專利名稱：用于預(yù)防和治療炎性疾病或免疫疾病的含樹花素的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及樹花素(Ramalin)用于治療炎性疾病或免疫疾病的新用途。更具體地，本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療炎性疾病或免疫疾病的藥物組合物，其包含具有抗炎活性的樹花素或其鹽，還涉及使用所述組合物預(yù)防或治療炎性疾病或免疫疾病的方法。
背景技術(shù)：
炎性反應(yīng)是由多種因素，例如病原感染或機(jī)體中組織損傷導(dǎo)致的防御性反應(yīng)，并且發(fā)揮最初的保護(hù)作用以限制對感染或受損區(qū)域的損害。在大多數(shù)情況下，此類炎性反應(yīng)導(dǎo)致致病因素消除，并通過先天免疫物質(zhì)誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫(Hawiger J., Innate Immunityand Inflammation:A Transcriptional Paradigm.1mmunologic Research.23，pp.99—109，2001)。已知伴隨炎癥出現(xiàn)的皮膚發(fā)紅、腫塊、灼熱和疼痛等是持續(xù)炎性反應(yīng)的結(jié)果，所述持續(xù)炎性反應(yīng)例如局部血流增加和局部血流速率降低，其源自炎癥區(qū)域中炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子導(dǎo)致的血管舒張；血管釋放血漿成分增加，其源自血管透性增加；血管釋放免疫細(xì)胞增加，其源自血管內(nèi)皮細(xì)胞對循環(huán)免疫細(xì)胞的粘附；以及由趨化性導(dǎo)致的向感染區(qū)域的遷移增力口 (Gallo RL，Murakami M，Takaaki 0，Zaiou Μ., Biology and clinical relevanceof naturally occurring antimicrobial peptides.J.Allergy.Clin.1mmunol.110，pp.823-831.2002 ；Graeme B.Ryan, MB，and Guido M.，Acute Inflammation.AmericanJournal of Pathology.86 (I)，pp.185-274，1977)。此外，炎癥相關(guān)的血管舒張和血管透性增加還可歸因于一些細(xì)胞響應(yīng)組織損傷而產(chǎn)生的組胺，以及在血液中以失活狀態(tài)存在并由組織損傷活化的低分子量激肽類(Yamaki K，Thorlacius H，Xie X，Lindbom L,Hedqvist P， Raud J.， Characteristics of histamineinduced leukocyte rolling inthe undisturbed microcirculation of the rat mesentry.British J.Pharmacol.123,pp.390-399，1998 ；Brocklehurst WE， Role of Kinins and Prostaglandins inInflammation.Proc.Roy.So c.Med.64，pp.4-6，1971)。通常，急性炎性反應(yīng)出現(xiàn)迅速，維持時間短，并伴隨著被稱為急性期反應(yīng)的系統(tǒng)反應(yīng)。慢性炎癥會導(dǎo)致與諸如感染或自身免疫性疾病相關(guān)聯(lián)的持續(xù)免疫活化，巨噬細(xì)胞的積累和活化也是慢性炎癥的標(biāo)識(Huang AL，Vita JA, Effects of Systemic Inflammationon Endothelium-Dependent Vasodilation.Trends, Cardiovasc.Med.16，p.1520,2006)。然而，持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致宿主細(xì)胞或組織的嚴(yán)重?fù)p害。通過巨噬細(xì)胞對病原的響應(yīng)啟動感染部位的炎性反應(yīng)。已知由病原活化的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的活性氧簇和活性氮簇(例如NO)、諸如前列腺素類和白細(xì)胞三烯的炎癥介質(zhì)，以及諸如TNF-a、IL-6和IL-8的促炎性細(xì)胞因子，參與了炎性反應(yīng)(Renauld JC，Newinsights into the role of cytokines in asthma.J.Clin.Pathol.54, pp.577-589,2001 ；Blake GJ，Ridker PM，Tumour necrosis factor-a , inflammatory biomarkers,andatherogenesis.Eur.Heart J.23，pp.345347，2002)。NF- κ B 是與炎癥介質(zhì)產(chǎn)生相關(guān)的基因的轉(zhuǎn)錄因子，NF-K B的活化在巨噬細(xì)胞的炎癥相關(guān)作用中非常重要。據(jù)報道，NF-kB在巨噬細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄炎癥相關(guān)基因，包括誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iN0S2)、環(huán)氧合酶(C0X-2)、TNF-a、IL-6 和 IL-8 等。在人體的巨噬細(xì)胞中，一氧化氮(NO)是通過一氧化氮合酶(下文稱作N0S)由L-精氨酸產(chǎn)生的(Kerwin, J.F.etal.，J.Med.Chem.，38:4343,1995)。人體的 NOS 具有三種NOS異構(gòu)體，包括內(nèi)皮組成型NOS (下文稱作ecNOS)、神經(jīng)組成型NOS (下文稱作ncNOS)和誘導(dǎo)型NOS (下文稱作iNOS)。其中，ecNOS和ncNOS分別在內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)，并且依賴于鈣和鈣調(diào)蛋白，而只有在細(xì)胞被病原菌細(xì)胞膜的脂多糖(下文稱作LPS)、諸如IL-1和TNF-α的細(xì)胞因子、以及諸如輻射的免疫刺激活化時，iNOS才在多種細(xì)胞中高度表達(dá)，且iNOS不依賴于鈣和鈣調(diào)蛋白。NO在高濃度下發(fā)揮防御抵抗腫瘤細(xì)胞和病原菌的作用，且血管內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生的低濃度NO發(fā)揮調(diào)節(jié)血壓的作用，而神經(jīng)細(xì)胞中產(chǎn)生的NO則進(jìn)行多種生理反應(yīng)，涉及神經(jīng)遞質(zhì)功能、學(xué)習(xí)和記憶等。組成型NOS (cNOS)在維持人體動態(tài)平衡中發(fā)揮重要作用，且ecNOS產(chǎn)生的NO在血管系統(tǒng)中發(fā)揮作用以抑制血管舒張和血小板粘附或凝集，而ncNOS產(chǎn)生的NO則在神經(jīng)系統(tǒng)·中發(fā)揮作用以提高長期記憶，或充當(dāng)導(dǎo)致憂郁癥的神經(jīng)遞質(zhì)并參與消化道運(yùn)動或陰莖勃起。另一方面，由特異細(xì)胞因子或LPS誘導(dǎo)的iNOS表達(dá)而產(chǎn)生的NO參與炎性表達(dá)或宿主防御機(jī)制。內(nèi)毒素刺激活化了巨噬細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B，誘導(dǎo)iNOS表達(dá)，從而提高了 NO 的產(chǎn)生(Butler, A.R., Chemistry&Industry, 16:828,1995)。已知當(dāng) LPS 外源刺激、誘導(dǎo)炎癥的輻射等誘導(dǎo)iNOS表達(dá)時，持續(xù)4-6小時產(chǎn)生大量NO，從而導(dǎo)致人體內(nèi)的炎性反應(yīng)。對于大鼠，通過外源刺激在巨噬細(xì)胞中表達(dá)大量iNOS mRNA和蛋白，且通過表達(dá)合成得到的NO發(fā)揮抗菌作用和抗癌作用。然而，已知當(dāng)大量過量的NO產(chǎn)生時，其導(dǎo)致炎性反應(yīng)，例如關(guān)節(jié)炎和敗血病、組織移植排斥、諸如自身免疫性疾病和糖尿病的免疫疾病，以及神經(jīng)元細(xì)胞死亡。因此，iNOS活性抑制劑非常有望作為治療此類疾病的活性物質(zhì)，且據(jù)此觀點(diǎn)，抑制iNOS產(chǎn)生NO的化合物可用作治療人體中多種炎性疾病的試劑?，F(xiàn)已進(jìn)行的關(guān)于抑制NO產(chǎn)生的物質(zhì)的研究主要涉及研發(fā)特異性抑制iNOS酶活性的物質(zhì)。具體地，現(xiàn)已進(jìn)行了研發(fā)前體L-精氨酸衍生物、L-瓜氨酸衍生物、氨基胍衍生物、異硫脲衍生物等的研究(Babu，B.R.B.and Griffith 0.ff., Current Opinion in Chemical Biology, 2:491,1998)。然而，炎性反應(yīng)中iNOS轉(zhuǎn)錄階段的表達(dá)調(diào)控在決定NO的產(chǎn)生中非常重要，因此，需要研發(fā)涉及通過IkB(IkB是巨噬細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子NF- κ B的抑制劑)的磷酸化調(diào)控NF- κ B活性的藥物，或涉及Akt、ERK、c-jun-和p38_MAPK信號途徑(其涉及NF- κ B活性的調(diào)控)的藥物。地衣類似于無花植物，是真菌(地衣共生菌)與藻類和/或藍(lán)細(xì)菌(共生光合生物)的共生體。地衣中的真菌形成包含典型次級代謝物的葉狀體或地衣基質(zhì)(AhmadjinV.，The lichen symbiosis, Wiley, New York, pp.1-6,1993)。足量的天然地衣樣品難以獲得，并且培養(yǎng)大量地衣的技術(shù)也是未知的。為此，與高等植物的研究相比，對地衣的研究相對不足。由于用于地衣的組織培養(yǎng)方法、大規(guī)模生產(chǎn)方法和生物分析方法已經(jīng)得到改進(jìn)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了積極的研究(Behera, B.C.et al.，Lebensm.ffiss.Technol.,39:805,2006)。從地衣中分離出了具有多種生物活性(包括細(xì)胞毒性、抗真菌性、抗菌性、抗氧化性和抗炎活性)的化合物，包括脂肪酸、縮酚酸類、縮酚酸環(huán)醚類、二苯并呋喃、雙萜、蒽醌、萘醌類(naphtoquinones)、地衣酸、普耳文酸(pulvinic acids)、咕噸酮和環(huán)二硫哌嗪二酮(epidithiopiperazinediones)(Muller, K., Appl.Microbiol.Biotechnol.,56:9-16,2001)?？讟浠?Ramalina terebrata)是天然生長在南極喬治王島(King GeorgeIsland)的地衣，并可容易地從喬治王島收集。在對南極地衣孔樹花的研究中，本發(fā)明人曾分離了具有優(yōu)異抗氧化活性的新化合物樹花素(Ramalin)(韓國專利申請N0.2008-111021)。然而，尚沒有報道樹花素具有抗炎活性。因此，本發(fā)明人通過進(jìn)行體外和體內(nèi)的比較實(shí)驗(yàn)檢測了樹花素的細(xì)胞免疫抑制活性，從而測定了樹花素在小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7中對LPS誘導(dǎo)的NO產(chǎn)生的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樹花素具有抑制炎性反應(yīng)的作用。更具體地，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的樹花素抑制了 iNOS的mRNA表達(dá)，從而顯著抑制了 NO產(chǎn)生，抑制了 NF- κ B的活化，抑制了 p38MAPK、ERKI/2和JNK信號途徑，抑制了 LPS受體TLR4的表達(dá)，并且在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中顯示了優(yōu)異的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，從而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)活性的樹花素的新用途。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療炎性疾病或免疫疾病的藥物組合物，其包含作為活性成 分的具有下式I結(jié)構(gòu)的樹花素或其藥學(xué)上可接受的鹽:
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防或治療炎性疾病或免疫疾病的藥物組合物，其包含作為活性成分的具有下式1結(jié)構(gòu)的樹花素或其藥學(xué)可接受的鹽，
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述炎性疾病或免疫疾病為:特應(yīng)性皮炎、關(guān)節(jié)炎、尿道炎、膀胱炎、動脈硬化、變應(yīng)性疾病、鼻炎、哮喘、急性疼痛、慢性疼痛、牙周炎、牙齦炎、炎性腸病、痛風(fēng)、心肌梗死、充血性心力衰竭、高血壓、心絞痛、胃潰瘍、腦梗死、唐氏綜合癥、多發(fā)性硬化、肥胖癥、糖尿病、癡呆、抑郁癥、精神分裂癥、結(jié)核病、睡眠障礙、敗血癥、燒傷、胰腺炎、帕金森氏癥、中風(fēng)、由癲癇發(fā)作導(dǎo)致的腦損害或自身免疫性疾病。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其進(jìn)一步包含通常用于制備藥物組合物的適合的載體、賦形劑或稀釋劑。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其與一種或多種藥劑組合制劑或聯(lián)合使用，所述藥劑選自:抗組胺藥、抗炎藥、抗癌藥和抗生素組成的組。
5.用于預(yù)防或改善炎性疾病或免疫疾病的功能性食品，其包含具有下式I結(jié)構(gòu)的樹花素作為活性成分，
6.如權(quán)利要求5所述的功能性食品，其中所述炎性疾病或免疫疾病為:特應(yīng)性皮炎、關(guān)節(jié)炎、尿道炎、膀胱炎、動脈硬化、變應(yīng)性疾病、鼻炎、哮喘、急性疼痛、慢性疼痛、牙周炎、牙齦炎、炎性腸病、痛風(fēng)、心肌梗死、充血性心力衰竭、高血壓、心絞痛、胃潰瘍、腦梗死、唐氏綜合癥、多發(fā)性硬化、肥胖癥、糖尿病、癡呆、抑郁癥、精神分裂癥、結(jié)核病、睡眠障礙、敗血癥、燒傷、胰腺炎、帕金森氏癥、中風(fēng)、由癲癇發(fā)作導(dǎo)致的腦損害或自身免疫性疾病。
7.功能性化妝品，其包含具有下式I結(jié)構(gòu)的樹花素作為活性成分，
8.如權(quán)利要求7所述的功能性化妝品，其用于改善炎性疾病。
9. 如權(quán)利要求8所述的功能性化妝品，其中所述炎性疾病是特應(yīng)性皮炎或燒傷。
全文摘要
本發(fā)明涉及從南極地衣孔樹花(Ramalina terebrata)分離的樹花素的新用途(抗炎活性)，更具體地，涉及包含作為活性成分的樹花素的藥物組合物。本發(fā)明的樹花素是源自天然物質(zhì)的化合物，沒有毒性或副作用，并且抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS2)在轉(zhuǎn)錄階段的表達(dá)以顯著抑制炎性反應(yīng)的關(guān)鍵介質(zhì)一氧化氮(NO)的產(chǎn)生。此外，其還抑制炎癥介質(zhì)NF-κB的活化，抑制p38MAPK、ERK1/2和JNK信號途徑，并抑制LPS受體TLR4的表達(dá)，表明樹花素具有優(yōu)異的抗炎作用。因此，包含樹花素的組合物能夠有效地用于根本性地治療或預(yù)防炎性疾病或免疫疾病，并消除或緩解所述疾病的癥狀。
文檔編號A61K31/17GK103140222SQ201180032808
公開日2013年6月5日 申請日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者任珽漢, 金一贊, 李圣九, 金德圭, 韓世鐘, 李亨錫, 金星珍, 金兌勍, 康弼盛, 樸喜勇, 樸荷主, 表皙能 申請人:韓國海洋研究院