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調(diào)節(jié)PD1的方法和組合物與流程

文檔序號(hào):11995333閱讀:來源:國知局
調(diào)節(jié)PD1的方法和組合物與流程

技術(shù)特征:
1.一種與PD1基因中的靶位點(diǎn)結(jié)合的鋅指蛋白,所述鋅指蛋白包含5或6個(gè)鋅指蛋白識(shí)別序列,從N-末端到C-末端排列,其中所述識(shí)別區(qū)域包含以下氨基酸序列:(i)F1:RSSALSR(SEQIDNO:23);F2:RPLALKH(SEQIDNO:24);F3:RNDHRKN(SEQIDNO:12);F4:TRPVLKR(SEQIDNO:25);和F5:DRSALAR(SEQIDNO:9);其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(ii)F1:RPSTLHR(SEQIDNO:27);F2:RSDELTR(SEQIDNO:28);F3:RNNNLRT(SEQIDNO:29)或TNWHLRT(SEQIDNO:30)或RTPHLTL(SEQIDNO:31)或RSAQLAT(SEQIDNO:32)或RCTHLYL(SEQIDNO:33)或RPTQRYS(SEQIDNO:34)或RANHREC(SEQIDNO:35)或RMGRLST(SEQIDNO:39)或RANHRVC(SEQIDNO:42)或RSTHLLG(SEQIDNO:43);F4:TRPVLKR(SEQIDNO:25);和DRSALAR(SEQIDNO:9),其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(iii)F1:RKFARPS(SEQIDNO:36);F2:RNFSRSD(SEQIDNO:37);F3:HPHHRMC(SEQIDNO:38);F4:TRPVLKR(SEQIDNO:25);和F5:DRSALAR(SEQIDNO:9),其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(iv)F1:RPSTLHR(SEQIDNO:27);F2:RSDELTR(SEQIDNO:28);F3:RHSRLTT(SEQIDNO:40);F4:TRPVLMR(SEQIDNO:41);和F5:DRSALAR(SEQIDNO:9),其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(v)F1:RNAALTR(SEQIDNO:45);F2:RSDELTR(SEQIDNO:28);F3:RSCGLWS(SEQIDNO:44)或RHHHLAA(SEQIDNO:48);RPMHLTN(SEQIDNO:49);或RSPHLYH(SEQIDNO:50);或RLPALLS(SEQIDNO:53),F(xiàn)4:TRPVLKR(SEQIDNO:25);和F5:DRSALAR(SEQIDNO:9),其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(vi)F1:RNAALTR(SEQIDNO:45);F2:RSDELTR(SEQIDNO:28);F3:RCEALHH(SEQIDNO:51)F4:TRPVLKR(SEQIDNO:25);和F5:DRSAQAR(SEQIDNO:52)或DRSALAR(SEQIDNO:9),其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(vii)F1:HNAALTR(SEQIDNO:54);F2:RSDELTR(SEQIDNO:28);F3:RTYNRTQ(SEQIDNO:55);F4:TRPVLKR(SEQIDNO:25);和F5:DRSALAR(SEQIDNO:9),其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:60所示的靶位點(diǎn);(viii)F1:DDWNLSQ(SEQIDNO:22);F2:RSANLTR(SEQIDNO:17);F3:TSGSLSR(SEQIDNO:61);F4:QSGDLTR(SEQIDNO:62);和F5:QSSDLRR(SEQIDNO:63);其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:75所示的靶位點(diǎn);(vix)F1:QSSHLTR(SEQIDNO:64);F2:RSDNLRE(SEQIDNO:65);F3:DRSNLSR(SEQIDNO:20);F4:TSSNRKT(SEQIDNO:19);F5:RSDSLSK(SEQIDNO:66);和F6:QSANRTT(SEQIDNO:80);其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:76所示的靶位點(diǎn);(x)F1:QSGDLTR(SEQIDNO:62);F2:RSDNLSE(SEQIDNO:67);F3:ERANRNS(SEQIDNO:68);F4:DRSDLSR(SEQIDNO:69);和F5:QSSDLRR(SEQIDNO:63);其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:77所示的靶位點(diǎn);(xi)F1:DRSHLAR(SEQIDNO:70);F2:RSDDLSR(SEQIDNO:71);F3:QSANRTK(SEQIDNO:72);F4:RSDTLSE(SEQIDNO:73);和F5:ANSNRIK(SEQIDNO:74);其中所述鋅指蛋白結(jié)合SEQIDNO:78所示的靶位點(diǎn)。2.一種融合蛋白,其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的鋅指蛋白和功能結(jié)構(gòu)域。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合蛋白,其中所述功能結(jié)構(gòu)域包括轉(zhuǎn)錄調(diào)控結(jié)構(gòu)域。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的融合蛋白,其中所述轉(zhuǎn)錄調(diào)控結(jié)構(gòu)域?yàn)榛罨Y(jié)構(gòu)域或抑制結(jié)構(gòu)域。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合蛋白,其中所述功能結(jié)構(gòu)域包括裂解結(jié)構(gòu)域或裂解半結(jié)構(gòu)域。6.一種多核苷酸,其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的鋅指蛋白或根據(jù)權(quán)利要求2-5中任一項(xiàng)所述的融合蛋白。7.一種在體外調(diào)節(jié)PD1基因在細(xì)胞中的表達(dá)的方法,所述方法包括在以便調(diào)節(jié)PD1基因表達(dá)的條件下,將至少一種根據(jù)權(quán)利要求6所述的多核苷酸引入所述細(xì)胞中。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其中所述調(diào)節(jié)包括活化,通過裂解PD1基因抑制或滅活。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中在裂解所述PD1基因后經(jīng)非同源末端連接(NHEJ)進(jìn)行滅活。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中所述調(diào)節(jié)包括通過裂解滅活并且進(jìn)一步地,其中所述方法包括將兩側(cè)是與所述PD1基因有同源性的序列的外源序列引入所述細(xì)胞中,其中通過同源重組將所述外源序列整合至所述PD1基因中。11.根據(jù)權(quán)利要求8-10中任一項(xiàng)所述的方法,其中所述細(xì)胞為原代細(xì)胞或干細(xì)胞。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法,其中所述原代細(xì)胞為外周血單核細(xì)胞(PBMC)、CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞,或所述干細(xì)胞為胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、造血干細(xì)胞、神經(jīng)元干細(xì)胞或間充質(zhì)干細(xì)胞。
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