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含長雙歧桿菌菌體裂解液的組合物凍干粉及其制備方法和應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):910449閱讀:904來源:國知局
專利名稱:含長雙歧桿菌菌體裂解液的組合物凍干粉及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種含長雙歧桿菌菌體裂解液的組合物凍干粉及其制備方法與在化妝品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
長雙歧發(fā)酵物裂解液是含有長雙歧桿菌iBindobeicterium longum)生產(chǎn)的必需成分和長雙岐的代謝產(chǎn)物(活性蛋白質(zhì)、多肽及細(xì)胞因子)、細(xì)胞質(zhì)成分、細(xì)胞壁成分及多糖復(fù)合物。這些物質(zhì)可以特異性的激活和支持皮膚自身的保護(hù)機(jī)制及修復(fù)機(jī)制,以對抗成熟前的皮膚老化。用于化妝品添加以促進(jìn)肌膚抗紫外、修復(fù)和重建完美構(gòu)造、抗衰老、保濕防護(hù)和解決敏感性和問題皮膚,它們對問題皮膚的作用主要包括1)激活紫外照射后正常的 DNA修復(fù)機(jī)制,修復(fù)皮膚突變2)保護(hù)皮膚并保持皮膚生機(jī)和充滿活力,保持皮膚水分,去皺,保持肌膚嫩滑3)中和紫外引起的光衰老,抗衰老4)對抗紫外引起的免疫抑制,回復(fù)皮膚平衡5)特異性的激活和支持皮膚自身的保護(hù)機(jī)制及修復(fù)機(jī)制,以對抗成熟前的皮膚老化。中國專利CN 101380288A、專利名稱為“用于處理敏感皮膚的長雙歧桿菌菌種裂解物的用途”和中國專利CN 101380289A、專利名稱為“長雙歧桿菌菌種裂解物用于干燥處理的美容用途”詳細(xì)闡述了雙歧桿菌屬種裂解物對于處理和/或預(yù)防敏感皮膚特別有效;對干性的表皮或角質(zhì)物質(zhì)具有美容治療作用,在處理魚鱗癬、銀屑病、表皮角化病、局部皮炎和頭皮的干燥頭皮屑狀態(tài)中特別有效。此外Gi^niche A等人使用長雙歧桿菌的提取液證明了在體外和臨床這種無細(xì)菌繁殖裂解液用于肌膚可以改善易過敏膚質(zhì),該裂解液還可以明顯抑制神經(jīng)元辣椒堿誘導(dǎo)降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)的釋放。人體試用結(jié)果顯示使用含雙歧桿菌提取物乳膏的志愿者在試驗(yàn)結(jié)束后皮膚敏感度顯著降低。此外,試驗(yàn)處理導(dǎo)致了皮膚對物理和化學(xué)侵害的抗性增強(qiáng)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),雞胚精華液含有多種營養(yǎng)成分、抗感染成分和生物活性物質(zhì),尤其是含有的類胰島素生長因子(IGFs)在抗衰老方面表現(xiàn)尤佳。長雙歧桿菌裂解液除了文獻(xiàn)已報(bào)道的在抗過敏以及預(yù)防皮膚干燥方面具有功效外,未見有預(yù)防衰老皮膚方面功效的報(bào)道,也未見長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合使用,制備抗衰老和美白化妝品的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗衰老和美白功效的含長雙歧桿菌菌體裂解液的組合物凍干粉及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的含長雙歧桿菌菌體裂解液的組合物凍干粉,由長雙歧桿菌菌體裂解液和雞胚精華液的混合液,由凍干保護(hù)劑海藻糖保護(hù)后經(jīng)凍干、粉碎而獲得;其中,混合液的體積百分比為長雙歧桿菌裂解液40% 90%,雞胚精華液10% 60%,兩者總量為100% ;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比(kg/L)海藻糖混合液=1 1. 0 6. 0。優(yōu)選為長雙歧桿菌裂解液50% 70%,雞胚精華液30% 50% ;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比 (kg/L)海藻糖混合液=1:2.0 5.0。更優(yōu)選為長雙歧桿菌裂解液55% 65%,雞胚精華液 35% 45% ;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比(kg/L)海藻糖混合液=1 3. 0 4. 0。本發(fā)明提出的長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的制備方法,其步驟如下
(1)將長雙歧桿菌凍干粉和磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比(kg/L)為1:3.0 1:8. 0的比例混合溶解,得到長雙歧桿菌溶液;
(2)將步驟(1)中的溶液用超聲波處理,破碎長雙歧桿菌的細(xì)胞壁,超聲程序?yàn)槌?2 6s,間隔2 6s,超聲15 30個(gè)循環(huán);按此程序重復(fù)超聲2 6次;
(3)超聲后以5000 8000rpm的轉(zhuǎn)速離心15 30min ;得上清液即長雙歧桿菌裂解
液;
(4)將長雙歧桿菌裂解液與雞胚精華液混合均勻,按體積比計(jì),長雙歧桿菌裂解液 40% 90%,雞胚精華液10% 60%,兩者總量為100% ;向該混合液中加入凍干保護(hù)劑海藻糖,按質(zhì)量體積比計(jì),海藻糖混合液=1:1. 0 1:6. 0 ;在-45 -85°C下冷凍干燥12 36h,得長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉。步驟(1)中,所述的長雙歧桿菌凍干粉和磷酸緩沖液質(zhì)量體積比(kg/L)優(yōu)選為 1:4. 0 1:6. 0。步驟(2)中,所述的超聲程序優(yōu)選為超聲3 5s,間隔3 5s,超聲15 25個(gè)循環(huán)。按照此程序重復(fù)超聲3 5次。步驟(3)中,所述的離心轉(zhuǎn)速優(yōu)選為5500 6500rpm,離心時(shí)間優(yōu)選為15 20mino步驟(4)中,優(yōu)選為長雙歧桿菌裂解液50% 70%,雞胚精華液30% 50% ;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比(kg/L)海藻糖混合液=1:2. 0 5. 0,在-55 -80°C下冷凍干燥15 30h。更優(yōu)選為長雙歧桿菌裂解液55% 65%,雞胚精華液35% 45% ;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比(kg/L)海藻糖混合液=1:3. 0 4. 0,在-65 -80°C下冷凍干燥18 Mh。本發(fā)明涉及長雙歧桿菌菌種中的一種或多種微生物的裂解液,特別地涉及長雙歧桿菌菌體裂解液。由發(fā)酵生物技術(shù)結(jié)合低溫粉碎裂解技術(shù)制造的長雙歧發(fā)酵物裂解液,含有長雙歧桿菌生產(chǎn)的必需成分和長雙岐桿菌的代謝產(chǎn)物(活性蛋白質(zhì)、多肽及細(xì)胞因子)、 細(xì)胞質(zhì)成分、細(xì)胞壁成分及多糖復(fù)合物。將這些活性成分用于皮膚可提供抗過敏、抗皺、保濕等功效。本發(fā)明中,雞胚精華液提取自健康孵化8 16天的雞胚,這個(gè)階段的雞胚尤其是孵化12 14天的雞胚,含有豐富的維持新生命萌發(fā)的各種營養(yǎng)物質(zhì),具有顯著的促進(jìn)生長和提高機(jī)體免疫能力的活性成分。雞胚中所含的生物活性物質(zhì)大體上可分為3類,即營養(yǎng)成分、抗感染成分和生物活性物質(zhì)。營養(yǎng)成分有蛋白質(zhì)、氨基酸、碳水化合物(葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖等)、脂類、脂肪酸、多種維生素(A、E、C等)、礦物質(zhì)(Fe、ai、Cu等)等; 抗感染成分有免疫球蛋白、干擾素、胎兒蛋白、溶菌酶和磷酸二酯酶(抗錐蟲)等;生物活性物質(zhì)有唾液酸、兒茶酚胺、類胰島素生長因子(IGF-I)、胰島素、激肽酶、組胺酶、紅細(xì)胞生成素、脫氧核糖核酸酶和核糖核酸酶等。這些成分對皮膚的作用主要有(1)營養(yǎng)滋養(yǎng)皮膚 (2)保水潤膚抗皺(3)抗感染。發(fā)明人經(jīng)過不斷的試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)將雞胚精華液與長雙歧桿菌裂解液混合制備成組合物,用于處理和/或預(yù)防皮膚的老化具有協(xié)同增效的作用。即本發(fā)明所述的長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉可用于制備對皮膚具有抗衰老和美白功效的化妝品。本發(fā)明還提供一種抗衰老和美白化妝品組合物,該化妝品組合物中含有本發(fā)明的長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉,其含量為化妝品組合物總重量的0. 1% 5%,優(yōu)選為1% 3%ο本發(fā)明涉及抗衰老和美白化妝品,其產(chǎn)品形式可以是乳膏、面霜、精華露、精華液、 精華素、凝膠、洗劑或洗脫型產(chǎn)品等。本發(fā)明中,術(shù)語“皮膚問題”包括有皺紋的、有線紋的,粗糙的、干燥的、易起屑的、 敏感的、暗黃的、衰老的和/或UV損傷的皮膚。這些不期望的問題特別地涉及皮膚具有衰老跡象的人,這些人的皮膚由于受到年齡、疾病、壓力、飲食習(xí)慣、使用的化妝品、紫外線等因素的影響,皮膚出現(xiàn)很多問題。如前所述,本發(fā)明的長雙歧桿菌菌種的裂解液與雞胚精華液組合物凍干粉作為化妝產(chǎn)品中的活性成分是特別有效的。特別地,化妝產(chǎn)品優(yōu)選適合用于有上述問題的皮膚,從而改善皮膚的外觀和觸感,以及用于健康的皮膚,從而用于預(yù)防或延緩皮膚的老化。本發(fā)明中,術(shù)語“改善”意為消除、最小化不期望的問題,可以視覺上或通過觸覺檢測到,例如皮膚皺紋、彈性、水分、黑素。本發(fā)明中,術(shù)語“預(yù)防”意為減少問題出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。本發(fā)明中,所述含有長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉,其中裂解液通常是指采用一定的方法,在一定程度上破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,使胞內(nèi)產(chǎn)物釋放到液相中獲得的細(xì)胞漿液。本發(fā)明中,使用術(shù)語“裂解液”,不優(yōu)先指通過所涉及的微生物裂解而獲得的全部裂解液,或者僅僅是其部分。故裂解液包括細(xì)胞內(nèi)生物組份和細(xì)胞壁和細(xì)胞膜組份的全部或部分。更具體地,所述的裂解液包括細(xì)胞胞質(zhì)部分,該胞質(zhì)部分包括乳酸脫氫酶、磷酸酶、磷酸酮酶、轉(zhuǎn)醛酶和代謝物等酶類。細(xì)胞壁的組份特別地是肽聚糖、胞壁糖或粘肽和磷壁酸,細(xì)胞膜的組份由甘油磷脂組成。細(xì)胞裂解可以用多種方法實(shí)現(xiàn),例如超聲波振蕩法、酶解法、滲透壓沖擊法、凍結(jié)-融化法等。本發(fā)明中,所述的雞胚精華液提取自健康孵化8 16天的雞胚,具體提取步驟為
(1)取孵化8 16天的健康雞胚蛋(優(yōu)選孵化12 14天的健康雞胚蛋),敲殼取雞胚;
(2)用食品粉碎機(jī)將雞胚打成勻漿,加入pH6.8 7. 2的磷酸緩沖液(30 50 mM),按質(zhì)量比,雞胚磷酸緩沖液=1:1 3,4 10°C條件下,將雞胚和磷酸緩沖液充分?jǐn)嚢杞∵^夜;
(3)用多層(例如4-6層)醫(yī)用紗布過濾步驟(2)中的雞胚浸取液,將濾液以4000 6000 rpm的轉(zhuǎn)速離心15 30min ;(4)將離心后的上清液,用截留分子量為10000 20000 Da的中空纖維膜超濾進(jìn)行過濾,得濾出液,即雞胚精華液。本發(fā)明所述的長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物,是以粉狀形態(tài)呈現(xiàn),此外還可以以液體形式被利用。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用在抗衰老美白化妝品中,該化妝品還可以加入化妝品用油性原料。對于所述油性原料并沒有特別的限制,可以包括合成酯類,具體為包括硬脂酸酯類,例如三硬脂酸甘油酯、硬脂酸鯊肝酯、氫化大豆油脂肪酸甘油酯;油酸酯類,亞油酸酯類,例如油酸異癸酯、丙二醇單油酸酯、亞油酸異丙酯;棕櫚酸酯類,例如棕櫚酸異硬脂基酯、棕櫚酸異十六烷基酯;異硬脂酸酯類,例如異硬脂酸異丙酯、異硬脂酸失水山梨醇酯、異硬脂酸丙二醇酯;羥基硬脂酸酯類,例如羥基硬脂酸甘油單酯、單羥基硬脂酸甘油酯;肉豆蔻酸酯類,例如肉豆蔻酸異硬脂基酯、肉豆蔻酸丁酯;異棕櫚酸酯類,例如異棕櫚酸辛酯、異棕櫚酸雙甘油基酯;月桂酸酯類,例如月桂酸甘油酯、月桂酸丙二醇酯、月桂酸異硬脂基酯;辛酸、壬酸、癸酸酯類,例如異硬脂基辛酸酯、 異壬酸異癸酯;聚甘油酯類,例如單硬脂酸聚甘油酯、二硬脂酸聚甘油酯;羊毛脂衍生物類,例如羥化羊毛脂、羊毛留醇;季戊四醇酯類,例如季戊四醇四肉豆蔻酸酯;蓖麻油酸酯類,例如蓖麻油酸甘油酯、氫化蓖麻油;檸檬酸,琥珀酸酯類,例如檸檬酸乙酰三乙酯、琥珀酸二乙氧基乙酯;磷酸酯類,例如聚氧乙烯烷基(12 16)醚磷酸酯(6E0)、磷酸三油基酯; 其它酯類,例如山崳酸甘油基酯、沒食子酸辛酯;還有脂肪酸類,例如椰子油脂肪酸、棕櫚仁油脂肪酸、亞油酸;脂肪醇類,芳香醇類,例如椰子油醇、花生醇、橄欖油醇;蠟類,例如合成烴蠟、合成角鯊?fù)?。在添加上述油性原料時(shí),其添加量優(yōu)選為化妝品總重量的0. 01% 45%,更優(yōu)選為 0. 05% 25%。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用在抗衰老美白化妝品中,該化妝品還可以加入化妝品用營養(yǎng)性添加劑,所述的營養(yǎng)性添加劑包括(1)維生素類,例如煙酸、尿囊素DL-泛醇、天然維生素E、d- δ -生育酚;(2)氨基酸,例如L-羥基脯氨酸、L-酪氨酸、L-組氨酸;(3)腺苷鹽,例如核黃素腺苷二核苷酸二鈉二水鹽、腺苷一磷酸;(4)留醇類,例如谷留醇、膽留醇油酸酯、植物留醇油酸酯、壬酸膽留醇酯;(5)水解蛋白類,例如油酰水解膠原蛋白、水解膠原乙酯液、椰子油脂肪酸水解膠原蛋白、異硬脂酰水解膠原蛋白;(6)其它營養(yǎng)性物質(zhì),例如臍帶提取液、油溶性胎盤提取液、葡萄糖酸鈉。在添加上述營養(yǎng)性添加劑時(shí),其添加量優(yōu)選為化妝品總重量的0. 01 45%,優(yōu)選的添加量為0. 05% 25%,更優(yōu)選為0. 1% 20%。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用在抗衰老美白化妝品中,該化妝品也可以加入表面活性劑。所述表面活性劑的例子包括失水山梨醇脂肪酸酯(Span-20、Span-40、Span-60、Span-80)和其環(huán)氧乙燒加成物(Tween-20、Tween_40、 Tween-60, Tween-80)、月桂醇聚氧乙烯醚、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、油酸單甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯羊毛脂、烷基磷酸酯、烷基磷酸聚氧化乙烯酯、脂肪酸堿金屬鹽、烷基甘油基醚??梢约尤肷鲜霰砻婊钚詣┲械囊环N或若干種。在添加上述表面活性劑時(shí),其添加量優(yōu)選為化妝品總重量的0. 01% 45%,更優(yōu)選為 0. 05% 25%。
本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用在抗衰老美白化妝品中,該化妝品也可以加入水溶性多元醇。所述水溶性多元醇的例子包括分子內(nèi)含有兩個(gè)或兩個(gè)以上羥基的醇,例如乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇、甘油-環(huán)氧乙烷加成物、山梨醇、P0E(20)山梨醇、1,3-丁二醇、葡萄糖、麥芽糖、麥芽糖醇、蔗糖、果糖、木糖醇、麥芽三糖、蘇糖醇、赤蘚醇以及通過還原淀粉分解得到的醇。可采用上述醇中的一種或數(shù)種。在添加上述水溶性多元醇時(shí),可根據(jù)實(shí)際需要來選擇合適的添加比例。通常,它們的添加量優(yōu)選為化妝品總重量的0. 01% 60%,更優(yōu)選為0. 1%25%。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用在抗衰老美白化妝品中,該化妝品還可以進(jìn)一步加入化妝品用粉類原料。所述粉類原料包括(1)硅酸鹽類,例如蒙脫土、浮石粉、硅酸鈣、玻璃粉;(2)鋁鹽,例如肉豆蔻酸鋁、異硬脂酸鋁、乳酸鋁;(3)云母類,例如金云母、絹云母、合成金云母;(4)層壓粉,例如聚乙烯對苯二甲酸酯-鋁-環(huán)氧樹脂層壓粉、聚乙烯-聚酯層壓粉;(5)表面處理物粉末,例如纖維素粉、松香酸鈉處理碳酸鈣;(6)其它粉末,例如水楊酸鈦、氧化鋁鈷、羥基磷酸鈣。這些粉類原料在使用前可以用以下物質(zhì)來預(yù)處理用甲基氫甲基聚硅氧烷、三甲基甲硅烷氧基硅酸、甲基環(huán)聚硅氧烷或類似物質(zhì)的聚硅氧烷處理;用磷酸全氟烷基酯、全氟醇或類似物的氟處理;用 N-酰基谷氨酸或類似物得氨基酸處理;卵磷脂處理;金屬皂處理;脂肪酸處理;磷酸烷基酯處理或類似處理。在添加上述化妝品用粉類原料時(shí),可根據(jù)化妝品的制劑形式選擇合適的添加比例。通常,它們的添加量優(yōu)選為化妝品總重量的0. 01% 50%,更優(yōu)選為0. 05 30%。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的抗衰老美白化妝品還可以包含多種其它在化妝品領(lǐng)域使用的添加劑。這類成分類型的實(shí)例包括保濕劑、成膜劑、增稠劑、抗菌防腐劑、顏料、香料、防曬劑、螯合劑、天然原料。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的抗衰老美白化妝品的PH值優(yōu)選3 10。更優(yōu)選的pH值為4 9,這樣接近皮膚正常的酸堿度,有利于保持皮膚的正常生理功能。一般采用本領(lǐng)域已知的制備化妝品的常規(guī)方法來制備本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的抗衰老美白化妝品。此類方法一般通過一個(gè)或多個(gè)步驟混合各種成分,使其成為相對均一的狀態(tài),其中涉及到有無加熱、冷卻、均質(zhì)、使用真空等??顾ダ厦腊谆瘖y品可以制備成任何所需的常規(guī)形態(tài),例如洗面乳、沐浴露、面霜、精華露、精華液、精華素、乳膏、凝膠、洗劑或洗脫型產(chǎn)品。在任何化妝品的配方中,本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的添加量范圍都是基于化妝品想要達(dá)到的效果,配方中的其它組分、組合物類型、 成本和實(shí)用性。通常,本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的添加量優(yōu)選為0. 1% 5%,更優(yōu)選為1% 3%。本發(fā)明所述的長雙歧桿菌菌種的微生物可以以活的、半活的或滅活的或死的形式包含在本發(fā)明的抗衰老美白化妝品中。當(dāng)這些微生物以活的形式用在抗衰老美白化妝品時(shí),每克產(chǎn)品中活微生物的量范圍可以為IO2 lO^cfu/g、優(yōu)選為IO4 IO11 cfu/g、更優(yōu)選為IO6 109cfu/g的微生物。所述的微生物也可以包含在細(xì)胞成份的部分形式中。稀釋或未稀釋,或可替代地濃縮或未濃縮的微生物或部分也可以通過粉末、液體、或其部分的形式加入。本發(fā)明的抗衰老美白化妝品還可以包含其它的多種化妝品用添加劑。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉在化妝品中使用,所述化妝品局部應(yīng)用,在皮膚上產(chǎn)生抗衰老和美白效果,例如彈性蛋白酶、酪氨酸酶的抑制和刺激膠原生成。此外,含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉可用于提供抗氧化效果。本發(fā)明的含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉可用于任何形式的化妝品,不論是否存在于化妝品中。凍干粉的量對于想要達(dá)到的效果以及組合物的制劑形式(例如洗面乳、面霜、乳膏或凝膠),應(yīng)該是安全和有效的,而含長雙歧桿菌菌種的裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的添加量優(yōu)選為0. 1% 5%。本發(fā)明中所述的抗衰老美白化妝品作為用于改善具有衰老跡象的皮膚的美容方法的一部分是特別有效的,其中,向需要此類改善的皮膚施用此類化妝品,進(jìn)行改善此類皮膚狀況所需的持續(xù)時(shí)間。雖然此類持續(xù)時(shí)間根據(jù)此類化妝品的效果而變化,優(yōu)選的每天向皮膚至少應(yīng)用一次該化妝品。在本說明書及下面的實(shí)施例中,除非另外特別說明,百分比是重量百分比,寫成 “… …間的數(shù)值范圍包含所述范圍的上限和下限。配制之前將各組份按本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員易于決定的順序和條件混合在一起。


圖1為消費(fèi)者皮膚功效測試。圖2為實(shí)施例8皮膚水分測試中,與初始時(shí)間記錄的數(shù)值相比水合值的變化。圖3為實(shí)施例11皮膚皺紋測試中,與處理開始時(shí)的數(shù)值相比最大粗糙度的變化。
具體實(shí)施例方式為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容,下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說明。其目的僅在于更好理解本發(fā)明的內(nèi)容而非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1長雙歧桿菌裂解液凍干粉的制備
將長雙歧桿菌凍干粉和磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比(kg/L) 1:5. 0混合溶解,然后用超聲波來破碎長雙歧桿菌的細(xì)胞壁,超聲程序?yàn)槌?s,間隔3s,超聲20個(gè)循環(huán)。再按照此程序超聲3次。超聲后以6000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min。將離心后的上清液按質(zhì)量體積比(kg/ L)海藻糖溶液=1:3.0向該溶液中加入海藻糖,在-80°C下冷凍干燥1 得長雙歧桿菌凍干粉。實(shí)施例2長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的制備
將長雙歧桿菌凍干粉和磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比(kg/L) 1:5. 0混合溶解,然后用超聲波來破碎長雙歧桿菌的細(xì)胞壁,超聲程序?yàn)槌?s,間隔3s,超聲20個(gè)循環(huán)。再按照此程序超聲3次。超聲后以6000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min。將離心后的上清液與雞胚精華液按體積比1. 5:1混合均勻,按質(zhì)量體積比(kg/L)海藻糖混合液=1:3. 0向該混合液中加入海藻糖,在-80°C下冷凍干燥1 得組合物凍干粉。以下為體外試驗(yàn)
實(shí)施例3長雙歧桿菌裂解液及其和雞胚精華液組合物的抗氧化(清除自由基)作用自由基是導(dǎo)致皮膚衰老的主要因素之一,抗氧化作用的物質(zhì)可與自由基結(jié)合或發(fā)生替代,使得[DPPH·]自由基的數(shù)量減少,溶液顏色變淺,表現(xiàn)為515 nm處的光吸收值不斷減少,只至達(dá)到穩(wěn)定。因此可以通過測定515 nm下抗氧化物質(zhì)對自由基的捕獲[清除]能力來計(jì)算(判斷)其抗氧化或清除自由基的能力。用于對功能性化妝品原料的抗氧化、抗衰老、 美白作用。[DPPH·] (二苯基苦味胼基自由基)是一類較為穩(wěn)定的以N為中心的自由基。 [DPPH·]甲醇溶液呈紫色,在515 nm波長處有最大光吸收,顏色的深淺與濃度呈線性關(guān)系。 [DPPH·]自由基被有較強(qiáng)還原能力的抗氧化劑直接捕獲,根據(jù)DPPH被抗氧劑捕獲后特征吸收的變化,可推知抗氧化劑對芳香自由基的清除能力,籍此對化妝品的抗衰老功效進(jìn)行表征。檢測對自由基的清楚能力,是防止皮膚老化的重要考察指標(biāo),特別是針對光老化。建立標(biāo)準(zhǔn)的DPPH實(shí)驗(yàn)方法,本發(fā)明的長雙歧桿菌裂解液凍干粉以及含長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用10 mM pH7.0的磷酸緩沖液復(fù)溶。實(shí)驗(yàn)以維生素C 為正對照,取樣0.1 11^,加入3.9 mL質(zhì)量濃度為25 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)DPPH甲醇溶液,以甲醇為調(diào)零對照,515 nm波長下測定不同時(shí)間的吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算為DPPH的質(zhì)量濃度, 計(jì)算出DPPH的殘留率。根據(jù)DPPH殘留率所對應(yīng)的抗氧化物質(zhì)的濃度判定長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物的清除自由基能力一抗氧化能力,結(jié)果顯示,與維生素C相比,建議使用量的長雙歧桿菌裂解液凍干粉以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉分別具有1(Γ30%和35飛5%的清除自由基的能力,可見組合物對自由基的清除能力比單獨(dú)使用長雙歧桿菌裂解液更顯著。實(shí)施例4長雙歧桿菌裂解液及其和雞胚精華液組合物對酪氨酸酶活性的抑制酪氨酸酶是一種含銅的金屬酶,普遍存在于哺乳動(dòng)物、植物和微生物中,主要參與生物
體內(nèi)黑色素和其他多酚類物質(zhì)的形成。體外酪氨酸酶活性抑制的生物活性物質(zhì)有一定的酪氨酸酶活性抑制能力,可以用于評判具有美白活性物質(zhì)的生物學(xué)功效。本發(fā)明的長雙歧桿菌裂解液凍干粉以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉用10 mM PH7.0的磷酸緩沖液復(fù)溶,以多巴為底物,蘑菇酪氨酸酶為正對照,磷酸緩沖為負(fù)對照,建立酪氨酸酶活性檢測體系,用于檢測長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物對酪氨酸酶的抑制作用。取1.0 mL蘑菇酪氨酸酶溶液,加3 mL PH 6.0的磷酸緩沖液,加入2.0 mL多巴溶液,搖勻。反應(yīng)5 min后,480 nm波長下測定OD 值(使用1 cm比色杯),以單位時(shí)間的OD值增加表示5分鐘反應(yīng)內(nèi)酶的活力。長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物對酪氨酸酶活性抑制活性的測定,在酶反應(yīng)體系中分別加入使用量的長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物,5分鐘后分別測定0D480,計(jì)算單位時(shí)間OD的負(fù)增加表示抑制后的酶活性,與不加抑制劑比較計(jì)算抑制效率。結(jié)果顯示長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物對酪氨酸酶活性的抑制作用分別為20 35%和3(Γ50%,組合物顯示了比單獨(dú)使用長雙歧桿菌裂解液更好的抑制效果。實(shí)施例5長雙歧桿菌裂解液及其和雞胚精華液組合物對黑色素合成的作用
美白活性物質(zhì)具有抑制黑色素形成或促進(jìn)黑色素降解的生物學(xué)作用,利用小鼠黑色素瘤Β16體系,檢測長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物對Β16細(xì)胞黑色素合成的抑制作用,評價(jià)美白化妝品活性活性成分的活性作用。黑色素細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)基中分別添加長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物為處理組,不加長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物為對照組培養(yǎng)細(xì)胞,收集細(xì)胞、破碎、離心,測定420 nm光吸收值,以0D420的大小表示黑色素的深淺。結(jié)果顯示,與對照相比,長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物分別可以減少B16細(xì)胞黑色素合成的15 35%和25飛0%,且組合物對細(xì)胞黑色素合成的減少要好于長雙歧桿菌裂解液。實(shí)施例6長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物對皮膚細(xì)胞膠原蛋白合成的作用
皮膚基質(zhì)指標(biāo)成分一膠原蛋白;細(xì)胞基底膜指標(biāo)成分一IV型膠原蛋白,皮膚重建等價(jià)物及皮膚組織功能成分指標(biāo)一纖維連接蛋白和透明質(zhì)酸等的測定,以評判這些功能性物質(zhì)對皮膚結(jié)構(gòu)和功能重建的作用。以HDF (人皮膚成纖維細(xì)胞)和HEK (人表皮角質(zhì)細(xì)胞)為體系,培養(yǎng)細(xì)胞分別添加長雙歧桿菌裂解液以及長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物為處理組,培養(yǎng)細(xì)胞48小時(shí),收集細(xì)胞,以ELISA試劑盒測定總膠原蛋白和IV型膠原蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩種添加物都可以提高HDF和HEK細(xì)胞合成膠原蛋白,但使用組合物的提高幅度較大。表1提高膠原蛋白合成的百分率(%)
權(quán)利要求
1.一種含有長雙歧桿菌菌體裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉,其特征在于由長雙歧桿菌菌體裂解液和雞胚精華液的混合液,由凍干保護(hù)劑海藻糖保護(hù)后經(jīng)凍干、粉碎而獲得; 其中,混合液的體積百分比為長雙歧桿菌裂解液40% 90%,雞胚精華液10% 60%,兩者總量為100%;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比為海藻糖混合液=1:1.0 6.0(kg/L)ο
2.一種如權(quán)利要求1所述的長雙歧桿菌菌體裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉的制備方法,其特征在于步驟如下(1)將長雙歧桿菌凍干粉和磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比為1:3.0 1:8.0(kg/L)的比例混合溶解,得到長雙歧桿菌溶液;(2)將步驟(1)中的溶液用超聲波處理,破碎長雙歧桿菌的細(xì)胞壁,超聲程序?yàn)槌?2 6s,間隔2 6s,超聲15 30個(gè)循環(huán);按此程序重復(fù)超聲2 6次;(3)超聲后以5000 8000rpm的轉(zhuǎn)速離心15 30min ;得上清液即長雙歧桿菌裂解液;(4)將長雙歧桿菌裂解液與雞胚精華液混合均勻,按體積比計(jì),長雙歧桿菌裂解液 40% 90%,雞胚精華液10% 60%,兩者總量為100% ;向該混合液中加入凍干保護(hù)劑海藻糖,按質(zhì)量體積比計(jì),海藻糖混合液=1:1. 0 1:6. 0 ;在-45 -85°C下冷凍干燥12 36h,得長雙歧桿菌裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(1)中,所述的長雙歧桿菌凍干粉和磷酸緩沖液質(zhì)量體積比為1:4.0 1:6.0 (kg/L)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(2)中,所述的超聲程序?yàn)槌?3 5s,間隔3 5s,超聲15 25個(gè)循環(huán);按照此程序重復(fù)超聲3 5 >次。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(3)中,所述的離心轉(zhuǎn)速為 5500 6500rpm,離心時(shí)間為15 20min。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于步驟(4)中,按體積比計(jì),長雙歧桿菌裂解液為50% 70%,雞胚精華液為30% 50% ;凍干保護(hù)劑海藻糖加量按質(zhì)量體積比為海藻糖混合液=1:2.0-5.0 (kg/L)。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于所述雞胚精華液提取自健康孵化8 16天的雞胚具體提取步驟為(1)取孵化8 16天的健康雞胚蛋,敲殼取雞胚;(2)用食品粉碎機(jī)將雞胚打成勻漿,加入pH為6.8 7. 2,濃度為30 50 mM的磷酸緩沖液,按質(zhì)量比,雞胚磷酸緩沖液=1:1 3,4 10°C條件下,將雞胚和磷酸緩沖液充分?jǐn)嚢杞∵^夜;(3)用醫(yī)用紗布過濾步驟(2)中的雞胚浸取液,將濾液以4000 6000rpm的轉(zhuǎn)速離心 15 30min ;(4)將離心后的上清液,用截留分子量為10000 20000Da的中空纖維膜超濾進(jìn)行過濾,得濾出液,即雞胚精華液。
8.如權(quán)利要求1所述的長雙歧桿菌菌體裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉在制備對皮膚具有抗衰老和美白功效的化妝品中的應(yīng)用。
9.一種化妝品組合物,其特征在于含有權(quán)利要求1所述的長雙歧桿菌菌體裂解液和雞胚精華液組合物凍干粉,其中,所述組合物凍干粉含量為化妝品組合物總重量0. 1% 5%。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化妝品組合物,其特征在于組合物是膏、霜、露、水、凝膠、洗劑或洗脫型產(chǎn)品。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化妝品組合物,其特征在于該組合物還加入有化妝品用油性原料,所述油性原料包括硬脂酸酯類,油酸酯類,亞油酸酯類,棕櫚酸酯類,異硬脂酸酯類,羥基硬脂酸酯類,肉豆蔻酸酯類,例如肉豆蔻酸異硬脂基酯、肉豆蔻酸丁酯;異棕櫚酸酯類,月桂酸酯類,辛酸、壬酸、癸酸酯類,聚甘油酯類,羊毛脂衍生物類,季戊四醇酯類,蓖麻油酸酯類,檸檬酸,琥珀酸酯類,磷酸酯類,以及山崳酸甘油基酯、沒食子酸辛酯;還有脂肪酸類,脂肪醇類,芳香醇類,蠟類;油性原料的添加量為組合物總重量的0. 01% 45%。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化妝品組合物,其特征在于該組合物還加入有化妝品用營養(yǎng)性添加劑,所述的營養(yǎng)性添加劑為維生素類,氨基酸,腺苷酸鹽,留醇類,水解蛋白類,以及其它營養(yǎng)性物質(zhì)臍帶提取液、油溶性胎盤提取液、葡萄糖酸鈉中的一種或幾種,營養(yǎng)性添加劑的添加量為組合物總重量的0. 01% 45%。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化妝品組合物,其特征在于該組合物還加入有表面活性劑, 所述表面活性劑為失水山梨醇脂肪酸酯和其環(huán)氧乙烷加成物、月桂醇聚氧乙烯醚、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、油酸單甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯羊毛脂、烷基磷酸酯、烷基磷酸聚氧化乙烯酯、脂肪酸堿金屬鹽、烷基甘油基醚中的一種或若干種;表面活性劑的添加量為組合物總重量的0. 01% 45%。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化妝品組合物,其特征在于該組合物還加入有水溶性多元醇,所述水溶性多元醇為乙二醇、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇、甘油-環(huán)氧乙烷加成物、山梨醇、POE (20)山梨醇、1,3-丁二醇、葡萄糖、麥芽糖、麥芽糖醇、蔗糖、果糖、木糖醇、麥芽三糖、蘇糖醇、赤蘚醇以及通過還原淀粉分解得到的醇中的一種或數(shù)種;水溶性多元醇的添加量為組合物總重量的0. 01% 60%。
15.根據(jù)權(quán)利要求9-14之一所述的化妝品組合物,其特征在于該組合物還加入有化妝品用粉類原料,所述粉類原料包括硅酸鹽類,鋁鹽,云母類,層壓粉,表面處理物粉末,其它粉末水楊酸鈦、氧化鋁鈷或羥基磷酸鈣;化妝品用粉類原料的添加量為組合物總重量的 0. 01% 50%O
全文摘要
本發(fā)明屬于化妝品技術(shù)領(lǐng)域,具體為一種含長雙歧桿菌菌體裂解液的組合物凍干粉及其制備方法與在化妝品中的應(yīng)用。將發(fā)酵培養(yǎng)的長雙歧桿菌菌體與磷酸緩沖液以一定的質(zhì)量體積比混勻,用超聲波破壁,超聲后離心得裂解液,向裂解液中加入適量雞胚精華液和海藻糖冷凍干燥得組合物凍干粉。長雙歧桿菌裂解液含有長雙歧桿菌的全部胞內(nèi)物質(zhì)及部分細(xì)胞壁裂解成分,與雞胚精華液進(jìn)行組合,用于抗衰老和美白化妝品中,功效優(yōu)異。本發(fā)明還提供含有上述組合物凍干粉的抗衰老和美白化妝品。
文檔編號(hào)A61K8/98GK102525873SQ201210012250
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月16日
發(fā)明者吳宏忠, 唐娟, 曹平生, 梁文娟, 王維榮, 謝承光, 黃勇前 申請人:上海家禽育種有限公司, 上海得高實(shí)業(yè)有限公司
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