專利名稱：預(yù)防hiv感染以及對由hiv引起的疾病和hiv相關(guān)疾病、包括aids進(jìn)行預(yù)防和治療的藥劑和方法
預(yù)防HIV感染以及對由HIV引起的疾病和HlV相關(guān)疾病、包括AIDS進(jìn)行預(yù)防和治療的藥劑和方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，可用于有效預(yù)防HIV感染、以及預(yù)防和治療由HIV引起的疾病和HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)包括基于極低劑量的抗干擾素抗體的活性形式對感染性疾病(包括病毒性疾病)進(jìn)行治療的藥劑(RU2192888C1，A61K39/395, 20.11.2002)。然而，這一藥劑既對HIV感染的預(yù)防無效，也對各種由HIV引起的各種疾病或HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)的預(yù)防和治療無效。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對無明顯副作用的復(fù)合藥劑的開發(fā)，所述復(fù)合藥劑使得能夠有效預(yù)防HIV感染以及預(yù)防和有效治療由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病(包括在HIV陽性受試者中的感染和侵染、惡性腫瘤以及AIDS)。
這一問題的解決方案由如下事實(shí)提供保障:用于預(yù)防HIV感染以及預(yù)防和治療由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)的本發(fā)明所述藥劑含有針對抗原的、活性強(qiáng)化形式(activated-potentiated form)的抗體；所述抗原為免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽,或者主要由免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的蛋白 或多肽；所述蛋白或多肽與HIV進(jìn)行反應(yīng)，或者其含量或功能活性在有HIV存在的情況下發(fā)生改變。
同時(shí),可使用主要針對溶解性抗原(solved antigen)(或可溶性抗原，即，未結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原)的、活性強(qiáng)化形式的抗體。
同時(shí)，可將細(xì)胞因子(cytokines)(除Y -干擾素外)用作可溶性抗原。
除此之外，還可使用主要針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體。
同時(shí),將具有免疫能力的(immunocompetent)細(xì)胞受體用作結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原。
此外,還可將分化簇(clusters of differentiation)(除T淋巴細(xì)胞的⑶4分子夕卜)用作結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原。
可將針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體以活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液的形式使用，所述活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液的活性基于以下方法:對處于水或水-醇溶劑中的抗體儲(chǔ)備(初始)溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋，且在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩。
同時(shí)，所要求保護(hù)的藥劑可被設(shè)計(jì)以固體劑型作為藥物組合物，所述藥物組合物含有:技術(shù)上所需(有效)量的中性載體，所述中性載體用活性強(qiáng)化形式的抗體的水溶液和水-醇溶液的混合物進(jìn)行飽和，所述抗體針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原；以及藥學(xué)上可接受的添加劑，所述添加劑包括例如乳糖、微晶纖維素和硬脂酸鎂。
可通過將抗體儲(chǔ)備(初始)溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋、并在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩，得到活性強(qiáng)化形式的抗體的水溶液和水-醇溶液，所述抗體針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原，所述儲(chǔ)備溶液的濃度為0.5-5.0mg/mL。
可以不同的順勢療法稀釋液(主要為百倍稀釋液)的混合物的形式使用活性強(qiáng)化形式的抗體。
這一問題的解決方案還由如下事實(shí)提供保障:在用于本發(fā)明中的預(yù)防HIV感染以及預(yù)防和治療由HIV引起的疾病和HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)的方法中，使用針對抗原(免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽，或者主要由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白或多肽)的、活性強(qiáng)化形式的抗體；所述抗原與HIV進(jìn)行反應(yīng),或者其含量或功能活性由HIV感染而改變。
針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體可以各組分的活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液的形式使用，所述活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液的活性基于以下方法:對處于水或水-醇溶劑中的抗體儲(chǔ)備(初始)溶液進(jìn)行多次稀釋，且在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩。
針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體的水溶液和水-醇溶液主要通過下述步驟得到:將抗體儲(chǔ)備(初始)溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋，并在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩；所述儲(chǔ)備溶液的濃度為0.5-5.0mg/mL。
根據(jù)本發(fā)明，所述活性強(qiáng)化形式為根據(jù)如下強(qiáng)化的順勢療法技術(shù)所制得的抗體形式:通過將抗體儲(chǔ)備(初始)溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋，且在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩而得以強(qiáng)化；該形式在預(yù)防HIV感染以及預(yù)防和治療由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)的藥理學(xué)模型和/或臨床方法中具有活性。
為針對溶解性抗原(例如，針對腫瘤壞死因子_a或人a-干擾素)或針對結(jié)合至免疫細(xì)胞外膜的抗原(例如，針對CD8受體)的、活性強(qiáng)化形式的抗體所提出的用途產(chǎn)生了意想不到的治療效果，所述意想不到的治療效果為藥劑在預(yù)防HIV感染以及預(yù)防和治療由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)方面更高的療效。
實(shí)驗(yàn)表明，所要求保護(hù)的藥劑其特征在于對HIV的預(yù)防療效高，所述藥劑預(yù)防人類免疫缺陷病毒侵入細(xì)胞及其胞內(nèi)復(fù)制，因此可用于有效治療和預(yù)防易表現(xiàn)出慢性病程的病毒性疾病，包括HIV-感染的二級預(yù)防。
所要求保護(hù)的藥劑可與抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑相結(jié)合使用，所述抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑包括復(fù)合藥劑、如逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如，齊多夫定衍生物)；這使得抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑的劑量減少，同時(shí)維持了高的治療功效，提高了治療的安全性并降低了不良事件的發(fā)生率。
具體實(shí)施方式
主要以如下方式制備所述藥劑。
為了制備活性強(qiáng)化形式的活性物質(zhì)，使用單克隆抗體或多克隆抗體(主要)；所述抗體可使用已知的技術(shù)獲得，尤其是使用例如在Immunological methods, G.Frimel, Μ.主編，‘Meditsina’，1987, p.9-33 [Russian];或在文獻(xiàn) Laffly E., Sodoyer R.，Hum.Antibodies.Monoclonal and recombinant antibodies, 30years after，2005，Vol.14，Nl-2.，P.33-55中所述的技術(shù)。
單克隆抗體可使用如雜交瘤技術(shù)獲得。并且，該方法的初始步驟包括基于已在多克隆抗血清制備過程中開發(fā)出的原則進(jìn)行免疫。這一方法的進(jìn)一步步驟包括:獲得產(chǎn)生具有相同特異性的抗體克隆的雜交瘤細(xì)胞。其各自的分離使用與多克隆抗血清分離相同的方法進(jìn)行。
多克隆抗體可通過動(dòng)物的主動(dòng)免疫獲得。為了這一目的，使用特別的方案，對動(dòng)物進(jìn)行本發(fā)明所需物質(zhì)、抗原或綴合抗原(免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽、或者主要由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白或多肽；所述蛋白或多肽與HIV進(jìn)行反應(yīng)，或者其含量和/或功能活性由HIV感染而改變)的一系列注射。作為這一過程的結(jié)果，獲得用于生產(chǎn)活性強(qiáng)化形式的單特異性抗血清。如果必要的話，例如使用親和色譜法、鹽析法、或離子交換色譜法的方法對存在于抗血清中的抗體進(jìn)行純化。
例如，對于所要求保護(hù)的藥劑的生產(chǎn)，可使用抗腫瘤壞死因子α多克隆抗體，所述抗腫瘤壞死因子α多克隆抗體作為進(jìn)一步制備活性強(qiáng)化形式的儲(chǔ)備(初始)溶液(濃度為 0.5-5.0mg/mL)使用。
優(yōu)選使用多 克隆抗體來制備所要求保護(hù)的藥劑；所述多克隆抗體可利用對兔進(jìn)行如下的免疫作用而獲得。
例如，抗腫瘤壞死因子a (TNF- α )多克隆抗體可使用TNF- α的整個(gè)分子來獲得，所述TNF-α的整個(gè)分子具有如下序列:
I MSTESMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGATTLFCL LHFGVIGPQR
61 EEFPRDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQffLNRRAN ALLANGVELR
121 DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE
181 TPEGAEAKPff YEPIYLGGVF QLEKGDRLSA EINRPDYLDF AESGQVYFGI IAL
使用例如選白于如下序列的腫瘤壞死因子的多肽片段，可獲得抗腫瘤壞死因子-a (TNF- α )多克隆抗體:
84-88:
PSDKP
93-97:
VANPQ
65-199:
RDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQffLNRRAN ALLANGVELRDNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEGAEAKPffYEPIYLGGV
77-93:
RSS SRTPSDKPVA HVV
32-54:
GGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGA
56-73:
IGPQR EEFPRDLSLI SPL
123-160:
QLWPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA
176-190:
PCQRE TPEGAEAKPff
5-45:
SMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSL
150-184:
V LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEG
77-233:
VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGV ELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQ TKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL.
在采血前7-9天，進(jìn)行1-3次靜脈注射，以提高抗體水平。在免疫過程中，從兔中取出小量的血液樣本，以評估抗體的量。第一次注射后40-60天，達(dá)到對所注射的大多數(shù)抗原的免疫反應(yīng)的最高水平。在第一個(gè)兔免疫周期后，提供30天來使之恢復(fù)，然后重復(fù)進(jìn)行包括1-3次靜脈注射在內(nèi)的免疫。為了獲得抗血清，從經(jīng)免疫的兔中將血液收集于容積為50ml的離心試管中。借助于木質(zhì)藥匙，從試管壁清除所形成的凝塊，將攪拌棒(stick)放置于試管中心所形成的凝塊中。將血液放置于冰箱(溫度4°C)中過夜。第二天，將附著至藥匙的凝塊移除，將剩余液體在13000g下離心lOmin。上清液(沉淀之上的液體)為抗血清。所獲得的抗血清應(yīng)為黃色?？杉尤?0%的NaN3至其終濃度為0.02%，在使用前，將所述抗血清于_20°C的溫度下保持冷凍、或者于_70°C的溫度下而不加入NaN3時(shí)保持冷凍?？砂凑杖缦滤镜姆绞綇目鼓[瘤壞死因子-α的抗血清中分離抗體:
1.將IOml兔抗血清用0.15Μ的NaCl稀釋2倍，加入6.26g Na2SO4,混合并在4°C下孵育12-16小時(shí)；
2.將所形成的沉淀物通過離心的方式移除，于IOml磷酸鹽緩沖液中稀釋，然后用相同的緩沖液在室溫下透析過夜；
3.通過離心方式移除沉淀物后，將溶液加樣至用磷酸鹽緩沖液平衡后的DEAE-纖維素柱；
4.通過在280nm處對洗脫液的光密度進(jìn)行測量來確定抗體餾分。
通過親和色譜方 法在具有抗原的柱中經(jīng)由如下方式對抗體進(jìn)行純化:將抗腫瘤壞死因子α抗體與抗原(腫瘤壞死因子α )結(jié)合，所述抗原連接至柱中的不可溶基質(zhì)；隨后用濃的鹽溶液對抗體進(jìn)行洗脫。
將由這一方法獲得的濃度為0.5-5.0mg/ml、優(yōu)選2.0-3.0mg/ml的抗腫瘤壞死因子α多克隆抗體的緩沖液用作基質(zhì)(初始)溶液，用于隨后制備活性強(qiáng)化形式的抗體。
抗人α -干擾素多克隆抗體可通過上述方法而獲得；用于兔免疫的免疫原(抗原)由佐劑和如下序列之一的人α-干擾素的完整分子表示:
人α-干擾素(亞型2):
MALTFALLVA LLVLSCKSSC SVGCDLPQTH SLGSRRTLML LAQMRKISLF SCLKDRHDFG
FPQEEFGNQF QKAETIPVLH EMIQQIFNLF STKDSSAAffD ETLLDKFYTE LYQQLNDLEA
CVIQGVGVTE TPLMKEDSIL AVRKYFQRIT LYLKEKKYSP CAffEVVRAEI MRSFSLSTNL
QESLRSKE
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防Hiv感染以及用于對由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病、包括AIDS進(jìn)行預(yù)防和治療的藥劑，其特征在于，含有針對免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽的、活性強(qiáng)化形式的抗體；所述蛋白或多肽與HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性隨所述HIV感染而改變。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑，其特征在于，使用針對溶解性抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥劑，其特征在于，使用除Y-干擾素以外的抗原細(xì)胞因子作為所述溶解性抗原。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑，其特征在于，使用針對結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥劑，其特征在于，將具有免疫能力的細(xì)胞用作所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥劑，其特征在于，將除T淋巴細(xì)胞的CD4分子以外的分化簇用作所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的藥劑，其特征在于，將針對所述溶解性抗原或針對所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體用作活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液，所述活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液的活性通過下述方法來調(diào)節(jié):將處于水或水-醇溶劑中的抗體基質(zhì)初始溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋，且在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩。
8.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的藥劑，其特征在于，所述藥劑以固體劑型作為藥物組合物生產(chǎn)，所述藥物組合物含有:技術(shù)上所需量的中性載體，所述中性載體用活性強(qiáng)化形式的抗體的水溶液和水-醇溶液的混合物進(jìn)行飽和，所述抗體針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原；以及藥學(xué)上可接受的添加劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的藥劑，其特征在于，針對所述溶解性抗原或針對所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體的水溶液和水-醇溶液通過下述方式生產(chǎn):將抗體基質(zhì)初始溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋，并在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩；同時(shí)所述基質(zhì)初始溶液的濃度為0.5-5.0mg/mL。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的藥劑，其特征在于，以不同的順勢療法稀釋液、主要為百倍順勢療法稀釋液的混合物形式使用所述活性強(qiáng)化形式的抗體。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥劑，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的添加劑包括乳糖、微晶纖維素和硬脂酸鎂。
12.預(yù)防HIV感染以及對由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病、包括AIDS進(jìn)行預(yù)防和治療的方法，其特征在于，使用針對抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體，所述抗原為免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽；所述蛋白或多肽與HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性隨HIV感染而改變。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，將針對溶解性抗原或針對結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體用作活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液，所述活性強(qiáng)化水溶液或活性強(qiáng)化水-醇溶液的活性通過下述方法來調(diào)節(jié):將處于水或水-醇溶劑中的抗體基質(zhì)初始溶液進(jìn)行多次稀釋， 且在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，針對所述溶解性抗原或針對所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體的水溶液或水-醇溶液通過下述方式生產(chǎn):將抗體基質(zhì)初始溶液進(jìn)行連續(xù)多次稀釋，并在每次稀釋后伴以外部機(jī)械作用-豎直震蕩；同時(shí)所述基質(zhì)初始溶液的濃度為0.5-5.0mg/mL。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，使用針對溶解性抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體。
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，使用除Y-干擾素以外的細(xì)胞因子作為所述溶解性抗原。
17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，使用針對結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原的、活性強(qiáng)化形式的抗體。
18.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，將具有免疫能力的細(xì)胞用作所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì)胞外膜的抗原。
19.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，將除T淋巴細(xì)胞的CD4分子以外的分化簇用作所述結(jié)合至免疫系統(tǒng)細(xì) 胞外膜的抗原。
全文摘要
用于預(yù)防HIV感染以及對由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)進(jìn)行預(yù)防和治療的藥劑，所述藥劑包含針對免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽的、活性強(qiáng)化形式的抗體；所述蛋白或多肽與HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性隨HIV感染而改變。同時(shí)，在用于預(yù)防HIV感染以及用于對由HIV引起的疾病或HIV相關(guān)疾病(包括AIDS)進(jìn)行預(yù)防和治療的方法中，使用針對抗原(即，免疫系統(tǒng)的蛋白或多肽)的、活性強(qiáng)化形式的抗體；所述蛋白或多肽與HIV相互作用，或者其含量和/或功能活性隨HIV感染而改變。
文檔編號(hào)A61P31/18GK103209705SQ201180040388
公開日2013年7月17日 申請日期2011年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月6日
發(fā)明者奧列格·伊里奇·愛潑斯坦, 謝爾蓋·亞歷山德羅維奇·塔拉索夫 申請人:奧列格·伊里奇·愛潑斯坦