專利名稱：硫氰酸紅霉素明膠微球制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種硫氰酸紅霉素明膠微球制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
緩釋、控釋制劑又稱為緩釋控釋給藥系統(tǒng)，它們不需頻繁給藥，能有效地減少對患病動(dòng)物的給藥量，此外，緩釋控釋藥物能降低血藥濃度的波動(dòng)，使其在人體內(nèi)保持平穩(wěn)血藥濃度，大大提高了藥效和降低毒副作用。然而國內(nèi)外肺靶向微球的研究中，關(guān)于載體材料的選擇和微球的制備還存在一些問題如白蛋白價(jià)格昂貴且儲(chǔ)存條件要求較高，不適合獸藥制劑的研發(fā)，PLGA的降解速度較慢，不能短期從肺中清除，韓冰等制備紫杉醇PLGA微球研究發(fā)現(xiàn)其體外釋藥可以維持30d。目前微球的制備方法主要有單凝聚法、乳化化學(xué)交聯(lián)法及噴霧干燥法等。噴霧干燥法需要特殊的儀器設(shè)備，且制備過程中所需溫度較高(> 100°C )，明膠在此條件下會(huì)快速水解而發(fā)生性質(zhì)的改變，從而影響微球的機(jī)械強(qiáng)度；單凝聚法是用降溫或加入凝聚劑等手段使明膠溶液發(fā)生分離，明膠溶解度降低而析出，丁素麗等在明膠溶液中滴加丙酮使明膠發(fā)生凝聚，再用戊二醛交聯(lián)得到明膠微球；乳化化學(xué)交聯(lián)法是在攪拌或超聲等外力作用下，使明膠溶液在不相混溶的油相中分散乳化成小液滴，再降溫冷卻交聯(lián)固化成球。這種方法通過對各種影響因素的配比進(jìn)行優(yōu)化，增強(qiáng)乳液穩(wěn)定性，改善微球制劑粒徑分布，并降低變形或聚集的微球數(shù)量。硫氰酸紅霉素屬于大環(huán)內(nèi)酯類藥物，在臨床上主要有注射制劑和可溶性粉兩種制劑類型，普通的制劑給藥吸收后廣泛的分布于全身各組織和體液中，在膽汁中濃度最高，可引起肝臟損害等不良反應(yīng)。目前硫氰酸紅霉素的主要?jiǎng)┬褪强扇苄苑酆图∪庾⑸渲苿?，給藥后廣泛分布于全身，藥物利用率較低且對肝臟有毒害作用，本發(fā)明以微球?yàn)檩d體，通過被動(dòng)靶向到肺中發(fā)揮藥效，有效地降低了其余健康組織的含藥量，降低毒副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)缺陷，提供一種設(shè)備要求簡單，成本低的硫氰酸紅霉素明膠微球制劑的制備方法。硫氰酸紅霉素主要用于治療革蘭氏陽性菌和支原體感染，但該藥物被吸收后廣泛分布于全身各組織和體液中，尤其是膽汁中濃度最高。本發(fā)明以 A型明膠為載體，采用乳化化學(xué)交聯(lián)法制備粒徑為7-20 μ m的微球，通過肺部毛細(xì)血管的機(jī)械性截留達(dá)到肺靶向的效果，避免了對肝臟的毒害作用。其技術(shù)方案為一種硫氰酸紅霉素明膠微球制劑的制備方法，其具體步驟為精確稱取1. 56g明膠、0357g Tween80和0. 69g硫氰酸紅霉素溶于IOml的經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾的雙蒸水中，于 58°C水浴中加熱攪拌溶解作為水相，加入到含有1743g span85的60ml液體石蠟中，IOOOr/ min，58°C磁力攪拌25min，轉(zhuǎn)移到5_10°C的冰水浴中1000r/min繼續(xù)攪拌15min，加入戊二醛固化6h，2000rpm離心，去下層沉淀用石油醚和異丙醇洗滌2次，加入甘氨酸洗滌lOmin， 異丙醇洗滌2次，冷凍干燥得淡黃色粉末。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為(1)本發(fā)明所述技術(shù)方案以微球?yàn)檩d體提高了硫氰酸紅霉素的生物利用度，減少了藥物用量。(2)本發(fā)明的制備方法簡單，成本較低，且微球粒徑符合要求(7-30μπι)，靜脈注射后被動(dòng)靶向于肺。(3)本發(fā)明所述方法制備出的硫氰酸紅霉素明膠微球在豬霉形體肺炎的療效試驗(yàn)表明，硫氰酸紅霉素明膠微球(相當(dāng)于硫氰酸紅霉素^rig/kg)注射組治愈率80%，有效率 93% ；普通硫氰酸紅霉素常規(guī)注射劑(相當(dāng)于硫氰酸紅霉素3mg/Kg)治愈率67%，有效率為87% ；陰性對照組治愈率0%，有效率0%，本發(fā)明制備的硫氰酸紅霉素明膠微球臨床效果顯著好于普通注射劑組和陰性對照組。


圖1硫氰酸紅霉素明膠微球的粒徑分布范圍；圖2硫氰酸紅霉素明膠微球的光學(xué)顯微鏡照片(*100)；圖3硫氰酸紅霉素明膠微球在釋放介質(zhì)中的溶出度曲線。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。精確稱取1. 56g明膠、0. 357g Tween80和0. 69g硫氰酸紅霉素溶于IOml的經(jīng) 0. 22 μ m濾膜過濾的雙蒸水中，于58°C水浴中加熱攪拌溶解作為水相，加入到含有1. 743g span85的60ml液體石蠟中，1000r/min，58°C磁力攪拌25min，快速轉(zhuǎn)移到5_10°C的冰水浴中l(wèi)OOOr/min繼續(xù)攪拌15min，加入戊二醛固化他，2000rpm離心，去下層沉淀用石油醚和異丙醇洗滌2次，加入甘氨酸洗滌lOmin，異丙醇洗滌2次，冷凍干燥得淡黃色粉末。取適量微球于載玻片上，覆以蓋玻片，滴加石油醚輕壓使微球分散均勻，100倍油鏡下觀察，對微球的粒徑和表面形態(tài)進(jìn)行考察，如圖1 ；去適量微球均勻分散在IOOml水中， 取細(xì)1于BT9300-H激光粒度分布儀下考察其粒徑分布范圍，圖2所示，微球平均粒徑為 12. 51 μ m，微球的粒徑在3-7 μ m之間占總數(shù)的10%，7-10 μ m占總數(shù)的9%，10-20 μ m占總數(shù)的73%，20- μ m占總數(shù)的7%,體外釋放度的考察精密稱取含藥微球和硫氰酸紅霉素原料藥各200mg，分別裝入透析袋中，加入5ml的PBS釋放介質(zhì)(pH= 7. 4)，置于加有釋放介質(zhì)495ml的燒杯中， 37士0. 5°C、100r/min 恒溫?cái)嚢?，分別于第 0. 083,0. 17,0. 25,0. 5,0. 75、1、2、4、8、12、24、 48h取樣HPLC檢測，同時(shí)補(bǔ)充等量的釋放介質(zhì)，檢測后計(jì)算累積釋放度，繪制體外釋放累積曲線。檢測發(fā)現(xiàn)硫氰酸紅霉素微球在Ih處藥物釋放量達(dá)到52 %，之后釋放緩慢，在第4 釋藥率達(dá)到94. 5 %，其釋藥曲線見圖3，由曲線可知該微球具有良好的緩釋效果，以In(I-Q) 對時(shí)間t作圖經(jīng)回歸處理得到釋藥方程，In(I-Q) = -0. 0533t+4. 1654 (R2 = 0. 9573)，Q為累積釋藥百分率，，可見In(I-Q)與時(shí)間(t)相關(guān)系良好，故可推論該微球在pH = 7. 4的緩沖溶液中屬一級(jí)釋藥。
按照本發(fā)明上述的方法制備硫氰酸紅霉素明膠微球臨床藥效學(xué)研究考察。試驗(yàn)方法將診斷為豬霉形體肺炎的病豬隨機(jī)分為三組，每組15頭。A組注射硫氰酸紅霉素明膠微球(相當(dāng)于硫氰酸紅霉素:3mg/kg)，一天一次，連用三天；B組注射硫氰酸紅霉素注射液(相當(dāng)于硫氰酸紅霉素:3mg/kg)，一天一次，連用三天；C組為陰性對照組，不給任何藥物治療。療效判定治愈用藥后，豬霉形體各種臨床癥狀消失，且停藥后20天內(nèi)不復(fù)發(fā)，稱為治愈， 根據(jù)各組治愈數(shù)計(jì)算治愈率有效經(jīng)注射給藥后完全治愈的和沒有死亡但有臨床癥狀表現(xiàn)者均為有效；試驗(yàn)結(jié)束后，每組存活的頭數(shù)占試驗(yàn)數(shù)的百分率為有效率。數(shù)據(jù)處理和分析用生物統(tǒng)計(jì)進(jìn)行數(shù)據(jù)進(jìn)行死亡率、有效率和治愈率的顯著性檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果硫氰酸紅霉素肺靶向微球臨床藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，表1硫氰酸紅霉素肺靶向明膠微球和常規(guī)注射劑對豬霉形體肺炎的療效比較
權(quán)利要求
1. 一種硫氰酸紅霉素明膠微球制劑的制備方法，其特征在于，其具體步驟為精密稱取1. 56g明膠、0. 357g Tween80和0. 69g硫氰酸紅霉素溶于IOml的經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾的雙蒸水中，于58°C水浴中加熱攪拌溶解作為水相，加入到含有1. 743g span85的60ml液體石蠟中，1000r/min, 58°C磁力攪拌25min，轉(zhuǎn)移到5_10°C的冰水浴中1000r/min繼續(xù)攪拌 15min,加入戊二醛固化6h，2000rpm離心，去下層沉淀用石油醚和異丙醇洗滌2次，加入甘氨酸洗滌lOmin，異丙醇洗滌2次，冷凍干燥得淡黃色粉末。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種硫氰酸紅霉素明膠微球制劑的制備方法，該方法利用明膠為載體，液體石蠟為油相，Span85和Tween80作為混合乳化劑，在機(jī)械的攪拌下形成W/O乳液，低溫冷卻戊二醛交聯(lián)固化形成7-20μm微球，就靜脈給藥而言，微球混懸劑經(jīng)靜注后，首先將與直徑為3-11μm的肺部毛細(xì)血管網(wǎng)接觸，而被肺部有效截獲，微球內(nèi)的藥物緩慢釋放，獲得平穩(wěn)長期的有效濃度。本發(fā)明采用乳化縮聚法制備，設(shè)備要求簡單，制備成本較低，易于推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P11/00GK102525946SQ20121000777
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者劉煥奇, 張啟迪, 曲志娜, 畢可東, 鄒明, 錢澤升 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)