專利名稱：溶酶體貯積病酶的制作方法
溶酶體貯積病酶相關(guān)串請(qǐng)本申請(qǐng)要求2010年4月23日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/343，177、2010年5月26日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/396，376、2010年9月9日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)Νο·61/403，011、2010年10月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/456，014、2011年I月13日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No. 61/432，372的權(quán)益。將上述申請(qǐng)的全部教導(dǎo)通過(guò)引用并入本文。
背景技術(shù)：
溶酶體酸性脂酶(LAL)缺乏是極罕見(jiàn)的溶酶體貯積病(LSD)，其特征在于因該酶的缺乏而不能在溶酶體中分解膽固醇酯(CE)和甘油三酯(TAG)。LAL缺乏與在許多組織和細(xì)胞類型具有底物積累的其它溶酶體貯積癥相似。在LAL缺乏中，底物積累在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞(包括肝中的肝巨噬細(xì)胞、脾中和小腸的粘膜固有層中的組織細(xì)胞)中是最顯著的。網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)巨噬細(xì)胞甘露糖/N-乙酰葡糖胺受體(也稱為巨噬細(xì)胞甘露糖受體或MMR、CD206)，其介導(dǎo)具有以GIcNAc或甘露糖終止的N-聚糖的蛋白質(zhì)的結(jié)合、細(xì)胞攝取和溶酶體內(nèi)化，并且提供此類至關(guān)重要的細(xì)胞類型的酶缺乏的潛在校正的途徑。LAL缺乏是多系統(tǒng)疾病，其最常見(jiàn)地表現(xiàn)出胃腸、肝和心血管并發(fā)癥，并且與顯著的發(fā)病率或死亡率相關(guān)。LAL缺乏的臨床效應(yīng)因脂質(zhì)材料在許多組織的溶酶體中大量積累以及膽固醇和脂質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡機(jī)制的深度擾亂(包括肝膽固醇合成的顯著增加)而引起。LAL缺乏呈現(xiàn)至少兩種表型沃爾曼病(Wolman disease) (WD)和膽固醇酯沉積病(CESD)。沃爾曼病是LAL缺乏的最具侵襲性的呈現(xiàn)。該表型的特征在于胃腸和肝表現(xiàn)，包括生長(zhǎng)不足、吸收不良、脂肪瀉、嚴(yán)重的體重減輕和肝腫大。沃爾曼病進(jìn)展迅速并且在生命的第一年內(nèi)通常是致命的。案例報(bào)告綜述顯示超過(guò)12月齡的存活對(duì)于在生命的第一年中呈現(xiàn)因LAL缺乏而引起的生長(zhǎng)不足的患者是極罕見(jiàn)的。在該最具侵襲性的形式中，生長(zhǎng)不足是主要臨床特征并且是早期死亡率的主要促因(contributor)。如通過(guò)肝增大和轉(zhuǎn)氨酶的升高證明的肝損害在嬰兒中也是常見(jiàn)的。身體檢查發(fā)現(xiàn)(Physical finding)包括具有肝腫大和脾腫大的腹脹，并且放射照相檢查通常顯示腎上腺的鈣化。實(shí)驗(yàn)室評(píng)估典型地顯示升高的血清轉(zhuǎn)氨酶的水平及缺乏或顯著減小的LAL酶活性。還可在患者中看到膽固醇和甘油三酯的升高的血液水平。沃爾曼病的目前治療選擇極其有限。向具有發(fā)熱和/或感染跡象的嬰兒施用抗生素?？商幏侥I上腺功能減退的類固醇替代療法和專門(mén)化營(yíng)養(yǎng)支持，然而無(wú)證據(jù)表明這些干預(yù)能預(yù)防死亡，目前還不清楚它們是否對(duì)短期存活具有影響。在一系列4名利用骨髓移植治療的具有LAL缺乏的患者中，所有4名患者在移植的數(shù)月內(nèi)死于該過(guò)程的并發(fā)癥。具有LAL缺乏的患者還可在以后的生活中呈現(xiàn)顯著的肝和心血管損害，這通常稱為膽固醇酯沉積病(CESD)。在CESD中，肝嚴(yán)重地受到顯著的肝腫大、肝細(xì)胞壞死、轉(zhuǎn)氨酶的升高、肝硬化和纖維化的影響。由于CE和TG的水平升高，高脂血癥和加速的動(dòng)脈粥樣硬化也見(jiàn)于LAL缺乏。特別地，脂肪沉積物在動(dòng)脈壁上的積累在生命早期已被描述。沉積使動(dòng)脈腔變窄，并且可導(dǎo)致血管阻塞，從而增加包括心肌梗塞和中風(fēng)的重大心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。CESD的表現(xiàn)是高度可變的，一些患者一直未確診直至在成人晚期表現(xiàn)出并發(fā)癥，然而其他患者在兒童早期已呈現(xiàn)肝功能障礙。CESD與縮短的壽命和明顯的不健康相關(guān)；患有CESD的患者的預(yù)期壽命取決于相關(guān)并發(fā)癥的嚴(yán)重度。用于CESD表型的目前治療選擇聚焦在通過(guò)排除富含膽固醇和甘油三酯的食物的飲食和通過(guò)施用降膽固醇藥抑制膽固醇合成和載脂蛋白B產(chǎn)生來(lái)控制脂質(zhì)積累。雖然可見(jiàn)一些臨床改善，但潛在的疾病表現(xiàn)繼續(xù)存在并且疾病進(jìn)展仍然存在。在大多數(shù)案例中，LAL缺乏的療法需要終身治療。此外，由于蛋白質(zhì)治療劑的高成本，期望施用最少的有效量的治療劑來(lái)治療LAL缺乏。然而，迄今為止，還沒(méi)有治療LAL缺乏，特別地患有沃爾曼病和CESD的患者的有效療法。因此，存在對(duì)利用具有最低的施用頻率以改善患者的生活質(zhì)量的有效療法的強(qiáng)烈需要。還存在對(duì)高表達(dá)且強(qiáng)勁的蛋白質(zhì)生產(chǎn)平臺(tái)的需要，所述蛋白質(zhì)生產(chǎn)平臺(tái)可產(chǎn)生穩(wěn)定的并且高效地靶向患者的患病組織細(xì)胞中的溶酶體區(qū)室的LAL蛋白。發(fā)明概沭
·
本文公開(kāi)了特別適合用于療法、例如用于與LAL缺乏相關(guān)的病況的治療的LAL的組合物。本文中描述的LAL分子包含特定的聚糖結(jié)構(gòu)，當(dāng)施用至受試者例如人受試者時(shí)該結(jié)構(gòu)提供至細(xì)胞的溶酶體內(nèi)的高效且快速的攝取。在一個(gè)方面，本文中公開(kāi)的組合物包含人LAL，其中相當(dāng)高百分比的人LAL包含至少一個(gè)甘露糖-6-磷酸聚糖部分，其可用作為用于通過(guò)在例如肝細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面上的甘露糖-6-磷酸受體內(nèi)化的配體。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物中包含的LAL的30%或更多，例如至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少97 %或至少99 %包含至少一個(gè)甘露糖-6-磷酸部分。甘露糖_6_磷酸部分可見(jiàn)于例如位于選自 SEQ ID NO :2 的 Asn15、Asn51、Asn8。、Asn14。、Asn252 和 Asn3。0 的一個(gè)或多個(gè)殘基上的N-聚糖結(jié)構(gòu)上。在另一個(gè)方面，本文中公開(kāi)的組合物包含人LAL，其中相當(dāng)高百分比的人LAL在任何其N-聚糖結(jié)構(gòu)中不包含唾液酸部分，這有時(shí)可干擾酶至細(xì)胞中的內(nèi)化。在一個(gè)實(shí)施方案中，15 %或更少，例如10 %或更少，5 %或更少，2 %或更少，I %或更少或基本上無(wú)包含于組合物中的LAL在任何其N-聚糖結(jié)構(gòu)中包含唾液酸部分。在另一個(gè)方面，本文中公開(kāi)的組合物包含人LAL，其中相當(dāng)高百分比的人LAL在任何其N-聚糖結(jié)構(gòu)中不包含巖藻糖部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含于組合物中的LAL中的50 %或更少，例如，50 %或更少，40 %或更少，30 %或更少，20 %或更少，10 %或更少，5 %或更少，2%或更少，1%或更少包含巖藻糖部分，或包含于組合物中的LAL基本上在任何其N-聚糖結(jié)構(gòu)中不包含巖藻糖部分。在另一個(gè)方面，描述了適用于產(chǎn)生含LAL的組合物的載體、宿主細(xì)胞、表達(dá)系統(tǒng)和相關(guān)方法。通常，本文中討論的和公開(kāi)的本發(fā)明的LAL為人LAL。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含LAL的組合物包括具有如下氨基酸序列的成熟LAL SGGKLTAVDPETNMNVSEIISYWGFPSEEYLVETEDGYILCLNRIPHGRKNHSDKGPKPVVFLQHGLLADSSNWVTNLANSSLGFILADAGFDVWMGNSRGNTWSRKHKTLSVSQDEFWAFSYDEMAKYDLPASINFILNKTGQEQVYYVGHSQGTTIGFIAFSQIPELAKRIKMFFALGPVASVAFCTSPMAKLGRLPDHLIKDLFGDKEFLPQSAFLKWLGTHVCTHVILKELCGNLCFLLCGFNERNLNMSRVDVYTTHSPAGTS
VQNMLHWSQAVKFQKFQAFDWGSSAKNYFHYNQSYPPTYNVKDMLVPTAVWSGGHDWLADVYDVNILLTQITNLVFHESIPEWEHLDFIWGLDAPWRLYNKIINLMRKYQ(SEQ ID NO :2).在另一個(gè)實(shí)施方案中，成熟LAL具有氨基酸序列GKLTAVDPETNMNVSEIISYWGFPSEEYLVETEDGYILCLNRIPHGRKNHSDKGPKPVVFLQHGLLADSSNWVTNLANSSLGFILADAGFDVWMGNSRGNTWSRKHKTLSVSQDEFWAFSYDEMAKYDLPASINFILNKTGQEQVYYVGHSQGTTIGFIAFSQIPELAKRIKMFFALGPVASVAFCTSPMAKLGRLPDHLIKDLFGDKEFLPOSAFLKWLGTHVCTHVILHELCGNLCFLLCGFNERNLNMSRVDVYTTHSPAGTSVQNMLHWSQAVKFQKFQAFDWGSSAKNYFHYNQSYPPTYNVKDMLVPTAVWSGGHDWLADVYDVNILLTQITNLVFHESIPEWEHLDFIWGLDAPWRLYNKIINLMRKYQ(SEQ ID NO 3).在另一個(gè)實(shí)施方案中，成熟LAL具有氨基酸序列TAVDPETNMNVSEIISYWGFPSEEYLVETEDGYILCLNRIPHGRKNHSDKGPKPVVFLQHGLLADSSNWVTNLANSSLGFILADAGFDVWMGNSRGNTWSRKHKTLSVSQDEFWAFSYDEMAKYDLPASINFILNKTGQEQVYYVGHSQGTTIGFIAFSQIPELAKRIKMFFALGPVASVAFCTSPMAKLGRLPDHLIKDLFGDKEFLPQSAFLKWLGTHVCTHVILKELCGNLCFLLCGFNERNLNMSRVDVYTTHSPAGTSVQNMLHWSQAVKFQKFQAFDWGSSAKNYFHYNQSYPPTYNVKDMLVPTAVWSGGHDWLADVYDVNILLTQITNLVFHESIPEWEHLDFIWGLDAPWRLYNKIINLMRKYQ(SEQ ID NO :4).在另一個(gè)實(shí)施方案中，成熟LAL具有氨基酸序列AVDPETNMNVSEIISYWGFPSEEYLVETEDGYILCLNRIPHGRKNHSDKGPKPVVFLQHGLLADSSNWVTNLANSSLGFILADAGFDVWMGNSRGNTWSRKHKTLSVSQDEFWAFSYDEMAKYDLPASINFILNKTGQEQVYYVGHSQGTTIGFIAFSQIPELAKRIKMFFALGpVASVAFCTSPMAKLGRLPDHLIKDLF⑶KEFLPQSAFLKWLGTHVCTHVILKELCGNLCFLLCGFNERNLNMSRVDVYTTHSPAGTSVQNMLHWSQAVKFQKFQAFDWGSSAKNYFHYNQSYPPTYNVKDMLVPTAVffSGGHDWLADVYDVNILLTQITNLVFHESIPEWEHLDFIWGLDAPWRLYNKIINLMRKYQ(SEQ ID NO :19)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，成熟LAL 為選自SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 4和SEQ ID NO 19的至少2種多肽的混合物。本發(fā)明還提供了下述組合物，其包含各類型的有用的蛋白質(zhì)分子例如本文中公開(kāi)的那些蛋白質(zhì)的分離的混合物，其中混合物中包含的蛋白質(zhì)分子的一種或多種具有連接的特殊寡糖結(jié)構(gòu)，特別地，本文中公開(kāi)的寡糖結(jié)構(gòu)。例如，本發(fā)明提供了 LAL分子的分離的混合物，例如包含利用下列結(jié)構(gòu)A-n至0-n的一種或多種糖基化的LAL分子的人LAL分子
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包含分離的、含有一種或多種N-聚糖結(jié)構(gòu)的人重組溶酶體酸性脂酶(LAL)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL基本上由SEQID NO :2的氨基酸序列組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述LAL由SEQID NO 2中所示的氨基酸序列組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述LAL在選自SEQID NO 2的Asn15, Asn51,Asn80> Asn14°、Asn252和Asn3°°的至少一個(gè)位置上被N-連接糖基化。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述LAL在SEQID NO :2的Asn15、Asn8°、Asn14°、Asn252和Asn3w上被N-連接糖基化。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在SEQID NO :2的Asn8°、Asn14°或Asn252上包含磷酸化甘露糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn8°上包含磷酸化甘露糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn8°連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少30%具有磷酸化甘露糖。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn80連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少50%具有磷酸化甘露糖。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn8°上包含雙磷酸化甘露糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
11.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn8°連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少50%包含雙磷酸化甘露糖。
12.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn14°上包含磷酸化甘露糖(M6P)的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
13.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn14ci連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的約10%至約50% 包含 M6P。
14.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn252上包含磷酸化甘露糖(M6P)的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其中Asn252上的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少50%包含M6P。
16.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn8°或Asn252上包含高-甘露糖基團(tuán)的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述高甘露糖基團(tuán)包含6、7、8、9或10個(gè)甘露糖。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的組合物，其中所述高甘露糖-基團(tuán)包含7、8或9個(gè)甘露糖。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn8°上包含7、8或9個(gè)甘露糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物，其中Asn8ci上的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少80%包含7、8或9個(gè)甘露糖。
21.根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn252上包含7、8或9個(gè)甘露糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
22.根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物，其中Asn252上的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少70%包含7、8或9個(gè)甘露糖。
23.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含在Asn15、Asn140或Asn3°°上包含末端半乳糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)。
24.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn15連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的約2%至約10%包含末端半乳糖。
25.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn14°連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于5%包含末端半乳糖。
26.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中與Asn3cici連接的N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于100%包含末端半乳糖。
27.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL的Asn51未被糖基化或?qū)嵸|(zhì)上未被糖基化。
28.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含不具有木糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)并且N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于15%包含唾液酸。
29.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含不具有木糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)并且N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于10%包含唾液酸。
30.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含不具有木糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)并且N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于5%包含唾液酸。
31.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含不具有木糖的N-聚糖結(jié)構(gòu)并且N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于I %包含唾液酸。
32.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL基本上不包含唾液酸和木糖。
33.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含N-聚糖結(jié)構(gòu)，其中N-聚糖結(jié)構(gòu)中的低于50%,40%,30%,20%,10%,5%^； 1%包含巖藻糖。
34.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL不包含巖藻糖。
35.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含N-聚糖結(jié)構(gòu)，其中N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少30%、50%、60%、70%、80%、90%和95%包含磷酸化甘露糖(M6P)。
36.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含N-聚糖結(jié)構(gòu)，其中N-聚糖結(jié)構(gòu)中的至少90%包含磷酸化甘露糖(M6P)。
37.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述LAL包含如下N-連接糖基化譜 g)在Asn15 上，GlcNAc4Man3GlcNAc2,或GallGlcNAc4Man3GlcNAc2 ；h)在Asn8。上，Phos2Man7GlcNAc2 ；i)在Asn14。上，PhoslMan6GlcNAc2,GlcNAclPhoslMan6GlcNAc2 ；Man3GlcNAc2 ；GlcNAc2Man3GlcNAc2 ；GlcNAc3Man3GlcNAc2 ；GlcNAc4Man3GlcNAc2,或GallGlcNAc4Man3GlcNAc2 ；j)在 Asn252 上，Man7GlcNAc2,Man8GlcNAc2,Man9GlcNAc2,PhoslMan8GlcNAc2，或PhoslMan9GlcNAc2 ;和k)在 Asn3。。上，GlcNAc2Man3GlcNAc2,GlcNAc3Man3GlcNAc2,GlcNAc4Man3GlcNAc2,GallGlcNAc4Man3GlcNAc2,GlcNAc5Man3GlcNAc2,GallGlcNAc5Man3GlcNAc2,GlcNAc6Man3GlcNAc2，或GallGlcNAc6Man3GlcNAc2, 其中Man =甘露糖， GlcNAc = N-乙酰葡糖胺， Phos =憐酸， Gal =半乳糖。
38.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL在SEQID NO :2的Asn15、Asn51、Asn8°、Asn14°、Asn252和Asn3°°上被N-連接糖基化。
39.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述LAL包含選自下列結(jié)構(gòu)的N-聚糖
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述LAL在種系轉(zhuǎn)基因禽類中產(chǎn)生。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的組合物，其中所述LAL從所述種系轉(zhuǎn)基因禽類的輸卵管細(xì)胞產(chǎn)生。
42.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述寡糖結(jié)構(gòu)為禽類來(lái)源的。
43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述禽類為雞。
44.一種組合物，其包含重組人溶酶體酸性脂酶(LAL)的混合物，所述混合物包含選自SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 4 和 SEQ ID NO 19 的至少兩種人 LAL。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中所述人LAL的混合物包含選自下列結(jié)構(gòu)的N-聚糖
46.根據(jù)權(quán)利要求44所述的組合物，其中所述LAL包含如下N-連接糖基化譜a)GlcNAc4Man3GlcNAc2，或GallGlcNAc4Man3GlcNAc2，分別在 SEQ ID NO :2、3、4 和 19 的 Asn15、Asn13、Asnlcl 和 Asn9上;b)Phos2Man7GlcNAc2分別在 SEQ ID NO :2、3、4 和 19 的 Asn80、Asn78、Asn75 和 Asn74 上；c)PhoslMan6GlcNAc2,GlcNAclPhoslMan6GlcNAc2,Man3GlcNAc2,GlcNAc2Man3GlcNAc2,GlcNAc3Man3GlcNAc2,GlcNAc4Man3GlcNAc2,或GallGlcNAc4Man3GlcNAc2分別在 SEQ ID NO :2、3、4 和 19 的 Asn14。、Asn138、Asn135 和 Asn134 上；d)Man7GlcNAc2,Man8GlcNAc2,Man9GlcNAc2,PhoslMan8GlcNAc2，或PhoslMan9GlcNAc2分別在 SEQ ID NO :2、3、4 和 19 的 Asn252、Asn250、Asn247 和 Asn246 上；和e)GlcNAc2Man3GlcNAc2,GlcNAc3Man3GlcNAc2,GlcNAc4Man3GlcNAc2,GallGlcNAc4Man3GlcNAc2,GlcNAc5Man3GlcNAc2,GallGlcNAc5Man3GlcNAc2, GlcNAc6Man3GlcNAc2，或 GallGlcNAc6Man3GlcNAc2分別在 SEQ ID NO :2、3、4 和 19 的 Asn300、Asn298、Asn295 和 Asn294 上。
47.一種包含分離的溶酶體酸性脂酶(LAL)分子的組合物，其中所述LAL產(chǎn)生于轉(zhuǎn)基因雞輸卵管細(xì)胞中，并且分離自包含編碼所述LAL的轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因雞的卵清。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的組合物，其中所述LAL為人LAL。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的組合物，其中所述輸卵管細(xì)胞為管腺細(xì)胞。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的組合物，其中所述分離的人LAL包含雞來(lái)源的糖基化模式。
51.—種治療患有與LAL缺乏相關(guān)的病況的患者的方法,其包括向所述患者施用治療有效量的包含重組人LAL的組合物。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述重組人LAL為如根據(jù)權(quán)利要求1-33中的一項(xiàng)所述的組合物。
53.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述病況為膽固醇酯貯積病(CESD)。
54.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述病況為沃爾曼病。
55.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法,其中向所述患者施用約O.35mg/kg至約5. Omg/kg的所述LAL組合物。
56.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法,其中向所述患者施用約O.35mg/kg至約3. Omg/kg的所述LAL組合物。
57.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中每7天一次至每45天一次向所述患者施用。
58.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中每3天一次，每5天一次，每周一次，每?jī)芍芤淮?，?0天一次，每28天一次，每30天一次或每I月一次向所述患者施用。
59.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中每?jī)芍芤淮蜗蛩龌颊呤┯眉sI.Omg/kg至3. Omg/kg的有效劑量。
60.一種制備糖基化人溶酶體酸性脂酶(LAL)的方法，其包括產(chǎn)生包含編碼可操作地連接于啟動(dòng)子的人LAL的轉(zhuǎn)基因并且在輸卵管細(xì)胞中表達(dá)所述人LAL的種系轉(zhuǎn)基因禽類，其中所述LAL在所述輸卵管細(xì)胞中被糖基化并且被儲(chǔ)存至由所述轉(zhuǎn)基因禽類所產(chǎn)的硬殼卵中。
61.一種轉(zhuǎn)基因禽類，其產(chǎn)生糖基化人溶酶體酸性脂酶(LAL)。
62.一種卵，其由根據(jù)權(quán)利要求61所述的轉(zhuǎn)基因禽類所產(chǎn)。
63.—種卵清，其包含由根據(jù)權(quán)利要求61所述的轉(zhuǎn)基因禽類產(chǎn)生的人LAL。
64.一種載體，其具有編碼根據(jù)權(quán)利要求I所述的人重組溶酶體酸性脂酶的核酸序列。
65.—種宿主細(xì)胞，其用根據(jù)權(quán)利要求64所述的載體轉(zhuǎn)化。
66.—種治療患有與LAL缺乏相關(guān)的病況的患者的方法,其包括向所述患者施用治療有效量的包含重組人LAL的組合物和向所述患者施用第二治療劑。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述第二治療劑為選自阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、羅舒伐他汀和辛伐他汀的降膽固醇劑。
68.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中所述第二治療劑為免疫抑制劑。
69.一種藥物制劑，其包含與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合的根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物。
70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的藥物制劑，其中所述制劑包含至少一種選自脫水檸檬酸三鈉、檸檬酸和人血清白蛋白的試劑。
71.根據(jù)權(quán)利要求69所述的藥物制劑，其中在維持于約5.6至約6. 2的pH的水溶液中提供所述制劑。
72.根據(jù)權(quán)利要求71所述的藥物制劑，其中將所述制劑維持在5.7至6. I的pH。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有特定糖基化模式以內(nèi)化至靶細(xì)胞中的重組人溶酶體酸性脂酶的組合物，包含編碼人溶酶體酸性脂酶的核酸的載體，用所述載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，包含重組人溶酶體酸性脂酶的藥物組合物，和治療與溶酶體酸性脂酶缺乏相關(guān)的病況的方法。
文檔編號(hào)A61K38/46GK102985538SQ201180031009
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2011年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月23日
發(fā)明者A·奎因, A·J·哈維 申請(qǐng)人:辛那杰瓦生物制藥股份有限公司