專利名稱：子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑以及含有其的飲食品組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑。特別是涉及含有特定乳酸菌而成的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑、以及含有該乳酸菌而成的飲食品組合物。
背景技術：
子宮內(nèi)膜異位癥是在月經(jīng)時剝落的子宮內(nèi)膜或與其類似的組織逆流過輸卵管、在子宮外的腹腔內(nèi)進行增殖的疾病，推測處于生殖期的女性中的6 10%患有該病，是極重要的婦科疾病之一。其發(fā)病機制雖有很多不清楚的地方，但通過眾多報告已經(jīng)清楚腹腔內(nèi)的免疫監(jiān)測系統(tǒng)的異常為其原因。通常，巨噬細胞、NK細胞等免疫活性細胞對流入腹腔內(nèi)的子宮內(nèi)膜組織進行排除。但是認為，當由于某種原因，這些免疫活性細胞的功能降低時，子宮內(nèi)膜組織在腹腔內(nèi)存活并生長。特別是有報告指出NK活性的降低與其嚴重程度顯著相關(非專利文獻I)。這種發(fā)現(xiàn)啟示了所謂的由于腹腔中的NK細胞對異位性子宮內(nèi)膜細胞的除去功能的降低與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病及發(fā)展有關的NK細胞說。另一方面，子宮內(nèi)膜異位癥多伴有疼痛，明顯損害QOL (Quality of Life ;生活質(zhì)量)。一般來說，在月經(jīng)期為了緩和疼痛而使用非留體抗炎藥(NSAIDs)。但是已知，NSAIDs由于所謂的抑制環(huán)氧化酶而抑制由花生四烯酸產(chǎn)生具有粘膜保護功能的前列腺素的藥理學性質(zhì)，因此誘發(fā)腐蝕性病變或潰瘍等腸胃障礙。進而，在使用達那唑或促性腺激素釋放激素激動劑等的子宮內(nèi)膜異位癥治療法中，還觀察到激素性的副作用。因此，在各個領域中對促進NK細胞活化的物質(zhì)進行了探索。在此之前作為具有某種程度效果而已知的例子，有多糖(香菇多糖、甲殼素、殼聚糖、灰樹花D餾分、nigero-低聚糖等)、菌體等。但是，關于子宮內(nèi) 膜異位癥的研究均不充分。另一方面，IL-12是具有活化Thl細胞或NK細胞等作用的細胞因子，有報告指出其具有異位性子宮內(nèi)膜細胞的生長抑制效果(非專利文獻2)。現(xiàn)有技術文獻非專利文獻非專利文獻1: Oosterlynck DJ, Meuleman C，Waer M, Vandeputte M, and KoninckxPR，The natural killer activity of peritoneal fluid lymphocytes is decreased inwomen with endometriosis.Fertil.Steril., 58, 290-295 (1992).
非專利文獻2: Somigliana Ej Vigano P，Rossi Gj Carinelli Sj VignaliM，and Panina-Bordignon P.Endometrial ability to implant in ectopic sitescan be prevented by interleukin-12in a murine model of endometriosis.Hum.Reprod.，14，2944-2950 (1999)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明欲解決的課題
但是，對于上述用于促進NK細胞活化的化合物、進而可誘導用于活化NK細胞的IL-12產(chǎn)生的化合物等，并未充分地研究它們與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病的相關性。因此，本發(fā)明的目的在于提供基于增強NK活性的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑。另外，本發(fā)明的目的還在于提供含有該乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善用飲食品組合物。進而，本發(fā)明的目的還在于提供預防和/或改善子宮內(nèi)膜異位癥的方法。特別是，本發(fā)明的目的還在于提供可經(jīng)口攝取且無副作用、可獲得高安全性和疼痛效果的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑等。用于解決課題的手段本發(fā)明人等之前也研究了益生菌乳酸菌對IL-12的誘導性。特別是，對于具有促進IL-12產(chǎn)生、增強NK細胞的細胞毒性的作用的乳酸菌對子宮內(nèi)膜異位癥顯示改善效果的可能性進行了各種研究。鑒于上述以往問題點，本發(fā)明人等進行了深入研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，某種乳酸菌、特別是乳桿菌(Lactobacillus)屬乳酸菌具有優(yōu)異的子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長抑制效果，從而完成了本發(fā)明。此外，當使子宮內(nèi)膜異位癥患者、特別是抱怨降低QOL的主要原因的骨盆痛的患者攝取乳桿菌屬乳酸菌時，可見該乳酸菌對于子宮內(nèi)膜異位癥、特別是月經(jīng)痙攣及痛經(jīng)的改善效果。如此，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)了乳酸菌對子宮內(nèi)膜異位癥患者的QOL提高有效，從而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明的一個方式為含有乳酸菌而成的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑。該子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑所含的乳酸菌并無任何限定，優(yōu)選為乳桿菌屬(Lactobacillus),更·優(yōu)選為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri),特別地最優(yōu)選為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。另外，本發(fā)明的另一個方式為含有有效量的乳酸菌而成的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善用飲食品組合物。在該子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善用飲食品組合物中，乳酸菌并無任何限定，優(yōu)選為乳桿菌屬，更優(yōu)選為格氏乳桿菌，特別地最優(yōu)選為格氏乳桿菌0LL2809株。其中，所述飲食品組合物優(yōu)選為發(fā)酵乳飲食品，另外優(yōu)選酸奶、酸奶飲料等酸奶飲食品，但并非限定于這些。另外，本發(fā)明的再一個方式為子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善方法，其特征在于，給予期望量的含有有效量乳酸菌的組合物。該子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善方法中，乳酸菌優(yōu)選為乳桿菌屬，更優(yōu)選為格氏乳桿菌，特別地最優(yōu)選為格氏乳桿菌0LL2809株。另外，所述子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善方法中，所述給予量優(yōu)選為至少2mg/kg/日，但并非限定于此?；蛘?，本發(fā)明涉及以下的(I) (19)。(I) 一種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防和改善這兩者或任一者的藥劑，其是含有乳酸菌而成的。(2)上述(I)所述的藥劑，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。
(3)上述(I)所述的藥劑，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)。(4)上述(I)所述的藥劑，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。(5)—種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防和改善這兩者或任一者的飲食品組合物，其是含有有效量的乳酸菌而成的。(6)上述(5)所述的飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobaci IIus)。(7)上述(5)所述的飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)。(8)上述(5)所述的飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。

(9)上述(8)所述的飲食品組合物，其特征在于，飲食品組合物為發(fā)酵乳飲食品。(10)上述(9)所述的飲食品組合物，其特征在于，發(fā)酵乳飲食品為酸奶。(11) 一種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防及改善這兩者或任一者的方法，其特征在于，給予期望量的含有有效量乳酸菌的組合物。(12)上述(11)所述的方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。(13)上述(11)所述的方法，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)。(14)上述(11)所述的方法，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。(15)上述(11) (14)中任一項所述的方法，其中，所述給予量為至少2mg/kg/日。(16) —種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防及改善這兩者或任一者的乳酸菌。(17)上述(16)所述的乳酸菌,其中,所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。(18)上述(16)所述的乳酸菌，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)。(19)上述(16)所述的乳酸菌，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株?；蛘撸景l(fā)明涉及以下的(101) (112)。(101) —種子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療劑，其含有乳酸菌而成。(102)上述(101)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療劑，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。(103)上述(101)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療劑，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。(104)—種子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療用飲食品組合物，其是含有有效量的乳酸菌而成的。(105)上述(104)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防治療組合物，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。(106)上述(105)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療用飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809株。(107)上述(106)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療用飲食品組合物，其中，飲食品組合物為發(fā)酵乳飲食品。(108)上述(107)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療用飲食品組合物，其中，發(fā)酵乳飲食品為酸奶、酸奶飲料等酸奶飲食品。(109) —種子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療方法，其特征在于，給予期望量的含有有效量乳酸菌的組合物。(110)上述(109)所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。(111)上述(109 )所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療方法，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809。(112)上述(109) (111)中任一項所述的子宮內(nèi)膜異位癥預防及治療方法，其中，所述給予量為至少2mg/kg/日。發(fā)明效果通過本發(fā)明，提供了含有某種乳酸菌、特別是乳桿菌屬乳酸菌而成的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑。本發(fā)明的乳桿菌屬乳酸菌以增強NK活性為特征，通過提高自身的免疫力，對子宮內(nèi)膜異位 癥、特別是對月經(jīng)痙攣及痛經(jīng)顯示了之前所沒有的強大改善效果。因此，可以將乳桿菌屬乳酸菌用于這些疾病的預防和/或改善。本發(fā)明的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑對于子宮內(nèi)膜異位癥患者的QOL提高是有效的。另外，本發(fā)明的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑可通過經(jīng)口攝取而簡便地攝取。另外，使用激素藥等進行預防或改善時有時會伴有副作用，而本發(fā)明沒有這種擔心。此外安全性高，為可作為食品看待的程度。如此，本發(fā)明的預防和/或改善劑的患者攝取障礙低，不會對生活造成負擔地使子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善變得可能。另外，由于具備這種特性，因此可以容易地將其制成飲食品組合物，可以進一步促進簡便攝取。另外，本發(fā)明的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑由于具有對其他未見類似的、該疾病所特有的疼痛的減輕效果，因此特別是對提高子宮內(nèi)膜異位癥患者的QOL是有效的。


圖1為比較對子宮內(nèi)膜異位癥模型小鼠給予0LL2809等之后的子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的重量(圖1 (A))及大小(圖1 (B))的圖表。a-c:不同符號之間具有顯著性差異(Ρ〈0.05)。圖2為表示存在于腹腔洗滌液中的腹腔細胞內(nèi)的IL-2 (圖2 (A))及Ncrl基因(圖2 (B))的亢進的圖表。a、b:不同符號之間具有顯著性差異(Ρ〈0.05)。圖3為利用視覺模擬評分法評價的月經(jīng)期疼痛的時間進程的圖表。*、**:分別為Ρ〈0.05,0.01。圖4為利用視覺模擬評分法評價的月經(jīng)期疼痛在攝取前后的變化量的圖表。**:Ρ〈0.01。圖5為表不月經(jīng)期的痛經(jīng)評分的時間進程的圖表。*:Ρ〈0.05。
圖6為表示月經(jīng)時的痛經(jīng)評分在攝取前后的變化量的圖表。(*):P<0.1。
具體實施例方式以下詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并非限定于以下所述的各個方式。本發(fā)明提供含有乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑(以下稱作“本發(fā)明的預防/改善劑”)。本發(fā)明的預防/改善劑還可如下表述。.含有乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善用醫(yī)藥組合物.含有乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥的病變部位的生長抑制劑.含有乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥的病變部位的生長抑制用醫(yī)藥組合物本說明書中，“預防和/或改善”還可表述為“預防及改善這兩者或任一者”。因此，本發(fā)明的“預防和/或改善”包含:.預防及改善.預防.改善另外，本說 明書中，“改善”也可表述為“治療”。本發(fā)明的預防/改善劑含有乳酸菌作為其活性成分。乳酸菌只要具有高的IL-12產(chǎn)生誘導能力，則種類并無關系。乳酸菌到目前為止被分類為乳球菌(Lactococcus )屬、乳桿菌(Lactobacillus)屬、明串珠菌(Leuconostoc)屬、小球菌(Pediococcus)屬、鏈球菌(Streptococcus)屬、Wissella 屬、四聯(lián)球菌(Tetragenococcus)屬、酒球菌(Oenococcus)屬、腸球菌(Enterococcus)屬、漫游球菌(Vagococcus)屬、肉桿菌(Carnobacterium)屬等超過30個屬。本發(fā)明的預防/改善劑中可以使用這些乳酸菌。優(yōu)選可舉出乳桿菌(LactobaciIIus)屬乳酸菌、更優(yōu)選可舉出格氏乳桿菌(LactobaciIIus gasseri )、特別優(yōu)選可舉出格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809株(保藏編號:NITE BP-72)，但并非限定于這些。另外，還可組合使用種類不同的2種以上的乳酸菌。本發(fā)明人等將格氏乳桿菌0LL2809株保藏在獨立行政法人制品評價技術基礎機構(gòu)專利微生物保藏中心。以下記載確定保藏的內(nèi)容。( I)保藏機構(gòu)名稱:獨立行政法人制品評價技術基礎機構(gòu)專利微生物保藏中心(獨立行政法人製品評価技術基盤機構(gòu)特許微生物寄託力 > 夕一)(2)聯(lián)系方式:〒292-0818千葉県木更津市分f ^鎌足2 — 5 — 8電話號碼0438-20-5580(3)保藏編號:NITE BP-72(4)用于識別的表示:格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809(5)原保藏日:平成17年(2005年)2月I日(6)基于布達佩斯條約向保藏機構(gòu)的移送日:2006年I月18日格氏乳桿菌0LL2809株(保藏編號:NITE BP-72)為革蘭式陽性桿菌，乳酸菌MRS瓊月旨、Difcoo上的菌落形態(tài)為圓形、淡黃色、扁平狀。作為生理學特征，具有同型乳酸發(fā)酵形式、45°C下的生長性、對葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、蔗糖、纖維二糖、乳糖、海藻糖具有發(fā)酵性。作為用于培養(yǎng)格氏乳桿菌0LL2809(保藏編號:NITE BP-72)的培養(yǎng)基，使用在乳酸菌的培養(yǎng)中通常使用的培養(yǎng)基。即，只要是除了主碳源之外還適當?shù)睾械?、無機物、其他營養(yǎng)素的培養(yǎng)基，則可以使用任何培養(yǎng)基。作為碳源，可根據(jù)所用菌的同化性使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、淀粉水解物、糖蜜等。作為氮源，可以使用酪蛋白的水解物、乳清蛋白水解物、大豆蛋白水解物等有機含氮物。另外，作為增殖促進劑，使用肉膏、魚肉膏、酵母膏等。培養(yǎng)優(yōu)選在厭氧條件下進行，但也可以是利用通常使用的液體靜置培養(yǎng)等的微需氧條件下。厭氧培養(yǎng)可以適用在二氧化碳氣層下進行培養(yǎng)的方法等公知手法，但也可以是其他的方法。培養(yǎng)溫度通常優(yōu)選為30 40°C，但只要是菌能夠生長的溫度則可以是其他的溫度條件。培養(yǎng)中的培養(yǎng)基的PH優(yōu)選維持在6.0 7.0，但只要是細菌能夠生長的溫度，則也可以是其他的PH條件。另外，還可以在分批培養(yǎng)條件下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)時間通常優(yōu)選為10 24小時，但只要是細菌能夠生長的時間，則可以是其他的培養(yǎng)時間。關于本發(fā)明中可使用的其他格氏乳桿菌，對于其為革蘭式陽性桿菌、及其他生理學特征，也顯示與格氏乳桿菌0LL2809同樣的特征。這種格氏乳桿菌只要是本領域技術人員則可以基于生理學特征從人類糞便等中分離。培養(yǎng)也可以通過與上文所述的有關格氏乳桿菌0LL2809的培養(yǎng)的同樣的方法進行。本發(fā)明的預防/改善劑可直接含有乳酸菌，或者還可以對乳酸菌實施了一些處理而得到的乳酸菌處理物的形式含有。例如，可以使用乳酸菌懸浮液、乳酸菌培養(yǎng)物(菌體、培養(yǎng)上清液(含培養(yǎng)基成分))、乳酸菌發(fā)酵物(乳酸菌飲料、酸乳、酸奶等)、濃縮物、加工成糊狀的糊化物、噴霧干燥物、冷凍干燥物(選自噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空干燥物、滾筒干燥物中的至少I個)、真空干燥物、滾筒干燥物、分散于介質(zhì)中的液態(tài)物、用稀釋劑稀釋得到的稀釋物、利用磨機等將干燥物粉碎而得到的粉碎物等作為處理物。另外，乳酸菌可以適當使用活菌、濕菌、干菌等。也可以是實施了滅菌、即加熱滅菌處理、放射線滅菌處理或粉碎處理等而得到的死菌。這些處理工序可單獨使用、也可并用多個。本發(fā)明的預防/改善劑可單獨用于人和動物的子宮內(nèi)膜異位癥的預防或改善?；蛘?，還可以在與醫(yī)藥品或食品中 可通常使用的其他成分混合后，經(jīng)口給予。另外，還可以與子宮內(nèi)膜異位癥的預防或改善效果已知的其他化合物或微生物等并用。子宮內(nèi)膜異位癥的預防或治療效果例如如實施例所示，也可通過利用視覺模擬評分法(VAS)或痛經(jīng)評分的主觀評價來進行確認。本發(fā)明的預防/改善劑的給予量可考慮給予途徑、包括人在內(nèi)的給予對象動物的年齡、體重、癥狀等各種因素進行適當設定。本發(fā)明并非限定于此，優(yōu)選作為有效成分至少給予2mg/kg/日。但是，當長時間以預防和/或改善為目的進行攝取時，可以是少于上述范圍的少量?；蛘?，本發(fā)明的預防/改善劑的有效成分在作為食品的安全性方面并無問題，因此也可以以多于上述范圍的量進行使用。另外，本發(fā)明的預防/改善劑可以通過經(jīng)口給予或非經(jīng)口給予(肌肉內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、栓劑、經(jīng)皮、經(jīng)胃管等)均可進行給予。作為本發(fā)明的預防/改善劑的給予方式，可根據(jù)預防目的或改善目的、給予路徑等來選擇劑型，例如可舉出片劑、包衣片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液體劑、懸浮劑、乳齊 、糖漿劑、注射劑、栓劑、浸劑、煎劑、酊劑等。這些各種制劑可根據(jù)常規(guī)方法針對主藥、根據(jù)需要使用填充劑、膨脹劑、賦形劑、粘合劑、保濕劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、著色劑、矯味除臭劑、增溶劑、懸浮劑、包衣劑等醫(yī)藥制劑技術領域中可通常使用的已知輔助劑進行制劑化。另外，在該醫(yī)藥制劑中還可含有著色劑、防腐劑、香料、風味劑、甜味劑等或其他醫(yī)藥品。本發(fā)明中，乳酸菌還可以以醫(yī)藥品或飲食品的任意形態(tài)使用。例如，通過作為醫(yī)藥品進行直接給予、或者作為特定保健用食品等特別用途食品或營養(yǎng)功能食品進行直接攝取，期待進行子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善。即，本發(fā)明提供含有有效量的構(gòu)成本發(fā)明預防/改善劑的乳酸菌而成的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善用飲食品組合物。作為飲食品組合物的形態(tài)，可以舉出調(diào)制奶粉或發(fā)酵乳飲食品等。作為發(fā)酵乳飲食品，可舉出酸奶、奶酪等，但并非限定于這些。本發(fā)明的飲食品組合物以酸奶等各種發(fā)酵乳、飲料等為代表，還可適用于保健功能食品或病人用食品。保健功能食品制度是考慮到國內(nèi)外的趨勢、符合一直以來的特定保健用食品制度，不僅以通常的食品、還以制成片劑、膠囊等形狀的食品為對象設定而成，因此包括特定保健用食品(個別許可型，product-based approval type)和營養(yǎng)功能食品(監(jiān)管標準型,regulatory standard type)這2種類型。通過直接攝取含有構(gòu)成本發(fā)明預防/改善劑的乳酸菌的特定保健用食品等特別用途食品或營養(yǎng)功能食品，可以對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防和/或改善。本發(fā)明的飲食品組合物具體地可在各種飲食品(牛奶、軟飲料、發(fā)酵乳、酸奶、奶酪、面包、餅干、脆餅、比薩餅(pizza crust)、調(diào)制奶粉、流質(zhì)食物、病人用食品、嬰幼兒用奶粉等食品、哺乳婦女用奶粉等食品、營養(yǎng)食品等)中添加構(gòu)成本發(fā)明預防/改善劑的乳酸菌，然后將其攝取?？?以直接使用本有效成分，或者與其他食品或食品成分混合等根據(jù)通常的飲食品組合物的常規(guī)方法進行使用。另外，對于其性狀，還可以是通常使用的飲食品狀態(tài)、例如固態(tài)(粉末、顆粒狀等)、糊狀、液態(tài)或懸浮狀的任意狀態(tài)。對于其他成分并無特別限定，在含有構(gòu)成本發(fā)明預防/改善劑的乳酸菌的飲食品組合物中可使用水、蛋白、糖質(zhì)、脂質(zhì)、維生素類、礦物類、有機酸、有機堿、果汁、香料類等作為主成分。作為蛋白，例如可舉出全脂奶粉、脫脂奶粉、部分脫脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白濃縮物、乳清蛋白分離物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、K-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳鐵蛋白、大豆蛋白、雞蛋蛋白、肉蛋白等動植物性蛋白、它們的水解物；黃油、乳清礦物質(zhì)(whey mineral)、奶油、乳清、非蛋白態(tài)氮、唾液酸、磷脂、乳糖等各種乳來源成分等。作為糖質(zhì)，可舉出糖類、加工淀粉(除了糊精外，可溶性淀粉、英國淀粉(Britishstarch )、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、食物纖維等。作為脂質(zhì)，例如可舉出豬油、魚油等、它們的分離油、氫化油、酯交換油等動物性油脂；棕櫚油、紅花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它們的分離油、氫化油、酯交換油等植物性油脂等。作為維生素類，例如可舉出維生素A、胡蘿卜素類、維生素B族、維生素C、維生素D族、維生素E、維生素K族、維生素P、維生素Q、煙酸、尼克酸、泛酸、生物素、肌糖、膽堿、葉酸等，作為礦物質(zhì)類，例如可舉出鈣、鉀、鎂、鈉、銅、鐵、錳、鋅、硒、乳清礦物質(zhì)等。作為有機酸，例如可舉出蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸等。這些成分可以組合使用2種以上，可以使用合成品和/或大量含有上述物質(zhì)的食品。構(gòu)成本發(fā)明預防/改善劑或飲食品組合物的乳酸菌的量可以根據(jù)其目的、用途(藥劑、飲食品組合物)任意地決定。本發(fā)明雖不限定于此，但作為其含量，相對于總量通常優(yōu)選為0.001 100% (w/w)、特別優(yōu)選為0.01 100% (w/w)。在飲食品組合物或藥劑的制造中使用乳酸菌時，制造方法可以通過本領域技術人員公知的方法進行。只要是本領域技術人員，則可適當組合將乳酸菌或其處理物與其他成分混合的工序、成形工序、滅菌工序、發(fā)酵工序、燒制工序、干燥工序、冷卻工序、造粒工序、包裝工序等，制作所需的食品或藥劑。另外，在各種乳制品的制造中使用乳酸菌時，可以通過本領域技術人員公知的方法制造所需的乳制品。示出當為酸奶的情況之一例時，可以經(jīng)過使用乳酸菌調(diào)制發(fā)酵劑的工序、將該發(fā)酵劑添加到經(jīng)過前處理的牛奶中進行培養(yǎng)的工序、冷卻工序、調(diào)味工序、填充工序等來制造酸奶。當為奶酪時，例如，可以經(jīng)過在進行了滅菌等前處理的牛奶中添加本發(fā)明的乳酸菌作為發(fā)酵劑使其乳酸發(fā)酵的工序、添加凝乳酶生成干酪凝塊的工序、凝塊剪切工序、乳清排出工序、加鹽工序、熟化工序等進行制造。或者，在所述各種乳制品的制造中，還可代替特定的乳酸菌(例如格氏乳桿菌)使用其他的乳酸菌作為發(fā)酵劑，然后在制造工序中添加該特定的乳酸菌(例如格氏乳桿菌)或其處理物。另外，本發(fā)明涉及子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善方法，其包含將乳酸菌經(jīng)口給予至動物的工序。作為給予乳酸菌的對象，可舉出哺乳動物。作為哺乳動物，可舉出人及除人以外的哺乳動物，優(yōu)選可舉出人或猴子，更優(yōu)選可舉出人。另外，本發(fā)明涉及用于在子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善中使用的乳酸菌?；蛘撸景l(fā)明涉及乳酸菌在子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑的制造中的用途。另外，本發(fā)明還涉及用于子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善的乳酸菌的用途。另外，本發(fā)明還涉及子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑的制造方法，其包含將乳酸菌和藥學上可容許的載體配合的工序。作為乳酸菌，優(yōu)選可舉出乳桿菌屬的乳酸菌、更優(yōu)選格氏乳桿菌、特別優(yōu)選格氏乳桿菌0LL2809株，但并非限定于這些。或者，本發(fā)明提供含有乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長抑制劑。另外，本發(fā)明還提供抑制子宮內(nèi)膜異位癥病變 部位的生長的方法，其包含將乳酸菌給予至動物的工序。此外，本發(fā)明還涉及用于抑制子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長的乳酸菌。或者，本發(fā)明涉及乳酸菌在制造子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長抑制劑中的用途?；蛘撸景l(fā)明涉及乳酸菌在用于抑制子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長中的用途。或者，本發(fā)明涉及子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長抑制劑的制造方法，其包含將乳酸菌和藥學上可容許的載體配合的工序。本發(fā)明的生長抑制劑可以配合適于經(jīng)口給予的載體。本發(fā)明的生長抑制劑為了抑制子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的生長，可以兼作食品進行給予。子宮內(nèi)膜異位癥主要在腹膜、卵巢或子宮、子宮直腸窩、腸或直腸等臟器的表面、卵巢的內(nèi)部、子宮的肌肉層等的細胞中發(fā)生。利用本發(fā)明的生長抑制劑是否抑制了病變部位的生長，例如可通過本領域技術人員公知的方法通過測量這些病變部位的面積或體積、重量進行判定。另外，本說明書中引用的全部現(xiàn)有技術文獻通過參照納入本說明書中。實施例以下舉出實施例說明本發(fā)明，但本發(fā)明并非限定于此。另外，本說明書中％符號在沒有明確說明的情況下，表示重量％。[實施例1]通過以下方法制作子宮內(nèi)膜異位癥模型小鼠，對本發(fā)明的預防/改善劑的預防及改善效果進行研究。[實驗動物]使用在5周齡時實施了卵巢摘除手術的6周齡雌性BALB/c小鼠(日本SLC株式會社)。小鼠給予CRF-1飼料(Oriental Yeast株式會社)，在室溫21±2°C、濕度55±15%下、在按照每12小時明暗循環(huán)進行管理的房間中，在分組的鼠籠中進行飼養(yǎng)。飼料和水自由攝取。子宮內(nèi)膜異位癥模型小鼠的制作使用對Somigliana et al.(非專利文獻2)的方法進行了改變的方法。具體地說，將下述供體小鼠的I對子宮角切為小片，懸浮在0.6ml的磷酸緩沖生理鹽水(PBS ;pH為7.2)中，利用18G的注射針向腹腔內(nèi)注入子宮內(nèi)膜懸浮液，使得每只受體小鼠為0.3ml (第O天)。受體小鼠使用在5周齡時(移植日的7日前)接受了卵巢摘除手術的小鼠，在7日前、第0、7、14日，共計4次將溶解于蓖麻油的雌性激素(和光純藥工業(yè)株式會社；100 μ g/kg)肌肉 給予至大腿部。供體小鼠與受體小鼠同樣，在移植日的7日前進行卵巢摘除和雌性激素給予。卵巢摘除和雌性激素的給予是為了將所有小鼠的性周期調(diào)至發(fā)情期而實施的。將小鼠IL-12重組體(和光純藥工業(yè)株式會社)懸浮在PBS中，向腹腔內(nèi)給予
0.15 μ g/0.4ml，從移植日的2日前至2日后共計連續(xù)進行5天。其他組在相同條件下僅給予溶劑。格氏乳桿菌0LL2809在乳酸菌MRS肉湯(Difco)中活化培養(yǎng)(37°C、18小時)2次。在相同培養(yǎng)基中接種1%經(jīng)活化的菌體，在37°C下培養(yǎng)18小時。在集菌后，利用生理鹽水洗滌2次、用滅菌蒸餾水洗滌I次。在75°C下加熱60分鐘進行滅菌、冷凍干燥。將冷凍干燥菌體以2mg/0.5ml的濃度懸浮于水中，以2mg/0.5ml/body的給予量使用胃管從移植日至解剖前日(第20日)的期間經(jīng)胃管給予。其他組在相同條件下僅給予溶劑。在子宮內(nèi)膜移植后的第21天，通過頸椎脫臼使小鼠安樂死，將腹腔洗滌液回收后，打開腹部。使用游標卡尺測定子宮內(nèi)膜病變部位的大小(長徑、短徑)后，將其摘出，測定重量。當病變部位形成嚢胞時，在吸引嚢胞液后實施。另外，在腹腔開腹前將Iml的含1%FCS的PBS注入到腹腔內(nèi)，回收0.5ml的腹腔洗滌液，用于測定腹水中的細胞因子濃度。細胞因子的測定使用Bio-plex細胞因子分析試劑盒(Bio-rad, Hercules, CA)。對于腹腔細胞，將0.5ml的腹腔洗滌液回收后，進而向腹腔內(nèi)注入4ml的含1%FCS的PBS，將其3ml的洗滌液回收。通過離心分離將細胞因子測定用所采用的0.5ml腹腔洗滌液中的細胞回收，一并作為腹腔細胞。來自腹腔細胞的總RNA使用Trizol試劑(Invitrogen, Calsbad, CA)。以抽提的 I U g 的總?cè)?RNA 為模板，使用 PrimeScript RT reagent Kit (TaKaRa Bio 株式會社)進行向 cDNA 的逆轉(zhuǎn)錄。實時 PCR 使用 FastStart Universal SYBR Green Master 試劑(Roche, Indianapolis, IN),利用 ABI Prism7300 (Applied Biosystems>Foster City、CA)進行測定。IL-2基因的寡核苷酸引物參考Overbergb et al.(Overbergb L, GiuliettiA,Valckx D,Decallonne B,Bouillon R, and Matbieu C.The use of real-time reversetranscriptase PCR for the quantification of cytokine gene expression.J.Biomol.Tech.，14，33-43 (2003))。NCRl 基因使用 TaqMan 探針(Applied Biosystems)進行測定。各基因的表達量利用甘油醛-3-磷酸脫氫酶的表達量進行校正(normalize)。結(jié)果用平均值土標準差進行表示。統(tǒng)計分析的參數(shù)數(shù)據(jù)通過單因素方差分析進行多重檢驗，當可見顯著性差異時，在Fishser的PLSD檢驗中分析組間的顯著性差異。非參數(shù)數(shù)據(jù)通過Steel-Dwass的方法進行多重比較。P〈0.05判斷為顯著。格氏乳桿菌0LL2809的給予對子宮內(nèi)膜異位癥病變部位的影響在通常(無處置)組中未見子宮內(nèi)膜異位癥病變部位，但在對照組每I個個體中檢測到2 7個病變部位，其重量和面積均與通常組相比顯示有顯著性的高值(圖1)。通過格氏乳桿菌0LL2809的給予，與對照組相比，其重量和面積均顯示有顯著性的低值，即可見病變部位的生長抑制效果。另外，其程度與作為陽性對照設定的IL-12給予組為同等程度。因此可以證明，通過給予本發(fā)明的預防/改善劑，對子宮內(nèi)膜異位癥具有預防及改善效果。腹腔細胞的基因表達分析腹腔洗滌液中經(jīng)測定的大多數(shù)細胞因子濃度為檢測限以下，根據(jù)腹腔細胞的細胞種比例，也無法確認格氏乳桿菌0LL2809的有顯著性的給予效果。因此，測定了腹腔細胞的基因表達量。結(jié)果，IL-2與通常組相比，在對照組中可見有顯著性的低值(圖2 (A))。與此相對，在0LL2809組和IL-12給予組中，其表達量回復、顯示與通常組為同等程度的值(圖2 (B))。已清楚IL-2基因主要是Thl細胞所產(chǎn)生的細胞因子，其促進B細胞或T細胞、NK細胞等的分化、增殖，且在大鼠中可抑制子宮內(nèi)膜異位癥(Velasco I, Quereda F, BermejoR, Campos A, and Acien P.1ntraperitoneal recombinant interleukin_2activatesleukocytes in rat entomentriosis.J.Reprod.Tmmunol., 74, 124-132 (2006)等X IL-2基因表達量通過格氏乳桿菌0LL2809的給予而增加，從而驗證了本發(fā)明的預防/改善劑的有效性。此外，對于NK 細胞活化標記物之一的 NCRl (Natural cytotoxicity triggeringreceptor I,自然細胞毒作用觸發(fā)性受體1)，可見基因表達量的顯著性增加。NCRl在人中還作為Ly94或NKp46而已知，已清楚在經(jīng)活化的NK細胞表面上表達。在測定基因表達量時，從各個體采集相同數(shù)量的腹腔細胞、使用由同濃度的總RNA制備的cDNA。此外，在利用FACS的腹腔細胞的種群分析中，未見NK細胞數(shù)有組間差異。因此，作為NK活性本身，雖未見格氏乳桿菌0LL2809給予所引起的顯著性提高，但在基因水平的分析中，啟示各個細胞的活性提聞。因此可知，含有格氏乳桿菌0LL2809的本發(fā)明預防/改善劑具有子宮內(nèi)膜病變的生長抑制效果。[實施例2]在以下的實施例2中，研究了本發(fā)明的預防/改善劑對子宮內(nèi)膜異位癥病患者的月經(jīng)痙攣及痛經(jīng)的改善效果。以診斷為子宮內(nèi)膜異位癥、滿足以下選擇標準且不符合排除標準的患者作為受試者。子宮內(nèi)膜異位癥的診斷標準根據(jù)《6th Obstetrics and Gynecology, 2003 (publishedby People，s Me dical Publishing House)》。即，當可見下述(I) (5)中的I個癥狀且可見(6)或(7)中任一種體征時，判斷為患病。癥狀:
(I)緩慢發(fā)展的持續(xù)性痛經(jīng)、(2)非月經(jīng)時的下腹部或骨盆痛、(3)性交引起的不舒服感或疼痛、(4)間歇性腹瀉、便秘、肛門的里急后重、(5)不孕。體征:(6)直腸子宮陷凹(rectouterine pouch)結(jié)節(jié)、子宮后壁下部的子宮骶韌帶的結(jié)節(jié)、(7)附著在子宮附件周圍的囊性腫塊。選擇標準:(I)年齡在18 45歲的患者、(2)每月有月經(jīng)、周期為28±3日的患者。排除標準:
(I)過去3個月內(nèi)接受了激素療法的患者、(2)有嚴重肝臟疾病、腎臟疾病、心肌梗塞或血液疾病的既往史的患者、(3)患有惡性腫瘤的患者或疑似患有惡性腫瘤的患者、(4) CA-125 為 100IU/ml 以上的患者、(5)在腹膜的切開部發(fā)生了子宮內(nèi)膜病變的患者、(6)在乳制品攝入后發(fā)生腹 與癥狀的患者、(7)接受過敏性疾病治療的患者、(8)攝取認為對試驗結(jié)果有影響的藥物(便秘改善藥或胃腸藥等)的患者、(9)每周攝取4日以上認為對試驗結(jié)果有影響的食品(含有乳酸菌的發(fā)酵乳或飲料等)的患者。中止 退出標準:(I)自愿拒絕試驗繼續(xù)的受試者、(2)在過程中未跟蹤經(jīng)過的受試者、(3)未遵守規(guī)則的受試者、(4)發(fā)生嚴重并發(fā)癥或副作用的受試者、(5)試驗片劑的攝取量為指定量的80%以下或120%以上的受試者。根據(jù)以上標準，將診斷為患有子宮內(nèi)膜異位癥的66人作為受試者。其中，62人完成了試驗，最終安慰劑組的分析對象為33人、活性劑組的分析對象為29人。由與試驗無直接相關的控制者將滿足上述選擇、排除標準的受試者隨機地分為安慰劑組和活性劑組。各受試者依次為活性劑組每日攝取2片含有本發(fā)明格氏乳桿菌0LL2809的預防/改善劑的活性片、安慰劑組攝取12周(3個性周期)安慰劑片。各受試者在開始試驗前、在開始攝取的1、2、3個月后每月I次通過問診等進行監(jiān)測，同時進行下述評價項目的記錄。對以下的評價項目設定各評分，進行評價。第一評價項目:在月經(jīng)期間中，利用視覺模擬評分法(VAS)和痛經(jīng)評分評價主觀疼痛的程度。
第二評價項目:月經(jīng)時以外的VAS和骨盆痛的總得分。將各得分示于表I。[表I]痛經(jīng)總得分(痛經(jīng)的程度得分和鎮(zhèn)痛藥的使用得分之和)
權(quán)利要求
1.一種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防及改善這兩者或任一者的藥劑，其是含有乳酸菌而成的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。
5.一種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防及改善這兩者或任一者的飲食品組合物，其是含有有效量的乳酸菌而成的。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobaci IIus)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飲食品組合物，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的飲食品組合物，其特征在于，飲食品組合物為發(fā)酵乳飲食品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的飲食品組合物，其特征在于，發(fā)酵乳飲食品為酸奶。
11.一種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防及改善這兩者或任一者的方法，其特征在于，給予期望量的含有有效量的乳酸菌的組合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。
15.根據(jù)權(quán)利要求11 14中任一項所述的方法，其中，所述給予量為至少2mg/kg/日。
16.一種用于對子宮內(nèi)膜異位癥進行預防及改善這兩者或任一者的乳酸菌。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的乳酸菌,其中,所述乳酸菌為乳桿菌屬(Lactobacillus)。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的乳酸菌,其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri)。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的乳酸菌,其中，所述乳酸菌為格氏乳桿菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。
全文摘要
本發(fā)明提供一種含有屬于乳酸菌的乳桿菌屬(Lactobacillus)、特別是格氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)OLL2809株的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善劑。另外，本發(fā)明還提供含有該乳酸菌的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善用飲食品組合物以及以給予該乳酸菌為特征的子宮內(nèi)膜異位癥的預防和/或改善方法。
文檔編號A61P15/08GK103249421SQ20118005718
公開日2013年8月14日 申請日期2011年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月29日
發(fā)明者伊藤裕之, 指原紀宏, 池上秀二, 紀再思, 內(nèi)田勝幸 申請人:株式會社明治