專利名稱：抗腫瘤/癌異源非細胞膠原制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明一般地涉及疫苗領域，并且更具體地，涉及包括抗腫瘤和/或抗癌生物材料的抗腫瘤和抗癌疫苗和材料。本發(fā)明還提供了已經(jīng)暴露于腫瘤和/或癌細胞的基底材料以提供可用于疫苗制備的條件化基底(例如，細胞外基質(zhì)(ECM))。
背景技術(shù)：
現(xiàn)在對治療性和預防性癌癥疫苗存在很大興趣。已經(jīng)檢驗了多種方法。例如，已經(jīng)檢驗了源自全細胞的疫苗并且發(fā)現(xiàn)其具有大量的抗原，并且據(jù)報道取得了一些成功。組織疫苗源自直接從腫瘤攜帶個體收集的腫瘤材料，并且不僅含有與腫瘤細胞相關的抗原，而且還含有與腫瘤結(jié)締組織和細胞外基質(zhì)相關的許多抗原。由源自豬小腸粘膜下層的細胞外基質(zhì)材料組成的以首字母縮寫SIS表示的一種物質(zhì)已經(jīng)描述為可用作組織支架的材料(Cook Biotech Inc.,West Lafayette, Indiana)。作為進一步的背景，已經(jīng)提出將多種細胞外基質(zhì)材料用于醫(yī)學移植、細胞培養(yǎng)和其他相關應用中。例如，已經(jīng)提出了含 有源自小腸、胃或膀胱組織的粘膜下層的醫(yī)學移植體和細胞培養(yǎng)材料(參見，例如，U.S.專利 N0.4，902，508，4，956，178，5，281，422，5，554，389，6，099，567 和 6，206，931)。此外，Cook Biotech Inc.(West Lafayette, Indiana)目前制造了商標名為SURGISIS 、STRATASIS⑧和OASIS 的多種基于小腸粘膜下層的醫(yī)學產(chǎn)品O例如，在U.S.專利N0.6，379，710中還提出了源自肝基底膜的醫(yī)學材料。此外，已經(jīng)提出了將源自羊膜(參見，例如，U.S.專利N0.4，361，552和6，576，618)和腎囊膜(參見，例如，W0003002165)的ECM材料用于醫(yī)學和/或細胞培養(yǎng)應用中。一些研究者已經(jīng)報道了小腸粘膜下層(SIS)材料具有提高的生物相容性，這使其成為有用的組織支架材料(Woods 等，(2004), Biomaterials, 25 (3):515-525)。在 Woods 文中，假設在SIS(HUVEC)上培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞沉積人基底膜蛋白以形成稱為“條件化(conditioned) ”SIS(c-SIS)的物質(zhì)。c-SIS的表面性質(zhì)假設以這樣的方式改變:與在天然、非條件化SIS (n-SIS)基底上培養(yǎng)的HUVEC細胞相比，在該c-SIS基底上重新接種人臍靜脈內(nèi)皮細胞時，細胞呈現(xiàn)出細胞接合的組織化的增強和代謝活性的提高。據(jù)報道，與n-SIS基底上生長的HUVEC相比，在c-SIS上培養(yǎng)的HUVEC細胞釋放較低量的促炎性前列腺素PGI2進入培養(yǎng)基中。最終這些效應為SIS提供了作為組織支架材料的改善的特性。一組研究者描述了從非癌、非腫瘤軟骨魚免疫細胞(S卩，獲自軟骨魚(如，鯊魚、鰩魚和鲅魚)的性腺上Gpigonal)器官或萊迪氏(Leydig)器官的細胞)的培養(yǎng)物制備的條件化細胞培養(yǎng)基，并且報道了該培養(yǎng)基顯示抗腫瘤活性(U.S.專利N0.7，309, 501)。將非腫瘤、非癌的魚免疫細胞描述為將免疫物質(zhì)釋放到這些培養(yǎng)物的培養(yǎng)基中。這些制劑沒有描述非腫瘤、非癌魚免疫細胞以外的其他細胞的應用。此外，這些制劑沒有涉及或提及細胞在細胞外基質(zhì)上的生長。癌細胞描述為沉積纖維蛋白原。纖維蛋白原在腫瘤基質(zhì)中沒有轉(zhuǎn)化成纖維蛋白。腫瘤的微環(huán)境由分泌的可溶性因子、固體材料和腫瘤細胞的混合物組成。分泌的可溶性因子包括趨化因子(如CXCR-4和CXCL-2)、基質(zhì)改變酶(如，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP))、蛋白酶抑制劑和生長因子(如，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF))，它們都存儲在周圍ECM中，并且在腫瘤細胞需要時釋放(通 過蛋白酶介導的ECM降解)。由細胞間基質(zhì)和基底膜組成的周圍ECM自身構(gòu)成了非細胞的固體材料，這在惡性癌細胞的錨定和遷移中是關鍵的(Alphonso等，(2009)，Neoplasia,11:1264-1271)。癌細胞描述為產(chǎn)生改造與腫瘤相關的ECM的蛋白酶(例如，基質(zhì)金屬蛋白酶、彈性酶、組織蛋白酶_L) (Sund等,(2009),Cancer Metastasis Rev.,28:177-183)。這種改造導致隔離在ECM中的物質(zhì)以及ECM蛋白的生物活性切割片段(如膠原和蛋白聚糖)的釋放?？梢葬尫胖聊[瘤ECM中的隔離物質(zhì)包括VEGF，其進一步影響了腫瘤進展。癌細胞還通過可溶性因子的釋放和通過細胞-基質(zhì)相互作用與微環(huán)境相互作用。分泌物或副產(chǎn)物的實例包括鈣粘蛋白、整聯(lián)蛋白、細胞因子(IL-l、IL-6、IL-8、TNF-a、PDGF、EGF和TGF-β)。其它的分泌分子包括內(nèi)皮縮血管肽、血纖維蛋白溶酶和uPA(Zigrino等，(2005)，Biochimie,87:321-328)。人乳腺癌細胞顯示為合成纖維蛋白原，并將其分泌和沉積至ECM中(Rybar[[d]]czyk等(2000) ,Cancer Res.,60:2033-2039)。特別地，已經(jīng)報道前列腺癌細胞分泌bFGF、PDGF 和 TNF- a (Kaminski 等，(2006)，Expert Opin.Ther.Targets, 14,77-94)。由各種類型的癌細胞合成的這些和其它產(chǎn)物描述為造成癌細胞的生長/擴散。然而，腫瘤/癌細胞分泌物和/或副產(chǎn)物是否顯示任何抗腫瘤和/或抗癌活性仍然是未知的。在醫(yī)學領域中持續(xù)地存在著對改進的抗癌/抗腫瘤制劑的需求。特別地，在尋找改進的抗癌和抗腫瘤藥物和疫苗的過程中，持續(xù)地追求具有腫瘤和/或癌抑制活性的基本上無細胞(非細胞)的改進制劑。用于治療和遏制癌和腫瘤生長的改進工具仍然有待開發(fā)，并且展現(xiàn)了新一代疫苗的希望。

發(fā)明內(nèi)容
特別地，本發(fā)明滿足本領域的上述需求。本發(fā)明的各個實施方案涉及包含條件化異源非細胞膠原材料基底及抗腫瘤生物分子、抗癌生物分子或抗腫瘤和抗癌生物分子組合的腫瘤抑制性條件化制劑，其中腫瘤和/或癌細胞已經(jīng)在適于所述細胞在所述基底上生長的條件下在所述制劑上進行了培養(yǎng)。腫瘤和/或癌細胞特別地可以包括黑素瘤細胞或前列腺腫瘤細胞。在特定的實施方案中，前列腺腫瘤細胞是人前列腺細胞。在本發(fā)明的一些實施方案中，基底是細胞外基質(zhì)。在其他實施方案中，基底基本上不含腫瘤和/或癌細胞。在本發(fā)明的其他實施方案中，提供了一種抑制病人中腫瘤再生長的方法，其包括:制備本發(fā)明的腫瘤抑制性條件化制劑；將所述制劑施用于病人中已經(jīng)除去腫瘤或癌細胞生長的部位；和抑制所述部位處的腫瘤再生長。在本發(fā)明的特定實施方案中，該方法進一步包括處理制劑以除去細胞材料而不降解制劑膠原成分的步驟。特別地，該處理步驟特別地可以包括用化合物處理、超聲處理或冷凍制劑和解凍制劑。本發(fā)明的特定實施方案涉及包含本發(fā)明的腫瘤抑制性條件化制劑的疫苗。在其它實施方案中，提供了包含本發(fā)明腫瘤抑制性條件化制劑的腫瘤傷口敷料。在本發(fā)明的再其它的實施方案中，提供了適用于皮下施用于病人的可注射制劑，其作為在藥物學上可接受載體中包含顆粒形式的本發(fā)明基底的疫苗。本發(fā)明的進一步實施方案涉及制備腫瘤和/或癌癥條件化細胞外基質(zhì)基底的方法，其包括:將哺乳動物腫瘤和/或癌細胞在適于所述細胞培養(yǎng)的基底上在適于所述細胞在所述基底上生長的條件下培養(yǎng)所述細胞一段時間以提供條件化基底；并且處理所述條件化基底以從所述培養(yǎng)物中除去細胞成分。附圖簡沭 考慮到以下結(jié)合附圖對于本發(fā)明的各種實施方案的詳細描述，可以更全面地理解本發(fā)明。

圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的組織的顯微照片，顯示出在SIS上生長的腫瘤細胞，SIS是源自豬小腸粘膜下層的細胞外基質(zhì)材料。圖2是根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案的組織的顯微照片，其顯示了通過硫氰酸鉀處理除去SIS(如圖1中所示)上生長的腫瘤細胞。圖3是表明通過條件化細胞外基質(zhì)(ECM)培養(yǎng)基降低腫瘤再生長的條形圖。切除腫瘤并施用條件化培養(yǎng)基后，監(jiān)測腫瘤的再生長。各個條表示未處理的SIS (SIS)、用硫氰酸鉀處理的SIS(SIS/L)、腫瘤細胞在其上生長并且然后用戊二醛固定的SIS(SIS/GFT)和腫瘤細胞在其上生長并且然后用硫氰酸鉀裂解的SIS(SIS/C/L)。結(jié)果證明SIS/GFT和SIS/C/L疫苗接種刺激腫瘤尺寸的顯著降低(P < 0.5)。SIS/GFT和SIS/C/L接種的大鼠之間的腫瘤尺寸沒有顯著的差異(P < 0.05)。圖4是顯示了外科腫瘤減積后黑素瘤再生長的條形圖。對照小鼠給予MEM，并且大的腫瘤很快再生長。相反，接種GFT疫苗或TC/ECM(SIS/細胞/PTE)疫苗的小鼠中腫瘤尺寸存在顯著降低(P < 0.005)，表明GFT或TC/ECM接種刺激了對黑素瘤再生長的保護性免疫。在接種GFT或TC/ECM的組之間腫瘤尺寸不存在統(tǒng)計學顯著的差異。圖5是概括了其中給動物接種培養(yǎng)基(MEM)、由戊二醛固定的腫瘤細胞制成的疫苗(GFT)或在SIS上生長并且隨后用硫氰酸鉀裂解的腫瘤細胞組成的疫苗(TC/ECM)的研究的條形圖。在激發(fā)后12天將動物安樂死，并且對腫瘤稱重。結(jié)果證明了與對照相比，用GFT處理的動物中的抗腫瘤免疫。GFT疫苗接種組中的小鼠的平均腫瘤重量顯著低于MEM組的那些(P < 0.005)，并且低于TC/ECM疫苗接種組的平均腫瘤重量(P < 0.05)。TC/ECM疫苗接種組中的小鼠的平均腫瘤重量顯著低于MHM對照組的平均腫瘤重量(P < 0.01)。發(fā)明詳沭本發(fā)明提供了獨特的包含有效的腫瘤抑制和/或癌癥抑制生物分子與異源非細胞膠原材料的組合的抗腫瘤和/或抗癌條件化制劑和材料。這些腫瘤和/或癌抑制生物分子可以進一步描述為一組特定生物分子或一組特定生物分子的集合，或特定抗腫瘤和/或抗癌生物分子的獨特組合、集合或比例，其顯示了生理上可檢測的抗腫瘤和/或抗癌細胞活性。例如，已經(jīng)報道了細胞因子如VEGF和EMAP-1I由腫瘤以不同的量產(chǎn)生，并且對腫瘤新生血管系統(tǒng)具有不同的效應。因此，設想了在生理環(huán)境中提供和/或設置本發(fā)明的腫瘤細胞和/或癌細胞條件化的、異源、非細胞膠原基質(zhì)時，如在身體內(nèi)或身體上，或在特定的組織部位，或注射時，抗腫瘤和/或抗癌細胞條件化的異源、非細胞、膠原的基質(zhì)將與該組織和/或身體部位的微環(huán)境，或與特定的細胞群相互作用，以引發(fā)生理上可證明的腫瘤抑制、癌細胞抑制和/或可觀察的和/或可量化的腫瘤/癌細胞停滯反應(沒有癌和/或腫瘤細胞生長或復制和/或癌和/或腫瘤細胞生長或復制降低)。這些特性使得本發(fā)明的制備物和/或制劑適用于其中已經(jīng)除去腫瘤和/或癌生長和/或腫瘤和/或癌大小減小的外科手術(shù)部位，以及適用于實際上用于其中在病人的臨床控制或治療中希望或另外需要腫瘤抑制、癌細胞抑制和/或癌 細胞停滯反應(無癌細胞和/或腫瘤生長和/或癌細胞和/或腫瘤生長降低)的任何體內(nèi)環(huán)境(例如,作為疫苗制劑注射入動物體內(nèi))。如在此所述的基底(例如，異源、非細胞膠原基底材料)的抗腫瘤和/或抗癌生物分子條件化導致了基底材料內(nèi)和/或之上腫瘤和/或癌細胞抑制生物分子的的抑制組合和/或比例。例如，并且在一些實施方案中，抗腫瘤和/或抗癌生物分子分泌和/或釋放到異源非細胞膠原材料基底上和其中提供了可以用于在體內(nèi)抑制和/或抑止條件化材料/基底所放置的部位處腫瘤或癌細胞(例如，惡性黑素瘤)的生長或再生長的條件化抗腫瘤和/或抗癌材料。因此，以一般和整體的意思來看，本發(fā)明提供了包含抗腫瘤和/或抗癌條件化基底制劑的組合物，該基底通過沉積待獲取的一種或多種抗腫瘤和/或抗癌細胞生物分子(例如，通過在基底上培養(yǎng)腫瘤和/或癌細胞)來條件化(“C”)。例如，可以將基底進一步描述為條件化的異源、非細胞膠原材料。例如，可以從哺乳動物組織，如細胞外基質(zhì)(ECM)組織，制備條件化的異源、非細胞膠原材料。在一些方面中，腫瘤和/或癌細胞條件化基底以及由其制得的材料可以描述為條件化細胞外基底材料，其中腫瘤和/或癌細胞已經(jīng)將細胞生物分子成分、副產(chǎn)物和/或其它抗癌和抗腫瘤生物分子的補體沉積和/或分泌至細胞外基質(zhì)上和之中。在一些實施方案中，基底/胞外基質(zhì)材料可以描述為基本上不含活的腫瘤和/或癌細胞。在另一個方面中，提供了用于抑制病人中腫瘤生長的方法，其包括將包含哺乳動物腫瘤和/或癌細胞條件化的基底的組合物施用于病人，其中基底通過在適于腫瘤和/或癌細胞生長的條件下在基底表面上培養(yǎng)腫瘤和/或癌細胞來條件化。條件化基底具有由哺乳動物腫瘤組織和/或癌細胞的培養(yǎng)物分泌和/或沉積的沉積在其上的生物分子。例如，設想生物活性材料可以包括抗癌或抗腫瘤有效量的2種或更多種的組合:纖維蛋白原、bFGF、PDGF, TNF- α、內(nèi)皮縮血管肽、血纖維蛋白溶酶或uPA。在本發(fā)明的其它方面中，提供了制備包含哺乳動物腫瘤和/或癌細胞條件化基底的組合物的方法。在一些實施方案中，哺乳動物腫瘤組織包括哺乳動物前列腺腫瘤組織或前列腺腫瘤細胞，或任何其他腫瘤細胞或目標細胞群。在特定的實施方案中，前列腺腫瘤組織是異種前列腺腫瘤組織。在一些實施方案中，條件化基底包括已經(jīng)過處理以使得基本上不含完整腫瘤和/或癌細胞的條件化異源非細胞膠原材料制劑，如從細胞外基質(zhì)制得的異源、非細胞膠原材料。在一些實施方案中，可以通過如洗滌、化學試劑處理、超聲處理的處理方法或其它不破壞和/或顯著影響腫瘤和/或癌細胞條件化基底的結(jié)構(gòu)完整性的合適方法從條件化細胞外基底材料中除去腫瘤和/或癌細胞，使得維持條件化基底/材料的膠原物質(zhì)(例如，1、I1、III和IV型膠原蛋白)的完整性。在這種狀態(tài)下，如在此所限定的，經(jīng)處理的、條件化的基底基質(zhì)可以描述為“去細胞的”。在一些實施方案中，用能夠使得基底上存在的任何腫瘤和/或癌細胞成為非存活的和復制失能的試劑處理腫瘤和/或癌條件化的基底材料，如條件化的異源非細胞膠原材料。這可以使用多種化學試劑完成，包括，例如，硫氰酸鉀、戊二醛，或可能通過如輻射、力口熱、超聲的方法或本領域技術(shù)人員已知的其它腫瘤和/或癌細胞破壞方法(例如，冷凍/破裂處理)來實現(xiàn)。再者，可以使用任何不破壞和/或使條件化基底材料的膠原成分顯著變性的方法。在再其他實施方案中，本發(fā)明提供了可以用作例如傷口和/或手術(shù)部位敷料的條件化基底，特別在其中已除去腫瘤·和/或癌生長的外科手術(shù)部位。例如，腫瘤和/或癌細胞生長于其上的腫瘤和/或癌細胞條件化基底材料，如從細胞外基質(zhì)制得的條件化異源非細胞膠原材料，可以按照在此所述的進行處理，并且用于覆蓋或處理病人的已經(jīng)除去腫瘤生長的外科手術(shù)部位。在這樣的實施方案中，條件化基底提供了具有腫瘤和/或癌抑制特性的醫(yī)學移植材料。在各種實施方案中，通過使用條件化基底抑制/阻止腫瘤再生長。在本發(fā)明的其它方面中，可以將抗腫瘤/抗癌條件化基底描述為包含基本上非細胞的、條件化國胞外基質(zhì)基底，所述基底包含具有表面的細胞外基質(zhì)材料，并且在該表面上沉積源自細胞外基質(zhì)材料的基底表面上非天然的腫瘤和/或癌細胞的生物分子(即，那些是添加至細胞外基質(zhì)材料的表面上的生物分子，與細胞外基質(zhì)材料源所保留的相對)。在特定的形式中，本發(fā)明的復合材料基本上沒有腫瘤和/或癌細胞及腫瘤和/或癌細胞成分，但保留腫瘤/癌細胞在基底上培養(yǎng)時由其分泌的抗癌/抗腫瘤物質(zhì)。此外，條件化基底的膠原成分得到了實質(zhì)性的保持。在再另外的實施方案中，提供了可注射制劑形式的條件化基底。在一些實施方案中，這些可注射形式的抗腫瘤/抗癌基底可以進行配制以使得適宜用作癌癥疫苗?？梢詫l件化異源非細胞膠原材料基底的顆粒制劑的無菌制備物與用于這種產(chǎn)品形式的藥物學上可接受的載體一起配制。在此所用的術(shù)語只是用于描述特定的形式或?qū)嵤┓桨傅哪康?，并且不是用來限制本發(fā)明的范圍。除非另外限定，在此所用的技術(shù)術(shù)語、符號和其他科學術(shù)語或?qū)I(yè)詞匯具有本發(fā)明所屬領域普通技術(shù)人員通常理解的相同意思。在一些情況中，為了清楚和/或為了便于引述，在此定義了具有通常理解的意思的術(shù)語，并且在此處包括這些定義并不一定解釋為其表示與本領域通常理解的具有實質(zhì)性差異。然而，在相互沖突的情況下，以本專利的說明書(包括定義)為準。除非另外指出，在說明書和權(quán)利要求中所用的所有表示成分量、特性(如分子量)、反應條件等等的數(shù)字理解為在所有情況中通過詞語“約”修飾。因此，除非有相反的表示，說明書和所附權(quán)利要求中列出的數(shù)字參數(shù)是可以根據(jù)本發(fā)明想要獲得的所需特性而改變的近似值。在此絕對沒有并且不試圖限制權(quán)利要求范圍等價物原理的應用，各個數(shù)字參數(shù)應當至少根據(jù)所記載有效數(shù)位的數(shù)目并通過應用普通舍入技術(shù)來解釋。
盡管給出了本發(fā)明寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，但特定實施例中列出的數(shù)值盡可能精確地記載。然而，任何數(shù)值固有地含有由相應測試方法中存在的標準偏差必然引起的特定誤差。描述本發(fā)明的上下文中(尤其是在以下權(quán)利要求的上下文中)所用的術(shù)語“一(a) ”、“一個(an) ”、“該(the) ”和相似的指代解釋為涵蓋單數(shù)和復數(shù)，除非在文中另外指出或與上下文明顯矛盾。在此的數(shù)值范圍的列舉僅僅是用作單獨地指代落入該范圍內(nèi)的單個獨立數(shù)值的簡化方法。除非文中另外指出，各單個數(shù)值引入說明書中，如同在此單獨列舉該單個數(shù)值一樣。如在此所用的，術(shù)語“非細胞的”意思是沒有或基本上沒有活的細胞。涉及描述天然狀態(tài)下包括細胞的材料(例如，含有天然細胞的ECM材料)的術(shù)語“去細胞”或“去細胞的”，意思是該材料進行或已經(jīng)過處理以除去至少約70%原始細胞(活的或死的)。更優(yōu)選地，本發(fā)明中涉及的去細胞處理將除去至少80%、85%或90%的細胞，且最優(yōu)選地，將除去至少99%的細胞。對于本發(fā)明的目的，術(shù)語“異源非細胞膠原材料”定義為包含1、II1、IV、V和V型膠原蛋白、生長因子、纖連蛋白、糖蛋白、葡胺聚糖和層粘連蛋白中的至少一種并適宜用作佐劑的非細胞、膠原材料。如在此所用的，術(shù)語“病人”指的是待治療的對象，包括人類和其他高等動物，和實驗室模型，如小鼠和大鼠?！疤幚淼摹辈溉閯游锬[瘤和/或癌細胞條件化基質(zhì)和/或材料定義為在其上已經(jīng)生長和/或培養(yǎng)哺乳動物腫瘤和/或癌細胞，并且隨后進行處理以使得腫瘤和/或癌細胞成為非存活的和復制失能的基底，如異源非細胞膠原組織制備物(在本發(fā)明的一些實施方案中，其可以從具有細胞外基質(zhì)成分的哺乳動物組織制得)。因此可以將條件化異源非細胞膠原組織制備物描述為“處理的”材料。腫瘤和/或癌細胞條件化的基底和/或基質(zhì)包括沉積和/或分泌以細胞外基質(zhì)上的生物活性分子和代謝產(chǎn)物。術(shù)語“基本上無細胞的”意思是沒有或基本上沒有細胞(活的或死的)。基本上無細胞的ECM材料意圖包括攜帶細胞的水平足夠低以致將材料植入受體尤其是對于細胞來說是異種的或同種異體的受體時是非免疫原性的ECM材料。如本申請中所用的，術(shù)語“哺乳動物腫瘤和/或癌細胞條件化的基質(zhì)”定義為在其上已經(jīng)培養(yǎng)哺乳動物腫瘤和/或癌細胞的細胞基質(zhì)。例如，這樣的基質(zhì)可以包含含有細胞外基質(zhì)材料的基底，如，例如，SIS基底。哺乳動物腫瘤和/或癌細胞條件化的基質(zhì)進一步定義為加工的和/或處理的哺乳動物腫瘤和/或癌細胞條件化基質(zhì)。用于本發(fā)明的合適基底材料可以通過異源、非細胞膠原材料來提供，如哺乳動物組織材料(例如，ECM材料)，包括但不限于具有生物取向(biotiOpic)或可重塑特性的那些材料，在特定形式中包括血管源的膠原細胞外基質(zhì)材料。例如，合適的異源膠原材料包括ECM材料，如粘膜下層、腎囊膜、真皮膠原(包括來自人類尸體的處理過的真皮膠原，其可以用作人的同種移植體)、硬腦脊膜、 心包膜、闊筋膜(facia lata)、漿膜、腹膜或基底膜層，包括肝基底膜。用于這些目的的示例性粘膜下層包括例如腸粘膜下層，包括小腸粘膜下層、胃粘膜下層、膀胱粘膜下層和子宮粘膜下層。本發(fā)明的優(yōu)選醫(yī)學移植產(chǎn)品將包括粘膜下層，如源自溫血脊椎動物的粘膜下層。優(yōu)選哺乳動物粘膜下層材料。特別地，源自為了肉食或其他產(chǎn)品的生產(chǎn)而飼養(yǎng)的動物(例如，豬、?；蚓d羊)的粘膜下層材料的使用是有利的。豬粘膜下層對于用于本發(fā)明而言提供了特別優(yōu)選的材料，尤其是豬SIS，更特別是基本上保持其天然交聯(lián)的豬小腸粘膜下層。粘膜下層或其他ECM基底材料可以源自任何合適的器官或其他生物結(jié)構(gòu)，包括例如源自溫血脊椎動物的食道、呼吸道、腸道、尿道或生殖道的粘膜下層。本發(fā)明中有用的粘膜下層可以通過收集這樣的組織來源并將粘膜下層從平滑肌層、粘膜層和/或組織來源中存在的其他層剝離來獲得。關于本發(fā)明特定實施方案中有用的粘膜下層及其分離和處理的其他信息，可以參考例如 U.S.專利 N0.4，902，508，5，554，389，5，993，844，6，206，931 和6，099，567，在此將其全部引入作為參考。本發(fā)明的粘膜下層或其他ECM材料可以源自任何合適的器官或其他組織來源，尤其是含有結(jié)締組織的來源。用于本發(fā)明的加工的ECM材料通常包含大量膠原，最常見由基于干重至少約80%重量膠原組成。這樣天然來源的ECM材料大部分包括非隨機定向的膠原纖維，例如，通常作為單軸或多軸但規(guī)則地定向的纖維存在。當進行加工以保留天然生物活性因子時，ECM材料可以保留作為固體散布在膠原纖維之間、之上和/或之內(nèi)的這些因子。用于本發(fā)明中的特別理想的天然來源的ECM材料包括在光顯微鏡檢測下容易確定的大量的散布的非膠原固體。在本發(fā)明的特定實施方案中，這樣的非膠原固體可以占ECM材料干重的顯著百分比，例如，至少約1%，至少約3%和至少約5%重量。如所制備和使用的，基底或其他粘膜下層材料或任何其他ECM材料可以任選保留和/或另外地包括對于來源組織來說天然的生長因子或其他生物活性成分。例如，粘膜下層或其他ECM材料可以保留一種或多種生長因子，如堿性成纖維細胞生長因子(FGF-2)、轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β)、表皮生長因子(EGF)和/或血小板源生長因子(TOGF)。此外，本發(fā)明的特定實施方案中所用的粘膜下層或其他ECM材料可以保持或包括其他生物材料，如肝素、硫酸肝素、透明質(zhì)酸、纖連蛋白等。因此，一般而言，粘膜下層或其他ECM材料可以保留或另外地包括生物活性成 分，其直接或間接誘導細胞應答，如細胞形態(tài)的改變、增殖、蛋白或基因表達。在特定的優(yōu)選實施方案中，ECM材料呈現(xiàn)出促進血管生成的能力。此外，除了包括這些天然生物活性成分以外或作為包括這些天然生物活性成分的替代，可以將非天然生物活性成分，如通過重組技術(shù)或其他方法合成產(chǎn)生的那些，摻入粘膜下層或其他ECM材料中。這些非天然生物活性成分可以是天然來源的或重組產(chǎn)生的對應于ECM材料中天然存在的那些的蛋白，但可能是不同的物種(例如，應用于來自其他動物(如，豬)的膠原ECM的人蛋白質(zhì))。非天然生物活性成分還可以是藥物物質(zhì)?？梢該饺隕CM材料中和/或之上的說明性藥物物質(zhì)可以包括,例如,抗生素和/或血栓促進物質(zhì),如凝血因子(例如，凝血酶、纖維蛋白原等)。這些物質(zhì)可以作為緊接該過程之前的預制造的步驟應用于ECM材料(例如，通過將材料浸沒在含有合適抗生素(如，頭孢菌素)的溶液中)，或在ECM材料移植至病人體內(nèi)的過程中或之后。本發(fā)明的特定實施方案中所用的粘膜下層或其他ECM材料優(yōu)選是高度純化的，例如，如U.S.專利N0.6，206，931中所述的，在此將其全部引入作為參考。因此，特定的優(yōu)選ECM基底材料將呈現(xiàn)出低于約12內(nèi)毒素單位(EU) /克的內(nèi)毒素水平，更優(yōu)選低于約5EU/克，并且最優(yōu)選低于約IEU/克。作為另外的選擇，粘膜下層或其他ECM材料可以具有低于約I菌落形成單位(CFU)/克的生物負荷，更優(yōu)選低于約0.5CFU/克。真菌水平理想地具有相似的低水平，例如，低于約ICFU/克，更優(yōu)選低于約0.5CFU/克。核酸水平優(yōu)選低于約5 μ g/mg,更優(yōu)選低于約2 μ g/mg,并且病毒水平優(yōu)選低于約50空斑形成單位(PFU) /克，更優(yōu)選低于約5PFU/克。本發(fā)明的特定實施方案中使用的ECM材料優(yōu)選用氧化試劑消毒，特別是過酸(例如，過醋酸)。以上引用并且將其全部引入作為參考的U.S.專利N0.6，206，931中教導的粘膜下層或其他ECM材料的這些和其他特性可以是本發(fā)明的特定實施方案中使用的粘膜下層的特征。起始ECM材料可以任選地包括多種生物活性或其他非膠原成分，包括，例如，生長因子、糖蛋白、葡胺聚糖、蛋白聚糖、核酸和脂質(zhì)。用堿性物質(zhì)處理材料可以降低材料內(nèi)所含的這些非膠原成分中的一種、一些或全部的量。在特定的實施方案中，用堿性物質(zhì)進行受控的處理將足以形成基本上不含核酸和脂質(zhì)并且潛在地也不含生長因子、糖蛋白、葡胺聚糖和蛋白聚糖的可重塑膠原材料。因此，如在此所述的堿性物質(zhì)的處理可以使材料膨脹至其最初體積的至少約兩倍，可以改變材料的表面和/或多孔特性，并且可以耗盡材料的特定生物活性成分。在一些實施方案中，該處理通過在將材料保持為完整膠原片的同時完成，其中該片可以進一步加工成多種抗癌和抗腫瘤制劑中的任何一種，如在此所述的癌疫苗材料。此外，如在此所述的，可以用堿性介質(zhì)處理可重塑膠原材料，如ECM片，以使其膨脹，同時材料保留一定量的生長因子，如FGF-2，或另一種生物活性成分，如纖連蛋白和/或肝素，它/它們對于ECM或其他膠原材料的來源組織來說是天然的。在特定的實施方案中，可以將一種或多種生物活性成分(外源的或內(nèi)源的)，例如，與堿處理過程中從膨脹的材料除去的那些相似的生物活性成分，返回至材料中。例如，膨脹的材料可以包括已經(jīng)耗盡核酸和脂質(zhì)，但其補充了生長因子、糖蛋白、葡胺聚糖和/或蛋白多糖的膠原材料?？梢酝ㄟ^任何合適的方法將這些生物活性成分返回至材料中。例如，在特定形式中，可以制備含有這些成分的組織提取物，如U.S.專利N0.6，375，989 (在此將其全部引入作為參考)中所討論的，并且施用于膨脹的膠原材料中。在一個實施方案中，膨脹的膠原材料可以在腫瘤和/或癌組織和/或腫瘤細胞制備物和/或培養(yǎng)物中孵育足夠長的時間，以使得其中所含的生物活性成分與膨脹的膠原材料結(jié)合。腫瘤和/或癌組織和/或細胞制備物可以例如獲自具有待治療病人的特定腫瘤生長類型或癌類型的病人的腫瘤組織。 用于將生物活性成分返回或引入膨脹的可重塑膠原材料中的其他方式包括噴霧、浸滲、浸潰等，如本領域已知的。例如，可以通過添加一種或多種生長因子，如堿性成纖維細胞生長因子(FGF-2)、轉(zhuǎn)化生長因子β (TGFi3)、表皮生長因子(EGF)、血小板源生長因子(PDGF)和/或軟骨源生長因子(CDGF)，來改變膨脹的膠原材料。其它生物成分可以加入膨脹的膠原材料中，如肝素、硫酸肝素、透明質(zhì)酸、纖連蛋白等。因此，一般而言，膨脹的膠原材料可以包括腫瘤和/或癌細胞相關的生物活性成分，其直接或間接誘導細胞反應，如細胞形態(tài)的改變、增殖、生長、蛋白或基因的表達。例如，在U.S.專利N0.6，375，989中描述了基底粘膜下層提取物的制備，在此將其全部引入作為參考。簡而言之，可以通過將提取賦形劑如脲、胍、氯化鈉、氯化鎂或表面活性劑加入粘膜下層組織中以將生物活性成分與組織分離來制備粘膜下層提取物。然后將生物活性成分與提取賦形劑分離。在一個優(yōu)選的實施方案中，通過將粘膜下層組織與磷酸鹽緩沖溶液(例如，磷酸鹽緩沖鹽水(PBS))混合來制備粘膜下層提取物。隨著應用緩沖液循環(huán)物理壓力，該混合物被處理成漿液。將組織中存在的生物活性成分吸入溶液中，并且隨后與漿液分離。然后通過使用本領域已知的程序(例如，滲析和/或色譜技術(shù))將溶液中提取的生物活性成分與漿液分離來形成生物活性粘膜下層提取物。優(yōu)選地，將提取溶液滲析來降低提取賦形劑的濃度或除去提取賦形劑，以提供提取的生物活性成分的溶液。粘膜下層組織的任何來源可以用于制備粘膜下層提取物。此外，相似的提取技術(shù)可以應用于其他可重塑ECM材料以提供用于本發(fā)明的生物學活性提取物。除了包括天然腫瘤和/或癌細胞和/或癌組織生物活性成分(如在粘膜下層或其他ECM提取物中提供的那些)以外或作為包括天然腫瘤和/或癌細胞和/或癌組織生物活性成分的替代，可以將非天然的腫瘤和/或癌細胞/組織分泌的生物活性成分(包括如通過重組技術(shù)或其他方法合成產(chǎn)生的那些)摻入膨脹的可重塑膠原材料中。這些非天然腫瘤和/或癌細胞/組織分泌的生物活性成分可以是天然來源的或重組產(chǎn)生的蛋白，并且可以對應于相同或不同的物種(例如，應用于來自其他動物(如豬)的膠原ECM的人腫瘤和/或癌細胞/組織分泌的蛋白)。除了非天然腫瘤和/或癌細胞/組織分泌的生物活性成分夕卜，還設想腫瘤和/或癌條件化基底也可以包括藥物物質(zhì)。可以結(jié)合至本發(fā)明中所用的腫瘤和/或癌細胞條件化基底材料中和/或之上的說明性藥物物質(zhì)包括，例如，抗生素、血栓促進物質(zhì)如凝血因子，例如，凝血酶、纖維蛋 白原等。與之前所描述的腫瘤和/或癌細胞和/或組織生物活性成分一樣，這些物質(zhì)作為緊接在該過程之前的預制造步驟(例如，通過將材料浸沒于含有合適抗生素(如，頭孢菌素)的溶液中)，或者在材料移植到病人體內(nèi)之前、之中或之后，施加于膨脹的可重塑膠原材料?；准毎饣|(zhì)(ECM)基礎材料優(yōu)選是從合適的動物或人體組織來源分離的天然來源的膠原ECM。合適的細胞外基質(zhì)材料包括，例如，粘膜下層(例如，小腸粘膜下層、胃粘膜下層、膀胱粘膜下層或子宮粘膜下層，其各分離自青年或成年動物)、腎囊膜、羊膜、硬腦脊膜、心包膜、漿膜、腹膜或基底膜材料，包括肝基底膜或上皮基底膜材料。這些材料可以作為完整的天然片形式、或顆粒形式來分離和使用，或可以使用包括源自這些材料的膠原和/或其他膠原材料的膠原的重建膠原層。關于本發(fā)明中有用的粘膜下層材料及其分離和處理的其他信息可以參考 U.S.專利 N0.4，902，508，5，554，389，5，733，337，5，993，844，6，206, 931，6，099, 567和6，331，319。腎囊膜還可以獲自溫血脊椎動物，如更特別地在作為W003002165公開的國際專利申請系列N0.PCT/US02/20499中所描述的。在此將各參考文獻全部引入作為參考。優(yōu)選的ECM基底材料含有殘余的生物活性蛋白或源自材料組織來源的其他ECM成分。例如，它們可以含有成纖維細胞生長因子2 (堿性FGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和轉(zhuǎn)化生長因子-β (TGF-β)。還預期本發(fā)明的ECM基礎材料可以含有其他生物活性成分，包括，例如，一種或多種糖胺聚糖、糖蛋白、蛋白聚糖和/或生長因子。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，可以在足以允許分泌的腫瘤和/或癌細胞和/或組織生物材料/生物分子沉積在一部分或整個基底材料表面(如ECM材料的表面)上的條件下和時間段內(nèi)在ECM材料上體外培養(yǎng)腫瘤和/或癌細胞。在所需量的抗腫瘤和/或抗癌生物分子沉積在基底基質(zhì)中/上后，可以將所得到的條件化ECM基底材料進一步加工以使得當前的抗腫瘤和/或抗癌條件化基底去細胞化。沉積的抗腫瘤和/或抗癌生物材料例如還附帶地增強了 ECM基底材料的功能性(例如，通過待治療病人中存在的非腫瘤和/或非癌細胞潛在地影響材料的重塑)。此外，在接種后(例如，在用腫瘤和/或癌細胞培養(yǎng)的過程中)，ECM基底與接種的腫瘤和/或癌細胞一起可以接受機械的、化學的或物理的應激以影響細胞生長以及腫瘤和/或癌沉積產(chǎn)物的沉積。這樣的力可以包括但不限于機械拉伸ECM基底材料(優(yōu)選不將其撕裂)、使ECM基礎材料經(jīng)歷脈沖力(例如，使流體，如培養(yǎng)基流過ECM基礎材料的管)、改變培養(yǎng)氣氛(例如達到更高或更低的二氧化碳含量)或加入影響細胞生長速率、表型、分泌功能或凋亡事件的特定生長因子或趨化因子，由此影響細胞沉積的分子?？梢砸匀魏魏线m的方式將用于將生物分子分泌至基底(如，ECM基底)中/上的腫瘤和/或癌細胞施加于基礎ECM支持結(jié)構(gòu)的表面上。說明性地，可以通過重力將細胞沉降在基礎ECM上來將腫瘤和/或癌細胞施加于基礎ECM材料上。也可以使用正壓力來迫使培養(yǎng)基通過ECM材料，由此將細胞沉積在ECM表面上。用于將腫瘤和/或癌細胞施加于ECM上的其他合適方式可以包括，但不限于，使用負壓以將哺乳動物腫瘤和/或癌細胞吸至ECM材料上和使用趨化劑。為了更有效地理解在此公開的本發(fā)明，以下提供非限制性的實施例。以下實施例描述了本發(fā)明方法的各種實施方案。實施例1-材料和方法提供本實施例來描述用于本發(fā)明開發(fā)和獲得本發(fā)明實施結(jié)果的各種材料和方法。方法動物。LobundWister(Lff)大鼠獲自圣母大學(University of NotreDame)飼養(yǎng)的繁殖群。LW大鼠是轉(zhuǎn)移至肺部的前列腺癌的確定的模型。PAIII細胞最初從LW大鼠的原生的(autochthonous)、轉(zhuǎn)移的前列腺腺癌分離得到(Pollard M, SuckowMA, Hormone-refractory prostate cancer in the Lobund-ffistar rat.ExperimentalBiology and Medicine, 230:520_526，2005)。通過LW大鼠中的腫瘤樣品的連續(xù)傳代，細胞作為腫瘤來維持。通 常，它們變成重量超過10克的大的皮下腫瘤。通過從安樂死的大鼠收集5-克的腫瘤部分并且在IOml改良Eagle’ s培養(yǎng)基(MEM)中切碎組織來進行腫瘤的傳代。皮下給予0.3ml這種細胞懸液一致地形成腫瘤塊，其在早至施用細胞懸液后7天就可以觸診到。為了形成用于該研究的皮下PAIII腫瘤，在右腹側(cè)對大鼠皮下給予0.3ml腫瘤細胞懸液。細胞外基質(zhì)。提供作為無菌的細胞外基質(zhì)凍干片的小腸粘膜下層(SIS)(SUGRISIS , Cook Biotech, Inc., West Lafayette, Indiana)。SIS 是豬來源的，并且通過從空腸段除去所有腸系膜組織、漿膜和肌膜來得到。在用腫瘤細胞培養(yǎng)和植入動物之前，將SIS切成2cmX2cm的切片。疫苗的制備。評價了兩種疫苗制劑。一種疫苗制劑包括SIS疫苗(SIS/C/L)，其由直接從皮下PAIII腫瘤收獲的腫瘤細胞組成并且在SIS上生長和隨后用硫氰酸鉀裂解。一種疫苗制劑由腫瘤細胞在其上生長并且然后在戊二醛中固定的SIS組成(SIS/GFT)，其也是從皮下PAIII腫瘤收獲并且隨后在戊二醛中固定。此外，包括用未處理SIS(SIS)接種的大鼠和用沒有細胞在其上生長但經(jīng)歷硫氰酸鉀處理的SIS(SISZl)接種的大鼠作為對照。通過在MEM中的2cmX2cm的SIS切片上，在37°C和5% CO2下孵育I X IO6收獲的腫瘤細胞來產(chǎn)生SIS/GFT疫苗。收獲的腫瘤細胞通過收集3g皮下腫瘤并且通過細切機械分離，接著通過80-目篩網(wǎng)以形成在改良Eagle’s培養(yǎng)基(MEM)中的細胞懸液(Suckow,2005)來獲得。生長3天后，然后將具有附著細胞的SIS在2.5%戊二醛(v/v)中在37°C下孵育60分鐘，然后用培養(yǎng)基徹底洗滌以產(chǎn)生最終的疫苗制劑。通過在MEM中在37°C和5%CO2下，在2 X 2cm的SIS切片上孵育I X IO6收獲的腫瘤細胞(與SIS/FT疫苗一樣獲得)來產(chǎn)生SIS/C/L疫苗制劑。生長3天后，將附著有細胞的SIS隨后置于20ml的IM KSCN中，并且在37°C下孵育過夜以裂解細胞。孵育后，將SIS置于攪拌盤上的0.0IM冷Tris緩沖液中，并且混合大約4小時。攪拌四小時后，在接下來48小時中將緩沖液再更換三次。將沒有發(fā)生細胞生長的對照SIS以相同的方式暴露于KSCN(SIS/L)。將來自用一些形式的SIS處理的各組的SIS樣品于10%中性緩沖的福爾馬林中固定，切片，并且用蘇木精和曙紅染色以證實細胞存在或不存在。包括經(jīng)歷細胞生長的SIS經(jīng)硫氰酸鉀處理之前和之后的樣品以確認細胞已經(jīng)在SIS上生長并且隨后在硫氰酸鉀處理后被去除。腫瘤的外科切除。施用PAIII細胞后十四天，大鼠經(jīng)歷皮下腫瘤的外科切除。用腹膜內(nèi)劑量的氯胺酮(90mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)誘導外科麻醉后，夾住腫瘤上覆蓋的毛發(fā)，并且用碘伏(iodophore)擦凈皮膚。使用無菌技術(shù)，通過外科手術(shù)將腫瘤切除，并且用外科手術(shù)縫合釘將皮膚閉合。給大鼠施用皮下劑量的布托啡諾(2mg/kg)用于術(shù)后止痛。使用該技術(shù)，保留了小的殘留腫瘤床，并且通常在10-14天內(nèi)，腫瘤再生長。研究設計。為了產(chǎn)生用于本研究的皮下PAIII腫瘤，給16只3_4個月大的雄性LW大鼠皮下施用0.3ml體積MEM中的新收獲的I X IO6腫瘤細胞。十四天后，所有大鼠具有可觸知的皮下腫瘤并且經(jīng)歷了腫瘤的外科切除。然后將大鼠隨機分成六組，通過在腫瘤床放置以下物質(zhì)之一來進行處理:SIS、SIS/L、SIS/GFT或SIS/C/L。二i^一天后，通過二氧化碳麻醉將大鼠安樂死，并且將腫瘤稱重。使用一元方差分析評價組之間平均腫瘤重量差異的顯著性，P 0.05時達到顯著性。 SIS樣品的組織學檢查。將切除和接種后大鼠的SIS/GFT和腫瘤樣品固定于10%中性緩沖福爾馬林中。將樣品在70%乙醇中洗漆，并且包埋于石蠟中，接著以4-5 μ m切片并且用蘇木精和曙紅染色。SIS上的細胞生長和通過硫氰酸鉀處理去除。如圖1和2中所示，SIS樣品的組織學檢查證實了細胞在SIS上生長(圖1)，并且隨后通過SIS/C/L的硫氰酸鉀處理去除(圖2)。來自SIS/GFT疫苗的樣品證實了 SIS上細胞的存在，并且來自SIS和SIS/L組的樣品證實了那些材料上不存在細胞。實施例2-腫瘤細胞條件化基底(ECM)的體內(nèi)抗前列腺腫瘤活性提供本實施例來證明本發(fā)明的腫瘤和/或癌細胞條件化基底在體內(nèi)的抗腫瘤和/或抗癌活性。按照實施例1中所描述的來準備動物。在安樂死(腫瘤切除和接種后21天)時，腫瘤重量如下:
11I平均腫瘤重量
SIS/C/L15.0
權(quán)利要求
1.一種腫瘤抑制性條件化制劑，其包含條件化異源非細胞膠原材料基底和抗腫瘤生物分子、抗癌生物分子或抗腫瘤和抗癌生物分子的組合，其中腫瘤和/或癌細胞已經(jīng)在適于所述細胞在所述基底上生長的條件下在所述制劑上進行了培養(yǎng)。
2.權(quán)利要求1的制劑，其中所述腫瘤和/或癌細胞是前列腺腫瘤細胞。
3.權(quán)利要求1的制劑，其中所述腫瘤和/或癌細胞是黑素瘤細胞。
4.權(quán)利要求2的制劑，其中所述前列腺腫瘤細胞是人前列腺細胞。
5.權(quán)利要求1的制劑，其中所述基底是細胞外基質(zhì)。
6.權(quán)利要求1的制劑，其中所述基底基本上不含腫瘤和/或癌細胞。
7.一種用于抑制病人的腫瘤再生長的方法，其包括: 制備權(quán)利要求1的腫瘤抑制性條件化制劑； 將所述制劑施用于病人中已經(jīng)消除腫瘤或癌細胞生長的部位；和 抑制所述部位處的腫瘤再生長。
8.權(quán)利要求7的方法，進一步包括將所述制劑進行處理以除去細胞材料而不降解制劑的細胞外成分的步驟。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述處理步驟包括用化合物進行處理。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述處理步驟包括超聲處理。
11.權(quán)利要求8的方法，其中所述處理步驟包括將制劑冷凍和將制劑解凍。
12.權(quán)利要求7的方法，其中所述腫瘤或癌細胞生長包括哺乳動物前列腺腫瘤細胞。
13.權(quán)利要求7的方法，其中所述腫瘤或癌細胞生長包括哺乳動物黑素瘤細胞。
14.一種疫苗,其包含權(quán)利要求1的腫瘤抑制的條件化制劑。
15.一種腫瘤傷口敷料,其包含權(quán)利要求1的腫瘤抑制的條件化制劑。
16.一種適用于作為疫苗皮下施用于病人的注射制劑，其包含在藥物學上可接受載體中的顆粒形式的權(quán)利要求1的基底。
17.一種制備腫瘤和/或癌條件化細胞外基質(zhì)基底的方法，其包括: 將哺乳動物腫瘤和/或癌細胞在適于所述細胞培養(yǎng)的基底上在適于所述細胞在所述基底上生長的條件下培養(yǎng)一段時間，以提供條件化基底；和 將所述條件化基底進行處理以從所述培養(yǎng)物除去細胞成分。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述哺乳動物腫瘤和/或癌細胞是人前列腺腫瘤細胞。
19.權(quán)利要求17的方法，其中所述哺乳動物腫瘤和/或癌細胞是黑素瘤癌細胞。
20.權(quán)利要求17的方法，其中所述基底是細胞外基質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了具有腫瘤抑制活性的哺乳動物腫瘤和/或癌細胞調(diào)控的基底制劑。在一些實施方案中，哺乳動物腫瘤和/或癌細胞調(diào)控的基底制劑基本上不含細胞成分。這些制劑包含條件化異源非細胞膠原組織制備物，并且可以使用哺乳動物細胞外基質(zhì)基底來制備。條件化基底包括許多不同的抗腫瘤和/或抗癌生物分子，如隨著哺乳動物腫瘤和/或癌細胞在基底上生長而分泌和/或產(chǎn)生的抗腫瘤生物分子群，由此賦予本發(fā)明的條件化基底抗腫瘤和/或抗癌特性。本公開還提供了用于制備哺乳動物腫瘤和/或癌細胞調(diào)控基底的方法，以及使用該制劑來抑制腫瘤生長的方法，如在疫苗或傷口敷料中。還描述了使用所述的條件化基底抑制前列腺腫瘤和黑素瘤的方法。條件化哺乳動物腫瘤和/或癌細胞基底制劑基本上不含活的和/或致癌的或侵襲性的腫瘤和/或癌細胞。條件化基底和基底制劑包括可以用于癌癥治療制備物和制劑中的抗腫瘤和抗癌特性。
文檔編號A61L15/40GK103140229SQ201180043961
公開日2013年6月5日 申請日期2011年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月13日
發(fā)明者M·A·蘇科, M·C·海爾斯 申請人:圣母大學, 庫克生物科技公司