專利名稱：一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，同時還涉及一種上述方法提取的降糖制劑在制備治療或預(yù)防糖尿病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中華醫(yī)學會糖尿病學分會組織于2007年6月至2008年5月期間完成的中國成年人糖尿病患病率調(diào)查顯示年齡標化的總糖尿病患病率是9. 7%;糖尿病前期(空腹血糖受損禾口糖耐量受損)是 15. 5% (Prevalence of diabetes among men and women in China. NEng J Med. 2010 ;362 (12) :1090-1101.)。世界衛(wèi)生組織2011年9月發(fā)布的糖尿病第 312號實況報道指出，糖尿病發(fā)展下去，可能損害心臟、血管、眼睛、腎臟和神經(jīng)。并估計，在 2006-2015年期間，僅因糖尿病及其并發(fā)癥，中國就將損失預(yù)計的國民收入5580億美元。如何盡早治療糖尿病，減少其并發(fā)癥的發(fā)生是當前醫(yī)藥界最迫切需要解決的難題之一?，F(xiàn)有的藥物治療可以抑制血糖升高，但是往往會產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥及其他副作用，如使血糖過低， 或給腎臟功能造成障礙等，最終不得不選擇胰島素注射治療，該療法價格昂貴，且往往會被患者不當使用，反而加快了糖尿病的進程。糖尿病的發(fā)生機制十分復(fù)雜，涉及到多個組織和器官，理想的治療藥物應(yīng)是多靶點的在消化道抑制α-葡萄糖苷酶，減少單糖的產(chǎn)生；在小腸降低葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白 2(Glut2)的表達，抑制糖類的吸收；在肌肉，促進細胞對葡萄糖的攝取，迅速降低血糖；在脂肪，抑制脂肪細胞分化和脂肪酸的合成，減少脂質(zhì)在細胞內(nèi)的堆積；在胰島，提高胰島素分泌，多靶點同時作用才能有效地預(yù)防和治療糖尿病。針對上述機理，本發(fā)明將明日草、豆豉和辣椒科學地組合起來。明日草(Angelica keiskei)屬饊形花科，是一種多年生草本植物，富含查爾酮、 黃酮，具有很強的藥用保健作用。在日本，明日草被當做防治糖尿病的保健食品廣泛使用。 動物實驗研究表明，明日草能夠提高骨骼肌細胞對葡萄糖的攝取能力，從而發(fā)揮一定的降糖功效(Antidiabetic activities of chalcones isolated from a Japanese Herb, Angelica keiskei. J Nutr Sci Vitaminol. 2007 ；53 (2) :133-137. Prenylated chalcones 4-hydroxyderricin and xanthoangelol stimulate glucose uptake in skeletal muscle cells by inducing GLUT4translocation. Mol Nutr Food Res. 2011 ；55(3) :467-75.)。豆豉為豆科植物大豆(Glycine max)種子的發(fā)酵加工品。它是一種無副作用， 價格便宜，含有多種維生素、酶和氨基酸的傳統(tǒng)健康食品。目前日本研制出了豆豉作為降糖的保健食品。研究資料表明豆豉中的大豆肽能使小腸中的α-葡萄糖苷酶活力下降， 從而使由淀粉和砂糖消化生成的單糖減少，能減緩小腸對糖份的吸收，所以只能吸收單糖的小腸無法快速吸收糖份了，從而能防止餐后血糖迅速上升。另外豆豉中的異黃酮能加速脂肪細胞的分解，改善脂類代謝，改善糖尿病的癥狀(Efficacy and safety of Touchi extract, an alpha—glucosidase inhibitor derived from fermented soybeans, innon-insulin-dependent diabetic mellitus. J Nutr Biochem. 2001 ；12(6) :351-356.)。辣椒(Chillies)是一種茄科辣椒屬植物。辣椒對糖尿病的防治有益。辣椒中含有豐富的辣椒素。研究表明辣椒中的辣椒素可使脂肪細胞中辣椒素受體表達上調(diào)，促進[Ca2+] i升高，并引起細胞內(nèi)PPARy等多種肥胖相關(guān)因子的表達改變，從而抑制脂肪細胞分化和脂肪酸的合成，減少脂質(zhì)在細胞內(nèi)的堆積(Activation of transient receptor potential vanilloid type-1 channel prevents adipogenesis and obesity. Circ Res. 2007 ； 100(7) :1063-1070.)。試驗表明，服用辣椒素的動物比沒有服用辣椒素的動物血糖明顯降低，同時測得的血胰島素濃度則明顯升高。因此，辣椒中的辣椒素可能提高了胰島素的分泌量，也有可能是延長了胰島素的作用時間(Dietary Red Chilli (Capsicum frutescens L.) is Insulinotropic rather than Hypoglycemic in Type 2 Diabetes Model of Rats. Phytother Res. 2008 ；22(8) : 1025—1029.)。明日草、豆豉和辣椒單用均有一定的降糖保健功能，但效果不強，目前只能開發(fā)成保健食品輔助患者提高生活質(zhì)量，無法開發(fā)成藥物，目前也沒有將明日草、豆豉和辣椒制成復(fù)方制劑用于治療糖尿病的相關(guān)報道。因此，本發(fā)明將明日草、豆豉和辣椒組合開發(fā)，制成降糖制劑以治療糖尿病，明日草能抑制小腸Glut2的活性，減少小腸對糖的吸收，明日草還能夠提高細胞對血中葡萄糖的攝取，降低胰島素抵抗程度；豆豉抑制α -葡萄糖苷酶活性，減少小腸對糖的消化；再者， 適量的辣椒能阻止脂肪細胞分化和脂肪酸的合成，減少脂質(zhì)在細胞內(nèi)的堆積，并具有提高胰島效能的作用。明日草、豆豉和辣椒結(jié)合，優(yōu)勢互補，將發(fā)揮多靶點治療糖尿病的功效，提高血胰島素水平，降低血糖水平。本發(fā)明將滿足廣大病人的需要，預(yù)計會有很好的經(jīng)濟效益和社會效益。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的第一個目的在于提供了一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，明日草采用乙醇水溶液提取，濃縮，干燥，得到明日草浸膏粉；豆豉采用水煎煮，濃縮，干燥得到豆豉浸膏粉；辣椒采用乙醇水溶液提取，濃縮，干燥，得到辣椒浸膏粉；將上述所得浸膏粉按一定的重量比混勻，然后粉碎，過篩，加入輔料制粒即可。本發(fā)明方法提取出了明日草、豆豉和辣椒中的有效成分，且易于實施。本發(fā)明的第二個目的在于提供了一種利用上述方法從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑在制備治療或預(yù)防糖尿病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的降糖制劑對糖尿病具有很好的預(yù)防和治療作用。本申請的發(fā)明人多年來一直致力于糖尿病的臨床治療和植物活性成分的研究工作。長期的研究和大量的實驗結(jié)果證實，與現(xiàn)有的主流療法相比，從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑對糖尿病的預(yù)防和治療具有效果好、副作用小、價格便宜等優(yōu)勢。 本發(fā)明中，降糖制劑治療糖尿病的機制在于①豆豉抑制α-葡萄糖苷酶活性，減少小腸對糖的消化；②明日草抑制小腸Glut2的活性，減少小腸對糖的吸收；③明日草提高細胞對血中葡萄糖的攝取降低血糖；④辣椒減少脂肪細胞分化和脂肪酸的合成，減少脂質(zhì)在細胞內(nèi)的堆積。⑤辣椒還能升高血胰島素濃度。當然，除了上述五種機制之外，明日草、豆豉、辣椒在機制上還存在著相互重疊、共同促進的作用。應(yīng)用從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑防治糖尿病既開發(fā)了單用明日草、豆豉或辣椒無法達到的良好降糖效果，形成優(yōu)勢互補，亦能在臨床治療方面給糖尿病患者帶來福音。為了實現(xiàn)上述第一個目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)措施一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，其步驟是(1)明日草浸膏的制備取干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-10L/kg倍的70_80v/ 乙醇，70-80°C回流提取2-3次，每次1-2小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到明
日草浸膏粉；(2)豆豉浸膏的制備取干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加7_15L/kg倍的水，90_100°C煎煮2-3 次，每次1-1. 5小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到豆豉浸膏粉；(3)辣椒粉浸膏的制備取干燥的紅辣椒，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7_15L/kg倍的75-95V/V% 乙醇，70-800C回流提取2-3次，每次1. 5-2小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辣椒
浸膏粉；(4)將步驟⑴得到的明日草浸膏粉、步驟(2)得到的豆豉浸膏粉、步驟(3)得到的辣椒浸膏粉，按照50-100 10-50 1的重量比進行混合，然后80目粉碎，得混合浸膏粉；(5)向步驟(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉與糊精混合物，混合物中淀粉、糊精重量比為4 1，再加入95v/v%的乙醇制成軟材，制粒即得。本發(fā)明的第二個目的通過以下技術(shù)措施得以實現(xiàn)一種從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑在制備治療或預(yù)防糖尿病藥物中的應(yīng)用，其基本過程是將提取得到的明日草、豆豉和辣椒的浸膏粉制成的降糖制劑，臨用前加水溶解至所需濃度的溶液，再經(jīng)口給藥，間隔一定時間后重復(fù)給藥。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果1、明日草采用乙醇水溶液提取，將提取液濃縮、干燥；豆豉采用水煎煮，將提取液濃縮、干燥；辣椒采用乙醇水溶液提取，將提取液濃縮、干燥；整個制備工藝簡單，提取方法易于實施；2、將明日草、豆豉和辣椒科學地組合在一起，多靶點共同作用，比單用更有效，實驗證明具有良好的降糖效果；3、明日草、豆豉和辣椒單品使用均未發(fā)現(xiàn)毒副作用，源自天然，更易為患者接受。


圖1明日草、豆豉和辣椒降糖制劑降低糖尿病大鼠血糖水平。x±s, η = 4,空白對照組，□；模型對照組，議；低劑量治療組，目;中劑量治療組，皿; 高劑量治療組，囟。與空白對照組相比，乍< 0. 05 ；與模型對照組比/P < 0. 05。與空白對照組相比，模型對照組血糖水平明顯升高(P < 0. 05)，說明造模成功。與模型對照組相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制劑(中劑量和高劑量組)均有明顯的增加降糖作用，使血糖恢復(fù)至正常水平。
圖2明日草、豆豉和辣椒降糖降糖制劑提高糖尿病大鼠血胰島素水平。
x±s,n = 4，空白對照組，□；模型對照組，議；低劑量治療組，目;中劑量治療組，皿;高劑量治療組，囟。與空白對照組相比，乍< 0. 05 ；與模型對照組比/P < 0. 05。與空白對照組相比，模型對照組胰島素水平明顯降低(P <0.05)，說明造模成功。與模型對照組相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制劑組均能在一定程度上提高胰島素水平，其中低劑量組能顯著提高血胰島素水平(P < 0. 05)。圖3明日草、豆豉和辣椒降糖制劑恢復(fù)糖尿病大鼠肝糖原水平。x±s, η = 4,空白對照組，□；模型對照組，議；低劑量治療組，目;中劑量治療組，皿; 高劑量治療組，囟。與空白對照組相比，乍< 0. 05 ；與模型對照組比/P < 0. 05。與空白對照組相比，模型對照組肝糖原含量水平明顯增加(P < 0. 05)，說明造模成功。與模型對照組相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制劑組均能在一定程度上降低肝糖原含量，其中高劑量組能顯著降低肝糖原含量(P < 0. 05)，使其基本恢復(fù)正常水平。圖4明日草、豆豉和辣椒降糖制劑降低糖尿病大鼠小腸黏膜葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2表達水平。Α、各組典型的DAB染色圖，上方為原圖(DAB和蘇木精復(fù)染)，下方為單獨剝離出 DAB發(fā)色圖；B、Nuance多光譜成像系統(tǒng)對DAB發(fā)色光密度值分析結(jié)果，[士s，η = 4，空白對照組，□；模型對照組，ι低劑量治療組，目；中劑量治療組，圓；高劑量治療組，囟。與模型對照組比，flP < 0. 05。與空白對照組相比，模型對照組小腸黏膜葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2表達水平增加。與模型對照組相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制劑組均能在一定程度上降低小腸黏膜葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(GluU)表達水平，其中，中劑量組能顯著降低Glut2表達水平(P<0. 05)， 使其基本恢復(fù)正常水平。
具體實施例方式下面，申請人將結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明方法及其應(yīng)用做進一步的詳細說明， 應(yīng)理解，以下內(nèi)容不以任何方式對本發(fā)明的保護范圍加以限制。實施例1 一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，其步驟是(1)明日草浸膏的制備取5kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7L/kg倍(即35L) 的70% (ν/ν)乙醇，70°C回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到明日草浸膏粉1080. 7g，測得此浸膏粉中查爾酮含量為0. 34% (w/w)，備用。(2)豆豉浸膏的制備取Ikg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加10L/kg倍(即10L)的水，90°C煎煮3次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到豆豉浸膏粉253. lg，測得此浸膏粉中總大豆肽的含量21.0% (w/w)，備用。(3)辣椒粉浸膏的制備取干燥的紅辣椒0. Ikg, 80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7L/kg倍(即0. 7L) 的75% (ν/ν)乙醇，70°C回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辣椒浸膏粉20. 6g，測得其中辣椒素的含量為0. 08% (w/w)，備用。
(4)取步驟⑴得到的明日草浸膏粉1kg、步驟⑵得到的豆豉浸膏粉200g、步驟 (3)得到的辣椒浸膏粉20g進行混合，重量比為50 10 1，80目粉碎，得混合浸膏粉；(5)向步驟(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉與糊精混合物(混合物中淀粉、糊精重量比4 1)，再加入4L 95% (ν/ν)乙醇，制成軟材，制粒即得。實施例2 一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，其步驟是(1)明日草浸膏的制備取5kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入10L/kg倍(即50L) 的75% (ν/ν)乙醇，75°C回流提取2次，每次1.5小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到明日草浸膏粉970. 7g，測得此浸膏粉中查爾酮含量為0. 35% (w/w)，備用。(2)豆豉浸膏的制備取2. 5kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加7L/kg倍(即17. 5L)水，95°C 煎煮2次，每次1. 5小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到豆豉浸膏粉649. 8g，測得此浸膏粉中總大豆肽的含量為20. 6% (w/w)，備用。(3)辣椒粉浸膏的制備取干燥的紅辣椒0. Ikg, 80目粉碎，置入提取罐中，每次加入10L/kg倍(即1L)的 85% (ν/ν)乙醇，75°C回流提取2次，每次1.5小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辣椒浸膏粉21. 0g，測得其中辣椒素的含量為0. 08% (w/w)，備用。(4)取步驟(1)得到的明日草浸膏粉500g、步驟(2)得到的豆豉浸膏粉500g、步驟 (3)得到的辣椒浸膏粉IOg進行混合，重量比為50 50 1，80目粉碎，得混合浸膏粉；(5)向步驟(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉與糊精混合物(混合物中淀粉、糊精重量比4 1)，再加入3L 95% (ν/ν)乙醇，制成軟材，制粒即得。實施例3 一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，其步驟是(1)明日草浸膏的制備取5kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入15L/kg倍(即75L) 的80% (ν/ν)乙醇，80°C回流提取2次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到明日草浸膏粉1046. 2g，測得此浸膏粉中查爾酮含量為0. 32% (w/w)，備用。(2)豆豉浸膏的制備取2kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加15L/kg倍(即30L)水，100°C煎煮2次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到豆豉浸膏粉501. 3g，測得此浸膏粉中總大豆肽的含量為22. (w/w)，備用。(3)辣椒粉浸膏的制備取干燥的紅辣椒0. Ikg, 80目粉碎，置入提取罐中，每次加入15L/kg倍(即1. 5L) 的95% (ν/ν)乙醇，80°C回流提取2次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辣椒浸膏粉23. 8g，測得其中辣椒素的含量為0. 08% (w/w)，備用。(4)取步驟(1)得到的明日草浸膏粉500g、步驟(2)得到的豆豉浸膏粉250g、步驟 (3)得到的辣椒浸膏粉5g進行混合，重量比為100 50 1，80目粉碎，得混合浸膏粉；(5)向步驟(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉與糊精混合物(混合物中淀粉、糊精重量比4 1)，再加入2.3L 95% (ν/ν)乙醇，制成軟材，制粒即得。實施例4 一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，其步驟是(1)明日草浸膏的制備取20kg干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入10L/kg倍(即 200L)的80% (ν/ν)乙醇，80°C回流提取2次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到明日草浸膏粉4394. 0g，測得此浸膏粉中查爾酮含量為0. 32% (w/w)，備用。(2)豆豉浸膏的制備取2kg干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加15L/kg倍(即30L)水，100°C煎煮2次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到豆豉浸膏粉510. 3g，測得此浸膏粉中總大豆肽的含量為22. (w/w)，備用。(3)辣椒粉浸膏的制備取干燥的紅辣椒0. 5kg, 80目粉碎，置入提取罐中，每次加入15L/kg倍(即7. 5L) 的95% (ν/ν)乙醇，80°C回流提取2次，每次1小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辣椒浸膏粉114. 2g，測得其中辣椒素的含量為0. 08% (w/w)，備用。(4)取步驟(1)得到的明日草浸膏粉4394g、步驟(2)得到的豆豉浸膏粉439. 4g、 步驟C3)得到的辣椒浸膏粉43. 94g進行混合，重量比為100 10 1，80目粉碎，得混合浸膏粉；(5)向步驟(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉與糊精混合物(淀粉、 糊精重量比4 1)，再加入15L 95% (ν/ν)乙醇，制成軟材，制粒即得。一種上述從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑在制備治療或預(yù)防糖尿病藥物中的應(yīng)用基本過程是臨用前將該降糖制劑加入水中，溶解至所需濃度的溶液，再經(jīng)口給藥，間隔一定時間后重復(fù)給藥。申請人對該降糖制劑作為制備治療或預(yù)防糖尿病藥物中的應(yīng)用進行了系列實驗驗證，結(jié)論是該制劑能顯著降低糖尿病小腸黏膜Glut2表達水平，降低血糖水平，恢復(fù)血胰島素水平，維持正常的肝糖原水平。實施例5 從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑降低糖尿病大鼠血糖水平1.動物SPF級Goto-Kakizaki雄性大鼠G 5周齡)，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司(動物許可證編號SCXK (滬)2007-0005)。大鼠自由飲水飲食，明暗周期為12小時。2.分組給藥空白對照組，喂養(yǎng)普通飼料(玉米73. 5%，麥麩20%，魚粉5%，谷粉1%，食鹽 0.5%)，灌胃生理鹽水10ml/kg體重/天；模型對照組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78.8%，膽固醇1 %，牛膽鹽0.2%，蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃給予生理鹽水10ml/kg體重/天；降糖制劑低、中、高劑量治療組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78. 8 %，膽固醇1 %，牛膽鹽0.2%， 蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃分別給予低、中、高劑量降糖制劑(由實施例1制得，臨用前加入水溶解至所需濃度(分別是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，劑量分別為 70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day，灌胃體積為 lml/100g 體重。4 個月后進行實驗。
3.血糖水平的測定大鼠尾靜脈采血測血糖，使用強生穩(wěn)豪型血糖儀(ONE TOUCH UltraEasy)及血糖試紙(購自強生上海醫(yī)療器械有限公司，血糖儀產(chǎn)品編號AW06477501B，血糖試紙產(chǎn)品編號YZB/USA0659-2010)測定。4.實驗結(jié)果血糖水平見圖1，與空白對照組相比，模型對照組血糖水平明顯升高(P < 0. 05)， 說明造模成功。與模型對照組相比，中高劑量明日草、豆豉和辣椒降糖制劑治療組均有明顯的降糖作用，使血糖恢復(fù)至正常水平。實施例6 從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑提高糖尿病大鼠血胰島素水平1.動物SPF級Goto-Kakizaki雄性大鼠G 5周齡)，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司(動物許可證編號SCXK (滬)2007-0005)。大鼠自由飲水飲食，明暗周期為12小時。2.分組給藥空白對照組，喂養(yǎng)普通飼料(玉米73. 5%，麥麩20%，魚粉5%，谷粉1%，食鹽 0.5%)，灌胃生理鹽水10ml/kg體重/天；模型對照組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78.8%，膽固醇1 %，牛膽鹽0.2%，蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃給予生理鹽水10ml/kg體重/天；降糖制劑低、中、高劑量治療組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78. 8 %，膽固醇1 %，牛膽鹽0.2%， 蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃分別給予低、中、高劑量降糖制劑(由實施例2制得，臨用前加入水溶解至所需濃度(分別是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，灌胃體積為 lml/100g 體重，劑量分別為 70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day。4 個月后進行實驗。3.血胰島素水平的測定放射免疫法測定血清空腹胰島素水平，胰島素放射免疫分析藥盒購自北京北方生物技術(shù)研究所。利用均相競爭抑制原理，采用平衡競爭法對血清或血漿進行直接測定。標準品或樣品中的胰島素和標記抗原共同與限量的特異性抗體進行競爭性免疫反應(yīng)。當樣品中胰島素濃度較高時，與抗體結(jié)合的標記抗原就少，反之，亦然。用免疫分離劑分離出抗原-抗體復(fù)合物，并測定結(jié)合物中的放射性。因標記抗原的結(jié)合量與樣品中胰島素呈一定的函數(shù)關(guān)系。因此，通過數(shù)學處理就能計算出樣品中的胰島素濃度。4.實驗結(jié)果胰島素水平見圖2，與空白對照組相比，模型對照組胰島素水平明顯降低(P < 0. 05)，說明造模成功。與模型對照組相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制劑治療組均能在一定程度上提高胰島素水平，其中低劑量組能顯著提高血胰島素水平(P < 0. 05)。實施例7 從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑恢復(fù)糖尿病大鼠肝糖原含量1.動物SPF級Goto-Kakizaki雄性大鼠G 5周齡)，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司(動物許可證編號SCXK (滬)2007-0005)。大鼠自由飲水飲食，明暗周期為12小時。
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2.分組給藥空白對照組，喂養(yǎng)普通飼料(玉米73. 5%，麥麩20%，魚粉5%，谷粉1%，食鹽 0.5%)，灌胃生理鹽水10ml/kg體重/天；模型對照組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78.8%，膽固醇1 %，牛膽鹽0.2%，蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃給予生理鹽水10ml/kg體重/天；降糖制劑低、中、高劑量治療組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78. 8 %，膽固醇1 %，牛膽鹽0.2%， 蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃分別給予低、中、高劑量降糖制劑(由實施例3制得，臨用前加入水溶解至所需濃度(分別是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，灌胃體積為 lml/100g 體重，劑量分別為 70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day。4 個月后進行實驗。3.肝糖原的測定采用肝糖原測試盒(購自南京建成生物工程研究所)。測定原理糖原在濃硫酸的作用下可脫水生成糖醛衍生物，后者再與蒽酮作用形成藍色化合物，與同法處理的標準葡萄糖溶液比色定量。糖原在濃堿溶液中非常穩(wěn)定，故在顯色之前先將組織放入濃堿溶液中加熱以破壞其他成分而保留糖原。4.實驗結(jié)果肝糖原水平見圖3，與空白對照組相比，模型對照組肝糖原含量水平明顯增加(P < 0. 05)，說明造模成功。與模型對照組相比，明日草、豆豉和辣椒降糖制劑治療組均能在一定程度上降低肝糖原含量，其中高劑量組能顯著降低肝糖原含量(P < 0. 05)，使其基本恢復(fù)至正常水平。實施例8:從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑降低糖尿病大鼠小腸黏膜葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2表達水平1.動物SPF級Goto-Kakizaki雄性大鼠G 5周齡)，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司(動物許可證編號SCXK (滬)2007-0005)。大鼠自由飲水飲食，明暗周期為12小時。2.分組給藥空白對照組，喂養(yǎng)普通飼料(玉米73. 5%，麥麩20%，魚粉5%，谷粉1%，食鹽 0.5% )，灌胃生理鹽水10ml/kg體重/天；模型對照組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78.8%， 膽固醇1%，牛膽鹽0.2%，蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃給予生理鹽水10ml/kg體重/ 天；降糖制劑低、中、高劑量治療組，喂養(yǎng)高脂飼料(普通飼料78. 8 %，膽固醇1 %，牛膽鹽 0.2%，蛋黃粉10%，豬油10% )，灌胃給予低、中、高劑量降糖制劑(由實施例4制得，臨用前加入水溶解至所需濃度(分別是7g/L、35g/L、70g/L)的溶液)。每天灌胃一次，灌胃體積為 lml/100g 體重，劑量分別為 70mg/kg/day、350mg/kg/day、700mg/kg/day。4 個月后處死動物，取小腸進行實驗。3.小腸黏膜葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2 (GluU)表達水平測定取新鮮小腸，4%甲醛固定后，常規(guī)技術(shù)石蠟包埋，4μπι切片，載玻片烤箱中60°C， 40min，二甲苯脫蠟，乙醇脫水，0. OlM檸檬酸鹽緩沖液修復(fù)抗原，血清封閉1小時后，Glut2 一抗孵育過夜，PBS洗脫3次后，二抗孵育3小時，DAB發(fā)色，然后蘇木精進行復(fù)染，中性樹脂封片，加蓋玻片，60°C 0. 5小時烘干。Nuance多光譜成像系統(tǒng)對DAB發(fā)色結(jié)果進行拍照和定量分析。4.實驗結(jié)果DAB發(fā)色照片見圖4-A，如圖所示，模型對照組DAB染色較空白對照組深，從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑治療組均能在一定程度上降低大鼠小腸黏膜Glut2表達水平，Nuance多光譜成像系統(tǒng)對DAB發(fā)色結(jié)果進行的定量分析結(jié)果如圖4-B所示，與空白對照組相比，模型對照組Glut2表達水平有一定程度的升高。與模型對照組相比，明日草、 豆豉和辣椒降糖制劑治療組均能在一定程度上降低Glut2表達水平，其中，中劑量組能顯著降低Glut2表達水平(P < 0. 05)，使其基本恢復(fù)至正常水平。
權(quán)利要求
1.一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，其步驟是(1)明日草浸膏的制備取干燥的整株明日草，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-10L/kg倍的70-80V/V% 乙醇，70-800C回流提取2-3次，每次1-2小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到明日草浸膏粉；(2)豆豉浸膏的制備取干豆豉，80目粉碎，置入提取罐中，每次加7-15L/kg倍的水，90-100°C煎煮2_3次，每次1-1. 5小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到豆豉浸膏粉；(3)辣椒粉浸膏的制備取干燥的紅辣椒，80目粉碎，置入提取罐中，每次加入7-15L/kg倍的75-95V/V%乙醇， 70-80°C回流提取2-3次，每次1. 5-2小時，合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辣椒浸膏粉；(4)將步驟⑴得到的明日草浸膏粉、步驟(2)得到的豆豉浸膏粉、步驟⑶得到的辣椒浸膏粉，按照50-100 10-50 1的重量比進行混合，然后80目粉碎，得混合浸膏粉；(5)向步驟(4)得到的混合浸膏粉中加入其重量2倍的淀粉與糊精混合物，混合物中淀粉、糊精重量比為4 1，再加入95V/V%的乙醇制成軟材，制粒即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法提取的降糖制劑在制備治療或預(yù)防糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從明日草、豆豉和辣椒中提取降糖制劑的方法，該方法包括下列步驟a、采用乙醇水溶液提取明日草，濃縮，干燥，得到明日草浸膏粉；b、采用水煎煮豆豉，濃縮，干燥，得到豆豉浸膏粉；c、采用乙醇水溶液提取辣椒，濃縮，干燥，得到辣椒浸膏粉；d、將明日草浸膏粉、豆豉浸膏粉、辣椒浸膏粉，按照50-100∶10-50∶1的重量比混勻，粉碎過篩，加入淀粉、糊精和乙醇，制成軟材，制粒即得。本發(fā)明還還公開了一種從明日草、豆豉和辣椒中提取的降糖制劑在制備治療或預(yù)防糖尿病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的降糖制劑的有效成分明確、療效確定、無毒副作用，提取方法易于實施，應(yīng)用前景廣闊。
文檔編號A61K9/16GK102552534SQ20121000838
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者劉敏, 唐和斌, 李小軍, 李玉桑, 王俊賢, 王少兵 申請人:唐和斌