cellulose acetate phthalate)、纖維素衍生物、蟲膠、聚乙烯吡咯烷酮衍生物、丙烯酸、聚丙烯酸衍生物和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)，如Eudragit (來自R hm GmbH,Darmstadt),尤其是Eudragit FS30D和Eudragit L30D-55。通過在包衣制劑中加入，例如，氫氧化鈉溶液，還可以影響這種包衣制劑的耐PH性能。有關配方和給予方法進一步的詳細情況可參見第21版的《(Remington:TheScience & Practice of Pharmacy(雷明頓制藥科學與實踐)》，2005 年由美國 Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore 出版,以及 Bauer教授的《Lehrbuch der Pharmazeutischen Technologie (醫(yī)藥科技教材)》，18 版，2006 年由 Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft (ISBN3804-72222-9)出版，以上文件通過引用結合到本文中。雖然根據(jù)本發(fā)明，此類乳酸菌優(yōu)選通過在胃內(nèi)存活而盡可能保持細菌殼完好的方式使用，但是，對乳酸菌施加耐胃液包衣是有利的，或者將它們配制為，例如，帶耐胃液的包衣的膠囊、糖衣藥丸、片劑、丸劑、顆粒劑、或晶體是有利的，這樣，盡可能使大部分細菌到達小腸或至少到達十二指腸(小腸的上部)。乳酸菌還可以包含在，例如，帶耐胃液包衣的丸齊U、顆粒劑中，或者耐胃液包衣可以應用到乳酸菌粉末(例如，采用噴霧程序)上。丸劑、顆粒劑或粉末可以裝到無包衣的膠囊中。這些還可以包含預期在胃內(nèi)釋放的乳糖酶。防止乳酸菌受胃酸影響的包衣非常有好處，尤其是如果使用了乳酸菌的情況下，如果不采用這種包衣，則其細菌殼將在胃內(nèi)被破壞，這樣，由于例如胃內(nèi)PH值低，它們的微生物乳糖酶在胃內(nèi)將會失活。用于本發(fā)明的其它合適的藥學上可以接受的和/或飲食上可以接受的載體或賦形劑包括水、礦物油、乙二醇、丙二醇、羊毛脂、硬脂酸甘油酯、失水山梨醇硬脂酸酯、肉豆蘧酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、丙酮、甘油、卵磷酯、膽酸鈉或乙醇鈉，但是并不限于這些載體或賦形劑。用于本發(fā)明的組合物還可以包含至少一種共乳化劑，所述共乳化劑包括氧乙烯化失水山梨醇單硬脂酸酯、脂肪醇，如硬脂醇或十六醇，或脂肪酸和多元醇的酯，如硬脂酸甘油酯，但并不限于這些。本發(fā)明采用的制劑優(yōu)選以穩(wěn)定化的形式提供。一般說來，本發(fā)明可以采用的穩(wěn) 定化方法和程序包括本領域已知的穩(wěn)定化學品或生物材料的任何方法和所有方法，包括，例如，加入化學試劑、基于溫度調(diào)節(jié)的方法；基于輻射的方法或以上方法的組合。除其它之外，本發(fā)明可采用的化學試劑包括防腐劑、酸、堿、鹽、抗氧化劑、增稠劑、乳化劑、膠粘劑(gelatiniser)以及它們的混合物。酸性乳糖酶是商業(yè)上可以獲得的(如日本的Amano和荷蘭的DSM)，并且通常借助微生物米曲霉以微生物方式進行制備。保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌也是商業(yè)上可以獲得的(例如，丹麥的Danisco或丹麥的Christian Hansen)。然而,本發(fā)明并不限于目前商業(yè)上可以提供的酸性乳糖酶，而是一般涉及到各種能夠與乳酸菌一起將乳糖(專門地或非專門地)轉(zhuǎn)化為葡糖糖和半乳糖的酶，所述乳酸菌能夠在小腸內(nèi)降解乳糖，即，通過釋放乳糖酶或通過乳糖的細胞內(nèi)代謝。根據(jù)本發(fā)明，乳糖酶的活性以FCC單位定義(《食品化學法典(Food ChemicalCodex)》單位)。在37°C、pH4. 5時,在《食品化學法典》第六版描述的條件下,一個酶單位每分鐘釋放一微摩爾鄰硝基苯酚(參見法典中完整的測量說明、測試描述、活性計算)。采用根據(jù)此定義測定的酶活性時，本發(fā)明的制劑每劑量單位乳糖酶應包含500-50, OOOFCC單位，優(yōu)選包含2000-20，000FCC單位，以及尤其優(yōu)選包含3000-12，000FCC單位。如果本發(fā)明制劑中包含的乳酸菌的量在下面標明(以菌落形成單位表示，簡稱為Cfu)，它們指的是本發(fā)明制劑保質(zhì)期結束時仍然存活的乳酸菌的量(單位cfu)。值得注意的是，包含乳酸菌的制劑優(yōu)選儲存在干燥陰涼的地方。因此，為了使乳酸菌存活足夠長的時間，將本發(fā)明的制劑儲存在氣密，以及優(yōu)選不滲水-汽，配備干燥劑(如在蓋中)(如硅膠或分子篩)的容器(如玻璃或鋁制容器)中是有利的。乳酸菌的量以Cfu (菌落形成單位)表示。本發(fā)明的制劑每種乳酸菌菌株應包含1000萬至2000億(10億=1000百萬)cfu，優(yōu)選5000萬至100億cfu，以及尤其優(yōu)選I億至20億cfu (如I億至10億cfu)。若除乳糖酶之外，組合制劑包含保加利亞乳桿菌和/或嗜熱鏈球菌，則一個劑量單位應該包含1000萬至2000億cfu保加利亞乳桿菌,優(yōu)選5000萬至100億cfu保加利亞乳桿菌，以及尤其優(yōu)選I億至20億Cfu (如5億至20億Cfu)保加利亞乳桿菌。除保加利亞乳桿菌之外，本發(fā)明制劑還可包含嗜熱鏈球菌，或以嗜熱鏈球菌代替保加利亞乳桿菌，其中本發(fā)明制劑每劑量單位應包含1000萬至2000億cfu嗜熱鏈球菌，優(yōu)選5000萬至100億cfu嗜熱鏈球菌，以及尤其優(yōu)選I億至20億cfu (如5億至20億cfu)嗜熱鏈球菌。已證明，本發(fā)明制劑每劑量單位包含2000-12000FCC單位(例如2000-6000FCC單位)酸性乳糖酶、I億-100億Cfu (如I億至20億cfu)保加利亞乳桿菌和I億-100億cfu (如I億至20億cfu)嗜熱鏈球菌尤其有利。如果酸性乳糖酶與兩種菌株德氏乳桿菌LB-VC18(保藏號DSM23320，保藏日期:2010年2月11日)和嗜熱鏈球菌ST-VC18 (保藏號DSM23319，保藏日期2010年2月11日)結合使用，可以獲得尤其有利的結果。這兩種菌株保藏在德國 Braunschweig 的 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH (德國微生物菌種保藏中心)(German Collection of Microorganisms and CellCultures)。上文提到的較寬的劑量范圍可以由本發(fā)明的制劑可以應用于范圍寬廣的不同嚴重程度和較溫和的乳糖代謝障礙這一事實來解釋。人和/或動物患者對一定乳糖負荷有不·同程度的反應。除此之外，不同的劑量還歸因于這一事實根據(jù)各自消耗的食品，供給身體的乳糖量變化非常大。本發(fā)明的制劑每劑量單位可包含，例如，500-50，000FCC單位(例如500-30，000FCC單位)乳糖酶和1000萬Cfu - 2000億Cfu保加利亞乳桿菌和/或1000萬cfu_2000億cfu嗜熱鏈球菌。代替這兩種微生物或除這些微生物的一種或兩種之外，本發(fā)明的制劑在每一情況下還可包含1000萬cfu-2000億cfu的以下乳酸菌德氏乳桿菌(非保加利亞乳桿菌亞種)、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、干酪乳桿菌、副干酪乳桿菌、短乳桿菌、植物乳桿菌、唾液乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、乳酸乳球菌、乳酸片球菌、乳雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嬰兒雙岐桿菌。除此之外，合適的添加劑可以以要求的量使用。本發(fā)明可以用于醫(yī)療目的和非醫(yī)療目的，如作為藥物組合物、醫(yī)療器械或食品。本發(fā)明內(nèi)容中的術語“治療”應在廣泛意義上理解。在本申請的意義上，治療不僅指的是為疾病提供治療或治療疾病，而且還包括非常普遍地使用本發(fā)明的制劑或在人或動物乳糖不耐癥和乳糖酶缺乏癥方面(因為幾乎所有哺乳動物消化乳糖的能力在母乳喂養(yǎng)停止后均下降)使用本發(fā)明的制劑。因此，在本申請意義上，治療包括尤其是使用本發(fā)明的制齊U，或使用本發(fā)明的制劑以預防、消除、減緩、減輕由于乳糖或含乳糖食品攝入或通過其它物質(zhì)(如藥物組合物)在人體或動物消化道內(nèi)釋放乳糖而引起的(a)所有類型和嚴重程度的癥狀，(b)所有類型和嚴重程度的不適以及(C)所有形式的健康受損和疾病，或作為以上幾種情況的預防措施。此外，在本申請意義上，治療包括消除、減緩、清除、減輕、預防措施對抗與攝入乳糖或含乳糖食品有關或與人體或動物消化道內(nèi)其它物質(zhì)(如藥物組合物)釋放的乳糖有關的腹脹、脹氣、胃痛、腹部絞痛、急胃痛、腹瀉、水樣腹瀉、腸音、腹部痙攣、打嗝、惡心、嘔吐、氣脹、腸內(nèi)微生物不平衡或腸內(nèi)氣體產(chǎn)生量增加，或以上情況的預防。此外，在本申請意義上，治療包括消除、減緩、清除、減輕、預防措施對抗與攝入乳糖或含乳糖食品有關或與人體或動物消化道內(nèi)其它物質(zhì)(如藥物組合物)釋放乳糖有關或與乳糖消化不充分或乳糖吸收不良有關的任何類型的抑郁、頭痛、偏頭痛、濕疹、皮疹、食欲不振和體重減輕，以及以上情況的預防。此外，本發(fā)明意義上的治療包括減輕乳糖在人體或動物體內(nèi)的生物利用率，以及減少人體或動物體內(nèi)或人體或動物體內(nèi)腸道細菌可以利用的乳糖量。在本申請中，術語“治療”包括預防和治療。實例現(xiàn)在，將對本發(fā)明進行說明，但是，本發(fā) 明并不限于以下提到的這些實例。實例I月交囊組合物通過將來自米曲霉的乳糖酶與凍干的保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌混合而制備以下膠囊組合物。膠囊組合物A-規(guī)格I膠囊在每個獲自Capsugel B VBA, Bornem, Belgium的規(guī)格I明膠膠囊(體積O. 5ml)內(nèi)填充70mg乳糖酶(乳糖酶的活性是50，000FCC/g)、40mg凍干嗜熱鏈球菌(300億cfu/g)、30mg凍干保加利亞乳桿菌(500億cfu/g)和200mg磷酸氫隹丐。優(yōu)選的嗜熱鏈球菌菌株是嗜熱鏈球菌ST_VC18(保藏號DSM23319)，優(yōu)選的保加利亞乳桿菌菌株是德氏乳桿菌LB-VC18 (保藏號DSM23320)。月交囊組合物B-規(guī)格3膠囊在每個獲自Capsugel B VBA, Bornem, Belgium的規(guī)格3明膠膠囊內(nèi)(體積O. 3ml)填充70mg乳糖酶(乳糖酶的活性是50，000FCC/g)、30mg嗜熱鏈球菌(300億cfu/g)、20mg保加利亞乳桿菌(500億cfu/g)和IOOmg磷酸氫隹丐。膠囊組合物C -規(guī)格O膠囊在每個獲自Capsugel BVBA, Bornem, Belgium的規(guī)格2明膠膠囊(體積O. 68ml)內(nèi)填充150mg乳糖酶(乳糖酶的活性是50，000FCC/g)、IOOmg嗜熱鏈球菌(300億cfu/g)、50mg保加利亞乳桿菌(500億cfu/g)和250mg磷酸氫隹丐。膠囊組合物D -規(guī)格2膠囊在每個獲自Capsugel B VBA, Bornem, Belgium的規(guī)格3明膠膠囊(體積0. 37ml)內(nèi)填充IOOmg乳糖酶(乳糖酶的活性是100，000FCC/g)、50mg嗜熱鏈球菌(300億cfu/g)、30mg保加利亞乳桿菌(500億cfu/g)和IOOmg磷酸氫隹丐。實例2乳糖酶和乳酸菌的組合對乳糖吸收不良者乳糖消化的影響研究開展了乳糖酶、凍干乳酸菌以及乳糖酶和乳酸菌的組合對乳糖吸收不良者乳糖消化影響的對比研究。此項研究由安慰劑對照的、隨機的、雙盲交叉研究組成，涉及24名乳糖吸收不良患者。一開始，研究招募了 30名受試者，但是，發(fā)現(xiàn)其中6名不是乳糖吸收不良患者，因此，在結果分析中排除了這6名受試者的結果。此項研究包括進入體檢(entry examination)和五個實驗日，每個實驗日間隔兩周的4個清洗期(wash-out period)。在此項研究期間,要求參與者不改變飲食習慣,并且避免服用維生素、礦物質(zhì)和其它增補劑。在每個實驗日的開始，在禁食過夜后，采集每個受試者的第一呼吸樣品。然后，每名受試者按隨機的順序攝入五種測試制備物(Pr印aration)中的一種制備物。
這些測試制備物以外觀相同的膠囊提供，其中研究參與者每一試驗餐服用一個膠囊以及喝150ml牛奶，牛奶中加入了 5g乳糖，得到含有大約12. 5g乳糖的乳糖強化奶。這五種測試制備物的組合物如下制備物(a):含IX IO9Cfu嗜熱鏈球菌以及IX IO9Cfu德氏乳桿菌保加利亞亞種的膠囊。制備物(b):含來自米曲霉的3300FCC酸性乳糖酶制備物(C):含來自米曲霉的9000FCC酸性乳糖酶的膠囊制備物(d):含3300FCC酸性乳糖酶以及I X IO9Cfu嗜熱鏈球菌和IX IO9Cfu德氏乳桿菌保加利亞亞種的膠囊(測試制備物(a))·
制備物(e):磷酸氫鈣(安慰劑)。測試制備物(a)和(d)中的乳酸菌是實例I及前文24頁描述的菌株ST-VC18和LB-VC18。測試制備物(b)是 Lactrase 3300 (Pro Natura Gesellschaft fur gesundeErnahrung mbH, Bad Vilbel, Germany),測試制備物(c)是 Lactrase Plus 9000 (ProNatura Gesellschaft fur gesunde Ernahrung mbH, Bad Vilbel, Germany),測試制備物(d)是 Lactrase 3300 (Pro Natura),其中加入了乳酸菌。研究參與者的隨機化以及測試制備物的包裝和編碼由未參加此項研究的對象執(zhí)行。給予的乳糖劑量(12. 5g)低于典型的乳糖吸收不良測試(50g)，但是更接近正常攝入食品的乳糖含量。在典型的乳糖吸收不良測試中(采用50g乳糖進行)，H2峰濃度達到20ppm或更高則被視為乳糖吸收不良的證明。然而，因為本研究中給予的乳糖劑量較少，所以采用較低的閾值來確定參與者是否為乳糖吸收不良者。因此，采用安慰劑時，參與者4峰濃度達到13ppm或更高的則視為乳糖吸收不良者，獲自這些參與者的結果被納入此項研究中。測試制備物對乳糖消化的影響采用H2-呼吸測試進行測量,此試驗采用QuinTronInstruments, Milwaukee, WI 53215，USA 的 MicroLyzer Model 12i 進行。當碳水化合物被結腸內(nèi)的細菌發(fā)酵時，大約90%的群體(population)會放出氫氣。因此，呼出氣體中的氫氣含量提供了指示結腸中發(fā)酵乳糖量的良好指標，并且也是小腸中乳糖酶缺乏的良好指標。采集3小時的呼吸樣品。選擇H2峰濃度作為乳糖消化的參數(shù)。每個受試者及五
種制備物中的每一種制備物的H2峰濃度如下表所示。
權利要求
1.一種用于治療乳糖不耐癥或因乳糖酶缺乏引起的疾病的組合物，其中所述組合物是非乳制品固體劑型，包含 (a)在pH值3-6時具有活性的乳糖酶；及 (b)一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物選自德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus)和嗜熱鏈球菌(Steptococcusthermophilus)； 其中所述乳糖酶(a)并非獲自所述的一種或以上的微生物(b);其中所述的一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式。
2.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其中所述劑型不是腸溶包衣膠囊。
3.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其中所述產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物并不帶腸溶包衣。
4.根據(jù)權利要求I至3任一項使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值3-6的范圍內(nèi)具有峰活性。
5.根據(jù)權利要求I至4任一項使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)獲自微生物，其中所述組合物基本上不含獲得該乳糖酶的微生物。
6.根據(jù)權利要求I至5任一項使用的組合物，其中所述組合物包含德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌這兩種細菌。
7.根據(jù)權利要求I至6任一項使用的組合物，其中所述固體劑型選自膠囊、片劑、糖衣藥丸、粉劑、丸劑和顆粒劑。
8.根據(jù)權利要求I至7任一項使用的組合物，其中所述組合物是單位劑型。
9.根據(jù)權利要求8使用的組合物，其中所述單位劑型選自膠囊、片劑和糖衣藥丸。
10.根據(jù)權利要求9使用的組合物，其中所述單位劑型是膠囊。
11.根據(jù)權利要求I至10任一項使用的組合物，其中所述組合物包含2000-12000FCC酶單位的乳糖酶(a)。
12.根據(jù)權利要求I至11任一項使用的組合物，其中所述組合物包含5000萬至100億菌落形成單位的保加利亞乳桿菌和5000萬至100億菌落形成單位的嗜熱鏈球菌。
13.根據(jù)權利要求I至12任一項使用的組合物，其中所述組合物基本上不含乳糖。
14.根據(jù)權利要求I至13任一項使用的組合物，其中所述保加利亞乳桿菌是德氏乳桿菌 LB-VC18 (保藏號DSM23320)。
15.根據(jù)權利要求I至14任一項使用的組合物，其中所述嗜熱鏈球菌是嗜熱鏈球菌ST-VC18 (保藏號DSM23319)o
16.根據(jù)權利要求I至15任一項使用的組合物，其中所述乳糖酶(a)獲自曲霉屬菌種。
17.根據(jù)權利要求16使用的組合物，其中所述曲霉屬菌種是米曲霉。
18.根據(jù)權利要求I至17任一項使用的組合物，其中所述組合物不是含兩種或多種添加中藥提取物與外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的組合的組合物。
19.根據(jù)權利要求I至18任一項所述的組合物，其中所述組合物包含 (c)藥學上或飲食上可以接受的載體或賦形劑。
20.選自膠囊、片劑、糖衣藥丸、粉劑、丸劑和顆粒劑的固體劑型，所述固體劑型沒有包覆腸溶包衣且包含乳糖酶和如權利要求I至19任一項定義的一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物選自德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌；前提是所述組合物不是含有兩種或多種添加中草藥提取物與外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的組合的組合物。
21.根據(jù)權利要求20所述的固體劑型，其中所述固體劑型選自膠囊、片劑和糖衣藥丸。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于治療乳糖不耐癥或因乳糖酶缺乏引發(fā)的疾病的組合物，其中所述組合物是非乳制品固體劑型，包含(a)乳糖酶；和(b)一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物選自德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌；其中所述乳糖酶(a)并非獲自所述的一種或以上微生物(b)；以及其中所述一種或以上產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式。本發(fā)明還提供了包含乳糖酶和產(chǎn)乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物的非包衣膠囊和片劑組合物。
文檔編號A61K35/74GK102946892SQ201180016171
公開日2013年2月27日 申請日期2011年2月4日 優(yōu)先權日2010年2月5日
發(fā)明者D·H·瓦羅布尼克, I·H·瓦羅布尼克 申請人:維塔凱爾有限責任公司