專利名稱：一種重組腫瘤疫苗及其生產(chǎn)方法
一種重組腫瘤疫苗及其生產(chǎn)方法
背景技術(shù)：
抗原提呈是適應(yīng)性免疫應(yīng)答中的一個(gè)過程，期間抗原提呈細(xì)胞捕獲抗原并將抗原提呈至其表面以供T細(xì)胞識(shí)別?？乖椭饕M織相容性復(fù)合物(MHC)分子位于抗原提呈細(xì)胞表面，其能夠被T細(xì)胞受體識(shí)別和結(jié)合，藉此促進(jìn)抗原提呈。一旦T細(xì)胞識(shí)別了細(xì)胞表面的抗原，其活化并產(chǎn)生針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答。通過抗原提呈，T細(xì)胞能夠產(chǎn)生針對(duì)外源性抗原和內(nèi)源性抗原的免疫應(yīng)答。細(xì)胞因子在免疫應(yīng)答調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞因子是由免疫系統(tǒng)中的細(xì)胞分泌的低分子量蛋白，其具有發(fā)送調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)信號(hào)的功能。不同細(xì)胞因子能夠傳送不同信號(hào)。例如，某些細(xì)胞因子能夠刺激免疫細(xì)胞的增殖或成熟；某些細(xì)胞因子能夠引導(dǎo)免疫細(xì)胞的遷移；以及某些細(xì)胞因子能夠增強(qiáng)基于細(xì)胞的免疫應(yīng)答。 據(jù)信，癌癥或腫瘤至少部分地與人體內(nèi)對(duì)癌變的免疫應(yīng)答減弱或缺乏相關(guān)。多種療法已被用于治療癌癥，包括基因療法。用于癌癥治療的基因療法可以涉及到輸送能夠殺傷或抑制癌細(xì)胞的基因、能夠增強(qiáng)針對(duì)癌細(xì)胞免疫應(yīng)答的基因、能夠修復(fù)或代替基因突變或改變的基因、或能夠使癌細(xì)胞對(duì)化療或放療更為敏感的基因。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療腫瘤和癌癥的重組腫瘤疫苗。該腫瘤疫苗可以包含編碼用于預(yù)防和治療腫瘤以及癌癥的抗原提呈肽、細(xì)胞因子和其它因子的核酸，和/或含有此類核酸的表達(dá)載體，和/或含有此類核酸和/或表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還涉及包含腫瘤疫苗的藥物組合物以及使用腫瘤疫苗預(yù)防和治療腫瘤和癌癥的方法。一方面，本發(fā)明提供了一種重組腫瘤疫苗，其包含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的組合物，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個(gè)。另一方面，本發(fā)明提供了一種重組腫瘤疫苗，其包含具有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的表達(dá)載體，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一個(gè)。另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的腫瘤疫苗，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個(gè)。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療腫瘤的方法，包括向?qū)ο蠼o予藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的腫瘤疫苗，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個(gè)。另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包含藥學(xué)上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的腫瘤疫苗，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一個(gè)。另一方面，本發(fā)明提供了一種治療腫瘤的方法，包括向?qū)ο蠼o予藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體以及含有編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸片段、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的腫瘤疫苗，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段中的至少一個(gè)。前述發(fā)明概述僅僅是示例性的，而非旨在以任何方式進(jìn)行限定。另外除上文所述示例性的方面、實(shí)施方式和特征外，更多方面、實(shí)施方式和特征將通過引用附圖和下文的詳細(xì)說明給出。附圖的簡(jiǎn)要說明圖I為表達(dá)載體pAd-HSP-hGM-CSF的示意圖。圖2為腺病毒基因組Ad-HSP-hGM-CSF的示意圖。圖3為腺病毒基因組Ad-HSP-mGM-CSF的示意圖。圖4顯示了在B16細(xì)胞(a)、Ifep3B細(xì)胞(b)、和Hela細(xì)胞(C)中通過ELISA測(cè)定的mGM-CSF的表達(dá)水平，其分別在10、100和1000的感染復(fù)數(shù)(MOI)下被Ad-HSP-mGM-CSF感染。圖5顯示了在B16細(xì)胞(a)、Ifep3B細(xì)胞(b)、和Hela細(xì)胞(C)中通過ELISA測(cè)定的hHSP70的表達(dá)水平，其分別在10、100和1000的MOI下被Ad-HSP-mGM-CSF感染。圖6顯示了在感染復(fù)數(shù)為300時(shí)Ad-HSP-hGM-CSF對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。圖7顯示了在感染復(fù)數(shù)為100時(shí)Ad-HSP-hGM-CSF對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。圖8顯示了在感染復(fù)數(shù)為30時(shí)Ad-HSP-hGM-CSF對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。圖9顯示了 Ad-HSP-mGM-CSF對(duì)7種不同類型細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。

圖10顯示了給予小鼠Ad-HSP-mGM-CSF后腫瘤尺寸的改變。發(fā)明詳述在以下詳細(xì)說明中，引用附圖作為參考，這些附圖也為本發(fā)明的其中一部分。附圖中，除非上下文另有說明，否則類似符號(hào)一般表示類似的組分。在詳細(xì)說明、附圖和權(quán)利要求中描述的示例性實(shí)施方式不具有限定作用。在不脫離本發(fā)明主旨和范圍的前提下，可以利用其它實(shí)施方式并可以進(jìn)行其它改變。核酸組合物本發(fā)明涉及一種重組腫瘤疫苗，其具有含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸、編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸、和至少一個(gè)啟動(dòng)子的組合物，其中至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至第一多核苷酸和第二多核苷酸中的至少一個(gè)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“重組”指使用一種或多種分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)一種或多種生物分子如多核苷酸或多肽分子進(jìn)行人工處理，以使得此類生物分子處于不同于其自然狀態(tài)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“多核苷酸”或“核酸”指核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、或核糖核酸_脫氧核糖核酸的混合物如DNA-RNA雜交物。多核苷酸或核酸可以是單鏈或雙鏈DNA或RNA或DNA-RNA雜交物。多核苷酸或核酸可以是線性的或環(huán)狀的。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“編碼”或“為……編碼”指能夠轉(zhuǎn)錄為mRNA和/或翻譯為肽或蛋白?！熬幋a序列”或“基因”指編碼mRNA、肽或蛋白的多核苷酸序列。在本發(fā)明中這兩個(gè)術(shù)語(yǔ)可以互換使用。本文使用的術(shù)語(yǔ)“mRNA”指與模版DNA序列互補(bǔ)并且能夠作為蛋白合成模版的RNA分子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗原提呈多肽”指能夠結(jié)合抗原、提呈抗原至抗原提呈細(xì)胞并且促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞識(shí)別抗原的多肽或蛋白。本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗原提呈細(xì)胞”指能夠在其表面呈現(xiàn)抗原和其主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的細(xì)胞，這樣T細(xì)胞能夠識(shí)別所呈現(xiàn)的抗原。呈現(xiàn)的抗原能夠被免疫細(xì)胞如T細(xì)胞識(shí)別，藉此產(chǎn)生針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方式中，抗原提呈細(xì)胞是樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B-細(xì)胞或上皮細(xì)胞。在某些示例性實(shí)施方式中，抗原提呈細(xì)胞是樹突狀細(xì)胞。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“操作性地連接”指所述編碼序列以允許其表達(dá)的方式直接或間接地連接或關(guān)聯(lián)至一個(gè)或多個(gè)調(diào)控序列本文使用的術(shù)語(yǔ)“表達(dá)”指編碼序列轉(zhuǎn)錄為mRNA和/或編碼序列翻譯為肽或蛋白。本文使用的術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)錄”指RNA的合成過程，通過RNA聚合酶讀取DNA序列以生成與DNA序列互補(bǔ)的RNA鏈。本文使用的術(shù)語(yǔ)“翻譯”指肽或蛋白的合成過程，通過核糖體讀取mRNA序列以根據(jù)mRNA序列中含有的氨基酸密碼子產(chǎn)生氨基酸鏈。本文使用的術(shù)語(yǔ)“調(diào)控序列”指對(duì)編碼序列表達(dá)所必須的或有益的任意核苷酸序列。調(diào)控序列可以包括，但不限于，一個(gè)或多個(gè)啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、轉(zhuǎn)錄終止子、多聚腺苷酸化序列和內(nèi)在核糖體插入位點(diǎn)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“啟動(dòng)子”指能夠控制編碼序列轉(zhuǎn)錄的多核苷酸序列。啟動(dòng)子序列包括足以供RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合和啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的特定序列。此外，啟動(dòng)子序列可以包括調(diào)節(jié)RNA聚合酶的識(shí)別、結(jié)合和啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄活性的序列。啟動(dòng)子可以影響與其定位于相同核酸分子的基因或與其定位于不同核酸分子的基因的轉(zhuǎn)錄。啟動(dòng)子序列的功能，依據(jù)其調(diào)控的性質(zhì)，可以是組成型的或誘導(dǎo)型的?！敖M成型”啟動(dòng)子指在宿主細(xì)胞中具有持續(xù)性活化基因表達(dá)功能的啟動(dòng)子?！罢T導(dǎo)型”啟動(dòng)子指當(dāng)存在特定刺激物或刺激時(shí)在宿主細(xì)胞中啟動(dòng)基因表達(dá)的啟動(dòng)子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“增強(qiáng)子”指使編碼序列轉(zhuǎn)錄和/或翻譯增強(qiáng)的核苷酸序列。增強(qiáng)子可以操作性地連接至編碼序列的5’末端或3’末端。在本文中可以使用在真核細(xì)胞中可起作用的任意增強(qiáng)子。增強(qiáng)子的實(shí)例包括，但不限于，猴病毒40 (SV40)早期基因增強(qiáng)子、來(lái)自勞氏肉瘤病毒長(zhǎng)末端重復(fù)(LTR)序列的增強(qiáng)子、以及來(lái)自人巨細(xì)胞病毒(CMV)的增強(qiáng)子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)錄終止子”指可被真核細(xì)胞RNA聚合酶識(shí)別以終止轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列。終止子序列可以操作性地連接至編碼序列的3’末端。在某些實(shí)施方式中，終止子可以包含裂解RNA的信號(hào)，這樣能夠暴露RNA上的多聚腺苷酸化位點(diǎn)。在本文中可以使用在真核細(xì)胞中有功能的任意終止子序列。終止子序列的實(shí)例包括，但不限于，來(lái)自病毒的終止序列如SV40終止子，和來(lái)自已知基因的終止序列如牛生長(zhǎng)激素終止子序列。本文使用的術(shù)語(yǔ)“多聚腺苷酸化序列”指能夠被真核細(xì)胞識(shí)別為當(dāng)其轉(zhuǎn)錄后，在轉(zhuǎn)錄的mRNA上添加多聚腺苷酸殘基的信號(hào)的核苷酸序列。多聚腺苷酸化序列可以操作性地連接至編碼序列的3’末端。在本文中可以使用在真核細(xì)胞中可起作用的任意多聚腺苷酸化序列。多聚腺苷酸化序列的實(shí)例包括，但不限于，AAUAAA，和SV40多聚腺苷酸化信號(hào)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“內(nèi)在核糖體插入位點(diǎn)”(IRES)指允許從mRNA序列的中部起始轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列。IRES可以用于在一個(gè)多核苷酸分子中將兩個(gè)或多個(gè)編碼序列分隔開來(lái)，以使得兩個(gè)或多個(gè)編碼產(chǎn)物分別翻譯形成。IRES可以操作性地連接至第一編碼序列的3’末端之后和第二編碼序列5’末端之前。在本文中可以使用在真核細(xì)胞中可起作用的任意IRES序列。IRES的實(shí)例包括，但不限于，小核糖核酸病毒IRES、瘟病毒IRES、口蹄疫病毒IRES、甲肝病毒IRES和丙肝病毒IRES。本發(fā)明提供了一種組合物，其包含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸和編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸。在某些實(shí)施方式中，第一多核苷酸和第二多核苷酸在不同的核酸分子上。在某些實(shí)施方式中，第一多核苷酸和第二多核苷酸在相同的核酸分子上。在某些實(shí)施方式中，由單一的啟動(dòng)子控制第一多核苷酸和第二多核苷酸的表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，由不同啟動(dòng)子控制第一多核苷酸和第二多核苷酸的表達(dá)。在某些實(shí)施方式中，第一多核苷酸和第二多核苷酸操作性地連接至一個(gè)啟動(dòng)子，其控制第一和第二多核苷酸的表達(dá)，并且其中第一多核苷酸片段和第二多核苷酸片段由IRES序列分隔。在某些實(shí)施方式中，第一多核苷酸操作性地連接至控制第一多核苷酸表達(dá)的第一啟動(dòng)子，第二多核苷酸操作性地連接至控制第二多核苷酸表達(dá)的第二啟動(dòng)子。第一啟動(dòng)子和第二啟動(dòng)子可以是相同的或不同的。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的啟動(dòng)子是真核啟動(dòng)子如來(lái)自CMV的啟動(dòng)子(例如CMV立即早期啟動(dòng)子(CMV啟動(dòng)子))、愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)啟動(dòng)子、人類免疫缺陷病毒(HIV)啟動(dòng)子(例如HIV長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)啟動(dòng)子)、莫洛尼病毒啟動(dòng)子、小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV)啟動(dòng)子、勞斯氏肉瘤病毒(RSV)啟動(dòng)子、SV40早期啟動(dòng)子、來(lái)自人基因的啟動(dòng)子如人肌球蛋白啟動(dòng)子、人血紅蛋白啟動(dòng)子、人肌肉肌酸啟動(dòng)子、人金屬硫蛋白￠-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、人泛素C啟動(dòng)子(UBC)、小鼠磷酸甘油酸激酶I啟動(dòng)子(PGK)、人胸腺嘧啶激酶啟動(dòng)子(TK)、人延伸因子Ia啟動(dòng)子(EFlA)、花椰菜花葉病毒(CaMV) 35S啟動(dòng)子、E2F-1啟動(dòng)子(E2F1轉(zhuǎn)錄因子I啟動(dòng)子)、a-甲胎蛋白啟動(dòng)子、縮膽囊肽啟動(dòng)子、癌胚抗原啟動(dòng)子、C-erbB2/neu癌基因啟動(dòng)子、環(huán)氧合酶啟動(dòng)子、CXC-趨化因子受體4 (CXCR4)啟動(dòng)子、人附睪蛋白4(HE4)啟動(dòng)子、II型己糖激酶啟動(dòng)子、L-網(wǎng)素啟動(dòng)子、粘蛋白樣糖蛋白(MUCl)啟動(dòng)子、前列腺特異性抗原(PSA)啟動(dòng)子、存活素啟動(dòng)子、酪氨酸酶相關(guān)蛋白(TRPl)啟動(dòng)子、和酪氨酸激酶啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的啟動(dòng)子可以是腫瘤特異性啟動(dòng)子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“腫瘤特異性啟動(dòng)子”指優(yōu)選地或特異性地在腫瘤細(xì)胞中具有啟動(dòng)基因表達(dá)的功能且在非腫瘤細(xì)胞或非癌細(xì)胞中無(wú)活性或具有降低活性的啟動(dòng)子。腫瘤特異性啟動(dòng)子的實(shí)例包括，但不限于，E2F-1啟動(dòng)子、a -甲胎蛋白啟動(dòng)子、縮膽囊肽啟動(dòng)子、癌胚抗原啟動(dòng)子、C-erbB2/neu癌基因啟動(dòng)子、環(huán)氧合酶啟動(dòng)子、CXCR4啟動(dòng)子、HE4啟動(dòng)子、II型己糖激酶啟動(dòng)子、L-網(wǎng)素啟動(dòng)子、MUCl啟動(dòng)子、PSA啟動(dòng)子、存活素啟動(dòng)子、TRPl啟動(dòng)子、和酪氨酸酶啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的啟動(dòng)子是E2F-1啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方式中，E2F-1啟動(dòng)子具有SEQ ID NO :29所示的核苷酸序列。上文所述的第一啟動(dòng)子和/或第二啟動(dòng)子可以是組成型啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方式中，組成型啟動(dòng)子可以是管家基因啟動(dòng)子，其為基本細(xì)胞功能所必須的。實(shí)例包括，但不限于，￠-肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子、UBC啟動(dòng)子、PGK啟動(dòng)子、TK啟動(dòng)子和EFlA啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方式中，組成型啟動(dòng)子可以是病毒啟動(dòng)子。實(shí)例包括，但不限于，CMV啟動(dòng)子、SV40啟動(dòng)子和CaMV 35S啟動(dòng)子。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的重組核酸組合物包含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸，其由組成型啟動(dòng)子如CMV啟動(dòng)子調(diào)控，以及編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸，其由腫瘤特異性啟動(dòng)子如E2F-1啟動(dòng)子調(diào)控。 在某些實(shí)施方式中，抗原提呈多肽是熱休克蛋白。熱休克蛋白是當(dāng)細(xì)胞暴露于升高的溫度或其它應(yīng)激狀況時(shí)表達(dá)增加的蛋白家族。已知熱休克蛋白在將蛋白折疊成適宜構(gòu) 象中起重要作用。此外，發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白可提呈蛋白片段至免疫系統(tǒng)。任意熱休克蛋白均可作為本發(fā)明中的抗原提呈多肽。熱休克蛋白的實(shí)例包括，但不限于，HsplO, Hsp20、Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70、Hsp71、Hsp72、Hsp90、Hspl04、HspllO、a -B-晶體蛋白和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白。在某些實(shí)施方式中，抗原提呈多肽是Hsp70。Hsp70蛋白包括，但不限于，Hsp70_l、Hsp70-2、Hsp70-4、Hsp70_5、Hsp70_6、Hsp70_7、Hsp70_8、Hsp70_9、Hsp70_12 和 Hsp70_14。在某些實(shí)施方式中，抗原提呈多肽是Hsp70-1。Hsp70-1蛋白包括，但不限于，Hsp 70-1A和Hsp 70-1B。在某些實(shí)施方式中，抗原提呈多肽是Hsp90。Hsp90蛋白包括，但不限于，Hsp90- a p Hsp90- a 2、Hsp90_ ^、內(nèi)源性纖溶酶和TNF受體相關(guān)蛋白I。在某些實(shí)施方式中，抗原提呈多肽是葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白包括，但不限于，葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75(Grp75，也稱為Hsp70_9)、Grp78(也稱為Hsp70_5)、Grp94(也稱為內(nèi)源性纖溶酶)和Grp 170。熱休克蛋白的示例性例子及其GenBank登錄號(hào)列于表I。表I熱休克蛋白的例子
權(quán)利要求
1.一種組合物，所述組合物包含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸，編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸，和至少一個(gè)啟動(dòng)子，其中所述至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至所述第一多核苷酸和所述第二多核苷酸中的至少一個(gè)。
2.一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含編碼抗原提呈多肽的第一多核苷酸片段，編碼細(xì)胞因子的第二多核苷酸片段，和至少一個(gè)啟動(dòng)子，其中所述至少一個(gè)啟動(dòng)子操作性地連接至所述第一多核苷酸片段和所述第二多核苷酸片段中的至少一個(gè)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述抗原提呈多肽是熱休克蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述熱休克蛋白選自 Hsp 10、Hsp20、Hsp27、Hsp40、Hsp60、Hsp70、Hsp71、Hsp72、Hsp90、Hsp 104、Hsp 110、 a -B-晶狀體蛋白和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物或表達(dá)載體，其中所述熱休克蛋白是Hsp70。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述抗原提呈多肽與Hsp70具有至少70%的序列同一性。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述細(xì)胞因子選自巨噬細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞集落刺激因子、巨噬細(xì)胞/粒細(xì)胞集落刺激因子、干細(xì)胞因子和紅細(xì)胞生成素。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其進(jìn)一步包括操作性地連接至啟動(dòng)子的編碼細(xì)胞因子的第三多核苷酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述第一多核苷酸操作性地連接至組成型啟動(dòng)子和所述第二多核苷酸操作性地連接至腫瘤特異性啟動(dòng)子。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述至少一個(gè)啟動(dòng)子是真核啟動(dòng)子。
11.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物或權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述至少一個(gè)啟動(dòng)子是腫瘤特異性啟動(dòng)子。
12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其中所述表達(dá)載體選自質(zhì)粒、病毒、噬菌體和粘粒。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的表達(dá)載體，其中所述表達(dá)載體是病毒載體。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的表達(dá)載體,其中所述病毒載體是衍生自一種或多種病毒的載體，所述病毒選自腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、牛痘病毒、單純皰疹病毒、泡性口炎病毒、 麻疹病毒、呼腸孤病毒、新城疫病毒和仙臺(tái)病毒。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的表達(dá)載體，其中所述病毒載體是復(fù)制型載體。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的表達(dá)載體,其中所述病毒載體是含有Ela基因的腺病毒載體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的表達(dá)載體，其中所述Ela基因操作性地連接至腫瘤特異性啟動(dòng)子。
18.分離的宿主細(xì)胞，所述細(xì)胞包含如權(quán)利要求I所述的組合物或如權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體。
19.藥物組合物，所述藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體，以及如權(quán)利要求I所述的組合物、如權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體和如權(quán)利要求18所述的分離的宿主細(xì)胞中的任意一種。
20.治療癌癥的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o予如權(quán)利要求19所述的藥物組合物。
全文摘要
本申請(qǐng)涉及用于預(yù)防和治療腫瘤以及癌癥的腫瘤疫苗。腫瘤疫苗可以含有編碼用于預(yù)防和治療腫瘤以及癌癥的抗原提呈肽、細(xì)胞因子和其它因子的核酸，或含有此類核酸的表達(dá)載體或病毒，或含有此類核酸或表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K31/7088GK102985094SQ201180031875
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2011年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月30日
發(fā)明者梁旻 申請(qǐng)人:東源生物醫(yī)藥科技(上海)有限公司