專利名稱：使用TGF-β拮抗劑治療心肌梗死的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本公開內(nèi)容涉及減少心肌梗死的不良后果的方法。
背景技術(shù)：
心臟病的問題和健康后果是影響深遠(yuǎn)的。心臟病在美國是女性和男性兩者的首要死亡原因。(Kung HCj Hoyert DLj Xu Jj Murphy SL Deaths: final data for2005.NationalVital Statistics Reports.2008; 56 (10))。每34秒在美國就有一人死于心臟病。每天有超過2，500名美國人死于心臟病。在2005年，652，091人死于心臟病(其中50.5%為女性)。占所有美國死亡人數(shù)的27.1%。心臟病是美國印地安人和阿拉斯加原住民、黑人、西班牙裔、和白人的首要死亡原因。對于亞裔和太平洋島嶼族裔，癌癥是首要死亡原因(占所有死亡的 27.5%)，心臟病是接近的第二位(25.0%)。(CDC.Deaths: leading causes for2004.National Vital Statistics Reports.2007; 56 (5)) 0 每年幾乎 600 萬例入院(在美國)是由心血管疾病所致。在2009年，心臟病預(yù)計(jì)造成超過3046億美元的花費(fèi)，包括死亡護(hù)理服務(wù)、藥物、和生產(chǎn)力喪失。(American Heart Association.Heart Disease and StrokeStatistics-2009Update.Dallas;AHA:2009.Statistics Committee and StrokeStatistics Subcommittee.Circulation.2008Decl5.)。在全世界范圍內(nèi)，冠心病在2005 年導(dǎo)致超過 760 萬人死亡。(World Health Organization.The Global Burden ofDisease:2004Update.Geneva;WHO:2008.)。在2003年，約37%成人報(bào)告具有心臟病和中風(fēng)的六項(xiàng)風(fēng)險(xiǎn)因素(高血壓、高膽固醇、糖尿病、當(dāng)前吸煙、身體不活動、和肥胖)中的兩項(xiàng)或更多項(xiàng)。(Hayes DK等，Disparities in multiple risk factors for heart disease andstroke, 2003MMW,.2005;54:113 - 116)。心肌梗死(MI)是由 缺血引起的心臟組織死亡?！叭毖敝竿ㄟ^由血管收縮或血流的局部障礙物產(chǎn)生的血供局部缺乏。對先前缺血的組織或器官，諸如心臟恢復(fù)血流稱為“再
灌注”。急性心肌梗死(AMI)，或“心臟病發(fā)作”在局部化心肌缺血引起限定組織死亡區(qū)域形成時(shí)發(fā)生。AMI最常由冠狀動脈中的動脈粥樣硬化損傷的破裂引起。這引起血栓形成，堵住動脈，使其停止對其供應(yīng)的心臟區(qū)域供血。重度且長時(shí)間的缺血產(chǎn)生跨越心肌壁的整個(gè)厚度的壞死區(qū)。此類透壁性梗死通常引起ST段抬高。不太嚴(yán)重且不太長時(shí)間的缺血可以在冠狀動脈阻塞繼之以自發(fā)再灌注時(shí)發(fā)生；梗死相關(guān)動脈沒有完全阻塞；阻塞是完全的，但是現(xiàn)有的并行血供防止了完全缺血；或者受累的心肌膜帶中的氧需求較小。在這些條件下，壞死帶可以主要限于心內(nèi)膜下層(subendocardium),這通常弓I起非ST段抬高M(jìn)I。壞死的心肌區(qū)和不受累的心肌區(qū)都在缺血事件后幾小時(shí)、幾天和幾周里經(jīng)歷進(jìn)行性變化。這種梗死后心肌演變過程導(dǎo)致初始事件后在可預(yù)測的時(shí)間發(fā)生特征性變化。急性缺血引起受累心肌膜中收縮性立即喪失，該狀況稱作低動力(hypokinesis)。壞死在急性缺血發(fā)作后約15-30分鐘開始在心內(nèi)膜下層中形成。壞死區(qū)在接著的3-6小時(shí)里朝心外膜向外生長，最終跨越整個(gè)心室壁。在梗死邊緣，心肌膜可能發(fā)生頓抑(stunned)(可逆受損)，并且如果血流回復(fù)最終會恢復(fù)。剩余的有活力的心肌膜的收縮性升高，該過程稱作高動力。梗死內(nèi)部發(fā)生一系列細(xì)胞、組織學(xué)和肉眼變化。梗死組織的肉眼外觀的改變在細(xì)胞死亡開始后至少6小時(shí)內(nèi)是不明顯的。然而，細(xì)胞生物化學(xué)和超微結(jié)構(gòu)在20分鐘內(nèi)開始顯示異常。細(xì)胞損傷是進(jìn)行性的，在約12小時(shí)里變得逐漸不可逆。細(xì)胞死亡開始后4-12小時(shí)，梗死的心肌膜開始經(jīng)歷凝固壞死，該過程以細(xì)胞溶脹、細(xì)胞器分解和蛋白質(zhì)變性為特征。在約18小時(shí)后，嗜中性粒細(xì)胞(吞噬性淋巴細(xì)胞)進(jìn)入梗死。它們的數(shù)目在約5天后達(dá)到峰值，然后下降。在3-4天后，肉芽組織在梗死帶邊緣出現(xiàn)。肉芽組織由巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞(其沉積下瘢痕組織)、和新的毛細(xì)血管組成。梗死的心肌膜在4-7天特別軟，因此極易破裂。隨著肉芽組織在幾周里向內(nèi)朝著梗死中心遷移，壞死組織被巨噬細(xì)胞吞噬并消化。然后，肉芽組織逐漸成熟，伴有結(jié)締(瘢痕)組織的增加和毛細(xì)血管的喪失。在2-3個(gè)月后，梗死已經(jīng)愈合，留下變薄的、堅(jiān)硬且呈淺灰色的心室壁的無收縮性區(qū)。微觀形態(tài)學(xué)變化如下隨時(shí)間演變:波狀心肌纖維在缺血發(fā)作后1-3小時(shí)出現(xiàn)。用四唑或堿性品紅染料的染色缺陷在缺血發(fā)作后2-3小時(shí)出現(xiàn)。伴有橫紋喪失、收縮帶、水腫、出血、和早期中性白細(xì)胞浸潤物的凝固壞死在缺血發(fā)作后4-12小時(shí)出現(xiàn)。持續(xù)的凝固壞死、細(xì)胞核的核固縮、和邊緣收縮帶在缺血發(fā)作后18-24小時(shí)明顯。細(xì)胞核和條紋的完全喪失伴隨著中性白細(xì)胞胞的嚴(yán)重浸潤在缺血發(fā)作后24-72小時(shí)出現(xiàn)。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤以及纖維血管應(yīng)答在缺血發(fā)作后3-7天開始。伴有突起的肉芽組織的纖維血管應(yīng)答在缺血發(fā)作后10-21天是明顯的。纖維化在缺血事件后7周或更早是容易明顯的。并發(fā)癥可以包括:心律失常和傳導(dǎo)缺陷、梗死形成或再梗死形成的延伸、充血性心力衰竭、心源性休克、心包炎、附壁血栓形成伴有可能的栓塞、心肌壁破裂伴有可能的填塞、乳頭肌破裂伴有可能的瓣閉鎖不全、和心室壁瘤形成。發(fā)明概述本文中公開了一種降低患者中心肌梗死的不良后果的方法，包括在心肌梗死的急性階段期間對所述患者施用TGF-β拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，心肌梗死是急性心肌梗死?？梢栽诩毙孕募∪毖l(fā)作的120小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。在多個(gè)實(shí)施方案中，在急性心肌缺血發(fā)作的約72小時(shí)內(nèi)、約48小時(shí)內(nèi)、約24小時(shí)內(nèi)、或約12小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用?？梢栽谑芩鲂募」Ｋ烙绊懙慕M織的實(shí)質(zhì)性巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤前開始所述TGF-β拮抗劑的施用。在一些實(shí)施方案中，在以受所述心肌梗死影響的組織的嗜中性粒細(xì)胞浸潤(neutrophilic infiltration)為特征的期間內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。在其它實(shí)施方案中，在以受所述心肌梗死影響的組織的壞死為特征的期間內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。一般地，患者可以是人或非人哺乳動物。在一些實(shí)施方案中，TGF-β拮抗劑可以選自下組:i)特異性結(jié)合一種或多種TGF-β同種型的抗體或抗體片段；ii)TGF-13受體或其可溶性片段；iii)特異性結(jié)合一種或多種TGF-β受體的抗體或抗體片段；和iv)反義或干擾RNA寡核苷酸。
在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對所述患者施用能夠選擇性恢復(fù)TGF-β的期望功能的化合物。例如，能夠選擇性恢復(fù)TGF-β的期望功能的化合物可以是消炎藥，或TNF-α拮抗劑。在一些實(shí)施方案中,所述方法可以進(jìn)一步包括對所述患者施用ACE抑制齊U。ACE抑制劑可以選自下組:貝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、福辛普利(fosinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、Transdolapril、賴諾普利(Iisinopril)、依那普利(enalapril)和 Ramparil。在其它實(shí)施方案中，所述方法可以進(jìn)一步包括對所述患者施用血管緊張肽II受體拮抗劑。血管緊張肽II受體拮抗劑可以選自下組:依普羅沙坦(eprosartan)、替米沙坦(telmisartan)、氯沙坦(1sartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、奧美沙坦(olmesartan)、坎地沙坦(candesartan)、和繳沙坦(valsartan)。TGF-β拮抗劑可以是特異性結(jié)合一種或多種TGF-β同種型的抗體或抗體片段，并且可以中和人TGF- β UTGF- β 2和TGF- β 3中的一者或多者。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段可以包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO: 2)及多至5處突變，或其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1074B9VH域(SEQID NO: 12)，或其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1287A10VH域(SEQ ID NO: 22)，或其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1073G12VL域(SEQ ID NO: 7)，或其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1074B9VL域(SEQ IDNO: 17)，或其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1287A10VL域(SEQ ID NO:27)，或其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含 PET1073G12V H 域(SEQ ID NO: 2)和 PET1073G12VL 域(SEQ ID NO: 7)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含PET1074B9VH域(SEQ ID NO: 12)和PET1074B9VL域(SEQ ID NO: 17)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含PET1287A10VH域(SEQID NO: 22)和PET1287A10VL域(SEQ ID NO: 27)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含一組CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其中所述HCDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQID NO:5, SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 25。在一些實(shí)施方案中，所述 VH 域的 HCDRl、HCDR2和HCDR3在種系重鏈框架內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述VH域的HCDRl、HCDR2和HCDR3在來自種系氨基酸序列且包含至多12處突變的框架內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或抗體片段包含一組⑶ROXDRl、IXDR2和IXDR3)，其中所述IXDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQID NO: 10,SEQ ID N0:20 和 SEQ ID NO:30。在一些實(shí)施方案中，所述 LCDR1、LCDR2 和 LCDR3在種系重鏈框架內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，所述LCDRl、LCDR2和LCDR3在來自種系氨基酸序列且包含至多5處突變的框架內(nèi)。附圖簡述

圖1顯示了在施用1D11-D3和1D11D-5和13C4的情況下纖維化降低。圖2顯示了心回波圖分析中前壁增厚和后壁增厚。圖3顯不了心回波圖分析中區(qū)域室壁運(yùn)動得分(regional wall motion score)。圖4顯示了在施用IDll和13C4的情況下的纖維化降低。圖 5 對 13C4-D0、1D11-D0、13C4-D1、1D11-D1、13C4-D5 和 1D11-D5 處理組顯示了心
回波圖分析中的前壁增厚和后壁增厚。圖 6 對于媒劑、13C4-D0、ID11-DO、13C4-D1、ID11-D1、13C4-D5 和 ID11-D5 處理組顯
示了心回波圖分析中的區(qū)域室壁運(yùn)動得分。圖7顯示了與媒劑處理組對比的LV瘢痕體積。
圖8顯示了瘢痕臨近區(qū)域中TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)目。圖9顯示了冠狀動脈阻塞/冠狀動脈再灌注(CA0/CAR)后4周測量的LV射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。圖10顯示了 CA0/CAR后2-4周時(shí)測量的LVEF。圖11顯示了 LV等容舒張時(shí)間。圖12顯示了與媒劑相比的區(qū)域室壁增厚。圖13顯示了 LV-舒張期末壓-容積關(guān)系的斜率。圖14顯示了在以來自兩種不同配制劑的I和5mg/kg劑量施用IDll的情況下LV中纖維化的降低。圖15顯示了在以來自兩種不同配制劑的I和5mg/kg劑量施用IDll的情況下有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域內(nèi)纖維化的降低。圖16顯示了在以來自兩種不同配制劑的I和5mg/kg劑量施用IDll的情況下有風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域內(nèi)心肌膜的增加。圖17顯示了媒劑、I和5mg/kg(對于兩種配制劑)的13C4和IDll的心回波圖分
析中的局部壁運(yùn)動得分。圖18顯示了抗體的IV施用后IDll的劑量依賴性血清水平。圖19顯示了在I/R 后施用IDll的情況下血清骨橋蛋白的降低。圖20顯示了 IR后TGF-β I的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的TGF-β I降低。圖21顯示了 IR后TGF-β 2的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的TGF-β 21降低。圖22顯示了 IR后TGF-β 3的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的TGF_b3降低。圖23顯示了 IR后膠原3的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的膠原3降低。圖24顯示了 IR后內(nèi)皮縮血管肽-1的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的內(nèi)皮縮血管肽-1降低。圖25顯示了 IR后纖溶酶原激活物抑制劑-1的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的纖溶酶原激活物抑制劑-1降低。圖26顯示了 IR后Snaill的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的Snaill降低。圖27顯示了 IR后Snai 12的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的Snai 12降低。圖28顯示了 IR后α-平滑肌肌動蛋白的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的α_平滑肌肌動蛋白降低。圖29顯示了 IR后纖連蛋白的誘導(dǎo)和I/R后劑量依賴性IDll介導(dǎo)的纖連蛋白降低。圖30顯示了 5mg/kglDll的施用對Bax表達(dá)的影響。發(fā)明詳述在MI，或心臟病發(fā)作后，心臟開始自身修復(fù)。此心臟修復(fù)過程可以分成重疊的階段。第一階段稱為炎性階段。炎性階段后是增殖階段。最后，成熟階段是心臟修復(fù)的最后階段。(Bujak，M.and Frangogiannis, NG Cariovasc Res.74:184-195 (2007))。在心臟病剛發(fā)作后，炎性階段的特征在于心肌細(xì)胞死亡、細(xì)胞因子和趨化因子的誘導(dǎo)、和炎性細(xì)胞流入以清除瀕死的組織。在增殖階段期間，存在對炎性介質(zhì)的阻抑作用，并且有幫助結(jié)締組織纖維形成的細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、和內(nèi)皮細(xì)胞流入梗死區(qū)中。成纖維細(xì)胞分泌胞外基質(zhì)。內(nèi)皮細(xì)胞促成在形成中的松散纖維結(jié)締組織，或稱肉芽組織內(nèi)形成微血管網(wǎng)絡(luò)。浸潤的炎性細(xì)胞然后開始進(jìn)行細(xì)胞死亡，或稱為凋亡。最終，在成熟階段期間，來自增殖階段的肉芽組織組織化并且成熟成密集的纖維結(jié)締組織瘢痕。心肌膜中纖維化應(yīng)答的此重塑可以是長時(shí)間的。一般而言，炎性階段從梗死時(shí)間到MI后1-7天發(fā)生。增殖階段從MI后約5-14天發(fā)生。最終，成熟階段從MI后約10-14天開始，并且繼續(xù)，直到發(fā)生心臟重塑。TGF-β在梗死的心肌膜中被誘導(dǎo)，并且參與MI后修復(fù)的所有階段，這一點(diǎn)已經(jīng)給確定此細(xì)胞因子在心臟修復(fù)中的作用的嘗試增加了復(fù)雜性。因此，TGF-β在MI后在心臟修復(fù)中的精確作用尚未得到充分了解。TGF-β是一種多功能細(xì)胞因子，它最初是以其將正常的成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化成能夠貼壁依賴性生長的細(xì)胞的能力命名的。目前有至少五種TGF-β同等型得到了鑒定:TGF-P l、TGF-P2、TGF-e3、TGF-e4jPTGF-e5。有可能從多種物種，包括人、小鼠、青猴(green monkey)、豬、牛、雞、和娃純化此TGF-β家族。還有可能從多種身體來源，包括骨、血小板、或胎盤純化此TGF-β家族，用于在重組細(xì)胞培養(yǎng)中將其生成，并用于測定其活性。在人類中，已知存在三種同等型TGF-β 1、TGF_@2和TGF-3 3。(Swiss Prot登錄號分別為P001137、P08112和P10600)。在其生物學(xué)活性狀態(tài)中，這三種同等型是25kDa同二聚體，包含通過鏈間二硫橋連接的兩個(gè)112個(gè)氨基酸的單體。TGF- β I與TGF- β 2相差27個(gè)氨基酸，而與TGF-β 3相差22個(gè)氨基酸。差異主要是保守氨基酸變化。已經(jīng)通過X-射線晶體學(xué)確定TGF-β的三維結(jié)構(gòu)，并且已經(jīng)定義了受體結(jié)合區(qū)。人TGF-β和小鼠TGF-β兩者是相似的。人TGF- β I與小 鼠TGF- β I具有一處氨基酸差異。人TGF- β 2與小鼠TGF- β 2僅具有三處氨基酸差異，而人和小鼠TGF- β 3是相同的。術(shù)語“TGF-β ”或“轉(zhuǎn)化生長因子”指具有任何人TGF-β同等型的全長、天然氨基酸序列的所描述的分子家族。這些包括潛活(“潛活TGF-β ”)和前體和成熟TGF-β的締合的或未締合的復(fù)合物。提及這樣的TGF-β時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解為提及了任一種目前鑒定的形式，包括TGF-β 1、TGF-β 2、TGF-β 3、TGF-β 4、和TGF-β 5及其潛活型式，以及未來鑒定的人TGF- β種類，包括源自任何已知的TGF- β序列且與所述序列至少約75%，優(yōu)選地，至少約80%，更優(yōu)選地，至少約85%，還更優(yōu)選地，至少約90%，甚至更優(yōu)選地，至少約95%同源的多肽 ο 特定術(shù)語 “ TGF- β I ”、“ TGF- β 2 ”、和 “ TGF- β 3 ”、及 “ TGF- β 4 ” 和 “ TGF- β 5 ” 指文獻(xiàn)中定義的 TGF- β (例如 Derynck 等,Nature,見上文，Seyedin 等,J.Biol.Chem., 262,見上文，及deMartin等，見上文)。術(shù)語“TGF- β ”指編碼人TGF- β的基因。TGF-β家族成員是在分子的成熟部分中具有9個(gè)半胱氨酸殘基，在成熟區(qū)中與其它已知的TGF-β序列共享至少65%同源性，并且可以競爭相同受體的蛋白質(zhì)。另外，它們都似乎作為較大的前體被編碼。前體在接近N端都具有一個(gè)高同源性區(qū)域，并且在前體的后來會通過加工除去的部分中，有三個(gè)半胱氨酸殘基顯示是保守的。TGF-β家族成員還似乎具有含4或5個(gè)氨基酸的加工位點(diǎn)。大量病理狀況中涉及到TGF-β活性水平升高，這樣的病理狀況包括但不限于下列各項(xiàng):(i)傷口愈合期間的纖維化、瘢痕形成、和粘連；(ii)心臟、肺、肝、和腎的纖維化疾?。?iii)動脈粥樣硬化和動脈硬化；(iv)某些癌癥類型，包括前列腺的癌癥、消化系統(tǒng)的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、宮頸的癌癥、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、和胃癌；(V)血管病(angiopathy)、血管病變(vasculopathy)、腎??；(vi)系統(tǒng)性硬化；(vii)病毒感染，諸如丙肝和HIV ;和(viii)免疫學(xué)和炎性病癥和缺陷，諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。對TGF-β在心臟損傷中的作用的初步研究指示在MI后的心臟修復(fù)的第一或炎性階段中發(fā)生保護(hù)性作用。在這些初步研究中，在缺血性損傷后幾小時(shí)內(nèi)在心肌缺血性損傷模型中施用TGF-β。Lefer在分離的大鼠心臟中顯示了在缺血性心臟損傷之前，或剛發(fā)生之后施用TGF-β降低冠狀循環(huán)中的超氧陰離子，維持內(nèi)皮依賴性冠狀舒張，降低自外源腫瘤壞死因子(TNF)介導(dǎo)的損傷，而且阻止重度心臟損傷。(Lefer，等Science, 249:61, 1990)。Lefer及同事繼續(xù)證明TGF-β保護(hù)內(nèi)皮功能,其特別是通過維持內(nèi)皮的內(nèi)皮衍生的舒張因子(EDRF，但是現(xiàn)在稱為一氧化氮或NO)形成來實(shí)現(xiàn)。(Lefer，AM.Biochem Pharmacol.42:1323-1327，1991)。用分離的心肌細(xì)胞或分離的心臟制備物進(jìn)行的其它研究進(jìn)一步闡明TGF-β介導(dǎo)的心臟保護(hù)的機(jī)制。Keller 等(Journal of Cardiovascular Pharmacology, 30:197-204, 1997)顯不了在犬心臟I/R模型中，在缺血/再灌注前30分鐘施用TGF-β時(shí)，與未處理的對照相比，在剛再灌注后在梗死帶中蛋白質(zhì)漏出指數(shù)(PLI)降低50%。然而，在再灌注后48小時(shí)沒有觀察到PLI的改善。另外，TGF-β在再灌注后I小時(shí)或48小時(shí)的犬中沒有改善內(nèi)皮依賴性舒張。這些結(jié)果提示了 TGF-β可以在再灌注早期阻止冠狀血管通透性升高，但是它不能阻止更晚的冠狀血管損傷。(Keller 等，J Cardiovasc Pharmcol.30:197-204，1997)。

新近，使用TGF- β受體拮抗劑中斷TGF- β信號傳導(dǎo)來調(diào)查TGF- β在MI修復(fù)中的作用。在一項(xiàng)研究中，Ikeuchi 等(Cardiovascular Research, 64:526-35，2004)通過在MI前7天在小鼠中肌肉內(nèi)注射編碼TGF-β II型受體(Τβ IIR)的胞外域的質(zhì)粒阻斷MI時(shí)的TGF-β信號傳導(dǎo)。與未處理的小鼠相比，他們觀察到MI后24小時(shí)期間升高的死亡率、升高的炎癥、升高的左心室(LV)擴(kuò)張和可收縮功能障礙，盡管梗死大小沒有增加。為了在MI后的后期階段阻斷TGF- β，小鼠在MI后第O天或第7天接受T β IIR的肌肉內(nèi)注射。MI后4周，T β IIR處理在非梗死心肌膜中阻止LV擴(kuò)張、可收縮功能障礙、心肌細(xì)胞肥大和間質(zhì)性纖維化。TGF-β在早期階段中是有益的，但是益處隨著持續(xù)的表達(dá)而喪失，導(dǎo)致LV重塑和衰竭。在另一項(xiàng)研究中，Okada等(Circulation, 11:2430-37, 2005)在 MI 后 3 天給小鼠肌肉內(nèi)注射編碼可溶性TGF- β II型受體的腺病毒(Ad.CAGsT β RII)。在MI后經(jīng)處理的小鼠中，存活顯著改善。同時(shí)MI后4周心室擴(kuò)張顯著減弱且心臟功能改善。MI大小與對照沒有區(qū)別，但是MI厚度和周長在經(jīng)處理的動物中較小。在經(jīng)處理的動物中梗死區(qū)成肌纖維細(xì)胞的凋亡頻度更低。在MI后4周時(shí)施用Ad.CAG-sT β RII是無效的。Okada等認(rèn)為抑制TGF-β的臨界窗口在3天后且在4周前出現(xiàn)。他們的研究中的注射特意在認(rèn)為處理不會影響心肌細(xì)胞的急性缺血性死亡的時(shí)間進(jìn)行。Okada等認(rèn)為在MI的急性階段期間抑制TGF- β是有害的。在這些研究后，使用針對TGF- β 1、2和3有效的拮抗性抗體在MI修復(fù)中調(diào)查TGF- β 拮抗作用。Frantz 等(Basic Research in Cardiology, 103:485-502，2008)在通過冠狀動脈結(jié)扎誘導(dǎo)MI之前7天，或之后5天開始，對小鼠施用TGF- β拮抗性抗體或陰性對照抗體。貫穿研究的8周持續(xù)時(shí)間每隔一天施用抗體。死亡率在接受抗TGF-β抗體的組中顯著更高。另外，這兩個(gè)抗TGF-β抗體處理組表明升高的左心室擴(kuò)張。這些作者推斷冠狀動脈結(jié)扎之前或之后的抗TGF-β處理增加死亡率，而且惡化左心室重塑。作者提示TGF-β拮抗的持續(xù)時(shí)間和TGF-β拮抗劑濃度的差異可能造成其研究與那些由Ikeuchi等(2004)和Okada等(2005)報(bào)告的研究之間的結(jié)果差異。本文中公開了一種治療患有心肌梗死，特別是急性心肌梗死的患者，或降低患者中心肌梗死的不良后果的方法，該方法包括在心肌梗死的急性階段期間對患者施用TGF- β拮抗劑。如下的發(fā)現(xiàn)是令人驚訝的，可以在急性心肌缺血發(fā)作后不到120小時(shí)的時(shí)間行之有效地開始TGF-β拮抗劑的施用。在一些情況下，本文中所描述的方法可以在急性心肌缺血發(fā)作的約72小時(shí)內(nèi)，在約48小時(shí)內(nèi)、在約24小時(shí)內(nèi)、或在約12小時(shí)內(nèi)開始TGF- β拮抗劑的施用。一般地，在本文中所公開的方法中，在MI的急性階段期間施用TGF-β拮抗劑?？梢栽谑苄募」Ｋ烙绊懙慕M織的實(shí)質(zhì)性巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤前開始TGF-β拮抗劑的施用。在一些實(shí)施方案中，在以受心肌梗死影響的組織的中性白細(xì)胞浸潤為特征的時(shí)期期間開始TGF-β拮抗劑的施用。在其它實(shí)施方案中，在以受心肌梗死影響的組織的壞死為特征的時(shí)期期間開始TGF- β拮抗劑的施用?！爸委?處理”指治療性處理和防范性或預(yù)防性措施兩者。那些需要治療的對象包括那些已經(jīng)患有可治療病癥的對象及那些要預(yù)防病癥的對象。治療可以包括或不包括完全治愈或恢復(fù)正常功能。治療也可以包括改善不想要的癥狀和/或不利病癥后果的降低。“哺乳動物”可以是分類為哺乳動物的任何動物，包括人、家畜和牲畜、和動物園、運(yùn)動、或?qū)櫸飫游铮T如犬、馬、貓、牛，等等。優(yōu)選地，哺乳動物是靈長類，諸如例如猴、猿、或人。術(shù)語“有效量”指有效治療哺乳動物中的疾病或病癥的藥物量。雖然某些TGF-β功能在MI后的早期階段中可能是期望的，但是在急性期期間及之后的拮抗TGF可以導(dǎo)致心臟重塑和功能的改善。然而，在期望恢復(fù)一種或多種選擇的TGF-β功能的情況下，可以希望與TGF-β拮抗劑共施用另一種能夠選擇性恢復(fù)期望的TGF-β功能的化合物。例如 ，能夠選擇性恢復(fù)期望的TGF-β功能的化合物可以是消炎藥、或TNF-α拮抗劑。也可以期望共施用另一種治療，例如，所述方法可以包括對患者施用ACE抑制劑。ACE抑制劑可以選自下組:貝那普利、卡托普利、福辛普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、Transdolapri1、賴諾普利、依那普利和Ramparil。在其它實(shí)施方案中,所述方法可以進(jìn)一步包括對患者施用血管緊張肽II受體拮抗劑。血管緊張肽II受體拮抗劑可以選自下組:依普羅沙坦、替米沙坦、氯沙坦、厄貝沙坦、奧美沙坦、坎地沙坦、和纈沙坦。中和性抗體可以用作TGF- β拮抗劑?！翱贵w”是免疫球蛋白，無論是天然的還是部分或完全合成生成的。該術(shù)語還覆蓋包含抗體的抗原結(jié)合域的任何多肽或蛋白質(zhì)。包含抗原結(jié)合域的抗體片段是諸如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd和雙抗體等分子。術(shù)語“抗體”以最廣義使用，并且明確涵蓋完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩個(gè)完整的抗體形成的多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、和抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性。單克隆抗體是高度特異的，針對單一抗原性位點(diǎn)。此外，與包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，每個(gè)單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。除它們的特異性外，單克隆抗體的優(yōu)勢在于它們可以在不受到其它抗體的污染的條件下合成。修飾語“單克隆”指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如,單克隆抗體可通過最初由Kohler等，Nature, 256:495(1975)記載的雜交瘤方法來生成，或者可通過重組DNA方法來生成(參見例如美國專利N0.4，816，567)?！皢慰寺】贵w”還可使用例如 Clackson 等,Nature, 352:624-628 (1991)及 Marks 等,J.Mol.Biol.，222:581-597(1991)中記載的技術(shù)從噬菌體抗體庫分離?！翱贵w片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選包含其抗原結(jié)合或可變區(qū)。抗體片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。術(shù)語“Fe受體”或“FcR”用于描述結(jié)合抗體Fe區(qū)的受體。優(yōu)選的FcR是天然序列人FcR。術(shù)語“可變的”在抗體或抗體片段的上下文中指可變域的某些部分在抗體序列間差異廣泛，并且在每種特定抗體對其特定抗原的結(jié)合和特異性中使用的實(shí)情。然而，變異性并非遍及整個(gè)抗體可變域均勻分布。它集中于輕鏈和重鏈可變域兩者中三個(gè)稱作高變區(qū)的區(qū)段中。可變域中更高度保守的部分稱作框架區(qū)(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)FR，它們大多采取β-折疊片構(gòu)象，通過形成環(huán)狀連接且在有些情況下形成β-折疊片結(jié)構(gòu)一部分的三個(gè)高變區(qū)連接。術(shù)語“高變區(qū)”指抗體中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘基。一般地，高變區(qū)包含來自“互補(bǔ)決定區(qū)”或“⑶R”的氨基酸殘基。“框架區(qū)”或“FR”殘基是那些除了如本文中限定的高變區(qū)殘基外的可變域殘基?！癋v”是含有完整抗原識別和抗原結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。此區(qū)由緊密、非共價(jià)結(jié)合的一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域的二聚體組成。正是在這種構(gòu)造中，每個(gè)可變域的三個(gè)高變區(qū)相互作用而在VH-VL 二聚體表面上確定了一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)高變區(qū)共同賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(或只包含對抗原特異性的三個(gè)高變區(qū)的半個(gè)Fv)也具有識別和結(jié)合抗原的能力，只是親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。Fab片段還包含輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域(CHl)。Fab’片段與Fab片段的不同之處在于重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中對其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶至少一個(gè)游離硫醇基的Fab’的稱謂。？(&13’)2抗體片段最初是作為在Fab’片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對Fab’片段生成的。還知道抗 體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。根據(jù)其恒定域氨基酸序列，來自任何脊椎動物物種的抗體的“輕鏈”可歸入兩種截然不同型中的一種，稱作卡帕(K)和拉姆達(dá)(λ)。“單鏈Fv”或“scFv”抗體片段包含抗體的VH和VL域，其中這些域存在于單一多肽鏈中。非人(例如嚙齒類)抗體的“人源化”形式是含有自非人免疫球蛋白衍生的最低限度序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體是這樣的人免疫球蛋白(接受抗體)，其中來自接受體高變區(qū)的殘基為具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)，諸如小鼠、大鼠、家兔或非人靈長類的高變區(qū)殘基所替換。在有些情況下，人免疫球蛋白的框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在接受抗體或供體抗體中未找到的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改善抗體性能。一般而言，人源化抗體會包含至少一個(gè)，通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對應(yīng)于非人免疫球蛋白的那些，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的那些。任選地，人源化抗體還會包含免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)的至少一部分,通常是人免疫球蛋白的。(Jones等，Nature,321:522-525(1986);Riechmann 等，Nature, 332:323-329(1988);and Presta, Curr.Op.Struct.Biol,.2:593-596(1992))?！癟GF- β抗體”指結(jié)合任何TGF- β同等型的抗體，優(yōu)選地，結(jié)合TGF- β 1、TGF- β 2、或TGF-β 3、或其任何組合，更優(yōu)選地，結(jié)合至少TGF-β 1、或至少TGF-β 2，且最優(yōu)選地，TGF- β 1，或TGF- β I以及TGF- β 2的抗體。任選地，抗體可以至少結(jié)合TGF- β 3。一種結(jié)合TGF-β 1、TGF-P2和TGF_P3同等型的中和性小鼠單克隆抗體稱為1D11，并且可自R&D Systems (產(chǎn)品目錄編號MAB-1835)或經(jīng)由ATCC (登錄號HB9849)得到。一種針對人TGF-β I的小鼠單克隆抗體也可購自R&D Systems。也已經(jīng)從用包含氨基酸位置48至60 (與TGF- β 1、TGF- β 2和TGF- β 3反應(yīng)性的抗體)和氨基酸位置86至101 (對TGF-β I特異性的抗體)的人TGF-β I肽免疫的小鼠生成中和性小鼠單克隆抗體。(Hoeferand Anderer, Cancer Tmmunol.1mmunother., 41:302-308 (1995))。GC1008 是一種人源化單克隆IgG4抗體，其中和所有TGF-β同等型，而且適合于人的治療性使用。IDll是一種在一大批體外測定法中中和小鼠TGF-β 1、TGF-β 2和TGF-β 3及人TGF-β I和TGF- β 2的鼠泛特異性抗TGF-β抗體(美國專利N0.5，571，714;R&D SystemMAB1835產(chǎn)品單)。在動物纖維化模型中，已經(jīng)證明了 IDll是有效的。然而，IDll是一種鼠單克隆抗體，并且可能不適合于人的治療性使用。如此，在一些實(shí)施方案中，人抗體或包含人序列元件的經(jīng)修飾的抗體可以是期望的。在一些實(shí)施方案中，治療MI的方法可以包括施用針對TGF-β的抗體以治療與TGF-β相關(guān)疾病中TGF-β過度生成有關(guān)的急性纖維化。身體響應(yīng)損傷或疾病而再生被破壞的組織。在長期或廣泛的損傷的情況下，破壞的組織可能被特化的纖維化結(jié)締組織所取代。這種纖維化組織的沉積可以導(dǎo)致患者中受累組織或器官功能的損害。在急性階段期間施用有效量的抗TGF-β抗體可以降低隨后的纖維化形成。此外，也可以在通常以纖維化為特征的MI后恢復(fù)期內(nèi)施用有效量的抗TGF-β抗體以中和TGF-β的生物活性，由此降低纖維化形成。在一些實(shí)施方案中，TGF-β拮抗劑可以選自下組:(i)特異性結(jié)合一種或多種TGF-β同等型的抗體或抗體片段；(ii) TGF-β受體或其可溶性片段；(iii)特異性結(jié)合一種或多種TGF-β受體的抗體或抗體片段；和(iv)反義或干擾RNA寡核苷酸。特異性結(jié)合并中和TGF-β分子的抗TGF-β抗體作為TGF-β拮抗劑是特別有用的。此類抗體的例子記載于美國專利申請公開文本N0.2006/0251658?？筎GF-β抗體包括針對TGF-β，特別是人TGF- β的特異性抗體，包括針對TGF- β 1、TGF- β 2和TGF- β 3的特異性抗體。由于抗體可以以許多方式修飾，術(shù)語“抗體分子”應(yīng)當(dāng)理解為覆蓋具有所要求的特異性的抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的任何抗體或物質(zhì)。因此，此術(shù)語涵蓋抗體片段和衍生物，包括任何包含抗原結(jié)合域的多肽，無論是天然的，或是完全合成或部分合成的。因此，這樣的嵌合分子也包括在內(nèi)，其包含抗體的抗原結(jié)合域或等同物及與之融合的另一種多肽。嵌合抗體的克隆和表達(dá)記載于ΕΡ-Α-0120694和ΕΡ-Α-0125023，及許多后續(xù)的文獻(xiàn)。因此，除非明確限制，術(shù)語抗TGF-β抗體在本文中以廣義使用，包括完全抗體(例如，IgG，諸如IgGl或IgG4)、抗體片段(例如，scFv、Fab、dAb)、或包含源自抗TGF-β抗體或其組分的抗TGF-β抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。

TGF-β拮抗劑包括具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基并且從非人來源導(dǎo)入其中的人源化單克隆抗TGF- β抗體。可以遵循Winter及同事的方法(Jones等，Nature, 321:522-525 (1986) ;Riechmann 等，Nature, 332:323-327 (1988);Verhoeyen等，Science, 239:1534-1536 (1988))通過用高變區(qū)序列取代人抗體的相應(yīng)序列實(shí)施人源化。因而，此類“人源化”抗體可以是嵌合抗體(例如，如記載于美國專利N0.4，816，567的)，其中完整的人可變域的一小部分已經(jīng)被取代為來自非人物種的相應(yīng)序列。實(shí)際上，人源化抗體通常是人抗體，其中一些高變區(qū)殘基和可能一些FR殘基用來自嚙齒類抗體中類似位置的殘基取代。依照所謂的“最佳擬合”方法，針對已知的人可變域序列的整個(gè)文庫篩選嚙齒類抗體的可變域的序列。然后，接受與嚙齒類序列最接近的人序列作為人源化抗體的人框架區(qū)(FR) (Sims 等,J.1mmunol., 151:2296(1993) ; Chothia 等,J.Mol.Biol., 196:901(1987))。另一種方法使用源自特定亞組的輕鏈或重鏈的所有人抗體的共有序列的特定框架區(qū)?？梢詫追N不同人源化抗體使用相同框架(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 89:4285(1992);Presta 等，J.1mmunol., 151:2623(1993))。優(yōu)選地，人源化抗體保留對抗原的高親和力和其它有利的生物學(xué)特性。為了實(shí)現(xiàn)此目的，可以通過如下的方法制備人源化抗體，所述方法包括使用親本和人源化序列的三維模型來分析親本序列和各種概念上的人源化產(chǎn)物。三維免疫球蛋白模型通常是可用的，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的。計(jì)算機(jī)程序是可用的，其例示并顯示選擇的候選免疫球蛋白序列的可能的三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)。檢查這些顯示容許分析殘基在候選免疫球蛋白序列運(yùn)行中可能的作用，即，分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。這樣，可以從接受和輸入序列選擇FR殘基并組合，從而實(shí)現(xiàn)期望的抗體特征，諸如對靶抗原的親和力升高。一般地，高變區(qū)殘基直接且最實(shí)質(zhì)性地參與影響抗原結(jié)合?？筎GF- β抗體通常包含抗體VH和VL域?；パa(bǔ)決定區(qū)⑶R在VH和VL域內(nèi)，所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR可以包含在不同框架區(qū)FR內(nèi)，以根據(jù)情況形成VH或VL域?？乖Y(jié)合位點(diǎn)可以由抗體VH域和/或VL域或其抗原結(jié)合部分組成?？筎GF-β抗體可以包 含HCDR組、IXDR組、或兩者，和/或人抗體VH域、VL域或兩者。HCDRl、HCDR2和HCDR3的組可以具有選自下組的序列:HCDRlSEQ ID NO: 3、HCDR2SEQ ID NO: 4、HCDR3SEQ ID NO: 5 (本文中稱為 “HCDR 的PET1073G12 組”)；HCDRlSEQ ID NO: 13、HCDR2SEQ ID NO: 14、HCDR3SEQ ID NO: 15 (本文中稱為“HCDR的 PET1074B9 組”)；HCDRlSEQ ID NO: 23、HCDR2SEQ ID NO: 24、HCDR3SEQ ID NO: 25 (本文中稱為“HCDR的 PET1287A10 組”)。IXDRl、IXDR2和IXDR3的組可以具有選自下組的序列:LCDRlSEg ID N0:8、LCDR2SEQ ID N0:9、LCDR3SEQ ID NO: 10 (本文中稱為 “LCDR的 PET1073G12 組”)；LCDRlSEg ID NO: 18，LCDR2SEQ ID NO: 19，LCDR3SEQ ID NO: 20 (本文中稱為“LCDR的 PET1074B9 組”)；LCDRlSEg ID NO: 28、LCDR2SEQ ID NO: 29、LCDR3SEQ ID NO: 30 (本文中稱為“LCDR的 PET1287A10 組”)。
HCDR的PET1073G12組以及LCDRS的PET1073G12組在本文中稱為CDR的PET1073G12組。HCDR的PET1074B9組以及LCDRS的PET1074B9組在本文中稱為CDR的PET1074B9組。HCDR的PET1287A10組以及LCDRS的PET1287A10組在本文中稱為CDR的PET1287A10組。包含如本文中所公開的HCDR組的VH域可以另外包含含有如本文中所公開的IXDR組的VL域。優(yōu)選地，這樣的VH域與這樣的VL域配對，且最優(yōu)選地，VH和VL域配對與本文中所列的的克隆中的相同?？筎GF- β抗體的VH域可以含有HCDR HCDRUHCDR2和HCDR3的組，其中該組HCDR對應(yīng)于具有一處或兩處氨基酸取代的PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或ΡΕΤ1287Α10的組?？筎GF- β抗體可以包含這樣的VL域，其含有IXDR IXDRl、IXDR2和IXDR3的組，其中該組CDR對應(yīng)于具有一處或兩處氨基酸取代的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10的CDR組。遵循計(jì)算化學(xué)在將多變量數(shù)據(jù)分析技術(shù)應(yīng)用于結(jié)構(gòu)/特性-活性關(guān)系中的引導(dǎo)(Wold,等 Multivariate data analysis in chemistry.Chemometrics—Mathematicsand Statistics in Chemistry(B.Kowalski 編),D.Reidel Publishing Company,Dordrecht, Holland, 1984(ISBN90-277-1846-6)),可以使用公知的數(shù)學(xué)技術(shù)諸如統(tǒng)計(jì)學(xué)回歸、模式識別和分類來衍生抗體的定量活性-特性關(guān)系(Norman等Applied RegressionAnalysis.Wiley-1nterscience;第 3 版(1998 年 4 月)ISBN:0471170828;AbrahamKandel, Eric Backer.Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis.PrenticeHall PTR; (1995 年 5 月 11 日)，ISBN:0133418847;Wojtek Krzanowsk1.Principlesof Multivariate Analysis:A User’s Perspective(Oxford Statistical ScienceSeries,No22 (Paper)).0xford University Press; (December2000), ISBN:0198507089;Ian H.Witten, Eibe Frank.Data Mining:Practical Machine Learning Toolsand Techniques with Java Implementations.Morgan Kaufmann; (1999 年 10 月11 日)，ISBN:1558605525;David G.T.Denison (編)，Christopher C.Holmes, BaniK.Mallick, Adrian F.M.Smith.Bayesian Methods for Nonlinear Classification andRegression(Wiley Se ries in Probability and Statistics).John ffiley&Sons;(2002年 7 月)，ISBN:0471490369;Arup K.Ghose, Vellarkad N.Viswanadhan.CombinatorialLibrary Design and Evaluation Principles, Software, Tools, and Applications inDrug Discovery.1SBN: 0-8247-0487-8)?？贵w的特性可以源自抗體序列的經(jīng)驗(yàn)和理論模型、功能和三維結(jié)構(gòu)(例如，分析可能的接觸殘基或計(jì)算的物理化學(xué)特性)，并且可以單一和組合考慮這些特性。對已知原子結(jié)構(gòu)的抗體的分析已經(jīng)闡明了抗體結(jié)合位點(diǎn)的序列和三維結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系(Chothia C.等 Journal Molecular Biology (1992) 227，799-817 ;Al_Lazikani 等Journal Molecular Biology (1997) 273 (4)，927-948)。這些關(guān)系暗示，除了 VH 域中的第三個(gè)區(qū)域(環(huán))外，結(jié)合位點(diǎn)環(huán)具有少數(shù)主鏈構(gòu)象:規(guī)范結(jié)構(gòu)之一。已經(jīng)顯示了特定環(huán)中形成的規(guī)范結(jié)構(gòu)由其大小及環(huán)和框架區(qū)兩者中關(guān)鍵位點(diǎn)處某些殘基的存在決定(Chothia等及Al-Lazikani 等,加上文)。可以使用序列-結(jié)構(gòu)關(guān)系來預(yù)測序列已知，但三維結(jié)構(gòu)未知的抗體中的那些殘基，它們在維持其⑶R環(huán)的三維結(jié)構(gòu)中及因此在維持結(jié)合特異性中是重要的。這些預(yù)測可以通過比較所述預(yù)測與來自引導(dǎo)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的輸出來確認(rèn)。在一種結(jié)構(gòu)方法中，可以使用任何免費(fèi)可用的或商業(yè)包，諸如WAM(ffhitelegg, N.R.u.and Rees, A.R(2000)Prot.Eng.，12，815-824)對抗體分子創(chuàng)建理論模型(Chothia 等 Science, 223，755-758 (1986))。然后，可以使用蛋白質(zhì)可視化和分析軟件包，諸如Insight II (Accelerys, Inc.)或DeepView (Guex, N.and Peitsch, M.C.Electrophoresis (1997) 18，2714-2723)來評估 CDR 和 FR中每個(gè)位置處的可能取代。然后，可以使用此信息來進(jìn)行可能對活性具有最小或有益影響的取代。在CDR、抗體VH或VL域和特定抗體的氨基酸序列內(nèi)進(jìn)行取代需要的技術(shù)一般是本領(lǐng)域中可得的?？梢陨勺凅w序列，其具有可以預(yù)測為對活性具有或沒有最小或有益影響的取代。因此，抗TGF-β抗體可以包含限定的CDR組，特別是PET1073G12、PET1074B9和PET1287A10的CDR組，和在CDR組內(nèi)具有一處或兩處取代的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10的⑶R組。相關(guān)的⑶R組在抗體框架區(qū)或其它蛋白質(zhì)支架，例如纖連蛋白或細(xì)胞色素B內(nèi)提供。優(yōu)選地，采用抗體框架區(qū)?？筎GF-β抗體的重鏈可以利用AVhI家族基因。在多個(gè)實(shí)施方案中，與人VhI家族基因的種系氨基酸序列相比，重鏈框架氨基酸序列含有1-12，優(yōu)選地3-12，且更優(yōu)選地，3-8處氨基酸差異。在一些實(shí)施方案中，重鏈框架序列是種系序列。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈的抗體框架區(qū)可以是來自VhI家族的人DP-10 (Vh1-69)或人DP-88 (VHl_e)。利用人DP-10基因的一些實(shí)施方案在殘基27、78和94處具有非種系氨基酸。在一些實(shí)施方案中，殘基27是酪氨酸，殘基78是蘇氨酸，而殘基94是絲氨酸或亮氨酸。在一些實(shí)施方案中，輕鏈利用與種系氨基酸序列相比具有1-5、1-4、更優(yōu)選地，1-3處氨基酸差異的人V K 3家族基因。在一些實(shí)施方案中，輕鏈框架序列是種系人VK3家族基因序列。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，輕鏈框架區(qū)可以是人DPK-22 (A27)。在一些此類實(shí)施方案中，殘基2是非種系氨基酸。在一些實(shí)施方案中，殘基2是蘇氨酸。在一個(gè)高度優(yōu)選的實(shí)施方案中，VH域具有SEQ ID NO: 2 (這稱作“PET1073G12VH域”)或SEQ ID N0:12(這稱作“PET1074B9VH域”)，或SEQ ID NO: 22 (這稱作“PET1287A10VH域”)的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，VL域包含SEQ ID NO: 7 (這稱作“PET1073G12VL域”)或SEQID N0:17(這稱作“PET1074B9VL域”)、或SEQ ID NO: 27 (這稱作 “PET1287A10VL 域”)的氨基酸序列。一個(gè)實(shí)例抗TGF-β抗體由PET1073G12VH域SEQ ID NO:2和PET1073G12VL域 SEQ ID NO: 7 構(gòu)成。另一個(gè)例子由 PET1074B9VH 域 SEQ ID NO: 12 和 PET1074B9VL 域 SEQID NO: 17 構(gòu)成。另一個(gè)例子由 PET1287A10VH 域 SEQ ID NO: 22 和 PET1287A10VL 域 SEQID NO:27構(gòu)成。這些或任何其它抗體TGF-β結(jié)合位點(diǎn)可以包含在任何期望的抗體分子形式(例如scFv、Fab、IgGU IgG4、dAb等)內(nèi)，如本文中別處進(jìn)一步討論的。另一個(gè)例子是IgG4抗體分子，其包含PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域，優(yōu)選地還包含相應(yīng)的PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10VL 域。
例子還有包含PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10VH 域、和 / 或 PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VL域的其它IgG4或其它抗體分子，以及在抗體VH域內(nèi)包含HCDR 的 PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10 組、和 / 或在抗體 VL 域內(nèi)包含 LCDR 的PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10 組的其它抗體分子。
抗TGF-β抗體可以是結(jié)合人TGF-β的所有三種同等型的抗體。此類抗TGF-β抗體可以包含PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或PET1287A10VH和/或VL域或那些域的抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施方案中，來自上述項(xiàng)之一的VH域與來自上述項(xiàng)之一的VL域配對以提供抗原結(jié)合位點(diǎn)。例如，PET1073G12VH 域(SEQ ID NO:2)可以與 PET1073G12VL 域(SEQ IDNO: 7)配對，使得形成包含PET1073G12VH和VL域兩者的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PET1074B9VH 域(SEQ ID NO: 12)與 PET1074B9VL 域(SEQ ID NO: 17)配對，使得形成包含PET1074B9VH和VL域兩者的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PET1287A10VH域(SEQ ID NO: 22)與 PET1287A10VL 域(SEQ ID NO: 27)配對，使得形成包含 PET1287A10VH和VL域兩者的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在其它實(shí)施方案中，PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或PET1287A10VH域與不同于相應(yīng)的PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或PET1287A10VL的VL域配對。類似地，本文中所公開的任何HCDR組可以在這樣的VH域中提供，所述VH域單獨(dú)或與VL域組合在作為特異性抗體使用。VH域可以具有如本文中所公開的HCDR組，并且若這樣的VH域與VL域配對，則給該VL域可具有本文中公開的IXDR組。HCDR組和IXDR組的配對可以如本文中對PET1073G12、PET1074B9和PET1287A10抗體公開的那樣。VH和/或VL域的框架區(qū)可以是種系框架。重鏈域的框架區(qū)可以選自VH-1家族，并且優(yōu)選的Vih框架是DP-10或DP-88框架。輕鏈的框架區(qū)可以選自Vk 3家族，并且優(yōu)選的此類框架是DPK-22。一個(gè)·或多個(gè)⑶R可以取自本文中公開其序列的VH或VL域，并摻入合適的框架中。這在本文中進(jìn)一步討論。對使用本文中所描述的方法獲得的抗體的其它CDR和CDR組而言同樣適用?？贵wVH域、抗體VL域、HCDR組、LCDR組、CDR組、一個(gè)或多個(gè)HCDR，例如HCDR3，和/或一個(gè)或多個(gè)LCR，例如IXDR3，可以在TGF-β拮抗劑中采用?？梢砸揽啃蛄懈淖兓蛲蛔兗昂Y選方法獲得VH和VL域和CDR的變體，包括氨基酸序列在本文中列出且可以在針對TGF-β的特異性抗體中采用者。可以在本文中所公開的方法中采用本文中明確公開其序列的任何VH和VL域的可變域氨基酸序列變體。特定的變體可以包括一處或多處氨基酸序列變化(添加、缺失、取代和/或插入氨基酸殘基)，可以是小于約20處變化、小于約15處變化、小于約10處變化或小于約5、4、3、2或I處變化?？梢詫σ粋€(gè)或多個(gè)框架區(qū)和/或一個(gè)或多個(gè)⑶R做出改變。與任何如下所述的特異性抗體競爭或交叉競爭對抗原的結(jié)合的人的、人源化的、嵌合的或合成的特異性抗體可以在本文中所公開的方法中使用，所述特異性抗體既結(jié)合抗原，又包含特異性抗體抗原結(jié)合域、本文中公開的VH和/或VL域、本文中公開的CDR或HCDR3組、或任何這些的變體。例如，使用ELISA和/或通過將特定報(bào)告分子加標(biāo)簽于一種抗體(其可以在存在其它不加標(biāo)簽的抗體的情況下檢出)，可以在體外容易地測定抗體間的競爭，以實(shí)現(xiàn)結(jié)合相同表位或重疊表位的特定抗體的鑒定。可以通過運(yùn)行反向測定法來容易地測定抗體間的交叉競爭，例如，通過反轉(zhuǎn)加標(biāo)簽的和不加標(biāo)簽的抗體以鑒定在兩個(gè)方向中都阻斷結(jié)合的配對?？梢允褂萌缦碌目贵w來拮抗TGF-β，所述抗體包含與PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或ΡΕΤ1287Α10 抗體分子，特別是 PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9 或 PET1287A10scFv 和 / 或 IgG4 競爭或交叉競爭的抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在多個(gè)實(shí)施方案中，抗體是人的、人源化的、嵌合的或合成的抗體。在別的方面，可以使用如下的抗體，其包含與本文中所描述的抗原結(jié)合位點(diǎn)競爭或交叉競爭對TGF-β的結(jié)合的人的、人源化的、嵌合的或合成的抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中人的、人源化的、嵌合的或合成的抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)由VH域和VL域構(gòu)成，且其中VH和VL域包含如本文中所公開的⑶R組。鑒于本文中所公開的信息，本領(lǐng)域中有多種方法可以用于生成針對TGF-β，并且可以與 PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9 或 ΡΕΤ1287Α10 抗體分子、具有 CDR 的 PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9 或 ΡΕΤ1287Α10 組的抗體分子、具有 PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9 或 PET1287ΑIOHCDR組的抗體分子、或具有PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或PET1287A10LCDR組的抗體分子競爭或交叉競爭的人的、人源化的、嵌合的或合成的抗體，以用作TGF-β拮抗劑。可以通過如下方法獲得一種或多種能夠結(jié)合TGF-β UTGF-β 2和TGF-β 3的特異性抗體，所述方法包括使抗體文庫和TGF- β接觸，并選擇文庫中能夠結(jié)合所有所述TGF- β的一種或多種特異性抗體。文庫可以在噬菌體顆粒的表面上展示，每個(gè)顆粒含有編碼在其表面上展示的抗體VH可變域，和任選地還有展示的VL域(若存在的話)的核酸。在選擇能夠結(jié)合抗原并在噬菌體顆粒上展示的特異性抗體后，可以從展示所述選擇的特異性抗體的噬菌體顆粒取得核酸。這樣的核酸可以隨后用來生成特異性抗體或抗體VH可變域(和任選地抗體VL可變域):通過表達(dá)從展示所述選擇的特異性抗體的噬菌體顆粒的取得核酸序列的核酸。具有所述選擇的特異性抗體的抗體VH域氨基酸序列的抗體VH域可以以分離的形式提供，包含這樣的VH域的特異性抗體也可以?？梢赃M(jìn)一步測試結(jié)合TGF- β的所有三種同等型的能力，還有與PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10 (例如，以scFv形式和/或IgG形式，例如IgG4)競爭或交叉競爭對TGF-β的所有三種人同等型的結(jié)合的能力。作為TGF-β拮抗劑使用的抗體可以以PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10抗體分子，例如scFv,或優(yōu)選地IgG4的親和力，或者以大于上述分子之一的親和力結(jié)合 TGF-β 1、TGF-β 2 和 / 或 TGF-β 3。有用的抗體可以以 PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9 或ΡΕΤ1287Α10 抗體分子，例如 scFv，或優(yōu)選地 PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10IgG4 的效力，或者以大于上述分子之一的效力中和TGF- β 1、TGF- β 2和/或TGF- β 3。作為TGF-β拮抗劑使用的抗體可以以PET1073G12、ΡΕΤ1074Β9或ΡΕΤ1287Α10抗體分子，例如，scFv，或優(yōu)選地IgG4的效力，或者以大于上述分子之一的效力中和天然存在的TGF-β?？梢栽谶m當(dāng)?shù)臈l件下比較不同特異性抗體的結(jié)合親和力和中和效力。作為TGF-β拮抗劑使用的抗體包括這的人的、人源化的、嵌合的或合成的抗體，它們可以以等于或大于由PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域和相應(yīng)的PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VL域形成的TGF-β抗原結(jié)合位點(diǎn)的效力的效力中和天然存在的TGF-β。除了抗體序列外，作為TGF-β拮抗劑使用的抗體可以還包含其它氨基酸，例如形成肽或多肽，諸如折疊域，或賦予分子以除了結(jié)合抗原的能力外的另一種功能性特征。特異性抗體可以攜帶可檢測標(biāo)記物，或者可以與毒素或靶向模塊或酶(例如，經(jīng)由肽鍵或接頭)
三雙口 ο抗原結(jié)合抗體包含抗原結(jié)合位點(diǎn)?？乖Y(jié)合位點(diǎn)也可以依靠CDR在非抗體蛋白質(zhì)支架，諸如纖連蛋白或細(xì)胞色素B,等等上的排列提供。Koide等，(1998) Journal ofMolecular Biology, 284:1141-1151;Nygren 等(1997)Current Opinion in StructuralBiology,第7卷:463-469)。用于工程化改造蛋白質(zhì)中的新穎結(jié)合位點(diǎn)的支架于Nygren等，見上文中已有更為詳細(xì)的綜述?？贵w模擬物的蛋白質(zhì)支架披露于W000/34784，其描述了包含具有至少一個(gè)隨機(jī)化的環(huán)的纖連蛋白III型域的蛋白質(zhì)(抗體模擬物)。對于用來嫁接一個(gè)或多個(gè)CDR，例如HCDR組的合適支架，可以由免疫球蛋白基因超家族的任何域成員來提供。支架可以是人或非人蛋白質(zhì)。非抗體蛋白質(zhì)支架的優(yōu)點(diǎn)在于它可以提供保守框架區(qū)中比至少一些抗體分子更小和/或更易制造的抗原結(jié)合位點(diǎn)?？贵w的小尺寸可以賦予有用的生理學(xué)特性，諸如進(jìn)入細(xì)胞、深度滲入組織中或觸及其它結(jié)構(gòu)內(nèi)的靶物，或者在靶抗原的蛋白質(zhì)空穴內(nèi)結(jié)合的能力。典型的是具有穩(wěn)定的主鏈和一個(gè)或多個(gè)可變環(huán)的蛋白質(zhì)，其中將一個(gè)或多個(gè)環(huán)的氨基酸序列特定或隨機(jī)突變以創(chuàng)建具有結(jié)合靶抗原的特異性的抗原結(jié)合位點(diǎn)。此類蛋白質(zhì)包含來自金黃色葡萄球菌(S.aureus)的蛋白A、運(yùn)鐵蛋白、四連蛋白、纖連蛋白(例如，第10纖連蛋白III型域)和脂籠蛋白的IgG結(jié)合域。其它方法包括合成的“Microbodies”(Selecore GmbH)，其基于環(huán)肽(cyclotide),即具有分子內(nèi)二硫鍵的小蛋白質(zhì)。除了抗體序列和/或抗原結(jié)合位點(diǎn)外，抗體還可以包含其它氨基酸， 例如形成肽或多肽，諸如折疊域，或賦予分子以在結(jié)合抗原的能力外的另一種功能性特征?？贵w可以攜帶可檢測標(biāo)記物，或者可以與毒素或靶向模塊或酶(例如，經(jīng)由肽鍵或接頭)綴合。例如，抗體可以包含催化位點(diǎn)(例如，在酶域中)及抗原結(jié)合位點(diǎn)，其中抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合抗原，由此將催化位點(diǎn)靶向至抗原。催化位點(diǎn)可以抑制抗原的生物學(xué)功能，例如通過切割。雖然如指出的,支架,諸如纖連蛋白或細(xì)胞色素B,可以攜帶⑶R(Haan和Maggos,2004BioCentury, 12(5):A1_A6; Koide 等，見上文；Nygren 等，見上文)，但是攜帶⑶R 或CDR組的結(jié)構(gòu)一般會屬于抗體重鏈或輕鏈序列或其實(shí)質(zhì)性部分，其中所述CDR或CDR組所處的位置與由重排的免疫球蛋白基因編碼的天然存在的VH和VL抗體可變域的CDR或CDR組對應(yīng)?？梢酝ㄟ^參考Kabat等，1987及其更新,現(xiàn)在在互聯(lián)網(wǎng)上可用(URL:1mmun0.bme.nwu.edu或者使用任何搜索引擎尋找“Kabat”)確定免疫球蛋白可變域的結(jié)構(gòu)和位置。有可能采取單克隆和其它抗體，并使用屬于重組DNA技術(shù)的技術(shù)，來生成保留初始抗體的特異性的其它抗體或嵌合分子。此類技術(shù)可涉及連接編碼免疫球蛋白可變區(qū)的DNA與恒定區(qū)，或?qū)⒖贵w的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)引入不同免疫球蛋白的恒定區(qū)加框架區(qū)中。參見例如EP-A-184187、GB2188638A或EP-A-239400，及許多后續(xù)文獻(xiàn)。生成抗體的雜交瘤或其它細(xì)胞可以進(jìn)行遺傳突變或其它變化，這些變化可能改變也可能不改變生成的抗體的結(jié)合特異性。本領(lǐng)域中可用的抗體工程化的其它技術(shù)已經(jīng)使得分離人的和人源化的抗體成為可能。例如，可以生成人雜交瘤，如由Kontermann等(Kontermann R和DubelStefan;Antibody Engineering, Springer-Verlag New York, LLC;2001，ISBN:3540413545)描述的。另一種確立的用于生成抗體的技術(shù)——噬菌體展示已經(jīng)詳細(xì)記載于許多出版物，諸如Kontermann等，見上文,及W092/01047 (下文進(jìn)一步討論)?？梢允褂眠@樣的轉(zhuǎn)基因小鼠來分離針對人抗原的人抗體，在所述轉(zhuǎn)基因小鼠中，使小鼠抗體基因失活并且在功能上用人抗體基因替換，同時(shí)保持小鼠免疫系統(tǒng)的其它組分完整(Mendez等，1997)。也可以在其它轉(zhuǎn)基因動物，諸如山羊、牛、綿羊、兔等中生成人抗體(單克隆或多克隆)?？梢允褂煤铣傻目贵w分子作為TGF-β拮抗劑，所述合成的抗體分子是通過在合適的表達(dá)載體內(nèi)合成并裝配的寡核苷酸生成的基因表達(dá)而產(chǎn)生的，例如，如由Knappik等，見上文或 Krebs 等，Journal of Immunological Methods254:67-84 (2001)描述的。完整抗體的片段可以實(shí)施結(jié)合抗原的功能。結(jié)合片段的例子是(i)Fab片段，其由VL、CL、VH和CHl域組成；(ii)Fd片段，其由VH和CHl域組成；(iii)Fv片段，其由單一抗體的 VL 和 VH 域組成；(iv) dAb 片段(Ward, E.S.等，Nature341, 544-546 (1989)，McCafferty 等(1990) Nature, 348，552-554)，其由 VH 域構(gòu)成；(V)分離的 CDR 區(qū)；(vi)F(ab’)2 片段，即一種包含兩個(gè)連接的Fab片段的二價(jià)片段；(vii)單鏈Fv分子(scFv)，其中VH域和VL域通過容許兩個(gè)域聯(lián)合以形成抗原結(jié)合位點(diǎn)的肽接頭連接(Bird等，Science, 242，423-426，1988;Huston 等,Proc.Natl.Acad.Sci USA85, 5879-5883; 1998; (viii)雙特異性單鏈Fv 二聚體(PCT/US92/09665);及(ix) “雙抗體”，即通過基因融合構(gòu)建的多價(jià)或多特異性片段(W0/13804) ;F.Holliger 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA906444-6448, 1993)。Fv、scFv或雙抗體分子可以通過摻入連接VH和VL域的二硫橋來穩(wěn)定化(Y.Reiter等，NatureBiotech, 14，1239-1245，1996)。也可以生成包含與CH3域連接的scFv的微型抗體(minibody)(S.Hu 等，Cancer Res.，56，3055-3061，1996)。dAb (域抗體)是抗體的一種小的單體抗原結(jié)合片段，即抗體重鏈或輕鏈的可變區(qū)(Holt等，2003)。VH dab在羊馬它(camelid)(例如,駱騎、美洲馬它(llama))中天然存在,可以通過用靶抗原免疫羊駝，分離抗原特異性B細(xì)胞，并從個(gè)別B細(xì)胞直接克隆dAb基因來生成。dAb也可在細(xì)胞培養(yǎng)物中生成。其較小的尺寸、良好的溶解度和溫度穩(wěn)定性使得它們在生理學(xué)上特別有用，且適合于選擇和親和力成熟?？贵w可以是如下的dAb，其包含基本上如本文中所列的VH或VL域，或包含基本上如本文中所列的CDR組的VH或VL域。在要使用雙特異性抗體的情況下，它們可以是常規(guī)的雙特異性抗體，其可以以多種方式制造(HoiIiger, P.和 Winter G.Current Opinion Biotechnol.4，446-449 (1993))，例如，化學(xué)或從雜合雜交瘤 制備，或者可以是上文提及的任何雙特異性抗體片段。雙特異性抗體的例子包括BiTE 技術(shù)的那些抗體，其中可以使用具有不同特異性的兩種抗體的結(jié)合域，并藉由短的柔性肽將它們直接連接。這在短的單一多肽鏈上組合兩種抗體?？梢詢H使用可變域在沒有Fe區(qū)的情況下構(gòu)建雙抗體和scFv，這可能減少抗獨(dú)特型反應(yīng)的影響。與雙特異性全抗體形成對比，雙特異性雙抗體也可以是特別有用的，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀讟?gòu)建并在大腸桿菌(E.coli)中表達(dá)?？梢允褂檬删w展示(W094/13804)從文庫容易地選擇合適結(jié)合特異性的雙抗體(和許多其它多肽，諸如抗體片段)。若要使雙抗體的一條臂保持恒定，例如具有針對TGF-β的特異性，則可以生成文庫，其中另一條臂有所變化，并且選擇合適多特異性的抗體?？梢酝ㄟ^隆突-進(jìn)入-空穴工程化生成雙特異性全抗體(C.Ε.B.Ridgeway 等,Protein Eng., 9, 616-621，1996)?？贵w可以是糖基化的，糖基化或者是天然實(shí)現(xiàn)的，或是通過各種真核細(xì)胞(例如，CHO或NS0(ECACC85110503)細(xì)胞)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的，或者抗體可以是未糖基化的(例如，若通過在原核細(xì)胞中表達(dá)來生成)。例如，也可以通過抑制巖藻糖基化有意改變糖基化，提高所得抗體的ADCC活性。因而，可以表達(dá)抗體，使得使巖藻糖基化最小化或消除巖藻糖基化。在一些實(shí)施方案中，CDR或VH或VL域與本文中列出其序列的規(guī)定區(qū)域是相同的或高度相似的。可以對⑶R和/或VH或VL域做出I至5，優(yōu)選地I至4或I或2，或3或4處氨基酸取代。與本文中給出其序列的那些高度相似的VH或VL域及⑶R和⑶R組由各方面涵蓋，具有基本上如本文中所列的序列的那些亦然。一般地，用于攜帶CDR或CDR組的結(jié)構(gòu)會屬于抗體重鏈或輕鏈序列或其實(shí)質(zhì)性部分，其中CDR或CDR組位于與由重排的免疫球蛋白基因編碼的天然存在的VH和VL抗體可變域的⑶R或⑶R組對應(yīng)的位置?？梢酝ㄟ^參考Kabat, Ε.A.等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest.第 4 版.US Department of Health and Human Services.1987及其更新，現(xiàn)在在互聯(lián)網(wǎng)上可用(URL:1mmun0.bme.nwu.edu或者使用任何搜索引擎尋找“Kabat”)確定免疫球蛋白可變域的結(jié)構(gòu)和位置。⑶R依照Kabat等限定。⑶R也可以為其它支架，諸如纖連蛋白或細(xì)胞色素B所攜帶。優(yōu)選地，基本上如本文中所列的CDR氨基酸序列被攜帶在人可變域或其實(shí)質(zhì)性部分中作為CDR。優(yōu)選的實(shí)施方案是基本上如本文中所列的HCDR3序列，并且優(yōu)選的是，它們中的每一個(gè)被攜帶在人重鏈可變域或其實(shí)質(zhì)性部分中作為HCDR3。采用的可變域可以獲自或源自任何種系或重排的人可變域，或者可以是基于已知的人可變域的共有或?qū)嶋H序列的合成的可變域。可以使用重組DNA技術(shù)來將CDR序列(例如，⑶R3)引入缺乏⑶R(例如，⑶R3)的可變域的全集中。在本文中已經(jīng)鑒定出優(yōu)選的種系框架。Marks 等(Bio/Technology, 1992，10:779-783)描述了生成抗體可變域全集的方法，其中將針對可變域區(qū)域的5’端處或附近的共有引物，與針對人VH基因的第三框架區(qū)的共有引物組合使用，來提供缺乏⑶R2的Vk可變域的全集。Marks等進(jìn)一步描述了此全集如何可以與特定抗體的⑶R2組合。使用類似的技術(shù)，可以用缺乏⑶R3的VH或VL域的全集改組CDR3衍生的序 列，并組合改組的完整的VH或VL域與關(guān)聯(lián)的VL或VH域以提供抗體。然后，可以在合適的宿主系統(tǒng)，諸如W092/01047或任何后續(xù)的若干文獻(xiàn)，包括Kay，B.K., Winter, J., and McCafferty, J.(1996)Phage Display of Peptides and Proteins:ALaboratory Manual, San Diego:Academic Press的卩遼菌體展不系統(tǒng)中展不全集,使得可以選擇合適的抗體。全集可以由IO4以上的個(gè)體成員，例如，IO6至IO8或101°個(gè)成員組成。其它合適的宿主系統(tǒng)包括酵母展示、細(xì)菌展示、T7展示、核糖體展示、共價(jià)展示,等等。Stemmer (Nature, 1994，370:389-391)也披露了類似的改組或組合技術(shù)，該技術(shù)是就β_內(nèi)酰胺酶基因來描述的，但是提到該方法可以用于抗體生成。另一種備選是生成攜帶如下⑶R的新穎的VH或VL區(qū)——使用一種或多種選擇的VH和/或VL基因進(jìn)行隨機(jī)誘變，以在整個(gè)可變域內(nèi)產(chǎn)生突變，來衍生這樣的VH或VL區(qū)。此類技術(shù)由 Gram 等 Proc.Natl.Acad.Sc1.，USA, 89:3576-3580)描述，其使用易錯 PCR。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以在HCDR和/或LCDR組內(nèi)做出一處或兩處氨基酸取代?？梢允褂玫牧硪环N方法是對VH或VL基因的⑶R區(qū)的定向誘變。此類技術(shù)由Barbas等，(1994，Proc.Natl.Acad.Sc1., USA, 91:3809-3813)和 Schier 等 J.Mol.Biol.263:551-567)披露。鑒于本文中提供的公開內(nèi)容，技術(shù)人員會能夠借助本領(lǐng)域中常規(guī)的方法，運(yùn)用此類技術(shù)來獲得其它抗體?？梢詫ET1073G12、PET1074B9或PET1287A10VH域進(jìn)行突變以提供一種或多種VH域氨基酸序列變體，這些變體可以與一種或多種VL域組合。VH域可以具有種系序列，在優(yōu)選的實(shí)施方案中是DP-10或DP-88。VL域序列可以具有種系序列，在優(yōu)選的實(shí)施方案中是DPK-22。可以采用PET1073G12、PET1074B9或PET1287A10HCDR1、HCDR2 和 HCDR3，或HCDR 的 PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10 組中的一項(xiàng)或多項(xiàng)，和 / 或 PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10LCDR1、LCDR2 和 LCDR3，或 LCDR的 PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10 組中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。免疫球蛋白可變域的實(shí)質(zhì)性部分會至少包含三個(gè)⑶R區(qū)，以及其居間的框架區(qū)。優(yōu)選地，所述部分還會包含第一和第四框架區(qū)之任一或兩者的至少約50%，該50%是第一框架區(qū)的C端50%和第四框架區(qū)的N端50%?？勺冇虻膶?shí)質(zhì)性部分的N端或C端末端的其它殘基可以是那些通常與天然存在的可變域區(qū)無關(guān)的殘基。例如，通過重組DNA技術(shù)進(jìn)行的抗體構(gòu)建可能導(dǎo)致由接頭編碼的N或C端殘基的引入(所述接頭是為了便于克隆或其它操作步驟而引入的)。其它操作步驟包括引入接頭以連接可變域與其它蛋白質(zhì)序列，包括免疫球蛋白重鏈、其它可變域(例如，在雙抗體的生成中)或蛋白質(zhì)標(biāo)記物。包含成對的VH和VL域的抗體是優(yōu)選的，也可以使用基于VH或VL域序列的單一結(jié)合域。已知單一免疫球蛋白域，特別是VH域，能夠以特異性方式結(jié)合靶抗原。在任一單一特異性結(jié)合域的情況下，可以使用這些域來篩選這樣的互補(bǔ)域:它們能夠形成可結(jié)合人TGF-β的三種同等型的雙域抗體。這可以使用如W092/01047中披露的所謂的分層雙重組合方法通過噬菌體展示篩選方法來實(shí)現(xiàn)，其中使用含有H或L鏈克隆的個(gè)別菌落來感染編碼另一條鏈(L或H)的克隆的整個(gè)文庫，并依照噬菌體展示技術(shù)，諸如那些在所述參考文獻(xiàn)中描述的技術(shù)選擇所得的雙鏈抗體。抗TGF-β抗體可以進(jìn)一步包含抗體恒定區(qū)或其部分。例如，VL域可以在其C端末端附著于抗體輕鏈恒定域，包括人Ck或匕鏈，優(yōu)選Ck鏈。類似地，基于VH域的抗體可以在其C端末端附著于源自任何抗體同等型，例如IgG、IgA、IgE和IgM以及任何同等型亞類，特別是IgGl和IgG4的免疫球蛋白重鏈的整體或部分(例如CHl域)。IgG4是優(yōu)選的。IgG4對于一些應(yīng)用是優(yōu) 選的，因?yàn)樗唤Y(jié)合補(bǔ)體，效應(yīng)器功能降低。在期望效應(yīng)器功能的情況下，IgGl是優(yōu)選的。也可以通過本領(lǐng)域中已知的方法操作抗體的糖基化狀態(tài)(諸如通過降低巖藻糖含量)來提高效應(yīng)器功能。重鏈可以具有或沒有C端賴氨酸殘基。在一些實(shí)施方案中，也可以使用具有這些特性并且可穩(wěn)定化可變區(qū)的任何合成的或其它恒定區(qū)變體?？贵w或其抗原結(jié)合片段的不均一制備物可能是有用的。例如，此類制備物可能是具有全長重鏈的抗體和具有缺乏C端賴氨酸的重鏈的抗體、具有各種程度的糖基化的抗體、具有衍生化的氨基酸(諸如N端谷氨酸環(huán)化而形成的焦谷氨酸殘基)的抗體、和/或具有重鏈和或輕鏈的脫酰胺化形式的抗體的混合物。可以對有此需要的個(gè)體，優(yōu)選地以“治療有效量”(這足以顯示對患者的益處)施用包含TGF-β抗體的組合物。這樣的益處可以是至少改善特定疾病或病癥的至少一種癥狀。施用的實(shí)際量，和施用的速率和時(shí)間過程會取決于所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性。治療的規(guī)則，例如關(guān)于劑量的決定等可以基于臨床前和臨床研究(其設(shè)計(jì)完全在本領(lǐng)域技術(shù)水平內(nèi))確定?？贵w可以通過注射(例如，皮下、靜脈內(nèi)、腔內(nèi)(例如,在腫瘤切除后)、損傷內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌肉內(nèi))、通過吸入、或者表面(例如，眼內(nèi)、鼻內(nèi)、直腸、進(jìn)入傷口中、在皮膚上)、或口服施用。施用路徑可以根據(jù)產(chǎn)品的物理化學(xué)特征、根據(jù)疾病的特殊考慮、根據(jù)劑量或劑量間隔或者根據(jù)優(yōu)化效力或使副作用最小化的需要確定。設(shè)想抗TGF-β治療不需要限于健康護(hù)理專業(yè)人員的施用。因此，皮下注射(尤其是使用無針裝置)可能是合適的。確切的劑量會取決于許多因素，包括患者的狀況和醫(yī)療史、抗體(例如，全抗體、片段或雙抗體)的確切性質(zhì)、和對抗體附著的任何可檢測標(biāo)記物或其它分子的性質(zhì)。典型的抗體劑量會在100 μ g至Igm(對于系統(tǒng)應(yīng)用)，和I μ g至Img (對于表面應(yīng)用)的范圍內(nèi)。通常，抗體會是全抗體，優(yōu)選的是IgG4同等型。這是成年患者的單次治療的劑量，其可以針對兒童和嬰兒按比例調(diào)節(jié)，而且還針對其它抗體形式與分子量和活性成比例調(diào)節(jié)?？梢愿鶕?jù)臨床醫(yī)生的判斷每天、每周兩次、每周、每月或以其它時(shí)間間隔重復(fù)治療?？贵w通常會以藥物組合物的形式施用，所述藥物組合物在抗體外還可以包含至少一種組分。在活性劑外，在治療AMI的方法中使用的藥物組合物可以包含藥學(xué)可接受賦形齊U、載體、緩沖液、穩(wěn)定劑或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它材料。此類材料應(yīng)當(dāng)是無毒的，并且不應(yīng)干擾活性劑的效力。此類材料可以包括例如，生理學(xué)相容的任何溶劑、分散介質(zhì)、涂層材料、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等張和吸收延遲劑，等等。藥學(xué)可接受載體的一些例子是水、鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水、右旋糖、甘油、乙醇等等，以及其組合。在許多情況下，會優(yōu)選的是組合物中包含等張劑，例如，鹽、多元醇，諸如甘露醇，山梨糖醇、或氯化鈉。藥學(xué)可接受物質(zhì)的其它例子是濕潤劑或少量輔助物質(zhì)，諸如濕潤或乳化劑、防腐劑或緩沖劑，其延長抗體的保存期或效力。載體或其它材料的精確性質(zhì)會取決于施用路徑，其可以是口服、表面、通過吸入或通過注射，例如靜脈內(nèi)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過靜脈內(nèi)輸注或注射施用抗體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過肌肉內(nèi)或皮下注射施用抗體。供口服施用的藥物組合物可以為片劑、膠囊、粉末或液體形式，例如，其具有惰性稀釋劑或可吸收的可食用載體。片劑可以包含固體載體，諸如明膠或佐劑。一般地，液體藥物組合物包含液體載體，諸如水、石油、動物或植物油、礦物油或合成油?？梢园睇}水溶液、右旋糖或其它糖類溶液或甘油，諸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇?？贵w(及其它成分，若想要的話)也可以在硬或軟殼明膠膠囊中密封，壓縮成片劑，或者直接摻入受試者的飲食中。對于口服治療劑施用，活性成分可以與賦形劑一起摻入，并且以可攝取的片劑、含服片劑、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿劑、速溶片，等等的形式使用。為了通過不同于胃腸外的施用來施用化合物，可能有必要用某種材料包被化合物，或共施用化合物與某種材料以防止其失活。對于靜脈內(nèi)注射，或者受累位置處的注射，活性成分會為胃腸外可接受的水溶液形式，其是無熱原的，并且具有合適的PK、等張性和穩(wěn)定性。本領(lǐng)域相關(guān)技術(shù)人員完全能夠使用例如等張媒劑，諸如氯化鈉注射液、林格氏注射液、和/或乳酸鹽林格氏注射液來制備合適的溶液。根據(jù)需要，可以包含防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其它添加劑。根據(jù)要治療的狀況，組合物可以單獨(dú)或與其它治療組合同時(shí)或序貫施用?？贵w可以配制為液體、半固體或固體形式，諸如液體溶液(例如，可注射或可輸注溶液)、分散體或懸浮液、 片劑、丸劑、粉末、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選的形式取決于意圖的施用模式、治療應(yīng)用、分子的物理化學(xué)特性和遞送路徑。配制劑可以包含賦形劑，或賦形劑的組合，例如:糖、氨基酸和表面活性劑。液體配制劑可以包含較寬范圍的抗體濃度和pH。可以通過例如凍干、噴霧干燥、或者通過超臨界流體技術(shù)進(jìn)行干燥來生成固體配制劑。
治療性組合物在制造和貯存條件下通常必須是無菌且穩(wěn)定的。組合物可以配制為溶液、微乳、分散體、脂質(zhì)體、或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。如下制備無菌可注射溶液，即在根據(jù)需要含有上文所列舉的一種成分或成分組合的合適溶劑中摻入需要量的抗體，接著進(jìn)行過濾滅菌。一般而言，分散體通過將活性化合物摻入無菌媒劑中而制備，所述無菌媒劑含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來自那些上文所列舉的成分的所需其它成分。在供制備無菌可注射溶液用的無菌粉劑的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，其自先前經(jīng)過無菌過濾的溶液產(chǎn)生含有活性成分加任何別的所需成分的粉末?？梢岳缤ㄟ^使用涂層諸如卵磷脂、在分散體的情況下通過維持所要求的粒度、及通過使用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)娜芤毫鲃有浴？梢酝ㄟ^在組合物中包含延遲吸收的藥劑例如單硬脂酸鹽和明膠來引起可注射組合物的吸收延長。在某些實(shí)施方案中，抗體組合物的活性化合物可以與會保護(hù)該抗體免于快速釋放的載體一起制備，諸如受控釋放配制劑，包括植入物、經(jīng)皮貼片和微囊化投遞系統(tǒng)?？梢允褂蒙锟山到獾摹⑸锵嗳莸木酆衔?，諸如乙烯乙酸乙烯、聚(酸)酐、聚乙醇酸、膠原、多正酯(polyorthoester)、和聚乳酸。許多用于制備此類配制劑的方法是有專利的或者本領(lǐng)域技術(shù)人員一般已知的。參見例如 Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems(J.R.Robinson 編,Marcel Dekker, Inc., New York, 1978)。在多個(gè)實(shí)施方案中，其它治療方案可以與抗TGF-β抗體的施用組合。聯(lián)合施用包括使用不同配制劑或單一藥物配制劑的共施用，和以任意次序的順序施用，其中優(yōu)選地存在這樣的時(shí)期，該時(shí)期中兩種(或所有)活性劑同時(shí)發(fā)揮其生物學(xué)活性。為了預(yù)防或治療心肌梗 死的后果，TGF-β拮抗劑的合適劑量會取決于患者的狀況、梗死形成的嚴(yán)重性和過程、出于預(yù)防還是出于治療目的施用抗體、先前療法、患者的臨床史和對抗體的響應(yīng)、和主治內(nèi)科醫(yī)生的判斷?？梢栽谌毖录蟮贠天(例如，在約8、12或24小時(shí)內(nèi))、第I天、第2天、第3天、第4天、或第5天，優(yōu)選地，在第O天、第3天、或第5天開始一次性或在一系列治療里對患者施用拮抗劑。也就是說，在一些實(shí)施方案中，在急性心肌缺血發(fā)作約120小時(shí)、約96小時(shí)、約72小時(shí)、約48小時(shí)內(nèi)、在約24小時(shí)、約12小時(shí)內(nèi)或甚至在約8小時(shí)內(nèi)或更早開始TGF-β拮抗劑的施用。根據(jù)狀況的類型和嚴(yán)重性，約5mg/kg抗體是對患者施用的初始候選劑量,無論例如通過一次或多次分開的施用，還是通過MI后的連續(xù)輸注進(jìn)行。根據(jù)上文提及的因素，一種典型的每日劑量可以等于5mg/kg或更小。為了在幾天或更長里重復(fù)施用，根據(jù)狀況，維持治療，直到發(fā)生對疾病癥狀的期望阻抑?？贵w的優(yōu)選劑量會是5mg/kg或更小靜脈內(nèi)施用。如此,可以對患者施用I個(gè)或多個(gè)約5mg/kg或更小的劑量(或其任何組合)。然而，可能可以使用其它劑量方案。通過常規(guī)技術(shù)和測定法容易地監(jiān)測此療法的進(jìn)展?？筎GF-β抗體在與腎素-血管緊張肽-醛固酮系統(tǒng)拮抗劑組合時(shí)可用于治療AMI,腎素-血管緊張肽-醛固酮系統(tǒng)拮抗劑包括但不限于:腎素抑制劑、血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑、Ang II受體拮抗劑(又稱為“Ang II受體阻斷劑”)、和醛固酮拮抗劑?？筎GF-β抗體在與包括但不限于下組的β_腎上腺素能系統(tǒng)拮抗劑組合時(shí)也可用于治療AM1:阿普洛爾(alprenolol)、布新洛爾(bucindolol)、卡替洛爾(carteolol)、卡維地洛(carvedilol)、拉貝洛爾(Iabetalol)、納多洛爾(nadolol)、氧烯洛爾(oxprenolol)、噴布洛爾(penbutolol)、Π引哚洛爾(pindolol)、普萘洛爾(propranolol)、索他洛爾(sotalol)、噻嗎洛爾(timolol)、阿替洛爾(atenolol)、倍他洛爾(betaxolol)、比索洛爾(bisoprolol)、塞利洛爾(celiprolol)、艾司洛爾(esmolol)、美托洛爾(metoprolol)、和奈必洛爾(nebivolol)。此外，抗TGF-β抗體在與包括但不限于下組的脂質(zhì)管理劑(lipid management agent)組合時(shí)可用于治療AM1:由洛伐他汀(1vastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、氟伐他汀(fIuvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、瑞舒伐他汀(resuvastatin)組成的他汀類(statins)組、由考來烯胺(chlestyramine)、考來替泊(celestipol)、考來維侖(colesevalam)組成的膽汁酸螯合劑組、由吉非貝齊(gemfibrozil)、非諾貝特(fenofibrate)、氯貝丁酉旨(clofibrate)組成的纖維酸(fibric acid)組、包括煙酸和Niaspan的組、包括膽固醇降低劑依澤替米貝(ezetimibe)和依澤替米貝和辛伐他汀的組合的組。在另一個(gè)方面，抗TGF-β抗體在與包括但不限于下組的抗血小板劑/抗凝血藥組合時(shí)可用于治療AM1:阿司匹林(aspirin)、由氯卩比格雷(clopidogrel)、普拉格雷(prasugrel)、替卡格雷(ticagrelor)、噻氯匹定(ticlopidine)、和抗凝血藥華法林(warfarin)組成的ADP受體抑制劑組。治療中使用的抗體的治療性配制劑可以在可用于靜脈內(nèi)治療的容器中提供。也可以通過將具有期望純度的抗體與任選的生理學(xué)可接受載體、賦形劑、或穩(wěn)定劑(包括但不限于那些在 Remington’ s Pharmaceutical Sciences 第 16 版，Osol, Α.編(1980)中的)混合來制備配制劑，以凍干配制劑或水溶性形式貯存?？山邮艿妮d體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度對接受者是無毒的，而且包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽、和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烴基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA ;糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；金屬復(fù)合物；和/或非離子表面活性劑。

依據(jù)治療的具體適應(yīng)癥的需要，配制劑還可含有超過一種活性化合物。優(yōu)選地，具有互補(bǔ)活性的化合物彼此沒有不利影響。或者/另外，組合物可以進(jìn)一步包含細(xì)胞因子、生長抑制劑、抗激素劑、TGF-β靶向藥物、抗血管生成劑、和/或保心藥。此類分子以對于意圖的目的有效的量適當(dāng)?shù)亟M合存在。“細(xì)胞因子”是由一種細(xì)胞群釋放，作為細(xì)胞間介質(zhì)作用于另一細(xì)胞的蛋白質(zhì)的通稱。此類細(xì)胞因子的例子有淋巴因子、單核因子和傳統(tǒng)的多肽激素。細(xì)胞因子中包括生長激素，諸如人生長激素、N-甲硫氨酰人生長激素和牛生長激素；甲狀旁腺素；甲狀腺素；胰島素；胰島素原；松馳素；松馳素原；糖蛋白激素類，諸如促卵泡激素(FSH)、促甲狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH);肝生長因子；成纖維細(xì)胞生長因子；促乳素；胎盤催乳激素；腫瘤壞死因子-α和;穆勒氏(Mullerian)抑制性物質(zhì)；小鼠促性腺激素相關(guān)肽；抑制素；激活素；血管內(nèi)皮生長因子；整聯(lián)蛋白；血小板生成素(TPO);神經(jīng)生長因子，諸如NGF-β ;血小板生長因子；胰島素樣生長因子-1和-1I;促紅細(xì)胞生成素(EPO);骨誘導(dǎo)因子(osteoinductive factor);干擾素,諸如干擾素_ α、- β和-γ ;集落刺激因子(CSF),諸如巨噬細(xì)胞CSF(M-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-CSF(GM-CSF);和粒細(xì)胞-CSF(G-CSF);白介素(IL)，諸如 IL-UIL-1 α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-1UIL-12 ;腫瘤壞死因子，諸如TNF-α或TNF-β ;及其它多肽因子，包括LIF和kit配體(KL)。在用于本文時(shí)，術(shù)語細(xì)胞因子包括來自天然來源或來自重組細(xì)胞培養(yǎng)物的蛋白質(zhì)及天然序列細(xì)胞因子的生物學(xué)活性等效物?！氨Ｐ乃帯笔欠乐够蚪档团c對患者施用藥物，諸如抗TGF-β抗體有關(guān)的心肌功能障礙(即，心肌病和/或充血性心力衰竭)的化合物或組合物。例如，保心藥可以阻斷或降低自由基介導(dǎo)的心臟中毒效應(yīng)和/或預(yù)防或降低氧化應(yīng)激損傷?；钚猿煞诌€可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊中(例如分別是羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)、在膠狀藥物投遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠囊)、或在粗滴乳狀液中。這些技術(shù)
JfT- RemingtonJ s Pharmaceutical Sciencesl6th edition, Osol, A.編(1980)。可以制備持續(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子可以包括含有抗體的固體疏水性聚合物半透性基質(zhì)，該基質(zhì)為定型產(chǎn)品的形式，例如薄膜或微膠囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括但不限于聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯、L-谷氨酸和Y -乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物、及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。要用于體內(nèi)施用的配制劑必須是無菌的。這通過過濾流過無菌濾膜容易實(shí)現(xiàn)。
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可以提供含有如上文所描述的可用于治療MI的材料的制品，其一般含有容器和容器上或與容器聯(lián)合的標(biāo)簽或包裝插頁。“包裝插頁”包含治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝中通常包含的用法說明書，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、禁忌證的信息和/或關(guān)于使用此類治
療產(chǎn)品的警告。合適的容器包括但不限于瓶、管形瓶、IV溶液袋、容器、注射器，等等。容器可以由多種材料，諸如玻璃或塑料形成。容器容納有效抑制TGF-β信號傳導(dǎo)的組合物，并且可以具有無菌存取口(例如，容器可以是靜脈內(nèi)溶液袋或具有由皮下注射針可刺穿的塞子的管形瓶)。組合物中的至少一種活性成分可以是抗TGF-β抗體。標(biāo)簽或包裝插頁可以指示組合物用于治療心肌梗死、急性心肌梗死、或降低心肌梗死的后果。在一個(gè)實(shí)施方案中，標(biāo)簽或包裝插頁指示包含抗體的組合物可以在心肌梗死的急性階段期間施用。此外，制品可以包含容器，該容器包含抗TGF-β抗體的組合物，和除抗體外的治療劑。制品可以進(jìn)一步包含包裝插頁，其指示可以組合使用第一和第二組合物來治療心肌梗死。此治療劑可以是前述部分中描述的任何輔助療法(例如，抗血管生成劑、抗激素化合物、保心藥、和/或哺乳動物免疫功能調(diào)節(jié)劑，包括細(xì)胞因子)。或者/另外，制品可以進(jìn)一步包含第二(或第三)容器，其含有藥學(xué)可接受緩沖劑，諸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩沖液鹽水、林格氏溶液和右旋糖溶液。它可以進(jìn)一步包含從商業(yè)和用戶觀點(diǎn)看期望的其它材料，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭、和注射器。為了方便，抗TGF-β抗體可以在試劑盒(即預(yù)定量的試劑及用法說明書的包裝組合)中提供。另外，可以包含其它添加劑，諸如穩(wěn)定劑、緩沖劑(例如，封閉緩沖劑或裂解緩沖劑)。特別地，抗體可以以干燥粉末(通常是凍干的)提供，所述干燥粉末包含賦形劑，其在溶解后會提供具有適當(dāng)濃度的溶液。
在上文發(fā)明概述和發(fā)明詳述中所描述的方法外，也涵蓋以下實(shí)施方案。治療患有心肌梗死、急性心肌梗死的患者或者在患者中降低急性心肌梗死的不良后果的方法可以包括在心肌梗死的急性階段期間對患者施用TGF-β拮抗劑。TGF-β拮抗劑可以選自下組:包含針對一種或多種TGF-β同等型的抗體片段的抗體或蛋白質(zhì)；TGF-β受體；包含針對一種或多種TGF-β受體的抗體片段的抗體或蛋白質(zhì)；潛活相關(guān)(latency associated)肽；大的潛活TGF-β，即一種抑制蛋白聚糖的TGF-β ;促生長素抑制素；甘露糖-6-磷酸；甘露糖-1-磷酸；促乳素；胰島素樣生長因子II ；IP-10 ;含有arg-gly-asp的肽；植物、真菌、或細(xì)菌提取物；反義或干擾RNA寡核苷酸；和牽涉TGF-β信號傳導(dǎo)的蛋白質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，TGF-β拮抗劑是人源化抗TGF-β抗體或抗TGF-β抗體的片段或抗原結(jié)合位點(diǎn)。TGF-β拮抗劑可以是能夠結(jié)合并中和TGF-β的超過一種同等型的抗體或抗體片段?？贵w可以是包含TGF-β結(jié)合部分和剩余部分的嵌合單克隆抗體，所述TGF-β結(jié)合部分包含單克隆抗體1D11.16的抗原結(jié)合部分，而剩余部分源自一種或多種人抗體。針對TGF-β的超過一種同等型的抗體可以是單克隆抗體1D11.16的人或人源化形式。TGF-β拮抗劑可以是中和人TGF-β K TGF-β 2和TGF-β 3的抗體或抗體片段?？梢栽诩毙孕募∪毖l(fā)作的約120、約80、約72、約48、或約24小時(shí)內(nèi)開始TGF- β拮抗劑的施用。在一些例子中，在急性心肌缺血發(fā)作的約12小時(shí)內(nèi)開始TGF-β拮抗劑的施用?？梢栽谑苄募」Ｋ烙绊懙慕M織的實(shí)質(zhì)性巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤前開始TGF-β拮抗劑的施用。在其它例子中，在以受心肌梗死影響的組織的嗜中性粒細(xì)胞浸潤為特征的時(shí)期內(nèi)開始TGF-β拮抗劑的施用。此外，在一些例子中，在以受心肌梗死影響的組織的壞死為特征的時(shí)期內(nèi)開始TGF- β拮抗劑的施用。所述方法還可以包括在心肌梗死的急性階段期間對診斷為急性心肌梗死的患者施用能夠選擇性修復(fù)TGF-β的期望功能的化合物，例如，消炎藥和/或TNF-α拮抗劑。所述方法可以在人和獸醫(yī)醫(yī)學(xué)中使用，從而患者可以是人或非人哺乳動物。就TGF-β拮抗劑而言，在一些實(shí)施方案中，拮抗劑是如下的抗體，其中和人TGF-β 1、TGF-0 2和TGF-β 3，并且包含抗體的抗原結(jié)合域，其中所述抗原結(jié)合域包含⑶R的組HCDRl、HCDR2和HCDR3，且其中所述抗原結(jié)合域利用人VHl家族基因，且其中所述HCDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQID NO:5, SEQ ID Ν0:15和SEQ ID Ν0:25。人VHl家族基因可以是人VH1-2基因，其在一些例子中可以是DP-10或DP-88基因?？乖Y(jié)合域可以進(jìn)一步包含⑶R的組IXDR1、IXDR2和IXDR3，且其中所述抗原結(jié)合域利用人V κ 3家族基因，且其中所述LCDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID N0:20和SEQID NO: 30。HCDR3 和 LCDR3 可以選自下組:(a)分別為 SEQ ID NO: 5 和 SEQ ID NO: 10 ； (b)分別為 SEQ ID N0:15 和 SEQ ID NO:20 -M (c)分別為 SEQ ID N0:25 和 SEQ ID N0:30。在一些實(shí)施方案中，人Vk 3家族基因可以是人VK DPK22基因。VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3可以包含在種系重鏈框架內(nèi)，或者VH域的HCDR1，HCDR2和HCDR3在來自種系氨基酸序列的包含多至12處突變的框架內(nèi)。Vk域的IXDR1、IXDR2和IXDR3可以包含在種系重鏈框架內(nèi)。在一些例子中，Vk域的^:01 1、^:01 2和^:01 3可以在來自種系￥1^氨基酸序列的包含多至5處突變的框架內(nèi)。TGF-β拮抗劑可以是如下的抗體，其中和人TGF-β 1、TGF-P2和TGF-P3，并且包含抗體的抗原結(jié)合域，其中所述抗原結(jié)合域利用人VH DP-10基因或人VH DP-88基因，并且包含含有SEQ ID NO: 31中的氨基酸序列的FR4氨基酸序列。抗原結(jié)合域可以利用人VHDP-1O基因或人VH DP-88基因，并且包含CDR的組HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:25，而且進(jìn)一步包含含有SEQ ID NO:31中的氨基酸序列的FR4氨基酸序列。抗原結(jié)合域可以進(jìn)一步利用人Vk 3家族基因和人Jk 5基因。利用人Vk 3家族基因和人Jk 5基因的抗原結(jié)合域可以包含⑶R的組IXDRl、IXDR2和IXDR3，其中所述IXDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQ IDNO: 10、SEQ ID NO:20 和 SEQ ID NO:30。在一些實(shí)施方案中，TGF-β拮抗劑中和人TGF-β 1、TGF12和TGF13，并且包含抗體的抗原結(jié)合域，其中所述抗原結(jié)合域包含:(a) SEQ ID NO: 3氨基酸序列的HCDRl、SEQID N0:4氨基酸序列的HCDR2、SEQ ID NO: 5氨基酸序列的HCDR3 ; (b) SEQ ID N0:13氨基酸序列的HCDRU SEQ ID NO: 14氨基酸序列的HCDR2、SEQ ID NO: 15氨基酸序列的HCDR3 ;或(c)SEQ ID NO: 23 氨基酸序列的 HCDRl、SEQ ID NO: 24 氨基酸序列的 HCDR2、SEQ ID NO: 25氨基酸序列的HCDR3?？乖Y(jié)合域可以進(jìn)一步包含抗體VL域?？乖Y(jié)合域可以包含選自下組的LCDR: (a) SEQ ID NO: 8氨基酸序列的LCDRl、SEQ ID N0:9氨基酸序列的LCDR2、SEQID N0:10氨基酸序列的LCDR3;(b)SEQ ID NO: 18 氨基酸序列的 LCDRl、SEQ ID NO: 19 氨基酸序列的LCDR2、SEQ ID NO:20氨基酸序列的LCDR3 ;和(c) SEQ ID N0:28氨基酸序列的LCDRl、SEQ ID NO: 29氨基酸序列的LCDR2、SEQ ID NO: 30氨基酸序列的LCDR3。在一些例子中，VH域的HCDRl、HCDR2和HCDR3可以包含在種系重鏈框架，例如人VHl家族框架內(nèi)。VH域的HCDRl、HCDR2和HCDR3可以在種系人重鏈框架VH1DP-10或DP-88內(nèi)。VL域的LCDRl、LCDR2和LCDR3可以在種系輕鏈框架內(nèi)。種系輕鏈框架可以是人V κ 3家族框架?？乖Y(jié)合域可以進(jìn)一步包含人Jk 5基因。人Vk 3家族基因可以是Vk DPK22基因。在一些變型中，TGF-β拮抗劑可以是包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)及多至5處突變，或其抗原結(jié)合部分的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含具有至多5處突變的PET1074B9VH域(SEQ ID NO: 12)，或其抗原結(jié)合部分的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含具有至多5處突變的PET1287A10VH域(SEQ ID NO: 22)，或其抗原結(jié)合部分的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含具有至多5處突變的PET1073G12VL域(SEQ ID NO: 7)，或其抗原結(jié)合部分的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含具有至多5處突變的PET1074B9VL域(SEQ ID NO: 17),或其抗原結(jié)合部分的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含具有至多5處突變的PET1287A10VL域(SEQ ID NO: 27)，或其抗原結(jié)合部分的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含PET1073G12VH域(SEQ ID NO:2)和PET1073G12VL域(SEQ ID NO:7)的抗體。TGF-β拮抗劑可以是包含PET1074B9VH 域(SEQ ID NO: 12)和 PET1074B9VL 域(SEQ ID NO: 17)的抗體?；蛘?，TGF-β拮抗劑可以是包含 PET1287A10VH 域(SEQ ID NO: 22)和 PET1287A10VL 域(SEQ ID NO: 27)的抗體。還涵蓋如本文中所描述的其它變型。SEQ ID NO指參見所附序列表的序列，其構(gòu)成本公開內(nèi)容的一部分。雖然方法已經(jīng)參照其某些實(shí)施方案詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員會容易想到的是，可以在背離本公開內(nèi)容或所附權(quán)利要求書的范圍的前提下進(jìn)行各種改變及采用等同方案。此外，呈現(xiàn)以下實(shí)施例作為方法的各方面的例示，而不應(yīng)解釋為限制性的。實(shí)施例1:抗體純化
通過蛋白A-Sepharose 層析(Goding, J Tmmunol Meth (1976) 42; 17) (PharmaciaFien Chemicals, Uppsala, Sweden)從培養(yǎng)物上清液或腹水純化單克隆抗體IDll和GC1008。通過添加商業(yè)制備的結(jié)合緩沖液(BioRad, Richmond, Calif.)增強(qiáng)gamma(Y)l亞類和gamma( Y )4亞類單克隆抗體IDll和GC1008對蛋白A的結(jié)合。將抗體用0.05M甘氨酸-HCl及0.15M NaCl緩沖液(ρΗ2.3)從蛋白A-Sepharose洗脫，針對PBS和NaCl緩沖液(ρΗ2.3)透析過夜，針對PBS透析過夜，并于-20攝氏度貯存。將自上清液純化的gamma( Y ) I和gamma( Y )4亞類抗體濃縮,并通過硫酸銨沉淀(50%飽和)部分純化,之后進(jìn)行蛋白A-層析。實(shí)施例2:心肌缺血再灌注的大鼠模型中TGF-β抑制劑的效果將12至14周齡雌性Lewis大鼠分配到5個(gè)處理組。在第O天(DO)，所有動物經(jīng)歷心肌缺血，接著是再灌注規(guī)程(Ι/R)。通過將心臟左心室上的左前降冠狀動脈短暫結(jié)扎60分鐘來產(chǎn)生心肌缺血。然后解開結(jié)扎，容許心臟缺血部分再灌注。Ι/R后3或5天開始，通過靜脈內(nèi)(IV)注射施用5mg/kglDll或?qū)φ丈唐?陰性對照抗體13C4或媒劑)，然后每隔兩天再施用，直到第28天。為了分析風(fēng)險(xiǎn)區(qū)(AAR)Jf 15 μ m直徑微球用黃色熒光染料標(biāo)記，并注射到心臟的左心室中，之后立即解開左降冠狀動脈的暫時(shí)結(jié)扎(D0)。微球在血液中均勻分布，并且駐留在心臟及其它器官和組織的毛細(xì)管中。心臟中的AAR定義為在結(jié)扎期期間沒有接受任何微球(或血液)的心肌組織區(qū)。在第28天，將動物用異氟烷輕微麻醉，并將心率維持于350±50bpm。然后，在長軸視圖中實(shí)施超聲心動圖以評估局部和全局心臟功能。在超聲心動圖顯象檢查后，用過度劑量的戊巴比妥鈉對動物實(shí)施安樂死。然后，切出心臟以進(jìn)行組織學(xué)分析。對AAR評估，隨后指配定性得分。從研究分析中剔除具有小的AAR(占LV的小于約20%)或沒有AAR的動物。利用組織學(xué)方法并利用心臟重量評估LV中的心臟纖維化，并表示為纖維化重量/總LV重量的百分比。然后，通過評估前壁增厚(AWT)，并與風(fēng)險(xiǎn)區(qū)中的后壁增厚(PWT)比較來評估局部心臟功能。壁增厚是心縮期時(shí)的壁厚與心舒期時(shí)的壁厚的差。還通過評估射血分?jǐn)?shù)(EF)和縮短分?jǐn)?shù)(FS)評估全局功能。每日目測臨床觀察所見在整個(gè)研究期間是不顯著的。在圖1中，與媒劑和陰性對照抗體13C4相比，IDll施用顯著降低LV中纖維化的百分比。無論IDll處理在Ι/R后3天(D3) [1D11-D3]還是Ι/R后5天(D5) [1D11-D5]開始，此纖維化降低均發(fā)生。與對照13C4處理組相比，在D5時(shí)開始IDll處理的組達(dá)到了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P〈0.05)。通過Ι/R后4周時(shí)的超聲心動圖顯象評估心臟功能參數(shù)，如表I中所看到的。射血分?jǐn)?shù)和縮短分?jǐn)?shù)代表全局心臟功能。AWT,PffT和AWT/PWT (局部壁運(yùn)動得分)代表局部心臟功能。在正常的嚙齒類中，AWT大致等于，且可以大于PWT。由此可見正常動物中的AWT/PWT比率(我們稱作局部壁運(yùn)動得分的)會是彡I。在表I中，正常動物組顯示大于PWT的AWT，及1.7±0.2的局部壁運(yùn)動得分(AWT/PWT)。

表I
權(quán)利要求
1.一種減少患者中心肌梗死的不良后果的方法，包括在心肌梗死的急性階段期間對所述患者施用TGF-β拮抗劑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述心肌梗死是急性心肌梗死。
3.權(quán)利要求1的方法，其中在心肌缺血發(fā)作的120小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。
4.權(quán)利要求1的方法，其中在心肌缺血發(fā)作的約72小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。
5.權(quán)利要求1的方法，其中在心肌缺血發(fā)作的約48小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。
6.權(quán)利要求1的方法，其中在心肌缺血發(fā)作的約24小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。
7.權(quán)利要求1的方法，其中在心肌缺血發(fā)作的約12小時(shí)內(nèi)開始所述TGF-β拮抗劑的施用。
8.權(quán)利要求1的方法，其中在受所述心肌梗死影響的組織的實(shí)質(zhì)性巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤前開始所述TGF-β拮抗劑的施用。
9.權(quán)利要求1的方法，其中在以受所述心肌梗死影響的組織的中性白細(xì)胞浸潤為特征的時(shí)期期間開始所述TGF- β拮抗劑的施用。
10.權(quán)利要求1的方法，其中在以受所述心肌梗死影響的組織的壞死為特征的時(shí)期期間開始所述TGF- β拮抗劑的施用。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述患者是人或非人哺乳動物。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述減少患者中心肌梗死的不良后果的方法是保護(hù)心肌膜的方法。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述TGF-β拮抗劑選自下組: i)特異性結(jié)合一種或多種TGF-β同等型的抗體或抗體片段； ii)TGF-13受體或其可溶性片段； iii)特異性結(jié)合一種或多種TGF-β受體的抗體或抗體片段；和 iv)反義或干擾RNA寡核苷酸。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括對所述患者施用能夠選擇性恢復(fù)TGF-β的期望功能的化合物。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述能夠選擇性恢復(fù)TGF-β的期望功能的化合物是消炎藥。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述能夠選擇性恢復(fù)TGF-β的期望功能的化合物是TNF-α拮抗劑。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括對所述患者施用ACE抑制劑。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述ACE抑制劑選自下組:貝那普利、卡托普利、福辛普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、Transdolapril、賴諾普利、依那普利和RampariI。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括對所述患者施用血管緊張肽II受體拮抗劑。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述血管緊張肽II受體拮抗劑選自下組:依普羅沙坦、替米沙坦、氯沙坦、厄貝沙坦、奧美沙坦、坎地沙坦、和纈沙坦。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括對所述患者施用β_腎上腺素能拮抗劑。
22.權(quán)利要求1的方法，其中所述腎上腺素能拮抗劑選自下組:阿普洛爾、布新洛爾、卡替洛爾、卡維地洛、拉貝洛爾、納多洛爾、氧烯洛爾、噴布洛爾、吲哚洛爾、普萘洛爾、索他洛爾、噻嗎洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、塞利洛爾、艾司洛爾、美托洛爾、和奈必洛爾。
23.權(quán)利要求13的方法，其中所述TGF-β拮抗劑是特異性結(jié)合一種或多種TGF-β同等型的抗體或抗體片段。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述抗體或抗體片段中和人TGF-β1、TGF-0 2和TGF-β 3。
25.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含具有至多達(dá)5處突變的PET1073G12VH域(SEQ ID NO: 2)，或其抗原結(jié)合部分。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含具有至多達(dá)5處突變的PET1074B9VH域(SEQ ID NO: 12)，或其抗原結(jié)合部分。
27.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含具有至多達(dá)5處突變的PET1287A10VH域(SEQ ID NO: 22)，或其抗原結(jié)合部分。
28.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含具有至多達(dá)5處突變的PET1073G12VL域(SEQ ID NO: 7)，或其抗原結(jié)合部分。
29.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1074B9VL域(SEQ ID NO: 17)，或其抗原結(jié)合部分。
30.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含具有至多5處突變的PET1287A10VL域(SEQ ID NO: 27)，或其抗原結(jié)合部分。
31.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含PET1073G12VH域(SEQIDNO:2)和 PET1073G12VL 域(SEQ ID NO:7)。
32.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含PET1074B9VH域(SEQIDNO:12)和 PET1074B9VL 域(SEQ ID NO:17)。
33.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含PET1287A10VH域(SEQIDNO:22)和 PET1287A10VL 域(SEQ ID NO:27)。
34.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含⑶R組HCDRl、HCDR2和HCDR3，其中所述HCDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:25。
35.權(quán)利要求34的方法，其中所述VH域的HCDRl、HCDR2和HCDR3在種系重鏈框架內(nèi)。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述VH域的HCDR1、HCDR2和HCDR3在來自種系氨基酸序列的包含至多達(dá)12處突變的框架內(nèi)。
37.權(quán)利要求24的方法，其中所述抗體或抗體片段包含⑶R組IXDRl、IXDR2和IXDR3，其中所述LCDR3具有選自下組的氨基酸序列:SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO:20和SEQ IDN0:30。
38.權(quán)利要求37的方法，其中所述IXDRl、IXDR2和IXDR3在種系重鏈框架內(nèi)。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述IXDRl、IXDR2和IXDR3在來自種系氨基酸序列的包含至多達(dá)5處突變的框架內(nèi)。
40.權(quán)利要求24的方法，其中在心肌梗死的急性階段期間對所述患者施用TGF-β拮抗劑包括施用每千克患者體重約Img的劑量。
41.權(quán)利要求24的方法，其中在心肌梗死的急性階段期間對所述患者施用TGF-β拮抗劑包括施用每千克患者體重約5mg的`劑量。
全文摘要
本文中公開了一種治療患有心肌梗死，特別是急性心肌梗死的患者，或減少患者中心肌梗死的不良后果的方法，包括在心肌梗死的急性階段期間對患者施用TGF-β拮抗劑。
文檔編號A61K39/395GK103201292SQ201180052346
公開日2013年7月10日 申請日期2011年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月1日
發(fā)明者G.Y.阿基塔, S.朗寧, 小理查德.C.格雷戈里, A.B.庫德耶 申請人:建新公司