專利名稱：：治療方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及治療蛋白尿或與蛋白尿相關之疾病的方法。
背景技術：
：在本說明書中引用的所有參考文獻(包括任何專利或?qū)＠暾?通過引用并入本文。應清楚地理解，盡管本文中提及了許多現(xiàn)有技術出版物，但是該引用不構(gòu)成承認這些文獻中的任一個形成本領域中常規(guī)知識的一部分。尿蛋白損失(蛋白尿)在世界范圍內(nèi)影響約I億人并且是腎小球源性腎功能障礙(包括炎癥)的特征。蛋白尿本身對于腎疾病和腎外疾病二者而言均是風險因素。蛋白尿一般反映了在通常情況下非濾過性血漿大分子(例如白蛋白)的腎小球通透性的提高。尤其在腎組織的疾病(腎炎、腎病、固縮腎(contractedkidney))中以及由心功能不全引起的充盈腎(engorgedkidney)中出現(xiàn)蛋白尿。除白蛋白(白蛋白尿)之外，球蛋白和其他血蛋白體(bloodproteinbody)也進入尿中。腎足細胞及其足突(footprocess,FP)是腎小球中超濾系統(tǒng)的重要部件，其中它們包含與內(nèi)皮細胞和腎小球基底膜(glomerularbasementmembrane,GBM)一起的濾過屏障。足細胞位于腎的腎小球內(nèi)，在那里它們附著于GBM。足細胞FP通過裂孔隔膜(slitdiaphragm,SD)(—種經(jīng)修飾的黏著連接(adherensjunction))而相互連接。蛋白尿性腎疾病通常與由足細胞微絲系統(tǒng)的重排驅(qū)動的不同程度的足細胞膜重建(FP消失和/或SD破壞)相關。由白蛋白穿過腎小球足細胞濾過屏障滲漏至尿中而引起的微量白蛋白尿(microalbuminuria)被認為是系統(tǒng)性脈管系統(tǒng)中更廣泛功能障礙的臨床窗(clinicalwindow),表明許多疾病(例如,包括代謝綜合征、心血管疾病(cardiovasculardisease,CVD)或糖尿病)風險的提高。因此，存在對改進的和/或額外的用于治療蛋白尿或與蛋白尿相關疾病之方法的需要。發(fā)明概述第一方面提供了用于治療蛋白尿或與蛋白尿相關之疾病的方法，其包括向有此需要的對象施用治療有效量的乳鐵蛋白(Iactoferrin)。第二方面提供了用于治療蛋白尿的乳鐵蛋白。第三方面提供了乳鐵蛋白在制備用于治療蛋白尿之藥物中的用途。所述第一方面的方法以及所述第二和第三方面的用途直接基于出乎意料的觀察結(jié)果乳鐵蛋白能夠在診斷為代謝綜合征的對象中(尤其是基線尿白蛋白/肌酸酐比值(albumin/creatinineratio,ACR)大于約2mg/mmol的對象亞組中)降低蛋白尿。在本發(fā)明的一些方面中可使用任何生物活性乳鐵蛋白。然而，第四方面提供了用于治療蛋白尿的、可經(jīng)口攝入或可經(jīng)口施用的乳鐵蛋白。所述第四方面的可經(jīng)口攝入或可經(jīng)口施用的乳鐵蛋白適于根據(jù)所述第一方面來施用。用于治療蛋白尿的現(xiàn)行醫(yī)療標準(standardofcare)必需施用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(angiotensin-convertingenzyme,ACE)抑制劑或血管緊張素受體阻斷劑(angiotensinreceptorblocker,ARB)。本發(fā)明提供了用于治療蛋白尿的替代治療?；蛘?，本發(fā)明可延遲開始施用ACE抑制劑或ARB的需求?；蛘?，本發(fā)明可用于與ACE抑制劑或ARB相結(jié)合。附圖簡述圖1描述了研究設計的示意圖。圖2描述了在基線具有>2mg/mmol之尿ACR的參與者亞組中的尿白蛋白/肌酸酐比值(ACR)。圖3描述了僅對于乳鐵蛋白組的來自圖2的尿ACR數(shù)據(jù)。圖4描述了來自圖2的在訪問3(V3)和訪問I(Vl)之間的尿ACR數(shù)據(jù)中的百分比變化。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及使用乳鐵蛋白治療蛋白尿。本文中使用的術語“治療”指降低癥狀的嚴重程度和/或頻率，消除癥狀和/或潛在病因(underlyingcause)，防止發(fā)生癥狀(預防)和/或其潛在病因，以及改善或修復損傷。因此，例如，第一方面的“治療”蛋白尿的本發(fā)明方法包括在易感的個體中預防病癥或疾病和在有臨床上有癥狀的個體中治療病癥或疾病。本文中使用的“治療”涵蓋在脊椎動物、哺乳動物、尤其是人中對病癥或疾病的任何治療或預防，并且包括抑制病癥或疾病，即，阻止其發(fā)生；或者緩解或改善病癥或疾病的影響，即引起病癥或疾病之影響的消退。本文中使用的“癥狀”指由特定病癥或疾病(即潛在病因)引起并且與其相伴隨的現(xiàn)象，并且作為該病癥或疾病的指示?！鞍Y狀”可直接在對象中可觀察，或可例如通過使用實驗室測試或測定而間接可觀察。另外，如本文中所使用的，治療癥狀包括對潛在病因的治療并且對治療潛在病因的治療包括對癥狀的治療。本文中使用的“預防”或“預防的”或“預防性”治療包括在對象中預防病癥的發(fā)生或改善所述病癥的后續(xù)進展，所述對象可能易患有所述病癥但卻尚未被診斷患有所述病癥。本文中使用的術語“蛋白尿”指蛋白質(zhì)在尿中以超過正常的水平存在?！暗鞍啄颉卑ā鞍椎鞍啄颉焙汀拔⒘堪椎鞍啄颉薄Ｄ蛑姓５娜说鞍踪|(zhì)水平的范圍是約O至30mg/L，但是對于隨機尿樣本而言，所述水平可能達到約80mg/L。對于24小時尿采集，正常的人尿蛋白水平的范圍是約O至150mg。尿ACR大于約30mg/mmol指示蛋白尿。當?shù)鞍啄蛩较陆抵恋陀诨€至少約10%時(例如，在基線時100的值將下降至少約10%至約90)，則蛋白尿被“治療”、“改善”或“降低”。在第一至第三方面的一些實施方案中，在對象中蛋白尿的降低為低于基線至少約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。在第一至第三方面中任一方面的一個實施方案中，在對象中蛋白尿的降低為低于基線約56%或約78%。可在開始治療后約I周，或者約2、3或4周，或者約I個月，或者約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月，或者約I年，或者約2或3年或者更長之后評估蛋白尿的降低。蛋白尿(包括白蛋白尿和微量白蛋白尿)通常引起或指示疾病，但是不限于產(chǎn)生疾病。蛋白尿旨在包括所有形式的蛋白尿，包括但不限于生理性蛋白尿；功能性蛋白尿；和運動性蛋白尿，其涉及過度肌肉運用之后的功能性蛋白尿形式。另外，蛋白尿涵蓋良性蛋白尿(也稱為“自發(fā)性”蛋白尿(“essential”proteinuria)),其指不是腎中病理學變化之結(jié)果的類型或蛋白尿。蛋白尿還涵蓋病理性蛋白尿，例如尿中的蛋白質(zhì)水平高于正常生理水平。在細胞水平，蛋白尿伴隨足細胞的結(jié)構(gòu)重排。腎超濾位于腎小球(血管和細胞的組合)內(nèi)。高度特化的足細胞進行濾過工作并且是腎疾病中的主要靶細胞。足細胞可以以高度動態(tài)方式重組其基于肌動蛋白的細胞骨架。這樣的重組確定了腎中超濾屏障的完整性。足細胞足突中的肌動蛋白細胞骨架從應力纖維(stressfibre)到皮質(zhì)肌動蛋白(corticalactin)的重組導致足細胞足突消失和發(fā)生蛋白尿。足細胞損傷可由許多病癥和因素引起。這些改變導致進行性腎損傷并且隨時間導致腎功能的退化。本文中使用的術語“白蛋白尿”(還稱為“大量白蛋白尿(macroalbuminuria)”)指白蛋白在尿中以超過正常的水平存在。因為尿蛋白主要是白蛋白，所以正常的人尿ACR水平的范圍是約O至30mg/mmol。本文中使用的術語“微量白蛋白尿”指尿中存在白蛋白，所述白蛋白在人中以約20至200μg/分鐘的速率或以約30至300mg/L的水平排泄。當由尿ACR定義時，“微量白蛋白尿”指尿ACR大于約30mg/g,或者尿ACR對女性而言為約3.5mg/mmol或更大以及對男性而言約2.5mg/mmol或更大。微量白蛋白尿通常是腎疾病的早期預警，但是也可能因其他原因而存在。“肌酸酐”是肌肉中肌酸的分解產(chǎn)物，并且一般以相當恒定的速率由身體產(chǎn)生(取決于肌肉質(zhì)量(musclemass))。肌酸酐主要通過腎(腎小球濾過和近腎小管分泌)從血液中濾出。很少甚至沒有肌酸酐的小管重吸收。肌酸酐可以以mg/dL或ymol/L為單位來報告(lmg/dL等于88.4ym0l/L)。通常的人血清肌酸酐參考范圍對女性而言是O.5至1.Omg/dL(約45至90μmol/L)或50至110μmol/L,而對男性而言是0.7至1.2mg/dL(60至llOymol/L)或60至120μmol/L。男性比女性易于具有更高水平的肌酸酐，這是因為男性通常比女性具有更多的骨骼肌質(zhì)量。如果腎的濾過不足，那么血漿肌酸酐水平就會上升。因此，血漿和尿中的肌酸酐水平可用于計算肌酸酐清除率(CrCl),其反映了腎小球濾過率(glomerularfiltrationrate，GFR)。GFR在臨床上很重要，這是因為其是腎功能的量度。然而，在嚴重的腎功能障礙的情況下，肌酸酐清除率將會被過高估計，因為主動分泌肌酸酐將占被清除的總肌酸酐的較大比例。酮酸、西咪替丁和甲氧芐啶降低肌酸酐的小管分泌，因而提高了GFR評估的準確性(尤其是在嚴重腎功能障礙中)?？赏ㄟ^測量血漿肌酸酐濃度和血漿尿素濃度來對腎功能進行較全面的評估。血尿素氮(BUN)與肌酸酐的比值可說明問題，但不是腎固有的那些；例如，與肌酸酐不成比例的尿素水平升高可說明腎前性(pre-renal)問題,例如容量不足(volumedepletion)。血衆(zhòng)尿素濃度可表示為BUN(以給出BUN/肌酸酐比值)或尿素(以給出尿素/肌酸酐比值)。正常的人血漿BUN值是7至30mg/dL或正常人血漿尿素值是2.5至10.7mmol/L。本文中使用的“BUN/肌酸酐比值”是BUN(mg/dL)與血漿肌酸酐(mg/dL)的比值(mg/g)。或者，“尿素/肌酸酐比值”是血漿尿素(mmol/L)與血漿肌酸酐(ymol/L)的摩爾比值。在該比值背后的原理是尿素和肌酸酐二者均由腎小球自由濾過這一事實。然而，通過小管的尿素重吸收可被調(diào)節(jié)(提高或降低)，而肌酸酐重吸收保持恒定和最低。因此，血衆(zhòng)BUN/肌酸酐比值大于約20mg/mg或尿素/肌酸酐比值大于約lOOmmol/mmol可說明腎前性疾病(在血漿中BUN重吸收相對于肌酸酐提高并且不成比例地升高)。約10至20mg/mg的血衆(zhòng)BUN/肌酸酐比值或約40至lOOmmol/mmol的尿素/肌酸酐比值可表示正?；蚰I后性(post-renal)疾病(BUN重吸收在正常極限內(nèi))。低于約10mg/mg的血衆(zhòng)BUN/肌酸酐比值或低于約40mmol/mmol的尿素/肌酸酐比值可指示腎內(nèi)性(intra-renal)疾病(腎損傷引起B(yǎng)UN重吸收降低并且在血漿中BUN相對于肌酸酐不成比例地降低)。然而，由于在參考范圍內(nèi)較低或正常偏低的肌酸酐和BUN或尿素,升高的BUN/肌酸酐比值或尿素/肌酸酐比值不大可能具有臨床意義。在第一至第三方面中任一方面的一個實施方案中，待治療的蛋白尿與腎前性疾病、腎內(nèi)性疾病(即腎疾病)或腎后性疾病相關。用于檢測和診斷蛋白尿、白蛋白尿或微量白蛋白尿的方法為本領域技術人員所公知，包括放射免疫測定、乳膠體免疫測定(immunoassayswithlatexbody)、突光免疫測定、酶免疫測定、凝集抑制、免疫比濁法(immunoturbidimetry)、免疫濁度測定法(immunonepheIometry)和放身寸免疫擴散測定(radial`immunodiffusionassay)?？赏ㄟ^對單個尿樣本或?qū)Χ〞r尿采集進行特定尿測試來測量蛋白尿、白蛋白尿或微量白蛋白尿。本領域技術人員應知曉用于確定肌酸酐和尿素濃度的基于酶的或基于抗體的方法。在第一、第二或第三方面的一個實施方案中，蛋白尿與葡萄糖代謝受損、胰島素作用受損、代謝綜合征、糖尿病(diabetesmellitus(diabete))、高血壓和/或肥胖相關。本文中使用的“代謝綜合征”指一批一起出現(xiàn)并且提高對象發(fā)生2型糖尿病、卒中或心臟病之風險的疾病。代謝綜合征的原因很復雜并且仍不十分清楚，但是有人認為其與遺傳相關。超重或肥胖以及缺乏身體活動(physicallyinactive)提高了發(fā)生代謝綜合征的風險。代謝綜合征還被稱為“綜合征X”或“胰島素抗性綜合征”。當對象患有以下疾病時被歸類為患有代謝綜合征-中心性(腹部)肥胖-在肚子(腹部)中及周圍有過多脂肪-加上以下因素中的任意兩個〇高血壓；〇高血液三酸甘油(highbloodtriacylglycerol)；〇低的高密度脂蛋白(HDL)；〇空腹葡萄糖受損(血液葡萄糖水平比正常高但是沒有高到足以被診斷為2型糖尿病)；和〇胰島素抗性(身體不像其應當?shù)哪菢佑行У厥褂靡葝u素，尤其在肌肉和肝中)。本文中使用的“胰島素抗性”指這樣的狀態(tài)，其中胰需要釋放升高水平的胰島素以維持正常血液葡萄糖水平。胰島素抗性提高了發(fā)生2型糖尿病的風險并且見于大多數(shù)患有該類型糖尿病的人中。如果胰不能夠產(chǎn)生額外的胰島素以克服胰島素抗性，那么血液葡萄糖水平將會上升并且將發(fā)生葡萄糖耐量受損或糖尿病?；加?型糖尿病的對象通常還具有代謝綜合癥的其他特征以及顯著提高的心血管疾病風險。本文中使用的“中心性肥胖”是身體脂肪主要沉積在腹部周圍和身體上部。腰圍與發(fā)生代謝綜合征的風險成比例。對象發(fā)生中心性肥胖的風險取決于其性別和種族背景而有所不同。通常，94cm或更大(男性)或者80cm或更大(女性)的腰圍指示代謝綜合征的風險。本文中使用的“高血壓”指在不存在其他風險因素時人對象中的血壓大于約140/90mmHg。人對象中的理想血壓范圍被認為是低于約130/80mmHg(或更低，如果存在其他疾病)。高血壓提高了發(fā)生心血管疾病、卒中和腎疾病的風險。三酰甘油和膽固醇是來源于飲食的以及由肝產(chǎn)生并且通過脂蛋白在血液中運輸?shù)闹|(zhì)。升高的血液三酰甘油和降低的HDL膽固醇提高了代謝綜合征和動脈粥樣硬化(這在心血管疾病中是促成因素)的風險。超重或肥胖本身也是諸如高三酰甘油水平、高血壓和動脈粥樣硬化等病癥的風險因素。本文中使用的“葡萄糖耐量受損”(有時稱為“前驅(qū)糖尿病(pre-diabetes)”)指血液葡萄糖水平比正常更高但是沒有高到足以被稱為糖尿病?；加形唇?jīng)治療的葡萄糖耐量受損或空腹葡萄糖受損的對象中的三分之一將發(fā)生糖尿病。這些病癥中的許多以復雜的方式相互關聯(lián)并且難以弄清事件鏈(chainofevents)。一些研究人員認為肥胖可能是代謝綜合征的起點。糖尿病定義了由多重致病因素引起的代謝疾病的復合體并且其特征為一般與蛋白質(zhì)和脂肪代謝受損相關的葡萄糖代謝受損。這導致了升高的空腹和餐后血糖，如果不對其進行治療將導致并發(fā)癥。已知有四種不同類型的糖尿病，(I)I型糖尿病，(2)2型糖尿病，(3)所謂的妊娠糖尿病，其在懷孕期間首先開始或被確認，以及(4)主要基于遺傳缺陷的另一些形式。術語“糖尿病”包括但不限于代謝異常，例如提高的血液葡萄糖水平、肥胖相關的病理狀況、葡萄糖耐量受損、提高的胰島素抗性、高血脂、血脂異常、膽固醇提高(高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥)、高胰島素血癥、高血壓和微量白蛋白尿。葡萄糖耐量受損和空腹葡萄糖受損是被稱為前驅(qū)糖尿病的兩種癥狀。該階段與所謂的胰島素抗性相關，所述胰島素抗性是一組稱為“代謝綜合征”或“綜合征X”的代謝疾病之一，尤其與高脂和肌肉比值相關。因為2型糖尿病通常與來自綜合征X的其他癥狀(例如高甘油三酯血癥或血脂異常)相關。糖尿病的兩種主要形式是I型和2型糖尿病，其中2型糖尿病是最普遍的形式。I型和2型糖尿病與高血糖癥、高膽固醇血癥和高血脂癥相關。在I型和2型糖尿病中對胰島素和絕對胰島素缺乏不敏感導致通過肝、肌肉和脂肪組織利用的葡萄糖降低并且導致血液葡萄糖水平升高。不受控制的高血糖癥與多個器官(例如，眼、心臟、血管、腎和神經(jīng))的功能障礙和衰竭相關，從而因微血管和大血管疾病(包括腎病、神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病、腿和足的潰瘍、脂肪肝疾病、高血壓、心血管疾病和腦血管疾病(卒中)，所謂的糖尿病并發(fā)癥)的風險提聞而導致提聞且過早的死亡率。I型糖尿病是這樣的糖尿病形式，其一般在幼年或青春期開始，并且特征為產(chǎn)生胰島素的β細胞的自身免疫破壞，從而導致胰島素分泌的完全缺陷。2型糖尿病是這樣的糖尿病形式，其主要在成年人中發(fā)生，在疾病的早期階段中，可在他們中產(chǎn)生足夠的胰島素，但是缺陷在于胰島素敏感性，尤其在外周組織中胰島素介導的對葡萄糖的利用和代謝中。在與2型糖尿病相關的多種組織中的變化甚至在檢測到臨床癥狀之前就存在。還考慮治療由創(chuàng)傷(例如燒傷或氮失衡)和脂肪組織疾病(例如肥胖)引起的胰島素抗性。另外，根據(jù)第一至第三方面中任一方面的待治療的尿蛋白包括但不限于與以下相關(即由以下引起或引起以下)的蛋白尿急性腎炎綜合征；奧爾波特綜合征(Alportsyndrome);氨基酸尿；淀粉樣變性；良性直立性(體位性)蛋白尿；膀胱腫瘤；心血管疾病；膠原血管疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡)；充血性心力衰竭；脫水；糖尿病；糖尿病性腎病；埃博拉(ebola)出血熱；子癇(eclampsia);法布里病(Fabry1sdisease)；范克尼綜合征(Fanconisyndrome);局灶性節(jié)段性腎小球硬化癥(focalsegmentalglomerulosclerosis,FSGS);腎小球疾病(例如膜性腎小球腎炎)；腎小球性腎炎；古德帕斯丘綜合征(Goodpasturesyndrome);重金屬攝入；血紅蛋白尿；溶血性尿毒癥綜合征(hemolytic-uremicsyndrome,HUS)；HIV相關的腎??；高血壓；高血壓性腎硬化；IgA腎病(即貝爾熱病(Berger’sdisease));IgM腎?。桓腥?例如系統(tǒng)性感染、HIV、梅毒、肝炎、鏈球菌感染后(post-streptococcalinfection));間質(zhì)性腎炎；腎(腎性)疾??；腎(腎性)窘迫(distress);紅斑狼瘡；惡性高血壓；髓質(zhì)囊性腎疾?。?型和II型膜增生性腎小球腎炎；膜性腎病；系膜增殖性腎炎；微小病變性疾病(minimalchangedisease);多發(fā)性骨髓瘤；肌紅蛋白尿；指甲髕骨綜合癥；壞死性血管炎；腎炎綜合征；腎病綜合征(即內(nèi)在腎衰竭)；腎毒性藥物；器官排斥；胰窘迫(pancreaticdistress);多囊性腎疾?。桓腥竞竽I小球腎炎(例如鏈球菌感染后腎小球腎炎)；子癇前期(preeclampsia);急進性(新月體性)腎小球腎炎；反流性腎??；腎靜脈血栓形成；結(jié)節(jié)病；鐮狀細胞疾??；劇烈運動(strenuousexercise);應激(stress);腎的中毒性損傷；尿窘迫(urinarydistress);尿道感染；以及血管內(nèi)皮功能障礙。伴隨嚴重的蛋白尿，通?？砂l(fā)生低蛋白血癥并且其導致膠體滲透壓(oncoticpressure)降低(腹水、水腫、胸腔積液)。在美國，每年有超過100，000人被診斷為腎衰竭。腎衰竭(或終末期腎病變，endstagerenaldisease,ESRD)是慢性腎疾病(chronickidneydisease,CKD)的最后階段。糖尿病、高血壓和腎炎或腎性炎癥在美國和澳大利亞是腎疾病最常見的原因(在澳大利亞分別有34%、14%和22%的新患者)。CKD和蛋白尿被認為位列對于CVD、住院治療和全因死亡率(all-causemortality)而言最顯著的臨床風險因素之中?？勺鳛樘悄虿〔l(fā)癥之結(jié)果的腎疾病或損傷被稱為糖尿病性腎病，其特征為腎小球過度濾過、細胞外基質(zhì)積聚、腎小球增大、系膜擴張和管間纖維化，從而最終導致糖尿病性腎小球硬化和進行性腎衰竭。早期診斷糖尿病和早期干預在減慢向許多I型和相當比例的2型糖尿病對象中觀察到的腎衰竭的進展中是關鍵性的。源于糖尿病的腎衰竭在美國占新腎衰竭病例的幾乎44%和在澳大利亞占新CKD病例的34%。在美國幾乎有2400萬人患有糖尿病并且在澳大利亞有7.6%的人口(或大約150萬人)患有糖尿病。即使當糖尿病被控制時，該疾病仍可導致CKD和腎衰竭。在美國，約20至30%患有糖尿病的人發(fā)生糖尿病性腎病，接近180，000人最終因腎衰竭而死亡。腎功能障礙可通過促進血管增厚和血管鈣化以及通過活化炎性途徑而促成全面的CVD。還認為，胰島素抗性與氧化應激(早期腎功能降低和白蛋白尿)密切相關。最近，蛋白尿和微量白蛋白尿已經(jīng)被鑒定為CVD的風險因素。高血壓是腎疾病的另一常見原因。患有糖尿病的人傾向于患高血壓。有許多藥學研究工作旨在積極地減慢慢性腎疾病的進展。CKD有兩個重要的異常臨床測試結(jié)果減小的腎小球濾過率(GFR，評估的GFR低于約60mL/分鐘)和蛋白尿。例如，在患有2型糖尿病的患者中經(jīng)常觀察到尿白蛋白排泄的水平大于正常水平。發(fā)生糖尿病性腎疾病要歷經(jīng)許多年。在數(shù)年中，發(fā)生腎疾病的人將會有少量血蛋白，白蛋白開始滲漏到他們的尿中。適度提高的白蛋白尿水平(所謂的微量白蛋白尿)表明進行性腎功能損失直到糖尿病性腎病以及心血管發(fā)病和死亡。隨著疾病發(fā)展，更多的蛋白質(zhì)(包括白蛋白)滲漏到尿中。該階段稱作大量白蛋白尿或蛋白尿。隨著尿中蛋白量的提高，腎的濾過功能一般開始下降。隨著腎損傷的發(fā)生，血壓通常也升高。根據(jù)第一至第三方面中任一方面的待使用的乳鐵蛋白或第四方面的乳鐵蛋白包括但不限于乳鐵蛋白、突變型乳鐵蛋白、截短型乳鐵蛋白、乳鐵蛋白葉(lobe)或者上述任一種與其他肽、多肽、蛋白質(zhì)或乳鐵蛋白水解產(chǎn)物的融合物。乳鐵蛋白是SOkD的鐵結(jié)合糖蛋白，其存在于大部分外分泌液中，包括眼淚、膽汁、支氣管黏液、胃腸液、子宮頸-陰道黏液、精液和乳汁。這是循環(huán)多形核中性粒細胞(circulatingpoIy-morphonucIearneutrophil)的次級特異性顆粒的主要成分。最富集的乳鐵蛋白來源是哺乳動物的乳汁和初乳(colostrum)。乳鐵蛋白以2至7μg/mL的濃度循環(huán)。它具有多種推測的生物學作用，包括調(diào)節(jié)鐵代謝、免疫功能和胚胎發(fā)育。乳鐵蛋白具有針對一系列病原體(包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌以及真菌(包括酵母))的抗微生物活性。乳鐵蛋白的抗微生物作用基于其結(jié)合鐵的能力，鐵對病原菌的生長是必需的。乳鐵蛋白還抑制數(shù)種病毒的復制并且通過與細菌膜上的脂多糖之脂質(zhì)A組分相結(jié)合來提高一些細菌對抗生素和溶菌酶的敏感性。本文中使用的“乳鐵蛋白”指純?nèi)殍F蛋白，天然衍生、重組或合成的乳鐵蛋白，乳鐵蛋白片段，乳鐵蛋白變體，乳鐵蛋白水解產(chǎn)物，或者其任何混合物或組合。乳鐵蛋白可以是每分子含有不多于2(即，0、1或2)個金屬離子的純?nèi)殍F蛋白多肽。乳鐵蛋白可被分離或純化。“經(jīng)分離”或“經(jīng)純化”的乳鐵蛋白基本不含與其天然相關聯(lián)的至少一種物質(zhì)(agent)或化合物。例如，經(jīng)分離的蛋白質(zhì)基本不含來自其所來源之細胞或組織來源的至少一些細胞材料或污染蛋白質(zhì)。短語“基本不含細胞材料”指制備物，其中乳鐵蛋白為至少50至59%(w/w)的純度，至少60至69%(w/w)的純度，至少70至79%(w/w)的純度，至少80-89%(w/w)的純度，至少90至95%的純度，或者至少96%、97%、98%、99%或100%(w/w)的純度?？赏ㄟ^任何合適的標準方法(例如，通過柱色譜法、聚丙烯酰胺凝膠電泳或HPLC分析)測量多肽的純度。實際上，用于制備乳鐵蛋白的離子/乳鐵蛋白比值的測量值可以在O2.5的范圍內(nèi)。乳鐵蛋白可以是天然多肽(例如從乳汁分離的)、重組多肽或合成多肽。可通過在無細胞表達系統(tǒng)中或轉(zhuǎn)基因動物、植物、真菌或細菌或者其他可用的物種中表達來生產(chǎn)重組乳鐵蛋白。重組人乳鐵蛋白可購自ProSpecProteinSpecialists?；蛘?可使用已知的有機合成方法來生產(chǎn)乳鐵蛋白?？赏ㄟ^陽離子交換色譜隨后超濾和滲濾來從乳汁中分離乳鐵蛋白?？捎玫娜殍F蛋白片段包括乳鐵蛋白水解產(chǎn)物的單個組分，含有N葉或C葉或者這二者的片段，N葉或C葉的片段,乳鐵蛋白肽(Iactoferricin)以及(通過人工或天然過程)產(chǎn)生的和通過如下述的已知技術鑒定的片段。乳鐵蛋白可以是哺乳動物來源的。牛和人乳運鐵蛋白(Iactotransferrin)(乳鐵蛋白前體)、乳鐵蛋白和其中的肽的經(jīng)核實的序列可見于Swiss-Prot(http://au.expasy.org/cg1-bin/sprot-search-ful)。乳鐵蛋白可包括，例如牛乳運鐵蛋白前體(檢索號P24627)或其片段乳鐵蛋白肽B,或者人乳運鐵蛋白前體(檢索號P02788)或其片段Kaliocin-1、LactoferroxinA、LactoferroxinB或Lactoferroxin。已經(jīng)報道并且可用于第一至第四方面中任一方面的乳鐵蛋白氨基酸和mRNA序列的其他實例包括但不限于人乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號AAW71443和NP_002334)和mRNA(檢索號NM_002343)序列；牛乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號NP_851341和CAA38572)和mRNA(檢索號X54801和NM_180998)序列；山羊乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號JC2323、CAA55517和AAA97958)和mRNA(檢索號U53857)序列；馬乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號CAA09407)和mRNA(檢索號AJO10930)序列；綿羊乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號NP_001020033)和mRNA(檢索號ΝΜ_001024862)序列；豬乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號NP_999527、AAL40161和AAP70487)和mRNA(檢索號NM_214362)序列；小鼠乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號NP_032548和A28438)和mRNA(檢索號NM_008522)序列；水牛(waterbuffalo)乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號CAA06441)和mRNA(檢索號AJ005203)序列；駱駝乳鐵蛋白的氨基酸(檢索號CAB53387)和mRNA(檢索號AJ131674)序列?？梢砸砸吧突蜃凅w形式使用這些序列。因此，在第一至第四方面中任一方面的一個實施方案中，所述乳鐵蛋白是綿羊、山羊、豬、小鼠、水牛、駱騎、牦牛(yak)、馬、驢、美洲鴕(llama)、?；蛉说娜殍F蛋白。在另一個實施方案中，所述乳鐵蛋白是野牛(buffalo)或鹿的乳鐵蛋白。可產(chǎn)生乳鐵蛋白的動物可以是轉(zhuǎn)基因動物，所述轉(zhuǎn)基因動物被設計成在其乳汁中過量表達乳鐵蛋白?？墒褂镁S持野生型乳鐵蛋白多肽之生物活性的野生型乳鐵蛋白多肽的變體(例如，含有至少2(例如，4、6、8、10、20、50、100、200、300、400、500、600、700)個氨基酸的野生型乳鐵蛋白多肽的片段，或含有乳鐵蛋白多肽序列的重組蛋白質(zhì))。或者，可使用本領域中公知的遺傳工程或化學合成技術來生產(chǎn)乳鐵蛋白。本文中使用的術語“變體”指通過添加、缺失或替換一個或更多個氨基酸而不同于給定物種的乳鐵蛋白之主要野生型氨基酸序列的天然(例如，等位基因變體)或非天然(例如，人工產(chǎn)生的突變體)乳鐵蛋白。用于產(chǎn)生此類變體的方法是本領域中已知的。可用的重組乳鐵蛋白和乳鐵蛋白片段及其產(chǎn)生方法在以下中報道美國專利說明書美國專利No.5，571，691、美國專利No.5，571，697、美國專利No.5，571，896、美國專利No.5，766，939、美國專利No.5，849，881、美國專利No.5，849，885、美國專利No.5，861，491、美國專利No.5，919，913、美國專利No.5，955，316、美國專利No.6，066，469、美國專利No.6，080，599、美國專利No.6，100，054、美國專利No.6，111，081、美國專利No.6，228，614、美國專利No.6，277，817、美國專利No.6，333，311、美國專利No.6，455，687、美國專利No.6，569，831、美國專利No.6，635，447、美國2005-0064546和美國2005-0114911?？捎玫淖凅w還包括牛乳鐵蛋白變體bLf-a和bLf-b。本領域普通技術人員應理解，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的某些氨基酸可被替換為另一些氨基酸而對乳鐵蛋白的活性沒有不利的影響。因此，本發(fā)明人考慮可在乳鐵蛋白的氨基酸序列中進行多種改變而不明顯地喪失其生物效用或活性。這樣的變化可包括缺失、插入、截短、替換、融合、模體(motif)序列的改組(shuffling)等。本領域技術人員會認識到，乳鐵蛋白可在其氨基酸序列中包含任何數(shù)目的保守性變化而不改變其生物特性，從而產(chǎn)生“變體”。這樣的保守氨基酸修飾基于氨基酸側(cè)鏈取代基的相對相似性，例如其疏水性、親水性、電荷、大小等?？紤]多種前述特征的示例性保守替換對本領域技術人員而言是公知的并且包括精氨酸和賴氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；絲氨酸和蘇氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；以及纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸。`乳鐵蛋白的同源物也包括在術語“變體”的含義內(nèi)。同源物通常是來自不同物種的多肽，但其共有與相應的多肽基本相同的生物學功能或活性。變體可共有至少50%、55%、60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%^；99%的序列同一性。本領域技術人員應很容易領會，許多軟件包能夠讓他們設計或鑒定乳鐵蛋白核苷酸和氨基酸序列的同源物，例如“BLAST”程序或其他合適的軟件包?？赏ㄟ^包括但不限于用于使野生型蛋白質(zhì)突變的技術來產(chǎn)生變體乳鐵蛋白，例如但不限于對編碼乳鐵蛋白的野生型核苷酸序列進行定點誘變并使所產(chǎn)生的多核苷酸表達；用于產(chǎn)生可表達的多核苷酸片段的技`術，例如使用一組隨機或經(jīng)選擇的引物的PCR;用于完全或部分蛋白水解或者水解野生型或變體乳鐵蛋白多肽的技術；以及用于化學合成多肽的技術?？赏ㄟ^表達作為來自乳鐵蛋白DNA或RNA或者其變體或片段的重組分子來制備乳鐵蛋白的變體或片段?？蓪⒕幋a乳鐵蛋白之變體或片段的核酸序列插入到用于在細胞中表達的合適載體中，所述細胞包括真核細胞(例如但不限于曲霉屬(Aspergillus))或細菌細胞(例如但不限于大腸桿菌(E.coli))?？墒褂靡阎腜CR技術來制備乳鐵蛋白變體或片段，所述技術包括但不限于易錯PCR(error-pronePCR)和DNA改組(DNAshuffling)。易錯PCR是在DNA聚合酶的復制保真度較低的情況下進行PCR的方法，從而獲得沿PCR產(chǎn)物的整個長度的高效率點突變。DNA改組指體外由隨機片段化基于序列同源性的DNA分子隨后在PCR反應中通過引物延伸固定交叉所引起的在不同的DNA分子(但高度相關的DNA序列)之間的強制同源重組。也可通過已知的有機合成方法產(chǎn)生乳鐵蛋白的變體或片段。在第一至第四方面中所使用的乳鐵蛋白可包含鐵離子(如在天然乳鐵蛋白多肽中)或非鐵金屬離子(例如，銅離子、鉻離子、鈷離子、錳離子、鋅離子或鎂離子)。例如，可將分離自牛乳的乳鐵蛋白的鐵耗盡，隨后荷載另一種類型的金屬離子。例如，可根據(jù)用于上述荷載鐵的相同方法實現(xiàn)對銅的荷載。用其他金屬離子荷載乳鐵蛋白的方法是本領域中已知的。乳鐵蛋白(例如，分離自牛乳的乳鐵蛋白)的制備可包含單個物種的多肽，例如，每分子結(jié)合兩個鐵離子。其還可包含不同物種的多肽，例如，一些分子不結(jié)合離子而另一些各自結(jié)合一個或兩個離子；一些分子各自結(jié)合鐵離子而另一些各自結(jié)合銅離子；一些分子各自是含有0、1或2個金屬離子的生物學活性的乳鐵蛋白多肽(全長或比全長短)而另一些各自是(相同或不同)多肽的片段；或者所有分子各自是含有0、1或2個金屬離子的(相同或不同)全長乳鐵蛋白多肽的片段。可通過用于分離結(jié)合金屬之多肽的已知技術(包括但不限于金屬親和色譜法)獲得結(jié)合金屬離子的乳鐵蛋白片段。乳鐵蛋白片段可與游離的或固定的金屬離子(例如Fe3+)接觸，然后以合適的方式純化。例如，片段可在中性PH下與通過螯合作用固定至包含亞氨基二乙酸或三(羧甲基)_乙二胺配體之色譜基質(zhì)的金屬離子相接觸?？赏ㄟ^降低所使用緩沖劑的PH和離子強度來從支持基質(zhì)上洗脫所結(jié)合的片段并將其收集?？筛鶕?jù)本領域中已知的方法制備金屬結(jié)合片段?？蓮娜L乳鐵蛋白多肽的水解產(chǎn)物(例如，部分消化(如蛋白酶消化))中制備全長乳鐵蛋白多肽和全長乳鐵蛋白多肽之多種片段的混合物?？衫缤ㄟ^完全消化(即，消化后沒有全長多肽剩余)全長乳鐵蛋白多肽或通過混合全長乳鐵蛋白多肽的不同片段來制備全長乳鐵蛋白多肽之多種片段的混合物。根據(jù)本領域中公知的方法(例如，通過調(diào)節(jié)蛋白酶的量或孵育時間)來控制消化的程度。另外，可通過將全長乳鐵蛋白多肽與全長乳鐵蛋白多肽之多種片段(例如，合成片段)相混合來獲得全長乳鐵蛋白多肽和全長乳鐵蛋白多肽之多種片段的混合物。在第一至第四方面中任一方面的一個實施方案中，所述乳鐵蛋白包括完全或部分的酶水解產(chǎn)物(包括但不限于蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、凝乳酶、溶纖酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、肽酶或氨肽酶水解產(chǎn)物)、完全或部分的微生物水解產(chǎn)物(包括但不限于由來自以下屬的細菌水解芽孢桿菌屬(Bacillus)、雙歧桿菌屬(Bifidus)、腸球菌屬(Enterococcus)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、片球菌屬(Pediococcus)、丙酸菌屬(Propionbacter)、假單胞菌屬(Pseudomonas)或鏈球菌屬(Streptococcus)或者其混合物)、完全或部分的酸水解產(chǎn)物(包括但不限于三氟乙酸和鹽酸水解產(chǎn)物)、溴化氰水解產(chǎn)物或者其混合物。乳鐵蛋白水解產(chǎn)物可以是天然、重組或合成的乳鐵蛋白多肽或者其混合物的水解產(chǎn)物。乳鐵蛋白水解產(chǎn)物可以是人乳鐵蛋白水解產(chǎn)物或牛乳鐵蛋白水解產(chǎn)物或者其混合物。乳鐵蛋白可以是非糖基化的或糖基化的?？捎锰烊换蚍翘烊惶腔耆虿糠值靥腔殍F蛋白。此外，可例如通過與聚合物相綴合來修飾乳鐵蛋白以提高其循環(huán)半衰期，例如通過聚乙二醇化或其他化學修飾。還可期望的是，將修飾引入乳鐵蛋白以提高貯存穩(wěn)定性。還考慮將這樣的經(jīng)修飾乳鐵蛋白用于根據(jù)第一至第四方面的用途。乳鐵蛋白可包含按重量計約50至100%或者按重量計至少約50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%的乳鐵蛋白。以下是用于從牛乳中分離乳鐵蛋白的示例過程。將新鮮脫脂乳(7L，pH6.5)在4°C下以5ml/分鐘的流量通過在milliQ水中平衡的300mlSSepharoseFastFlow柱。用2·5倍床體積(bedvolume)的水沖洗未結(jié)合的蛋白質(zhì)，用大約2.5倍床體積的各自為O.1M、0.35M和1.OM的氯化鈉逐步洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。收集IM氯化鈉中的不顯眼的粉紅帶洗脫乳的鐵蛋白作為單一級分并用milliQ水透析，然后冷凍干燥。將經(jīng)冷凍干燥的粉末溶于25mM磷酸鈉緩沖劑(pH6.5)中并且用上述緩沖劑中的梯度至IM的氯化鈉以3ml/分鐘的流量在SSepharoseFastFlow上再次進行色譜分析。將含有通過凝膠電泳和反相HPLC確定的足夠純度之乳鐵蛋白的級分合并，透析，然后冷凍干燥。在含有O.15M氯化鉀的80mM磷酸氫二鉀(ρΗ8·6)中采用S印hacryl300通過凝膠過濾完成乳鐵蛋白的最終純化。將選擇的級分合并，用milliQ水透析，然后冷凍干燥。如通過HPLC分析表明該制備物的純度大于95%，并且對于乳鐵蛋白的鐵飽和形式，其光譜比值(280nm/465nm)為19或更低。通過將2:1摩爾過量的5mM次氨基三乙酸鐵(ferricnitrilotriacetate)添加至I%純化乳鐵蛋白的50mMTris溶液(pH7.8，含有IOmM碳酸氫鈉)來實現(xiàn)鐵飽和。通過用100倍體積的milliQ水(更新兩次)在4°C下透析總共20小時來移除過量的次氨基三乙酸鐵。隨后將荷載鐵的(全)乳鐵蛋白冷凍干燥。通過用30倍體積的含有500mg/LEDTA二鈉的O.1M檸檬酸(ρΗ2·3)在4°C下透析1%高度純化乳鐵蛋白樣本的水溶液30小時來制備耗盡鐵的(去輔基)乳鐵蛋白(iron-depleted(apo_)Iatoferrin)。隨后，通過用30倍體積的milliQ水(更新一次)透析來移除檸檬酸鹽和EDTA，并且將所得無色溶液冷凍干燥。在第一至第三方面中任一方面的一個實施方案中，所述乳鐵蛋白可經(jīng)口攝入或可經(jīng)口施用?？山?jīng)口攝入或可經(jīng)口施用的乳鐵蛋白可以是膠囊化的(encapsulated)、微膠囊化的(microencapsulated)或納米膠囊化的(nanoencapsulated)。這些方面的任一方面中使用的乳鐵蛋白可提供為營養(yǎng)品(nutraceutical)或藥物。本文中使用的術語“營養(yǎng)品”指可分離或純化自食物(例如乳制品)的可食用產(chǎn)品，其被證明在經(jīng)口施用時具有生理學益處或提供對急性或慢性疾病或損傷的保護或緩解。因此，營養(yǎng)品可單獨或者與可食用的食物或飲料混合以飲食制備物或補充劑(supplement)的形式存在?！盃I養(yǎng)品”還稱為“功能性食品”?？赏ㄟ^本領域中已知的多種方法和工藝來生產(chǎn)營養(yǎng)品，包括但不限于合成(化學或微生物)、從生物材料中提取、將功能性成分或組分與常規(guī)食品混合、發(fā)酵或者使用生物技術工藝。營養(yǎng)品可在身體中直接發(fā)揮其作用或其可例如通過腸內(nèi)菌群而發(fā)揮功能。一般來說，盡管不是完全必需的，但是這樣的營養(yǎng)品將包含純化至一定程度的乳鐵蛋白，或至少將可驗證營養(yǎng)品(例如“FirstLeaf”)的所有組分。營養(yǎng)品是根據(jù)第三方面制造的藥物或第四方面的乳鐵蛋白的一個實例。合適的食品、飲料或可食用的消費品的實例包括可溶性粉末、奶粉、糖果(confectionary)、重構(gòu)的水果產(chǎn)品、早餐谷物(breakfastcereals)、即食棒(ready-to-eatbar)、小吃棒(snackbar)、燕麥堅果能量棒(mueslibar)、涂抹調(diào)味品(spreads)、沙司(dips)、乳制品(包括酸奶和奶酪)、液體或即飲制品(包括基于乳制品或非乳制品的飲料(例如，乳、果汁、茶或軟飲料))、食品補充劑、膳食補充劑(例如，硬膠囊或軟膠囊、小袋(min1-bag)或者片(tablet)、茶包)、營養(yǎng)制品、運動營養(yǎng)補充劑(包括基于乳制品或非乳制品的運動營養(yǎng)補充劑)、用于向嬰兒施用的嬰兒配方(尤其是人性化乳配方)、食品添加劑(例如蛋白質(zhì)末(proteinsprinkles))和膳食補充劑產(chǎn)品(包括日常補充劑片)。營養(yǎng)品優(yōu)選具有可接受的感官特性(例如可接受的氣味、味道和適口性(palatability))?？沙Ｒ?guī)地生產(chǎn)營養(yǎng)品；例如，可通過將蛋白質(zhì)與其他添加劑(例如，多種香料、纖維、甜味劑)一起共混以制備組合物，并且還可存在其他添加劑。如果使用的話，乳化劑可包含在共混物中。營養(yǎng)品可包含其他營養(yǎng)物，例如氨基酸、蛋白質(zhì)或糖類。此時可添加額外的維生素和礦物質(zhì)，但是一般稍后添加以避免熱降解。另一些維生素和/或礦物質(zhì)可選自以下中的至少一種維生素A、B1、B2、B3、B5、B6、B11、B12、生物素、C、D、E、H和K以及鈣、鎂、鉀、鋅和鐵。如果期望生產(chǎn)粉狀營養(yǎng)品，那么可將乳鐵蛋白與粉狀形式的額外的組分混合。粉末的水分含量應低于按重量計約5%。之后，可將水(優(yōu)選已經(jīng)過反滲透的水)混合到其中以形成液體混合物。如果營養(yǎng)品將以準備消費的液體形式提供，那么可對其進行加熱以降低細菌負荷。如果期望生產(chǎn)液體營養(yǎng)品組合物，那么優(yōu)選將液體混合物無菌地填充到合適的容器中?？墒褂帽绢I域常見技術來實施容器的無菌填充。用于實施這種性質(zhì)之無菌填充的合適裝置可市購。優(yōu)選地，所述營養(yǎng)品還包含一種或更多種可藥用載體、稀釋劑或賦形劑。營養(yǎng)品可包含緩沖劑，例如中性緩沖鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水等；糖類，例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、乳果糖或右旋糖；甘露醇或乳糖醇(Iactitol);蛋白質(zhì)；多肽或氨基酸，例如甘氨酸；抗氧化劑；螯合劑，例如EDTA;輔料以及防腐劑。由于牛乳是已經(jīng)在食物鏈中數(shù)百年的天然產(chǎn)品，所以用作營養(yǎng)品的乳鐵蛋白不需要是完全純的。然而，為了降低待施用組合物的量，優(yōu)選的將乳鐵蛋白相對于在乳中乳鐵蛋白濃度進行顯著地濃縮。優(yōu)選地，以乳中乳鐵蛋白濃度的至少10倍的濃度并且更優(yōu)選乳中乳鐵蛋白濃度的20、30、40或50倍的濃度施用乳鐵蛋白。藥物制劑是適于向人施用的那些。獸用制劑是適于向動物施用的那些。通常來說，這樣的制劑將包含經(jīng)純化的乳鐵蛋白或者至少制劑(例如“FirstLeaf”)的所有組分將是可核實的。制劑是根據(jù)第三方面制備的藥物或第四方面的乳鐵蛋白的實例。根據(jù)第三方面制備的藥物或第四方面的乳鐵蛋白可包含一種或更多種載體和任選的其他治療劑。每種載體、稀釋劑、輔料和/或賦形劑可以是藥學上“可接受的”?！翱伤幱幂d體”意指非生物學上或在其他方面上非期望的材料，即，可將所述材料與所選擇的活性劑一起向個體施用而不引起任何不期望的生物效應或以有害的方式與藥物組合物中包含的任何其他組分相互作用。類似地，本文中所提供的新化合物的“可藥用”鹽或酯不是生物學上或在其他方面上不期望的鹽或酯。本文中使用的“藥物載體”是用于向?qū)ο筮f送物質(zhì)的可藥用溶劑、助懸劑或載劑。所述載體可以是液體或固體并且根據(jù)所考慮的計劃施用方式而進行選擇。每種載體從不是生物學上或在其他方面上不期望的意義上說必須是藥學上“可接受的”，即所述載體可與物質(zhì)一起向?qū)ο笫┯枚灰鹑魏位驀乐氐牟涣挤磻?。可在含有常?guī)無毒可藥用載體、輔料和載劑的制劑中經(jīng)口、局部或腸胃外施用所述制劑。優(yōu)選地，經(jīng)口施用所述制劑?？勺鳛槠瑒?、水性或油性混懸劑、糖錠劑(lozenge)、錠劑(troche)、散劑、顆粒劑、乳劑、膠囊、糖漿劑或酏劑經(jīng)口施用所述制劑。用于經(jīng)口使用的制劑可包含選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的一種或更多種物質(zhì)以生產(chǎn)藥學上精致的且適口的制劑。合適的甜味劑包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿司帕坦或糖精。合適的崩解劑包括玉米淀粉、甲基纖維素、聚乙烯卩比咯燒酮、黃原膠、膨潤土、藻酸或瓊脂。合適的矯味劑包括薄荷油(peppermintoil),鹿蹄草(wintergreen)、樓桃、橙的油或覆盆子香料(raspberryflavoring)。合適的防腐劑包括苯甲酸鈉、維生素Ε、α生育酚、抗壞血酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯或亞硫酸氫鈉。合適的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、油酸鈉、氯化鈉或滑石粉。合適的延時劑(delayagent)包括單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。片劑可包含與適于制備片劑之無毒可藥用賦形劑相混合的物質(zhì)。這些賦形劑可以是例如⑴惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；(2)成粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉或藻酸；⑶黏合劑，例如淀粉、明膠或阿拉伯膠；以及⑷潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。這些片劑可不包衣或通過已知的技術進行包衣以延遲在胃腸道中崩解和吸收，從而提供更長時間的持續(xù)作用。例如，可使用延時材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。在一個實例中，可根據(jù)常規(guī)程序通`過壓制乳鐵蛋白與固體載體和潤滑劑的混合物來配制片劑。固體載體的實例包括淀粉和糖膨潤土。還可以以包含黏合劑(例如，乳糖或甘露醇)、常規(guī)填料和壓片劑(tabletingagent)的硬殼片劑或膠囊形式來施用乳鐵蛋白。本文中使用的術語腸胃外包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、結(jié)膜下、腔內(nèi)、經(jīng)皮和皮下注射、用于向肺或鼻腔施用的氣霧劑或者通過輸注(通過例如滲透泵)施用。用于腸胃外施用的制劑包括無菌水性或非水性溶液劑、混懸劑和乳劑。非水性溶劑的實例有丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)和可注射的有機酯(例如油酸乙酯)。水性載體包括水、醇/水性溶液、乳液或混懸液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。腸胃外載劑包括氯化鈉溶液、林格右旋糖(Ringer'sdextrose)、右旋糖和氯化鈉、乳酸鹽林格溶液(lactatedRinger’s);靜脈內(nèi)載劑包括流體和營養(yǎng)補充劑、電解質(zhì)補充劑(例如基于林格右旋糖的那些)等。還可存在防腐劑和其他添加劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、生長因子和惰性氣體等。所述制劑還可包含提供補充的、額外的或增強的治療功能的其他活性化合物。所述制劑還可與施用說明書一起包含在容器、包裝或分配器(dispenser)中。可存在以獸用制劑形式使用的制劑，其可例如通過本領域的常規(guī)方法制備。這樣的獸用制劑的實例包括適于以下的那些(a)經(jīng)口施用、外用，例如獸用頓服藥(drench)(例如水性或非水性溶液劑或混懸齊U);片劑或大丸劑(bolus);用于與飼料混合的粉劑、顆粒劑或微丸；用于向舌頭施用的糊齊U，如果待向反芻動物施用的話，這尤其適于保護而避免經(jīng)過瘤胃(rumen)；(b)腸胃外施用，例如通過皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射，例如作為無菌溶液劑或混懸劑；或者(在適當時)通過乳房內(nèi)注射，其中將混懸劑或溶液劑經(jīng)由乳頭引入乳房；(C)局部施用，例如向皮膚施用的霜劑、軟膏劑或噴霧劑；或者(d)陰道內(nèi)，例如子宮托(pessary)、霜劑或泡沫劑。為了便于施用和劑量的均勻性，尤其有利地以劑量單位形式配制所述制劑。本文中使用的劑量單位形式指適合作為用于待治療之對象的作為單位劑量的物理上分散單位；每個單位包含計算用于與所需的藥物載體聯(lián)合以產(chǎn)生期望治療效果的預定量的活性化合物。通過(并且直接取決于)活性化合物的獨特特征和待實現(xiàn)的特定治療效果以及在組合用于治療個體的此類活性化合物的領域中固有的局限性來確定本發(fā)明劑量單位形式的說明書。以治療有效量來施用所述制劑。本文中使用的乳鐵蛋白的“有效量”是足以降低蛋白尿的劑量。一般來說，治療有效量可隨著對象的年齡、狀況和性別以及對象中醫(yī)療狀況的嚴重程度而改變。可由醫(yī)師確定劑量并且(如需要的話)調(diào)整至適合所觀察到的治療效果。用于施用乳鐵蛋白的適當劑量的范圍可以是5mg至100mg、15mg至85mg、30mg至70mg或40mg至60mg、5mg至500mg、10mg至400mg、20mg至300mg、25mg至250mg、40mg至200mg、50mg至IOOmg0例如劑量可以是5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、125、150、175、200、225、230或250mg?？梢砸砸淮蝿┝渴┯没蛘唛g隔(例如，每日一次、每日兩次、每周一次和每月一次)施用所述制劑?？筛鶕?jù)乳鐵蛋白的半衰期或蛋白尿的嚴重程度來調(diào)整計量方案。一般來說，作為大丸劑給藥來施用所述制劑，以在給藥后最長時間內(nèi)使循環(huán)乳鐵蛋白的水平最大化。在所述大丸劑給藥之后可使用連續(xù)輸注。有越來越多的證據(jù)表明，蛋白尿不僅是腎損傷和/或疾病進展的結(jié)果(疾病標志物)，而且是腎損傷和/或腎疾病進展的直接原因或風險因素。有證據(jù)表明，通過多種途徑發(fā)生源自蛋白尿的腎損傷，包括誘導導致間質(zhì)中炎性細胞浸潤和持續(xù)纖維發(fā)生(fitoogenesis)的小管趨化因子表達和補體活化。巨噬細胞在間質(zhì)炎性浸潤物(infiltrate)中是顯著的。在患有慢性腎疾病的對象中，該細胞類型介導腎損傷的進展至這樣的程度腎活檢中的巨噬細胞數(shù)目預測腎的存活。炎性細胞的化學引誘物(chemoattractant)和黏附分子通過近端小管細胞的過量超濾蛋白質(zhì)荷載而上調(diào)。因此，用于降低蛋白尿的治療是減慢腎疾病進展的常見臨床實踐。當前，可用于降低蛋白尿的藥物是用于治療高血壓的藥物。已經(jīng)證明兩種類型的藥物(ACE抑制劑和ARB)有效地降低蛋白尿水平并且減慢腎疾病的進展。盡管ACE/ARB在降低蛋白尿中確切藥理機制尚不清楚，但是沒有數(shù)據(jù)表明它們參與炎性過程。因此，第一和第二方面的一個實施方案還包括向用ACE抑制劑或ARB治療的對象施用ACE抑制劑或ARB或者施用乳鐵蛋白。在第三方面的一個實施方案中，使用ACE抑制劑或ARB配制藥物。如果作為分開的制劑而攝入或施用，那么乳鐵蛋白可在用ACE抑制劑或ARB治療之前和/或同時和/或之后用于治療蛋白尿。有益于蛋白尿或者相關病癥或疾病的其他治療上可用的物質(zhì)可任選地包含在乳鐵蛋白中或者與乳鐵蛋白同時或依次施用。整個本說明書中，除非上下文另有需要，否則詞語“包含/包括”將被理解為表明包括所述要素或整數(shù)或者要素或整數(shù)的組，但不排除任何其他要素或整數(shù)或者要素或整數(shù)的組。還必須注意的是，除非上下文清楚地另外指明，本說明書中使用的沒有數(shù)量詞修飾的名詞表示一個/種或更多個/種。對本領域技術人員來說顯而易見的是，雖然為了清楚和理解的目的而詳細地描述了本發(fā)明，但是可對本文中描述的實施方案和方法進行多種修改和改變，只要不背離本說明書中公開的本發(fā)明理念的范圍即可。實施例臨床試驗概述‘FirstLeaf’乳鐵蛋白研究是包括以下三個治療組的隨機化臨床試驗FirstLeaf;乳鐵蛋白和安慰劑。安慰劑組充當比較者(comparator)并且所述試驗是隨機化雙盲設計。獨立于研究隊伍之外地確定治療組的分配并且參與者和研究人員二者均不知道哪一組進行哪一種治療，直到完成12周的干預期。每位參與者分配有獨特研究編號。在統(tǒng)計軟件程序‘Minitab’TM*，統(tǒng)計人員通過使用參與者的獨特研究編號將參與者隨機分入三個治療組。臨床試驗藥劑師基于這三組分發(fā)藥物?！瓼irstLeaf’是由FOURLEAFJAPANCo.Ltd開發(fā)的保健補充劑(healthsupplement)。除其他成分之外，每個藥片包含25mg乳鐵蛋白。該乳鐵蛋白由MGNutritionals(MurrayGoulburnCo-opLtd的子公司)提供。該項目根據(jù)試驗方案和臨床試驗的國際臨床協(xié)調(diào)指南(InternationalClinicalHarmonisationGuidelinesforClinicalTrials)的標準進行。倫理問題和所研究藥物的耐受性項目的過程中沒有出現(xiàn)意料之外的問題，包括嚴重不良事件、出乎意料的不良事件或?qū)⑴c者的影響。然而，一位女性參與者由于在開始藥物研究后不久發(fā)生廣泛的身體皮疹而退出藥物研究。皮疹在停藥后逐漸消退。其他四位參與者由于胃腸癥狀而臨時停止服用所研究的藥物(持續(xù)4至18天)。在全部的四個病例中，癥狀消退并且在恢復給藥之后沒有復發(fā)。沒有收到對所進行研究的投訴。目的該研究是隨機化雙盲臨床試驗，用于考察‘FirstLeaf’和乳鐵蛋白對指示通常與生活方式和環(huán)境相關慢性疾病風險之健康參數(shù)的影響。經(jīng)12周的干預期，給予患有代謝綜合征的男性和女性以下三種治療(相匹配的膠囊)之一(I)‘FirstLeaf’；(2)僅乳鐵蛋白；或者(3)安慰劑。在這三個組之間比較經(jīng)干預期的臨床和生化標志物的變化。簡介‘FirstLeafy‘FirstLeaf’是日本成年人通常作為保健補充劑而服用的用于增強幸福感(wellbeing)和提高免疫力的補充劑。其包含萬壽菊(Marigold)、黑醋粟(cassis)和花草茶(herbaltea)、小米草(Eyebright)的提取物。成分包括番爺紅素(Iycopene)、乳鐵蛋白、輔酶QlO和葉黃素(lutein)。番茄紅素和葉黃素是類胡蘿卜素，認為其作為抗氧化劑而提供保健益處。輔酶Qltl(還稱為泛醌(ubiquinone))是尤其與對心臟病提供之保護相關的維生素樣物質(zhì)。乳鐵蛋白乳鐵蛋白是具有強大的抗微生物及免疫調(diào)節(jié)活性的鐵結(jié)合糖蛋白。最近還表明乳鐵蛋白通過刺激成骨細胞之增殖和分化以及抑制破骨細胞生成(osteoclastogenesis)而促進骨骼生長。因此，現(xiàn)在認為乳鐵蛋白可在骨骼生長和治愈中具有生理作用，并且作為合成代謝因子(anabolicfactor)在骨質(zhì)疏松癥中具有潛在的治療作用。盡管乳鐵蛋白是從乳清乳中提取的，但是它還是以低濃度見于中性粒細胞的次級顆粒中的天然糖蛋白。動物研究已經(jīng)表明，乳鐵蛋白的全身水平在炎癥期間顯著提高并且認為乳鐵蛋白可在平衡來自一些炎性反應介質(zhì)的對骨架的分解代謝作用中發(fā)揮作用。有人提出乳鐵蛋白的作用機制還包括差異調(diào)節(jié)細胞免疫應答的組分。該機制的活化有可能改變了不同T輔助細胞的比例，并且輔助Tl細胞與輔助T2細胞的比值(Thl/Th2)提供對變態(tài)反應癥狀的指示。研究目的主要療效目的研究的主要目的是在12周的干預期間在‘FirstLeaf’治療組(活性物)、‘乳鐵蛋白’治療組(活性物)和安慰劑(對照)組之間比較與代謝綜合征、骨質(zhì)疏松癥和免疫功能相關的臨床和生化標志物的變化。對象和方法根據(jù)全國涉人研究道德操守聲明(NationalStatementonEthicalConductinResearchInvolvingHumans)(澳大利亞聯(lián)邦,2001年)、ICH臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范(ICHGoodClinicalPracticeguidelines)和赫爾辛基宣言(DeclarationofHelsinki)(1996)進行該研究。該研究經(jīng)Barwon健康研究和倫理咨詢委員會(BarwonHealthResearchandEthicsAdvisoryCommittee)(06/09)批準并且所有的參與者簽署對研究的知情同意書。入詵標準所有的參與者滿足澳大利亞代謝綜合征標準并且超重。大部分的體重指數(shù)屬于肥胖的范疇(>30)。具體地，所有的對象滿足以下標準才有資格進行該試驗能走動的門診患者(男性和女性)，年齡為25歲和更大；體重指數(shù)(bodymassindex,BMI)為25至35kg/m2(BMI=重量[kg]除以身高[米]的平方)；篩選時，所有的參與者患有代謝綜合征-所有都患有中心性肥胖，其定義為男性白種人的腰圍>94cm和女性白種人的腰圍>80cm，并且其他群體具有種族特異性的值；-加上以下四個因素中的任意兩個1.升高的血清甘油三酯水平(≥1.7mmol/L)；2.降低的血清HDL膽固醇水平(男性中<1.03mmol/L，女性中<1.29mmol/L)；3.升高的血壓(bloodpressure,BP)(收縮BP>I3OmmHg或舒張BP>85mmHg或者治療之前經(jīng)診斷為高血壓)；以及4.空腹血糖受損(在之前沒有診斷為2型糖尿病時空腹血糖≥5.6mmol/L且≤7.Ommol/I,)。棑除標準·已知對乳蛋白過敏；·BMK25或>35kg/m2；目前正在服用任何以下藥物或在過去的6個月中已服用任何以下藥物超過一個月經(jīng)口降血糖劑；胰島素；二膦酸鹽/酯；選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑；鍶；甲狀旁腺激素(parathyroidhormone,PTH);骨化三醇(calcitriol)或雌激素(不包括陰道雌激素乳膏)；糖皮質(zhì)激素治療，相當于在之前的三年期間每天>5mg的潑尼松龍超過6個月。之前診斷的以下醫(yī)療狀況糖尿病；類風濕性關節(jié)炎；佩吉特病(Pagetsdisease);多發(fā)性骨髓瘤；除了非侵襲性非黑色素瘤性皮膚癌和原位子宮頸癌之外的癌癥；顯著的腎疾病或血漿肌酸酐>150μmol/L;高鈣血癥(經(jīng)校正的血漿鈣>2.65mmol/L);結(jié)節(jié)??；甲狀腺功能亢進(在過去的2年中)；或者活躍的消化性潰瘍病或炎性腸疾。劑量所有參與者的藥物研究的劑量是每IOkg體重(在訪問I時的體重)I個膠囊。由于參與者的平均體重是89kg，所以平均劑量是每天9個膠囊。告知參與者在早晨攝取一半的劑量并且在晚上攝取一半的劑量。安慰劑是不含活性成分的乳糖粉末。每個‘FirstLeaf’藥片含有25.5mg乳鐵蛋白以及其他活性成分。一個標準的‘FirstLeaf’藥片相當于一個膠囊。每個乳鐵蛋白膠囊含有125mg乳鐵蛋白，即每個膠囊比每個‘FirstLeaf’膠囊多大約5倍的乳鐵蛋白。評估參與者到Geelong醫(yī)院的臨床試驗中心(ClinicalTrialUnit)進行三次研究訪問-訪問I=基線；訪問2=藥物研究開始后6周；以及訪問3=開始藥物研究后12周。在每次研究訪問時進行包括人體測量學在內(nèi)的病理學和臨床評估。將病理樣本離心并且酌情分裝，之后立即貯存在_80°C。詢問參與者在過去的6周以及在過去的12個月中經(jīng)歷的變應性癥狀。制備用于研究的藥物并且由Geelong醫(yī)院的臨床試驗藥劑師在訪問I和2時進行分發(fā)。給予參與者6周的供應以及額外一周的供應(萬一需要重新安排其下一個研究訪問)。在下一個研究訪問時回收所有未使用的研究藥物并且對其進行計數(shù)。順從性計算為與推薦的膠囊劑量相比所服用膠囊的百分比。統(tǒng)計分析主要的終點是在三個組之間的從基線到三個月的臨床和生化標志物的變化。如果‘FirstLeaf’組或乳鐵蛋白組的因變量平均值與安慰劑組的不同，那么對分析進行檢驗(test)。如果平均值在基線(訪問I)時沒有不同但是在訪問2和/或訪問3時與安慰劑組不同，那么這是潛在有意義的。使用方差分析對治療作用進行評價，顯著性定義在P<0.05。還通過查看‘自基線以后的因變量的變化’(即訪問3-訪問I)來研究基線(訪問I)之后的任何均數(shù)差。方差分析比較多于兩組的群體平均值。雙因素方差分析同時對治療組之間以及基線訪問和6周和12周干預時的研究訪問之間平均值的差別進行了檢驗。使用非平衡數(shù)據(jù)的一般線性模型通過雙因素方差分析對數(shù)據(jù)進行分析。該方法同時對以下組合中平均值的差別進行了檢驗(A)治療組組1對組2;組1對組3以及組2對組3(B)訪問編號V1對V2；V1對V3；V2對V3采用用于等方差的檢驗(除對治療組之間以及訪問次數(shù)之間相互作用進行的檢驗)轉(zhuǎn)換(自然對數(shù)等)非正態(tài)分布的參數(shù)。檢驗的零假設(nullhypothesis)H0μ!=μ2=μ3:在組1、2和3中每個參數(shù)(因變量)的平均值相等。H1:在組1、2和3之間‘因變量’平均值不相等。隨后酌情進行Post-hoc分析。如果P值小于O.05,那么進行采用多重檢驗Tukey’s調(diào)整的Adhoc分析。該第二過程鑒別三個治療組之間的差異是否出現(xiàn)在干預(即訪問2和/或3)之后。構(gòu)建問卷用于歸類。根據(jù)參與者在每個治療組中的比例對在基線時詢問的問題進行分析，表明了與他們在訪問I時的答案相比有所提高的狀態(tài)。通過比例的卡方檢驗(Ch1-squaretest)分析所有的回答，即有所提高的參與者比例在三個治療組之間不同么？。使用統(tǒng)計軟件程序(Minitab，版本13)進行統(tǒng)計分析。研究的時間安排(timeline)列在表I中。表1:時間安排權利要求1.治療蛋白尿的方法，其包括向有此需要的對象施用治療有效量的乳鐵蛋白。2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中所述蛋白尿是白蛋白尿或微量白蛋白尿。3.根據(jù)權利要求1或權利要求2所述的方法，其中利用尿白蛋白/肌酸酐比值(ACR)診斷所述蛋白尿。4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其中在診斷蛋白尿時所述對象的所述ACR大于或等于約2mg/mmol05.根據(jù)權利要求1或權利要求2所述的方法，其中利用血尿素氮(BUN)/肌酸酐比值或尿素/肌酸酐比值診斷所述蛋白尿。6.根據(jù)權利要求1或權利要求2所述的方法，其還包括向所述對象施用ACE抑制劑或ARB。7.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的方法，其中經(jīng)口施用所述乳鐵蛋白。8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其中所述乳鐵蛋白作為食品、飲料、補充劑、營養(yǎng)品或藥物而經(jīng)口施用。9.根據(jù)權利要求7的所述方法，其中經(jīng)口施用的所述乳鐵蛋白是膠囊化的、微膠囊化的或納米膠囊化的。全文摘要本方法涉及治療蛋白尿的方法，其包括施用乳鐵蛋白。文檔編號A61K9/107GK103068401SQ201180040591公開日2013年4月24日申請日期2011年6月24日優(yōu)先權日2010年6月24日發(fā)明者彼得·霍布曼,米歇爾·羅尼,杰夫·尼克爾森,凱里·桑德斯申請人:墨累古爾本合作有限公司